罗格列酮对果糖饲养大鼠血糖血脂及血管重构的影响

目的 研究罗格列酮 (Rosiglitazone)对高果糖饲料饲养SD大鼠血管重构的作用和对血糖血脂的影响。方法 高果糖饲料饲养SD大鼠 1mon ,随机分为两组 :高果糖组 ,继续喂养高果糖饲料 1mon ;高果糖罗格列酮处理组 ,喂高果糖饲料和罗格列酮 (5mg·kg-1·d-1,溶于饮水中 ) 1mon。最后 ,每组一半大鼠麻醉从心脏取空腹血测血糖、血脂、胰岛素。每组另一半取主动脉和肠系膜小动脉 ,固定 ,切片 ,HE染色 ,用病理分析系统测量主动脉和肠系膜小动脉重构指标 :内径、中膜、中膜 /内径、中膜横切面积。结果 高果糖罗格列酮处理组与高果糖组对比 ,罗格列酮降低了血压 (16 0kPavs 18 0kPa ,P <0 0 1)、胰岛素 (34 89mIU·L-1vs5 3 5 6mIU·L-1,P <0 0 1)、甘油三酯 (0 5 6mmol·L-1vs1 16mmol·L-1,P <0 0 5 ) ,升高了胰岛素敏感指数 :血糖 /胰岛素的值 (0 2 6vs 0 14 ,P <0 0 5 ) ;增加了肠系膜小动脉内径 (173 0 μmvs 10 0 0 μm ,P <0 0 1) ,减小了中膜 (18 8μmvs 2 4 5 μm ,P <0 0 5 ) ,减小了中膜 /内径(10 90 %vs 2 5 5 5 % ,P <0 0 1) ;减小了主动脉中膜 (89 0μmvs 10 9 0 μm ,P <0 0 1) ,减小了中膜 /内径 (5 74 %vs6 80 % ,P <0 0 1)。结论 罗格列酮能降低果糖饲养SD大鼠的高血压 ,?

广州市登革1型病毒基因组测序及系统进化分析

目的:对引起2002年广州登革热的登革1型病毒分离株(71/02GZ)进行全基因组测序和系统进化分析。方法:采用C6/36细胞培养71/02GZ,分别采用RT-PCR,5’RACE和3’RACE扩增基因组中编码区序列、5’和3’末端非编码区序列,PCR产物克隆到载体并测序,拼接成全基因组序列,分别基于E基因序列、E/NS1连接区240 nt、基因组中10 016 nt进行系统进化分析。结果:71/02GZ株基因组全长10 735 nt,两端非编码区(NCR)长度分别为94 nt和462 nt。基于E基因序列、E/NS1连接区240 nt、基因组中10 016 nt的进化分析结果显示71/02GZ株和2002年广州分离株(GZ01/02,GZ/218/2002),1995年广东分离株(GD23/95,GD01/95)、1995年广州分离株(GZ01/95)组成一个基因型;而1999年广东分离株(GD05/99),1997年广东分离株(GD14/97)和1980年广州分离株(GZ/80)属于另一个基因型;另外,71/02GZ株同1998年印度尼西亚分离株(98901530 DF DV-1-ID)的同源性最高。结论:71/02GZ株可能是印度尼西亚输入的。

医学微生物学与免疫学理论教学改革初探

医学微生物学与免疫学知识量大、内容繁杂、系统性不强,难于记忆。目前教学内容繁冗、教学方法单一。只有对教学内容以及教学方法进行改革,才能减轻学生学习负担,提高教学效果。该文对医学微生物学和免疫学理论教学内容、教学方法的改革谈点个人看法。

过氧化物酶体增殖物激活受体与心血管疾病的关系

有多种化合物如脂肪酸、二十烷类以及人工合成的药物噻唑烷二酮类通过激活细胞核内的过氧化物酶体增殖物激活受体 (PPARs)而控制着多种基因的表达并进而改善 2型糖尿病的胰岛素抵抗、增加脂肪酸摄取和氧化、增强脂质代谢、降低血压。PPARs的激活也影响血管紧张度、平滑肌细胞增殖和迁移、平滑肌细胞的炎症。

