抗菌肽基因转化樱桃矮化砧木获得抗根瘤病的转基因植株

建立了樱桃（PrunuspseudocerasusLindl．）矮化砧木茎尖高频再生系统，并利用根癌土壤杆菌（Agrobacteriumtumefaciens（SmithetTownsend）Conn）介导将gus及抗菌肽基因导入樱桃矮化砧木，获得19个转化株系。经Southernblot检测证明，抗菌肽基因已整合到樱桃的基因组。转基因植株接瘤实验、gus基因表达产物的颜色反应及叶片提取液对根癌土壤杆菌C58的抑菌实验表明，抗菌肽基因在转化植株中可能已得到有效表达，试管苗具有明显的抗根瘤病特性。还研究了茎尖分生组织的种质转化特点，结果表明它是一个较好的转化系统，可获得较高的转化频率。

转豇豆胰蛋白酶抑制剂基因抗虫甘蓝植株的获得

利用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导,将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入甘蓝(Brassica oleracea var.capitata L.)栽培品种“京丰”和“迎春”,并分别获得了转基因再生植株。对NPTⅡ的ELISA检测表明,标记基因NPTⅡ已在再生植株中得到有效表达。对转化植株进行Southern blot分子杂交实验进一步证明CpTI基因已整合到甘蓝的基因组。实验室内的叶片离体饲虫及盆栽饲虫试验表明,转基因甘蓝对菜青虫具有一定抗性。实验中还观察到,采用愈伤组织分化途径可以获得较高的转化频率,但嵌合体较多;而直接分芽的途径转化率低,但嵌合体较少。

黑核桃体细胞胚状体发生及其基因转化系统的建立

以我国种植的优良品种黑核桃 (JuglansnigiaL .)幼胚和幼叶为外植体诱导出体细胞胚状体 ,通过根癌农杆菌介导将nptⅡ和gus基因导入体细胞胚 ,同时研究了激素、体细胞胚的发育时期及预培养等对转化率的影响 ,建立了黑核桃体细胞胚基因转化系统 ,还分析了体细胞胚胎转化系统的特点和潜力。

天兰冰草染色体对小冰麦外植体再生能力的影响及基因的染色体定位

本文研究了天兰冰草（Ａｇｒｏｐｙｒｏｎｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｍ２ｎ＝４２）染色体导入小麦后对小冰麦外植体再生能力的影响，从而分析调控再生能力的基因所在天兰冰草染色体的定位。对异源八倍体小冰麦的研究表明，与天兰冰草强再生能力有关的基因主要分布在附加到中２的冰草染色体组上；对７个异附加系小冰麦的研究进一步表明，冰草强再生能力的性状由多基因调控，这些基因主要分布在附加到ＴＡＩ－１１、ＴＡＩ－１２、ＴＡＩ－１３的冰草染色体上。此外，小冰麦杂种Ｆ１的研究表明，在组织培养中同样能够表现出杂种优势。

网纹瓜单细胞固-液双层培养及体细胞无性系建立(简报)

网纹瓜(Cucumis melo Var.reticulatus)是名贵的优质甜瓜,为葫芦科、甜瓜属植物。我国引种后生长良好,产量高,经济效益好,每年从日本购进大量杂交种子。但由于种子不纯,基因型差异较大,植株不整齐,产量不稳定,而且价格昂贵。因此。

五个异源八倍体小冰麦的二种同工酶分析

实验结果表明,天兰冰草的过氧化物酶同工酶具有P_(1-2)、P_(3-19)二条特征酶带.五个异源八倍体小冰麦的过氧化物同工酶谱分两类:中_1、中_2为一类,具有冰草的P_(12)特征酶带而缺少P_(3-19).中_3、中_4、中_5为另一类.缺少P_(1-2)而具有冰草的P_(3-19)特征酶带.此与染色体组分析结果(中_2是附加冰草的同一个染色体组.中_3、中_4、中_5附加了冰草的另一个染色体组)相一致.可分别以P_(1-2)、P_(3-19)作为鉴别冰草两个不同染色体组的标志酶帝.冰草的酯酶同工酶具有特征酶带EST-P,可作为中_2所附加的冰草染色体组的标志酶带.

