破骨细胞的形成、功能及细胞因子的调节

破骨细胞的形成、功能及细胞因子的调节文剑明郑铭豪破骨细胞为多核巨细胞，其生成及其在骨吸收中的作用受细胞因子和细胞间相互作用所调节。在许多常见病中，如骨质疏松症、骨炎性变形、无菌性移植松脱、原发性骨肿瘤和恶性肿瘤骨转移等都可见到破骨细胞的活化。本文就细...

骨巨细胞瘤瘤组织中M-CSF、TNF-α的检测及其意义

目的 :探讨细胞因子与骨巨细胞瘤局部溶骨的关系。方法 :通过ELISA法、Westernblot法和免疫组化法对 10例骨巨细胞瘤、5例骨肉瘤和 5例正常人血清进行了TNF -α和M -CSF表达及定位检测。结果 :骨巨细胞瘤组织TNF -α含量和M -CSF表达率明显高于骨肉瘤和正常人血清。TNF -α由骨巨细胞的部分单核基质细胞和多核巨细胞分泌 ;而M -CSF由部分单核基质细胞分泌 ,多核巨细胞则不表达。结论

病理学实习课因人施教法的尝试

在本科生的一个班进行了实习课因人施教的尝试 :采用学习类型分类法对学生进行分类 ,然后根据每个学生的不同学习类型在实习课中进行不同教学方法的施教。实验表明 ,实验班的学生实习课、理论课成绩和总成绩都比对照班高。实践提示 ,这种教学方法能针对不同的学习对象施教 。

人骨肉瘤瘤组织诱发大鼠异位骨质形成的观察

用ＨＥ、碱性磷酸酶组化、骨粘连蛋白免疫组化及Ｘ线照相等方法观察６例人骨肉瘤冻干瘤组织引起大鼠背部肌肉异位骨质形成。结果表明，冻干骨肉瘤瘤组织埋入大鼠背部肌肉３～５周，均可引起局部组织形成小梁状或片块状骨样组织，其中小梁状骨样组织边缘可见骨粘连蛋白线状阳性反应，部分骨样组织出现钙化。在骨样组织形成区内有大量碱性磷酸酶阳性细胞。Ｘ线显示植入部位密度增高。综合文献报道，骨肉瘤瘤组织诱发异位骨质形成可归因于瘤组织中含有骨形态形成蛋白（ＢＭＰ）。本研究结果为解释骨肉瘤病变部位肿瘤性骨质形成原因提供动物实验依据。

光敏剂间-四羟基苯二氢卟酚诱导肿瘤细胞凋亡的研究

目的：探讨体外以间－四羟基苯二氢卟酚 (mesotetrahydroxyphenylchlorin,mTHPC)为光敏剂的光动力诱导肿瘤细胞死亡的机制。方法：用含 1.3μ mol/L mTHPC (0.8μ g/ml)的培养液孵育人骨肉瘤细胞系 (HOS-8603)和小鼠髓性白血病细胞系 (命名为 JCS细胞 )细胞 16 h后用波长 580 nm、 7.5 mW/cm2光照射。观察光处理后瘤细胞存活率的变化，用共聚焦显微镜检测 mTHPC在瘤细胞的分布；用 Hoechst 33258荧光染色显示瘤细胞的凋亡形态变化，而瘤细胞凋亡 DNA片段用琼脂糖电泳检测。结果： mTHPC位于 HOS-8603和 JCS细胞的胞浆，经光动力治疗后，细胞存活率随培养时间延长逐渐降低， JCS细胞半数存活率为 2 h， HOS-8603细胞为 4 h。 JCS细胞凋亡率在处理后 1 h为 2.1％、 2 h为 62.9％、 4 h为 100.0％，而 HOS－ 8603细胞凋亡率 4 h为 20.2％、 8 h为 65.9％、 12 h为 100.0％。两种细胞在电泳中均出现特征性凋亡条带。结论： mTHPC是一种强光效应的光敏剂，能有效地进入肿瘤细胞胞浆，诱导瘤细胞死亡的方式主要是凋亡，其次是坏死。