实验性X综合征大鼠模型的建立

目的 建立一种典型的X综合症动物模型。方法 雄性SD大鼠施行两肾一夹术后普通饲料喂养 4周 ,诱发肾性高血压 ,继以高果糖饲料喂养 4周 ,诱导建立X综合症模型。结果 术后 4周 ,大鼠仅出现收缩压升高 ,血糖、血脂未见明显改变。高果糖饲料喂养 4周后 ,大鼠出现高血糖、高胰岛素血症、胰岛素抵抗、高血压和高脂血症。结论 肾性高血压形成后高果糖饮食 1个月 ,可诱导SD大鼠出现典型的X综合症 ,为研究胰岛素抵抗及其伴随的心血管疾病提供了一种理想的动物模型。

温州无偿献血人群丙肝病毒感染情况及其基因型的研究

目的了解温州市无偿献血人群丙型肝炎病毒感染及其基因分型的情况。方法对2010年1月～2012年12月温州中心血站采集的无偿献血者血液进行丙型病毒性肝炎病毒抗体(抗-HCV)的检测,并对检验结果进行统计分析,同时采用RT巢式-PCR法,对2012年度68例HCV-IgG阳性者进行HCV-RNA的检测及基因分型。结果温州市无偿献血者丙型肝炎病毒抗体不合格率各年份基本保持稳定,差异无统计学意义(P<0.05);而68例抗-HCV阳性标本的基因分型结果显示,2a单阳性为4.41%,1b单阳性为30.88%,1b和2a双阳性为60.29%,1b总阳性率为91.18%,2a总阳性率为64.71%。结论温州市无偿献血者HCV感染率不高,总体趋稳,所感染的HCV基因型以1b型占优势,并且基因型1b和2a混合感染率较高。

丙型肝炎病毒HLA-A*1101和A*2402限制性CD8^+T细胞表位的研究

目的:鉴定出丙型肝炎病毒(HCV)特异性HLA-A*1101限制性和A*2402限制性CD8+T细胞表位。方法:采用T细胞表位预测软件SYFPEITHI预测HCV特异性CD8+T细胞表位,合成HLA-A*1101限制性、A*2402限制性候选表位;建立永生化的HLA-A*1101阳性、A*2402阳性B细胞株,采用竞争性肽结合实验检测候选表位与HLA-A*1101或A*2402分子的结合力;候选表位体外分别刺激HLA-A*1101阳性或A*2402阳性HCV感染者外周血单个核细胞(PBMCs)后,采用酶联免疫斑点(ELISPOT)和细胞内细胞因子染色(ICS)实验分别检测肽特异性分泌γ-干扰素(IFN-γ)的细胞的水平和肽特异性IFN-γ+CD8+T细胞的水平。结果:5条HLA-A*1101限制性候选表位中,NS3_609(ITLTHPITK)和NS2_165(VVFSDMETK)与HLA-A*1101分子具有高结合力。3条HLA-A*2402限制性候选表位中,NS3_373(KCDELASKL)和NS5b_382(YYLTRDPTI)与HLA-A*2402具有高结合力;在HLA-A*1101阳性HCV感染者PBMCs中存在NS3_609和NS2_165特异性分泌IFN-γ的CD8+T细胞,而在HLA-A*2402阳性HCV感染者PBMCs中存在NS3_373和NS5b_382特异性分泌IFN-γ的CD8+T细胞。结论:本研究证实NS3_609(ITLTHPITK)和NS2_165(VVFSDMETK)为全新的HCV特异性HLA-A*1101限制性CD8+T细胞表位,NS3_373(KCDELASKL)和NS5b_382(YYLTRDPTI)为全新的HCV特异性HLA-A*2402限制性CD8+T细胞表位。