甜樱桃新品系13-38茎尖无性系建立及试管苗嫁接研究

本文报告通过茎尖培养及试管苗嫁接快速繁殖甜樱桃新品系13-38苗木。取新品系母树休眠芽制备成无菌外植体,分别在MS附加6-BA 0.1-0.5mg/l,IAA 0.1mg/l培养基及MS附加ZT1—1.5mg/l,IAA 0.1—0.25mg/l培养基中进行微型扦插及茎尖分化培养,建立茎尖无性系。试管苗年扩繁量为4~8和10~3。以新品系试管苗为接穗,采用切接,皮接两种方法嫁接于四种砧木,成活率为20—70%不等。实验表明13-38试管苗与砧木新品系1090试管幼苗的亲和力较好。接合部位预先施用200ppm的NAA可提高嫁接成活率。

苦参对鸡大肠杆菌的抑菌作用及其机理研究

目的阐明苦参的抑菌作用及机理,为生产实践提供理论依据。方法采用牛津杯法及液体倍比稀释法对鸡大肠杆菌等常见致病细菌进行了敏感性试验;通过电镜观察,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳对蛋白表达的研究,生长曲线的绘制以及流式细胞仪对菌体细胞周期的分析,对苦参碱粗提物的抑菌作用及机理进行研究。结果苦参对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌均有明显抑制作用,抑菌谱广;药物是通过抑制鸡大肠杆菌功能蛋白的表达,从而影响菌体的细胞周期,使I期菌数增加,R期菌数下降,最终菌体不能达到正常对数生长期而直接进入衰亡期;菌体形态结构发生明显变化,表现为菌体缢缩变形,中间凹陷呈规则元宝状,细胞质固缩,质壁分离,最终细胞壁破损,内容物泄漏而使菌体死亡。结论苦参碱对鸡大肠杆菌抑菌机理是抑制调控细菌生长、分裂相关蛋白的合成,阻滞其分裂和生长,并且与细胞内的蛋白质结合,细胞质固缩、解体而死亡。

雪花莲凝集素基因转化菊花及转基因植株的抗蚜性研究

针对菊花存在的蚜虫虫害问题 ,采用农杆菌介导法将gna基因导入菊花叶片 ,共获得 93个转化克隆。研究了影响转化频率的主要因素 ,得出在使用 pH5 6的YEB培养基 ,菌液浓度OD60 0 =0 4 ,4 5日苗龄中部叶片预培养 1d ,共培养 4d ,共培养的培养基中加入 0 5mg/LGA3 的条件下可使转化频率提高到 11 2 1%。PCR、实时荧光PCR检测结果表明 ,外源基因已整合到植物细胞基因组中。转化植株幼苗饲虫实验表明 ,不同转化克隆的抗蚜性差异较大 ,蚜口密度抑制率从 10 %～ 84 %不等 ,平均蚜口密度抑制率为 39.4 %。

甘薯花青素的提取及其抑菌效果分析

建立了甘薯块根花青素(sweetpotatoanthocyanin,SPAC)的大孔树脂吸附制备技术,分析了其抑菌作用和机理。结果表明,在0.8%柠檬酸、物料比1∶200,60℃温水浴提取2h的条件下可获得最大的提取率3.81mg·g-1。粗提物经AB-8大孔树脂过柱纯化后可获得色价为225.1E的纯品,色价提高6倍。研究发现SPAC对3种常见致病菌均有抑菌作用,并与其浓度呈正相关。通过电镜观察、SDS-PAGE分析及生长曲线比较表明,SPAC抑菌机理是通过SPAC与细胞中的蛋白或酶结合,使其变性失活,抑制对数生长期的细胞分裂,而后使细胞质固缩、解体,导致细胞死亡。SPAC具有色素和抑菌双重功能,是理想的功能性天然色素。

大白菜AB-81高频再生系统的建立及gusA基因瞬时表达的研究

以大白菜自交系AB 81的子叶和真叶切块为外植体 ,建立了高频不定芽离体再生系统。在MS附加TDZ 0 .2mg/L ,NAA 2 .0mg/L ,AgNO310mg/L和ABA 0 .2 5mg/L的再生培养基上 ,子叶和真叶的不定芽再生频率分别达到 93.3%和 90 .0 % ,每块外植体的不定芽数达 3～ 6个 ,最多达 2 1个。以EHA10 5/pMOG4 10为载体转化侵染大白菜AB 81的子叶 ,获得较高gusA基因瞬时表达频率的条件为 :子叶预培养 2～ 3d ;侵染的工程菌液的浓度OD 0 .3～ 0 .5;侵染时间 2～ 10min ;共培养时间 2～