骨肿瘤增殖细胞核抗原免疫组化研究

应用增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）单克隆抗体免疫组化方法检测４０例骨肿瘤切片。结果表明，各亚型和各组织学分级的骨肉瘤和骨巨细胞瘤ＰＣＮＡ阳性率无统计学意义。骨巨细胞瘤组织中的单核基质细胞和多核巨细胞中的部分细胞核呈ＰＣＮＡ阳性，提示单核基质细胞是肿瘤性细胞，而部分多核巨细胞是由这些肿瘤性单核基质细胞融合而来。软骨肉瘤ＰＣＮＡ阳性率明显低于骨肉瘤的软骨母细胞型。

人胚呼吸道上皮细胞非时序DNA合成

为研究和比较化学致癌物对人呼吸道上皮细胞和纤维母细胞的损伤及损伤后DNA修复合成的差异,作者用直接致癌物4-硝基喹啉-1-氧化物(4-NQO)和间接致癌物3,4-苯并芘(BaP)处理人胚鼻咽、气管上皮细胞和纤维母细胞,用放射自显影术测定这3种细胞的非时序脱氧核糖核酸合成(UDS)。用4-NQO处理后,这3种细胞的UDS均呈明显的剂量依赖(dose dePendency)关系,但气管和鼻咽上皮细胞UDS平均分别是纤维母细胞的3.0和2.4倍。用BaP处理后,气管和鼻咽上皮细胞UDS呈现明显的剂量依赖关系,而纤维母细胞未见这种关系。气管和鼻咽上皮细胞的UDS平均分别是纤维母细胞的8.6和3.0倍。

骨形成蛋白诱导成骨性分化的实验研究

通过动物实验和细胞培养，观察到骨形成蛋白在体内诱导异位成骨，在体外诱导人胚骨间质细胞、动脉瘤样骨囊肿间质细胞及其转化细胞成软骨分化的效应。

地鼠和人胚肺上皮细胞对致癌剂毒性和染色体损伤反应

为了检查人染色体比啮齿类动物染色体更为稳定的假设,我们比较了人和叙利亚地鼠胚胎肺上皮细胞对诱导性细胞毒性,染色体畸变和姐妹染色体交换(SCE)的敏感性。接种细胞一天后,用不同剂量乙基亚硝基脲(ENU)处理2小时,然后用标准法检查其染色体畸变和SCE率,用细胞计数法测定细胞毒性。染色体畸变和SCE率均表明清楚的剂量依赖关系,而且在地鼠细胞的发生率明显高于人细胞,但两种细胞表明相同的细胞毒性反应。这些结果提示人细胞染色体比地鼠细胞染色体更为稳定和细胞毒性反应不一定总是与染色体损伤有关。

TRAP-银染方法检测体外培养细胞的端粒酶活性

ＴＲＡＰ－银染方法检测体外培养细胞的端粒酶活性孙来保文剑明张萌谢丹赵国强罗超权关键词端粒酶ＴＲＡＰ－银染方法端粒中图号Ｒ７３０４３端粒（Ｔｅｌｏｍｅｒｅ）由ＤＮＡ和蛋白质构成，位于真核生物染色体的末端。这一结构的ＤＮＡ部分主要由富含鸟嘌呤（Ｇ）的简...