罗格列酮对果糖饲养的肾性高血压大鼠糖、脂代谢的影响

为探讨X综合症大鼠糖、脂代谢的变化以及罗格列酮的干预作用 ,采用高果糖饲养两肾一夹SD大鼠建立典型的X综合症模型 ,观察罗格列酮对其糖、脂代谢的影响。实验分用药组 [罗格列酮 5mg (kg·d)干预 ]、未用药组 (X综合症模型 )和假手术组 ,分别测定各组术后 8周和 11周的收缩压及血脂、血糖和血胰岛素水平 ,同时计算胰岛素敏感指数。结果发现 ,8周时用药组和未用药组收缩压、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、空腹血糖及血浆胰岛素水平与假手术组相比显著升高 ,胰岛素敏感指数、高密度脂蛋白胆固醇则明显降低。 11周时用药组收缩压、甘油三酯、空腹血糖及血清胰岛素水平与 8周时比较显著降低 ,总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇和胰岛素敏感指数显著升高 ,低密度脂蛋白胆固醇升高但没有显著性意义 ;而另两组 11周时与 8周时比较变化不明显。结果提示 ,罗格列酮能降低X综合症大鼠的血压 ,减轻胰岛素抵抗 ,纠正糖、脂代谢紊乱。

丙型肝炎病毒CTL-Th表位嵌合DNA疫苗的构建

目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)CTL-Th表位嵌合DNA疫苗并探讨其体内免疫学效应。方法:基于我们前期从HCV中鉴定的4条HLA-A*0201限制性CTL(细胞毒性T细胞)表位(NS4b78-86、NS5a367-375、C181-189和NS2172-180),2条HLA-A*1101限制性CTL表位(NS3609-617和NS5b251-259),1条HLA-A*2402限制性CTL表位(NS5b382-390)和2条Th(辅助性T细胞)表位(P73-15和NS5A276-288),合成编码串联CTL表位和Th表位的基因并克隆入真核表达质粒pc DNATM3.1/myc-His(-)A;阳性重组质粒分别免疫HLA-A*0201、HLA-A*1101和HLA-A*2402转基因小鼠,采用ELISPOT实验和CTL杀伤实验检测小鼠脾细胞内单个CTL表位特异性T细胞的水平及其杀伤靶细胞的效应。结果:合成了含有Kozak序列和编码Igκ信号链序列、7条CTL表位、2条Th表位的基因序列并顺利克隆入了真核表达质粒。阳性重组质粒免疫三种转基因小鼠后,采用ELISPOT实验检测到小鼠脾细胞内存在单个CTL表位特异性分泌IFN-γ的CTL,后者可杀伤负载单个CTL表位的脾细胞。结论:成功构建了可诱导CTL反应的HCV的CTL-Th表位嵌合DNA疫苗。

登革病毒抗原肽免疫小鼠诱导特异性CD4^+ T细胞反应

目的:探讨4条登革病毒抗原肽在不同遗传背景小鼠中的免疫原性。方法:4条登革病毒抗原肽(C45-57KLV-MAFIAFLRFL,E396-408SSIGKMFEATARG,NS323-35YRILQRGLLGRSQ和NS3141-155NREGKIVGLYGNGVV)中每条肽分别免疫BALB/c小鼠和C57BL/6小鼠;3周后,处死小鼠并制备脾细胞悬液;不刺激或同样抗原肽刺激脾细胞后,采用细胞内细胞因子染色流式细胞术(ICS)检测小鼠脾细胞CD4+ T细胞中肽特异性产生IFN-γ或IL-4的CD4+ T细胞的百分比。结果:肽C45-57可诱导BALB/c小鼠产生特异性的IFN-γ+ CD4+ T细胞(0.72%±0.04% vs 0.04%±0.02%,P<0.05)而肽E396-408则诱导产生特异性的IL-4+ CD4+ T细胞(0.09%±0.01%vs0.01%±0.01%,P<0.05);肽E396-408、NS323-35和NS3141-155均可诱导C57BL/6小鼠产生特异性的IFN-γ+ CD4+ T细胞(分别为0.31%±0.03%vs0.02%±0.01%,P<0.05;0.21%±0.03% vs 0.04%±0.01%,P<0.05;0.44%±0.04% vs 0.02%±0.01%,P<0.05),而肽C45-57可诱导产生特异性的IL-4+ CD4+ T细胞(0.45%±0.05% vs 0.02%±0.02%,P<0.05)。结论:肽C45-57和E396-408在BALB/c小鼠中具有免疫原性而肽C45-57、E396-408、NS323-35和NS3141-155在C57BL/6小鼠中具有免疫原性。

