固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法快速测定鸡粪中37种抗菌药物的含量

建立了固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法(SPE-UPLC-MS/MS)快速测定鸡粪中37种抗菌药物含量的方法。鸡粪经冻干制备,80%乙腈(含0.1%甲酸)提取,Oasis PRiME HLB通过式固相萃取净化后,利用UPLC-MS/MS测定抗菌药物含量。结果表明,37种抗菌药物浓度在0.40~200.0ng/mL范围内线性关系良好,相关系数(R^(2))大于0.996,检出限(LOD)为1μg/kg,定量限(LOQ)为4μg/kg。37种抗菌药物在3个浓度添加标水平(LOQ、5倍LOQ、10倍LOQ)下的回收率为63.5%~104.2%,批内相对标准偏差为1.47%~10.5%,批间相对标准偏差为2.39%~14.2%。所建立方法准确、快速、灵敏、稳定,可实现鸡粪中37种抗菌药物的同时快速测定。

液相色谱法测定氟尼辛葡甲胺注射液含量的不确定度评定

为提高检验结果的准确性,确定检验过程中的关键影响因素,对液相色谱法测定氟尼辛葡甲胺注射液含量进行不确定度评估。依据《中国兽药典》2020版氟尼辛葡甲胺注射液质量标准对其含量进行测定,分析影响不确定度的因素,参照JJF 1135-2005《化学分析测量不确定度评定》和JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》中的规定及要求,对检验过程中的不确定因素进行评估,根据CNAS-GL006:2019构建了氟尼辛含量的不确定度评估数学模型,对检测过程中各种不确定度的来源进行分析,并计算合成相对标准不确定度和扩展不确定度。氟尼辛葡甲胺注射液含量的不确定度结果表示为(102.2±2.72)%,(k=2,置信区间为95%),主要来源于仪器重复性。

黔东南小香鸡林下生态养殖技术要点

林下养殖生态鸡必须做到科学规划和规范化养殖,若养殖需度过大、布局不合理,粪污、病死禽处理不当等,极易对局部环境植被带来破坏和环境交叉污染,甚至给禽蛋食品卫生安全带来潜在危害。该文从场地规划和布局、圈舍设计、林下养鸡管理要点以及疫病防控技术措施等方面介绍黔东南小香鸡林下生态养殖技术要点,旨在提升黔东南小香鸡林下养殖效益。

黔东南小香鸡种群禽白血病、禽网状内皮组织增生症和鸡白痢感染情况检测与分析

为了解黔东南小香鸡种群禽白血病(AL)、禽网状内皮组织增生症(RE)和鸡白痢(PD)的感染状况,便于有效预防、净化疫病,更好地保护黔东南小香鸡的种质资源,从鸡群采集524份血清样品,采用ELISA检测禽白血病病毒p27抗原(ALV-p27)、禽网状内皮组织增生症病毒(REV)及鸡白痢感染抗体水平,采用PCR核酸检测进行禽白血病病毒A、B、J亚群(ALV-A、B、J)鉴定。结果表明:样品中ALV-p27抗原的阳性率为85.88%、ALV-J亚群的阳性率42.67%,REV抗体的阳性率为25.57%,鸡白痢抗体的阳性率为3.82%。根据检测结果,建议尽早对种群采取净化措施,以避免AL进一步发生及流行。

鸽源沙门氏杆菌的分离鉴定与药敏性

【目的】分离鉴定临床鸽源沙门氏菌,探明分离菌对常见抗生素及自拟复方中药的敏感性,为肉鸽养殖场沙门氏菌合理用药和中兽药防治提供科学依据。【方法】通过病死鸽病料分离沙门氏菌,进行形态学、培养特征、生化特征、16SrRNA测序鉴定;使用临床常用抗生素、自拟中药复方对分离菌进行药敏试验。【结果】分离菌株符合沙门氏菌形态学、生化试验等特性,16Sr RNA测序鉴定为沙门氏菌;该菌对头孢拉定、链霉素、多粘菌素B、多西环素、四环素、阿奇霉素、复方新诺明耐药;对新霉素、克林霉素中度敏感;对诺氟沙星、恩诺沙星、左氟沙星等8种常见抗生素敏感;对自拟中药复方四(白头翁、鱼腥草、金银花、乌梅、诃子、白术等中药)高度敏感,对方二(白头翁、黄柏、黄芩、蒲公英、乌梅等中药)、方三(连翘、蒲公英、夏枯草等中药)、方五(由黄芩、秦皮、诃子、柴胡等10味中药)为中度敏感。【结论】分离鸽源沙门氏菌对头孢拉定等7种常见抗生素耐药;自拟中药复方在抑制鸽源沙门氏菌方面具有一定效果,其中,中药复方四对该菌高度敏感。