芦荟抗氧化物质活性及对红细胞的保护作用

目的 : 对 6种芦荟提取物的抗氧化活性进行比较研究 ,进一步纯化并探讨抗氧化物对动物红细胞的保护功能。方法 : 采用分别产生氧自由基 (O-2· )和羟自由基 (·OH)的化学模型体系研究清除自由基的活性 ,进一步利用硅胶柱和薄层层析法对龙山芦荟 (Aloe berebihoria)的提取物进行纯化 ,并用反相高压液相色谱法分析其纯度 ,采用体外红细胞体系研究抗氧化物对动物细胞的保护功能。结果 : 龙山芦荟 (Aloe berebihoria)提取物的清除两种自由基的能力最强 ,清除率分别为 3 2 .1 9%和 2 6 .0 5 % ,经纯化得到组分 A(比移值 Rf为 0 .497) ,高压液相色谱分析为单一组分 ,保留时间 (Rt)为 1 5 .95 6 min,醋酸镁甲醇显色反应表明该物质为具有酚羟基的蒽醌类物质。A组分对由活性氧引起的红细胞溶血有较高的抑制作用 ,半抑制量 (IC50 )为 0 .85 6 g/L。结论 : 龙山芦荟提取物的组分 A对 O-2· 和· OH具有强烈的清除作用 ,从而抑制红细胞膜脂质过氧化 。

高产细菌素菌株WJ K84-1的诱变筛选及其对植物病原菌抑菌机理的研究

以发根土壤杆菌K84为供试菌株 ,对其进行紫外诱变 ,采用定向竞争选择技术 ,筛选出高产细菌素的目的菌株WJK84_1 ,并对根癌农杆菌的抑菌作用及其抑菌机理进行了研究。通过琼脂扩散法和液体培养法测试表明 ,WJK84_1菌株和其产生的P_2 0 0 1细菌素均对C5 8病原菌有明显的抑制作用。蛋白电泳谱带分析示出 ,细菌素对C5 8病原菌的作用是抑制蛋白合成 ,使其蛋白总量表达水平呈下降趋势 ,尤其是大分子量蛋白含量下降显著 ,有的蛋白谱带 (R1、R4 )缺失 ,且随细菌素浓度的增加 ,抑制作用更加强烈。扫描电镜观察 ,细菌素作用后的菌体不同部位出现缢痕 ,直至缢缩成颗粒状残体而死亡。透射电镜观察进一步证明 ,C5 8菌细胞膜被裂解 ,细胞结构被破坏而致死。樱桃接瘤实验表明 ,WJK84_1菌株和其产生细菌素均可抑制根瘤发生 ,抑瘤率达到 83 4

培养条件对银杏悬浮培养细胞黄酮合成影响研究

对12个不同品种的银杏树幼叶及其诱导的愈伤组织进行了银杏黄酮含量测定,发现其存在较大差异.梅核品种幼叶黄酮含量最高,为3.32%,大白果品种幼叶黄酮含量最低,为0.84%;梅核品种幼叶愈伤组织黄酮含量最高,达1.26%,岭南品种幼叶愈伤组织黄酮含量最低,为0.22%.选取生长旺盛、银杏黄酮含量高的愈伤组织在B5液体培养基中进行了银杏细胞悬浮培养,研究了多种条件对银杏细胞生长和银杏黄酮含量的影响.结果表明,在150mL培养瓶中装有50mL培养液,接种量为鲜质量30～40g/L,对培养细胞给予3000～4000lx的光照、以蔗糖为碳源最有利于黄酮的合成,以葡萄糖为碳源则最有利于细胞生长.HPLC检测结果显示,银杏悬浮培养细胞中银杏黄酮含量可达细胞干质量的2.82%.