登革病毒HLA-A*0201限制性T细胞表位诱导免疫反应的研究

目的:探讨登革病毒(DENV)HLA-A*0201限制性T细胞表位诱导DENV血清型间交叉反应性T细胞的效应。方法:基于已鉴定DENV-1中HLA-A*0201限制性CD8+T细胞表位(NS4b40-48TLYAVATTI)序列,合成在其他血清型中相似的候选表位,采用MHC-肽复合物稳定性实验检测候选表位与HLA-A*0201结合力。采用酶联免疫斑点(ELISPOT)实验研究已鉴定表位及候选表位免疫HLA-A*0201转基因小鼠产生的CD8+T细胞识别相同及相似表位能力;采用ELISPOT实验研究不同DENV血清型感染HLA-A*0201转基因小鼠是否产生能识别已鉴定表位及候选表位的T细胞反应。结果:DENV-3中NS4b39-47TLYAVATTV与HLA-A*0201具高结合力,但DENV-2中NS4b39-47TLYAVATTF与HLA-A*0201结合力弱。DENV-1-NS4b40-48和DENV-3-NS4b39-47免疫的转基因小鼠脾、淋巴结和外周血中存在可识别DENV-1-NS4b40-48、DENV-2-NS4b39-47和DENV-3-NS4b39-47的交叉反应性CD8+T细胞。在DENV-1,-2,-3感染的转基因小鼠体内也存在类似的T细胞反应。结论:DENV-3中NS4b39-47TLYAVATTV为新的CD8+T细胞表位,该表位及已报道表位NS4b40-48TLYAVATTI均可诱导DENV血清型间交叉反应性CD8+T细胞反应,二者有助于我们研究DENV血清型间交叉反应性CD8+T细胞的功能以及用于评估DENV候选疫苗的T细胞免疫效应。

登革病毒高度保守的HLA-A*1101限制性T细胞表位鉴定和体内免疫反应研究

目的:鉴定登革病毒2型(DENY-2)HLA-A~*1101限制性T细胞表位并探讨其诱导的T细胞反应的特征。方法:基于DENV-2的氨基酸序列,采用T细胞表位预测软件预测HLA-A~*1101限制性候选T细胞表位;基于HLA-A~*1101转基因小鼠,采用ELISPOT实验、ELISA实验和CD8^+T细胞(CTL)杀伤实验研究候选表位的HLAA~*1101限制性和所诱导的T细胞反应的特征。结果:在合成的14条候选表位中,9条肽(NS1_(161-170)、NS1_(263-272)、NS3_(6-15)、NS4b_(44-53)、NS3_(33-42)、C_(58-67)、E_(30-38)、NS3_(576-584)和NS4a_(72-80))免疫HLA-A~*1101转基因小鼠可诱导产生肽特异性分泌IFN-γ的T细胞。除了分泌IFN-γ,C_(58-67)和NS3_(576-584)特异性T细胞也可分泌TNF-α,而E_(30-38)特异性T细胞更可同时分泌TNF-α和IL-6。DENV-2感染的HLA-A~*1101转基因小鼠体内也可检测到针对NS4b_(44-53)、NS3_(33-42)、C_(58-67)、E_(30-38)、NS3_(576-584)和NS4a_(72-80)的分泌IFN-γ的T细胞。采用上述6条肤的混合物免疫HLA-A~*1101转基因小鼠所诱导的效应细胞可显著杀伤DENV-2感染的小鼠脾单核细胞。结论:本研究鉴定出了9条全新的DENV-2特异性HLA-A~*1101限制性T细胞表位。

丙型肝炎病毒HLA-A*0201限制性CTL表位免疫学效应研究

目的:研究前期实验鉴定的2条丙型肝炎病毒HLA-A*0201限制性CTL(活化的CD8+T细胞)表位的体内外免疫学效应。方法:采用丙型肝炎病毒HLA-A*0201限制性CTL表位肽C_181(LLSCLTTPV)和NS2_172(VLQAGLIRV)分别体外刺激HLA-A*0201阳性健康志愿者外周血单个核细胞(PBMCs)和免疫HLA-A*0201转基因小鼠,采用酶联免疫斑点实验(ELISPOT)和细胞内细胞因子染色(ICS)/流式细胞术检测表位肽特异性CD8+T细胞的水平。结果:C_181和NS2_172诱导HLA-A*0201阳性PBMCs产生了高水平的肽特异性分泌IFN-γ的细胞和肽特异性IFN-γ+CD8+T细胞;在C_181和NS2_172免疫的HLA-A*0201转基因小鼠脾细胞中检测到了肽特异性分泌IFN-γ的细胞和肽特异性IFN-γ+CD8+T细胞。结论:C_181和NS2_172具有较好免疫学效应,有望用于研发CTL表位肽疫苗。