黔中金荞麦醇提物对断奶仔猪肠道菌群的影响

为了探究黔中金荞麦醇提物对断奶仔猪肠道菌群的影响,选取12头健康的断奶柯乐仔猪平均分为2组,Ⅰ组(试验组)饲喂98.5%基础日粮+1.5%黔中金荞麦提物,Ⅱ组(对照组)饲喂100%基础日粮,第15 d采集直肠粪便利用高通量测序技术分析仔猪肠道菌群的变化。结果:(1)Ⅰ组的细菌OTU(运算分类单元)数比Ⅱ组大,真菌OTU数比Ⅱ组小,2个组的细菌菌群丰富度差异不显著(P>0.05);Ⅰ组的细菌菌群多样性比Ⅱ组大,真菌菌群丰富度和多样性比Ⅱ组小,细菌群落结构差异显著(P<0.05)。(2)细菌分类:门水平主要有厚壁菌门(51.88%、36.17%)、拟杆菌门(32.23%、26.90%)、变形杆菌门(4.26%、22.17)等,属水平主要有埃希菌-志贺菌属(1.77%、15.56%)、琥珀酸弧菌属(1.51%、7.87%)、乳杆菌属(4.87%、2.34%)等;真菌分类:门水平主要有子囊菌门(40.67%、46.65%)、新美鞭菌门(35.56%、9.02%)、担子菌门(5.48%、7.16%)等,属水平主要有新美鞭菌属(35.36%、9.02%)、曲霉属(12.94%、16.18%)、丝孢酵母属(5.76%、3.48%)等。Ⅰ组的细菌差异物种数比Ⅱ组大,真菌差异物种数比Ⅱ组小。结论:饲喂黔中金荞麦醇提物可显著影响断奶仔猪肠道菌群结构,表现为有益菌群丰富度提高,有害菌群丰富度降低。

山羊传染性胸膜肺炎ELISA诊断试剂盒的研发及应用

山羊传染性胸膜肺炎ELISA诊断试剂盒是应用1998年分离研究的丝状支原体山羊亚种"贵罗PG3"作为包被抗原,以抗原包被浓度62 mg/mL,血清稀释度倍数1∶100作为最佳工作条件,其阳性血清D492 nm值S>1、阴性血清D492 nm值N≤0.5,且具有良好的稳定性。经山羊血清样本反复检测试验表明,其有效率达96.11%,经与山羊传染性胸膜肺炎间接血凝PG3、Y98诊断试剂试验检测比对,ELISA试剂盒对丝状支原体山羊亚种PG3具有较强的敏感特异性。在贵州省部分养羊基地县的推广应用过程中,其对872份非免疫山羊血清样本进行了阳性抗体检测,其平均阳性率达28.33%。这充分表明,本试验建立的ELISA诊断试剂盒对山羊传染性胸膜肺炎PG3的阳性抗体检测具有良好的敏感特异性。

患病大鲵中嗜水气单孢菌的分离鉴定及其防治

2009年5月,贵州省贵定县人工饲养的大鲵(娃娃鱼)发生了以四肢和腹侧的皮肤溃烂、口腔粘膜弥漫性出血以及肝脏肿大为临床病理特征的传染病。本研究对该传染病进行了病原分离、动物回归、菌株16S rRNA基因测序检测、药物敏感性、药物治疗及灭活乳化疫苗免疫保护方面的实验研究。试验结果表明,动物回归分离菌株与病原分离菌株其形态特征及理化特性一致,分离菌基因16S rRNA测序检测与嗜水气单胞菌的同源性达到99.57%以上,因此确诊该病为鱼类嗜水气单孢菌感染。致病株具有较强的耐药性,敏感药物治疗能抗菌,但皮肤溃烂组织、深部肌肉组织抗炎效果较差。经致病菌株灭活乳化免疫和免疫保护攻毒试验表明,灭活乳化疫苗免疫平均保护率达83.33%。

贵州鸡淋巴性白血病A亚型血清学调查及PCR诊断

鸡白血病是由禽白血病病毒引起的多种肿瘤性疾病的总称,以造血组织恶性增生为特征的一种病型很复杂的慢性传染病。通过对贵州省鸡淋巴性白血病血清学调查,采用ELISA方法对采集分离的273份血清样本进行了血清学抗体检测,检测结果阳性率为14.65%;运用PCR方法对某鸡场血管瘤型病例进行生物学诊断,检测结果证实了血管瘤型病例是由ALV-A亚群病毒引起的禽A亚型淋巴性白血病。