人肝癌组织中iNOS、VEGF的表达及微血管密度的病理意义

背景与目的:诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)被认为是诱导和调节肿瘤血管生成,进而影响肿瘤病理进展和预后的重要相关因子。本研究检测人肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)及相应癌旁组织中iNOS、VEGF的表达,探讨其与血管生成的关系,为临床诊治HCC及判断其预后提供理论依据。方法:应用组织芯片技术,采用原位杂交和免疫组化法分析147例HCC组织及癌旁组织中iNOS、VEGF的表达,并用CD34标记免疫组化法检测微血管密度(microvessel density,MVD)。结果:iNOS、VEGF在癌旁组织中的阳性率分别为33.33%和40.82%,而在癌组织中的阳性率分别为86.39%和78.91%,癌组织与癌旁组织比较差异有显著性(P<0.01)。癌组织的MVD值为56.5±12.8,癌旁组织的MVD值为8.4±3.6,两者差异有显著性(P<0.01)。iNOS的表达与肿瘤大小、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)相关(P<0.05),而与转移和肿瘤分化程度无关(P>0.05)。VEGF的表达及MVD值与肿瘤大小、转移相关(P<0.05),而与HBsAg和肿瘤分化程度无关(P>0.05)。在癌组织中MVD与VEGF、iNOS的表达呈正相关,VEGF和iNOS之间亦存在正相关关系(P<0.01)。结论:HCC中iNOS及VEGF的表达与肿瘤血管生成有关。癌组?

NY-ESO-1致敏树突状细胞诱导的CTL对肝癌细胞株的特异性杀伤作用

目的:探讨肿瘤睾丸抗原NY-ESO-1(New York-esophageal-1)致敏树突状细胞体外诱导特异性CTL对肝癌细胞株的杀伤作用。方法:重组质粒pGEX-ESO1经原核诱导表达并纯化GST-ESO1融合蛋白肽。重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和白细胞介素4(rhIL-4)诱导培养人外周血来源的树突状细胞(dendritic cells,DCs),经GST-ESO1融合蛋白肽致敏后诱导特异性CTL增殖。以此CTL为效应细胞,分别以NY-ESO-1阳性表达的肝癌细胞株HepG2和不表达NY-ESO-1的肝癌细胞株H2P为靶细胞,MTT法检测CTL对肝癌细胞株的杀伤作用。结果:重组质粒pGEX-ESO1经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达相对分子质量约36 000的GST-ESO1融合蛋白肽,纯化后的质量浓度为50μg/ml;经rhGM-CSF和rhIL-4联合诱导成功培养人外周血DCs,其表型分子HLA-DR为91.4%、CD86为70.5%、CD83为71.2%、CD80为55.3%。NY-ESO-1致敏的DCs能明显诱导CTL增殖,此CTL对肝癌细胞株HepG2的杀伤率显著高于GST刺激组、未致敏DC组和无DC刺激组(均P<0.05),效靶比为50∶1时杀伤效应达到最高峰[(53.23±3.78)%,P<0.01];相同条件下CTL对H2P细胞无特异性杀伤作用。结论:NY-ESO-1抗原致敏的DCs在体外可诱导同种CTL产生和增殖,后者对NY-ESO-1阳性肝癌细胞株具有特异性杀伤效应,该方法为肝癌免疫治疗提供了一条新思路。

骨巨细胞瘤基质金属蛋白酶系统的表达及其与复发的关系

目的:研究骨巨细胞瘤组织中基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9(matrixmetalloproteinaseMMP2,MMP9)及其特异性抑制剂金属蛋白酶组织抑制物-1和金属蛋白酶组织抑制物-2(tissueinhibitorsofmetalloproteinaseTIMP1和TIMP2)和尿激酶型纤溶蛋白酶原激活物(urokinasetypeplasminogenactivatoruPA)的表达与肿瘤复发的关系。方法:用免疫组化法和原位杂交法检测45例骨巨细胞瘤组织中MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP2和uPA蛋白和RNA的表达,计算MMP2/TIMP2和MMP9/TIMP1的比值,对比肿瘤复发组和非复发组的差异。结果:骨巨细胞瘤组织有高水平的MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP2和uPA表达,但与肿瘤的形态分级无关。复发组MMP2、MMP9和MMP2/TIMP2、MMP9/TIMP1比值以及uPA表达均比非复发组明显增高。高水平MMP2、MMP9、MMP2/TIMP2、MMP9/TIMP1表达的病例复发时间较早,复发风险较高。结论:骨巨细胞瘤的复发与基质金属蛋白酶和酶激活物表达增高,酶抑制剂表达减低相关。