肾素-血管紧张素系统对果糖诱导的SD大鼠胰岛素抵抗的影响

目的研究肾素-血管紧张素系统对胰岛素抵抗的影响。方法雄性SD大鼠，随机分为4组，每组6只，对照组：SD大鼠+标准饲料12周，两肾-夹肾血管性高血压组(2K1C-+RHR，)：2K1C-RHR+标准饲料8周，果糖组(HFD，)：SD大鼠+标准饲料4周+高果糖饲料4周+标准饲料4周，果糖饲养两肾-夹肾血管性高血压组(2K1C-RHR+HFD，)：2K1C-RHR+高果糖饲料4周+标准饲料4周。检测大鼠血压和空腹血糖、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、胰岛素。结果与果糖组相比，果糖饲养两肾-夹肾血管性高血压组的血压、血糖、胰岛素和甘油三酯显著升高(P<0．01)。结论肾素-血管紧张素系统的激活虽然没有导致胰岛素抵抗的产生，但却大大加强了果糖喂养所诱发的胰岛素抵抗；在一定条件下，肾素-血管紧张素系统的激活的确可以作用于胰岛素抵抗。

罗格列酮对果糖饲养SD大鼠肝肾功能、血脂、血常规的影响

目的:了解罗格列酮(Rosiglitazone)处理果糖饲养的SD大鼠后对肝、肾功能,血常规的影响。方法:将24只成年健康SD大鼠随机分为A、B两组。A组持续喂高果糖饲料1月后再随机分为:①高果糖饲养组;②果糖饲养同时用罗格列酮处理组。B组喂标准饲料1月后随机分为:①对照组;②罗格列酮处理组。采用氧化酶法、放免法等技术方法测定大鼠的空腹血糖、血脂、胰岛素水平,肝功能,肾功能,血常规等指标。结果:与对照组相比:果糖饲养组大鼠直接胆红素、总胆红素、间接胆红素、血糖、胰岛素、总胆固醇、甘油三酯等指标均升高;而总蛋白、钾、钠、氯、胰岛素敏感指数等指标均下降,差异均具有统计学意义(P＜0．05)。而罗格列酮处理组中总胆红素、间接胆红素、尿酸和尿素/肌酐等指标均升高;而总蛋白、球蛋白、钾、钠、氨水平、甘油三酯、血常规细胞数、血红蛋白均下降,差异具有统计学意义(P＜0．05)。与果糖饲养组相比,果糖饲养罗格列酮处理组的总胆红素、直接胆红素、谷草转氨酶、间接胆红素、谷丙转氨酶、总胆固醇均升高;而胰岛素、甘油三酯、钙离子水平均下降差异均具有统计学意义,且前面三个指标的差异更明显(P＜0．05)。结论:罗格列酮在治疗过程中虽改善了果糖饲养SD大鼠所引起的胰岛素抵抗,但会加重肝肾功能障碍;对机体有一定的毒副作用。