鸡大肠杆菌病的中草药制剂防治试验

为筛选具有显著防治效果及使用安全的中草药制剂产品,根据鸡大肠杆菌病的病理特性,严格遵循中兽医医学标本兼治的防治理论,进行了中草药组方药物的筛选试验。结果表明:兽用中草药制剂肠杆灵散对鸡大肠杆菌CVCC-245菌株有明显的抑制作用,人工感染防治试验有效率为93.85%～97.78%,应用推广试验有效率为92.37%。表明,中草药制剂肠杆灵散对鸡大肠杆菌病具有显著的防治效果。

贵州鸡淋巴性白血病血清学诊断及流行病学调查

鸡白血病是由禽白血病病毒（Avian leukosis virus,ALV）引起的多种肿瘤性疾病的总称。该病原为反转录病毒,是主要以造血细胞恶性增生为特征的一类传染病。据资料显示,目前在我国的大部分地区先后发生了以鸡为主的禽淋巴性白血病,阳性感染率为21%～96%。自2002年以来,在贵州的蛋鸡、肉鸡群中也发生了以血管瘤,肝、脾肿大,肿瘤增生的疑似淋巴性白血病的临床病例。

肠杆灵散及球虫血痢散对鸡肠道微生物菌群结构多样性影响比较试验研究

本试验通过Pacbio高通量宏基因组测序分析,研究“球虫血痢散”和“肠杆灵散”兽用中草药组方药物应用对鸡肠道菌群结构的影响,并与禽肠道常用抗生素药物硫酸安普霉素进行比较。通过设置3个药物试验组和1个空白对照,连续7 d用药,收集4个试验组鸡大肠段内容物样品,经总DNA提取、PCR扩增及高通量宏基因组序列测定分析。结果显示:“球虫血痢散”和“肠杆灵散”组方药物试验组Shannon指数显著高于硫酸安普霉素组和空白对照组,且组间差异显著(P﹤0.05),其中“球虫血痢散”组方药物试验组ACE值为60.09,表明肠道菌群多样性优势突出;基于Weighted Unifrac距离的PCoA分析结果显示,各药物试验组间菌落构成差异较小,但与空白对照组菌落构成差异较大。在门和种水平上,3个药物试验组中变形杆菌门(Proteobacteria)均呈显著下降趋势,厚壁菌门(Firmicutes)占比上升趋势明显,同时各试验药物对降低鸡埃希氏-大肠杆菌(Escherichia-coil)的比例均优于空白对照组且差异显著(P﹤0.05),表明各试验药物均有利于鸡肠菌群平衡紊乱的改善。其中“肠杆灵散”药物组在提高Streptococcus(非解乳糖链球菌FGM)的丰度占比上要优于“球虫血痢散”组,但硫酸安普霉素组的微生物种类含量比例显著低于2个兽用中草药药物试验组,且均匀性低。因此,2个兽用中草药组方药物在抑制鸡埃希氏-大肠杆菌增殖的同时,更有利于鸡肠道菌群平衡紊乱的改善和维持菌群结构的多样性。

山羊传染性胸膜肺炎双价灭活疫苗的制备及应用效果

为给山羊传染性胸膜肺炎(CCPP)的防控提供参考依据,运用贵州本地分离的PG3和Y98致病株制备山羊传染性胸膜肺炎双价油乳灭活疫苗,并进行效果检测。结果表明:抗原含量在Y98≥10×109个/mL、PG3≥10×109个/mL时,其免疫抗体阳性率为100%,攻毒保护试验有效率达87.5%以上;应用试验免疫抗体阳性率达90.7%～96.3%,免疫山羊经2011—2012年饲养观察,未见其他不良免疫反应和疑似传染性胸膜肺炎的发生。表明,Y98、PG3双价油乳灭活疫苗对山羊传染性胸膜肺炎具有良好的免疫保护和使用安全性。

鸡慢性呼吸道病兽用中草药制剂毒性试验研究

为了明确鸡慢性呼吸道病兽用中草药制剂（贵州省畜牧兽医研究所自主研发）在禽病防治上的安全性，试验参照《中药天然药物长期毒性研究指导原则》对其进行了急性毒性试验和反复给药毒性试验研究。结果表明：昆明小白鼠按最大给药量40g／kg进行急性毒性试验（MTD）均无明显的毒性反应；在此基础上，用sD大鼠按10，5，2g／kg设高、中、低3个给药剂量组，以最大程度暴露其毒性，在连续灌药5周后对其凝血系统指标、血液生化指标及各主要器脏病理组织学变化等进行检查，除肌酐（Cr）具有一定的差异外其他未见异常。各剂量组具有统计学意义的指标在给药剂量不同时无明显规律性，且与给药剂量无显著相关性，推测该中草药制剂无明显毒理学意义。