维甲酸和地塞米松对骨肉瘤细胞分化与端粒酶活性的影响

目的 :观察维甲酸 (RA)和地塞米松 (DEX)对骨肉瘤细胞 (HOS)形态和功能分化的诱导作用以及分化后细胞周期与端粒酶活性的变化。方法 :用RA和DEX诱导HOS细胞分化 ,观察分化后瘤细胞的细胞形态和功能的变化。细胞周期用流式细胞仪测定。端粒酶活性用TRAP -银染法检测。结果 :RA和DEX可使体外培养的HOS细胞停留在G2 /M期 ,细胞生长受到明显抑制 ,细胞形态和功能分化成熟 ,碱性磷酸酶 (AP)活性明显升高 ,瘤细胞端粒酶活性随药物作用时间和浓度的增加而明显减弱。结论 :RA和DEX能诱导骨肉瘤细胞形态和功能上的分化 ,端粒酶活性的调节可能发生于细胞周期的S期 ,其活性的下降可作为骨肉瘤细胞分化的指标 。

中枢神经细胞瘤的临床病理及影像学表现

目的:探讨中枢神经细胞瘤(CNC)的临床病理及影像学表现,以提高对该病的认识。方法:回顾性分析6例经手术病理证实为CNC的临床病理及影像学资料。结果:6例中男4例,女2例。年龄30～63岁,平均45岁。肿瘤位于侧脑室内的前中部及室间孔附近,呈宽基底紧贴侧脑室壁或透明隔。CT表现为等或稍高密度肿块,其内夹杂多个低密度小坏死灶或斑片状钙化灶。MR表现为T1WI等或稍低信号,T2WI不均匀稍高信号,增强后肿瘤轻、中度强化。免疫组化突触素(Syn)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)标记均为阳性。结论:CNC主要发生在脑室前部或靠近室间孔附近,其影像学表现有一定的特征性,当此区发生肿瘤时,要考虑CNC的可能。

人NY-ESO-1基因的原核表达、纯化和初步应用

目的:克隆人NY-ESO-1基因,进行原核表达和分离纯化,并初步应用于肝癌患者血清NY-ESO-1抗体的检测。方法:通过RT-PCR技术从人肝癌组织中扩增NY-ESO-1基因片段,插入原核表达载体pGEX4T-1(+)中,构建重组表达质粒pGEX/ESO1,导入大肠杆菌BL21(DE3),诱导目的蛋白表达,经包涵体透析复性和GSTrap亲和层析纯化目的蛋白,Westernblot鉴定。应用间接ELISA方法初步检测50例肝癌患者血清和20例正常人血清NY-ESO-1抗体的表达。结果:扩增得到NY-ESO-1基因3'端276bp片段,与GeneBank公布序列一致,构建的pGEX/ESO1原核表达质粒经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达分子量约36kD的GST-ESO1融合蛋白,纯化后蛋白纯度为90%。50例肝细胞癌患者血清中4例检测到NY-ESO-1抗体(8%),正常人血清均为阴性。结论:成功构建pGEX/ESO1重组表达质粒,得到有活性的NY-ESO-1融合蛋白,对肝癌患者血清NY-ESO-1抗体的检测有一定的应用价值。