磁共振诊断前列腺炎并发梗阻性无精子症患者射精管梗阻情况的效用研究

目的:分析磁共振检查(MR)在青年前列腺炎并发射精管梗阻性无精子症患者的检查特征,为临床青年前列腺炎患者并发射精管梗阻性无精子症患者的临床诊断提供参考。方法:回顾性分析我院2014年1月至2015年12月收治的青年慢性Ⅲ型前列腺炎患者并发射精管梗阻性无精子症患者33例,所有患者均行MR检查梗阻数量,患者均行手术治疗,详细记录术中所见射精管梗阻数量,将MR检查与术中所见结果进行比较,计算MR诊断青年前列腺炎并发射精管梗阻性无精子症结果的准确性、特异性和灵敏度,比较MR和术中所见的kappa一致性系数。分析前列腺炎并发射精管梗阻性无精子症患者的MR特征,及MR对青年前列腺炎并发射精管梗阻性无精子症患者的临床价值。结果:MR术前诊断射精管粘连情况:射精管单点粘连23例,两点粘连5例,多点粘连5例。术中所见:射精管单点粘连21例,两点粘连6例,多点粘连6例,MR诊断与手术中所见的kappa一致性系数为0.814,该方法和手术中所见具有高度的一致性。MR法的敏感度为93.55%、准确度为90.91%、特异度为50.00%。前列腺炎并发射精管梗阻性无精子症MR特征为:前列腺以弥漫性炎症为主,其次为局灶性,射精管以单点粘连为主,射精管增强扫描31例出现管壁强化。结论:青年慢性Ⅲ型前列腺炎患者较易并发射精管梗阻性无精子症,MR检查可明确病变特征,为青年前列腺炎合并射精管梗阻性无精子症患者的手术方案的制定提供准确信息,具有较高的临床价值。

小鼠抗EV71衣壳蛋白VP1单克隆抗体的制备

目的制备肠道病毒71型(EV71)衣壳蛋白VP1特异性小鼠单克隆抗体(mAb)并检测其特异性。方法合成编码EV71-VP1的基因并克隆入原核表达质粒p ET21a;采用重组表达的VP1免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞融合并采用ELISA筛选可分泌抗VP1的m Ab的杂交瘤细胞株;将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔,采用蛋白G亲和层析法从腹水中纯化mAb,并采用SDS-PAGE和Western blot法检测m Ab的纯度和特异性;EV71感染Vero细胞,采用间接免疫荧光细胞化学染色和Western blot法评估所制备m Ab识别EV71的能力。结果成功表达了EV71-VP1,制备出了4株杂交瘤细胞(6E、8D、9F和10C),杂交瘤细胞所分泌的小鼠m Ab均可识别EV71。结论成功制备了小鼠抗EV71衣壳蛋白VP1的m Ab。

让语文教学充满活力——高中语文智慧课堂教学模式研究

智慧课堂教学模式是以学生综合素质发展为目的的创新教学模式。在智慧课堂教学中,可以对教学场景和教学方法进行创新构建,促进高中语文课堂教学效率的提升。本文就高中语文智慧课堂的构建提出了自己的意见和建议。

结核分枝杆菌esxN特异性细胞表位的鉴定及其在肺结核诊断中的应用

目的鉴定结核分枝杆菌早期分泌靶向抗原6(ESAT-6)样蛋白esxN特异性HLA-A~*0201限制性细胞毒性T细胞(CTL)表位并用于肺结核诊断。方法采用SYFPEITHI软件预测esxN中受HLA-A~*0201限制性的CTL表位并合成候选表位;采用主要组织相容性复合体(MHC)-肽复合物稳定性实验检测候选表位与HLA-A~*0201分子结合力;采用酶联免疫斑点实验(ELISPOT)研究候选表位在HLA-A~*0201转基因小鼠中的免疫原性;基于鉴定的CTL表位、ESAT-6和培养滤液蛋白10(CFP-10),采用ELISPOT检测肺结核患者体内表位及蛋白特异性CTL的水平。结果 6条候选CTL表位中,esxN_(15-24)(AMIRAQAASL)和esxN_(48-57)(VACQEFITQL)与HLA-A~*0201分子有较高结合力;候选表位免疫HLA-A~*0201转基因小鼠,esxN_(48-57)诱导产生可分泌γ干扰素(IFN-γ)的T细胞反应;在HLA-A~*0201阳性肺结核患者中检测到esxN_(15-24)、esxN_(48-57)、ESAT-6、CFP-10特异性分泌IFN-γ的T细胞;esxN_(15-24)、esxN_(48-57)诊断肺结核的敏感率与ESAT-6、CFP-10相近。结论从结核分枝杆菌esxN中鉴定出两条HLA-A~*0201限制性CTL表位,其有望用于辅助肺结核病的诊断。

内燃机冷却系的功用和维护

本文主要说明冷却液使用和冷却液温度选用直接影响内燃机的寿命和经济性,冷却系须定期清除灰尘杂物,文内详细叙述了清除方法,如何维护内燃机中各主要零件,使内燃机能保持正常运转。