复合益生素制剂对杂交肉鸡的饲养试验研究

为观察以功能性益生菌为主的益生素对肉鸡生长性能的影响,应用研发的复合益生素试验制剂、复合芽孢菌制剂、嗜乳酸杆菌制剂对杂交肉鸡进行饲养试验,从生长性能和血液生化指标进行效果评估。试验结果表明,复合益生素试验制剂、复合芽孢菌制剂试验组效果较为显著,对肉鸡平均增重分别提高了13.15%和10.47%;在饲料消耗方面分别降低了10.18%和6.91%;总蛋白含量分别增加15.65%、8.66%;血糖含量分别提高了24.59%、8.96%。由此可见,以多菌株功能性益生菌及生物酶组成的复合益生素制剂对肉鸡的影响效果较为显著。

蛋鸡血管瘤型淋巴性白血病诊断报告

近年来,在我省蛋鸡养殖生产中,以皮肤血管瘤型为主的疑似鸡淋巴性白血病的发生较为突出,发病鸡只主要表现为血管瘤破裂后流血不止而死亡,部分鸡群死淘率高达35-40%。2008年12月10日对贵阳市某商品蛋鸡发生的血管瘤型病例通过PCR检测,确诊为鸡淋巴性白血病。

兽用中草药制剂肠杆灵散的毒性试验

肠杆灵散(暂定名)是贵州省畜牧兽医研究所自主研发的防治鸡大肠杆菌病的中草药制剂,为了明确该制剂在禽病防治上的安全性,根据国家《中药天然药物长期毒性研究指导原则》,用昆明小白鼠按最大给药量(生药)0.4 mL/10 g进行急性毒性试验(MTD),均无明显的毒性反应。用大鼠(SD品系)按10 g/kg5、g/kg、2 g/kg设高、中、低3个给药剂量组,连续灌药5周后,以最大程度暴露其毒性,对其凝血系统指标、血液生化指标、各主要器脏病理组织学变化等检查,结果表明:除Cr具有一定的差异外,其他未见异常,各剂量组具有统计学意义的指标,在不同给药变化未见明显规律性,且与给药剂量未见显著相关性,从而推测该制剂无毒理作用。

鸡球虫病兽用中草药制剂的毒性试验研究

根据国家中药、天然药物长期毒性研究指导原则,用昆明小白鼠按最大给药量40g(生药)/kg对鸡球虫病兽用中草药制剂进行急性毒性试验(MTD),均无明显的毒性反应。在此基础上,用大鼠(SD品系)按10、5、2g/kg设高、中、低3个给药剂量组,以检测其毒性。在连续灌药5周后,对其凝血系统指标、血液生化指标、各主要脏器病理组织学变化等进行检查。结果表明,除Cr具有一定的差异外,其他未见异常,各剂量组具有统计学意义的指标,在不同给药变化无明显规律性,且与给药剂量无显著相关性,推测无明显毒理学意义。

防治奶牛子宫内膜炎中草药生物合元制剂对血清SOD和MDA影响的研究

为了观察中草药生物合元制剂对奶牛子宫内膜炎的防治作用,试验应用酶联免疫分析检测技术对子宫内膜炎患牛用药前后血清中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性进行检测。结果表明:中草药生物合元制剂能有效降低血清中MDA含量和提高SOD活性,对提高机体组织的抗炎能力具有显著促进作用。

鸡球虫病中草药制剂的研发及防治实验研究

本实验研究使用的兽用中草药制剂"球虫血痢散",经鸡柔嫩艾美尔球虫卵感染发病治疗、体外抑菌,实验动物药物急性及慢性毒理、理化测定,田间应用推广防治试验等一系列实验,研究表明:"球虫血痢散"对鸡大肠杆菌CVCC-245菌株有明显的抑制作用;鸡球虫卵人工感染防治实验有效率为94.17%～99.17%,田间应用推广试验有效率为95.1%。该组方药物筛选严格遵循中兽医医学"标本兼治"的防治理论,充分兼顾了养鸡生产中鸡球虫病的临床病理特性,其应用具有显著的防治效果及使用安全性。