骨巨细胞瘤中MMP-9和TIMP-3的表达及临床意义

【目的】研究骨巨细胞瘤组织中基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)及其特异性抑制剂金属蛋白酶组织抑制因子-3(tissue inhibitor of metalloproteinase-3,TIMP-3)的表达及临床意义。【方法】用免疫组化SP法检测45例骨巨细胞瘤组织中MMP-9、TIMP-3的表达情况,以CD31标记检测微血管密度(micro vessel density,MVD)。【结果】骨巨细胞瘤组织中MMP-9、TIMP-3阳性率分别为100%和91%,MMP-9表达与MVD水平存在正相关性(χ2=14.812,P=0.001),而且两者在复发组均显著高于非复发组(χ2=18.250,P=0.000;t=-8.14,P=0.000),但TIMP-3在两组的表达在统计学上无明显差异,此外MMP-9、TIMP-3及MVD与组织学分级无关。【结论】MMP-9、TIMP-3表达的不平衡可能会加速肿瘤血管形成并影响骨巨细胞瘤的复发。

骨髓基质干细胞在骨形成蛋白诱导下异位成骨及应用于人造骨的实验研究

目的 研究经分离培养的骨髓基质干细胞 (MSC)在骨形成蛋白 (BMP)诱导下在体内外的异位成骨效应 ,为研制一种本身具有成骨能力的人造骨材料提供实验依据。方法 分离、培养 Wistar大鼠 MSC,体外实验将 MSC+ BMP分别在培养板和弥散小室内培养 ,体内实验将 MSC+ BMP与人工珊瑚骨 (CHA)制成复合移植体 ,种植在大鼠背肌内 ,用形态学、组织化学和免疫组化方法观察其成骨效应。结果 MSC在体外 (培养板和弥散小室 )只形成软骨基质 ,在体内复合移植体 (CHA + BMP+ MSC)形成骨质 ,其成骨效应比对照组 A(CHA + MSC)和对照组 B(CHA )强。结论 复合移植体 (CHA+ BMP+ MSC)有可能被研制成本身具有成骨能力的人造骨材料。除 BMP外 ,移植体植入的机体和局部还存在其它诱导成骨的因子 ,进一步探讨这些因子的作用 ,将对研制这种理想的人造骨材料具有重要意义。

新会柑皮中抗白血病主要成分的鉴定

本实验采用ＧＣ／ＭＳ分离、鉴定新会柑皮抗小鼠髓性单核细胞性白血病提取物中的５种成分，即化合物I为４'，５，６，７，８－五甲氧基黄酮，化合物Ⅱ为４'，５，７，８－四甲氧基黄酮，化合物Ⅲ为５－羟基，３’，４’，６，７，８－五甲氧基黄酮，化合物Ⅳ为３’，４’，５，６，７，８－六甲氧基黄酮，化合物Ｖ为３’，４’，５，７，８－五甲氧基黄酮。这与ＰＭＲ谱和ＵＶ谱分析相符。其中化合物Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ抑制白细胞生长 ５０％所需的浓度分别为 ２．９，２．５，２．８ ｍｇ／Ｌ。

MAGE-A3在肝癌组织中的表达及意义

目的检测黑色素瘤抗原-A3(MAGE-A3)在肝癌组织中的表达,为应用MAGE-A3抗原对肝癌患者进行特异性抗肿瘤免疫治疗及判断预后提供理论依据。方法逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测31例肝癌组织及相应癌旁组织中MAGE-A3基因的表达,应用组织芯片技术、免疫组织化学方法分析178例肝癌组织及相应癌旁组织中MAGE-A3抗原的表达。结果31例肝癌组织标本中有23例(74.19%)表达MAGE-A3基因,而相应的癌旁组织MAGE-A3基因均不表达。178例肝癌组织中102例表达MAGE-A3抗原(57.30%),相应的癌旁组织MAGE-A3抗原均不表达。MAGE-A3蛋白表达与肿瘤转移有关(P<0.05),而与HBsAg、AFP水平和分化程度均无关(P>0.05)。结论MAGE-A3基因在肝癌组织中有较高表达,这使得以该基因编码蛋白作为肿瘤疫苗用于肝癌的免疫治疗成为可能。表达MAGE-A3的肝癌患者预后较差。