樱桃砧木叶片再生系统建立及抗菌肽基因转化

以优良樱桃砧木新品系 98 1、Colt、大青叶为试材进行叶片离体再生及根癌农杆菌介导遗传转化 ,建立了高频率再生系统 ,并获得抗菌肽转基因植株。诱导叶片再生的最佳培养基为MS附加BA 1.0～2 .0mg/L、NAA 0 .3～ 0 .5mg/L、GA 0 .5mg/L、AgNO3 5 .0～ 10 .0mg/L。农杆菌及受体感受态是影响转化的关键 ,延迟筛选可提高叶片中转化细胞对卡那霉素的抗性而利于再生。PCR及SouthernBlot检测为阳性 ,表明抗菌肽基因已整合到樱桃砧木 98 1基因组。

新乔纳金苹果遗传转化及转基因植株再生

新乔纳金苹果遗传转化及转基因植株再生张志宏１景士西１王关林２方宏筠２吴禄平１（１沈阳农业大学果树园艺系，沈阳１１０１６１；２辽宁师范大学生命科学院，大连１１６０２９）关键词苹果；根癌农杆菌；转化；转基因植株ＧｅｎｅｔｉｃＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏ...

苹果主栽品种高效遗传转化系统的建立及其影响因子的研究

研究影响农杆菌介导的苹果主栽品种遗传转化的若干因子效应，建立起新乔纳金苹果简单、高效的遗传转化系统。外源基因向新乔纳金苹果细胞转移的效率明显高于皇家嗄拉和富士苹果。菌株ＥＨＡ１０５介导基因转移的能力比菌株ＬＢＡ４４０４明显高。用乙酰丁香酮、磷酸饥饿、低ｐＨ值等ｖｉｒ基因诱导因子处理菌株ＥＨＡ１０５的细胞，未能提高转化效率。叶片在菌液中的浸泡时间不仅影响基因转移效率，而且影响头孢霉素对外植体上农杆菌生长的抑制效果。共培养时，叶片远轴面与培养基接触比近轴面与培养基接触的转化效率高。

甘薯花青苷色素的抗氧化活性及抑肿瘤作用研究

目的:为在食品中应用甘薯花青苷色素(SPAC),研究其抗氧化活性及抑肿瘤作用。方法:采用体外实验测定SPAC清除??O2和?OH及抑制丙二醛(MDA)生成的能力。测定SPAC对小鼠血清及皮肤超氧化物歧化酶(SOD)活性、抑制S180生长和血谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性与MDA生成的作用。结果:在体外实验中SPAC能清除??O2和?OH,与同浓度VC相比,清除率分别提高30.63%和20.57%;小鼠灌胃SPAC后的血清和皮肤细胞中SOD活力分别提高27.30%和13.50%;SPAC对小鼠肉瘤S180有抑制作用,最高抑瘤率达到43.12%;与对照组相比,在用SPAC的抑瘤组小鼠血清中GSH-Px和SOD活性明显提高,MDA降低。结论:SPAC具有抗氧化及抑肿瘤作用,在食品和化妆品中有开发潜力。

栀子多糖的抗肿瘤活性研究

采用3种不同的方法分别测定了栀子(GardeniajasminoidesEills)多糖对3种不同肿瘤细胞的抑制情况,结果表明,栀子多糖具有比较广谱的抑瘤效应。土豆碟法测定栀子多糖对根癌农杆菌(Agrobacteriumtume faciens)C58诱导植物根瘤的最高抑制率为68.4%(1.258mg/mL栀子多糖);MTT法测定栀子多糖对人红白血病细胞K562的无毒剂量约为0.4μg/mL,低毒剂量约为14.33μg/mL,半致死剂量约为62.61μg/mL,100μg/mL栀子多糖对人红白血病K562细胞的抑制率为63.2%;实体瘤称重法测定栀子多糖对小鼠腹水肝癌Hca f实体瘤的抑制情况表明,栀子多糖口服给药效果优于注射给药的效果,500μg/(kg·d)的栀子多糖口服对小鼠肝癌实体瘤的抑制率达49%。

番茄转果聚糖合酶基因获得抗寒植株

从枯草芽孢杆菌毖Bacillus subtilis中分离克隆果聚糖合酶(levansucrase)基因sacB,构建置于CaMV35s启动子调控下的表达载体,通过农杆菌介导,将sacB基因导入番茄栽培品种碧娇。Southern杂交证明,目的基因已经整合到番茄基因组中。RT-PCR分析表明,sacB基因在转基因植株中获得转录。在含50mg·ml-1卡那霉素生根培养基中转化植株生根良好。抗冻试验、叶片电导率测定、多糖含量测定的试验结果均表明,果聚糖合酶基因赋予转基因番茄良好的抗寒性状。