结合恶性胸腔积液中脱落细胞探讨上皮细胞-间质转化与非小细胞肺癌的相关性

目的探讨恶性胸腔积液(malignant pleural effusion,MPE)中非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)上皮细胞-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关分子标志物的表达及意义。方法对823例胸水标本进行液基细胞薄层检测(thinPrep cytology test,TCT),结合活检结果确诊107例NSCLC标本,随机分成NSCLC细胞组、NSCLC活检组及NSCLC癌旁组织组三组,对其中39例NSCLC细胞组胸水标本进行沉渣后包埋、切片,采用免疫组化SP法检测三组中vimentin、E-cadherin、N-cadherin、β-catentin的表达,并进行对比分析。结果E-cadherin、β-catentin阳性/异常阳性率在NSCLC细胞组、活检组均明显低于癌旁组织组(P<0.05)。NSCLC细胞组、活检组N-cadherin、vimentin的阳性率均明显高于癌旁组织组(P<0.05)。同时亦发现,在NSCLC细胞组中,E-cadherin表达与分化程度和淋巴结转移有关(P<0.05),β-catentin异常阳性与分化程度有关(P<0.05),N-cadherin与vimentin表达与淋巴结转移有关(P<0.05)。以上4个抗体表达/异常表达均与患者年龄、性别、吸烟史和组织学分型无关(P>0.05)。结论MPE中NSCLC细胞具备EMT表型,从细胞学角度进一步证实EMT现象存在于NSCLC,为新的靶向治疗药物的研究和治疗靶点提供新思路。

CK34βE12、P63和P504S在前列腺良恶性病变中的表达

目的探讨CK34βE12、P63和P504S在前列腺良恶性病变中的表达及鉴别诊断意义。方法应用免疫组化S-P法对57例前列腺癌及49例良性前列腺增生组织中CK34βE12、P63和P504S的表达水平及鉴别诊断意义。结果CK34βE12、P63和P504S在57例前列腺癌中的阳性表达率分别为1.7%及96.4%,P63为100%阴性表达;CK34βE12和P63在49例良性前列腺增生中阳性表达率分别为100%及100%,P504S为100%阴性表达。结论在前列腺增生性病变组织中联合检测CK34βE12、P63和P504S的表达对于前列腺良恶性病变鉴别诊断有重要意义。

RhoC和Ki67在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的探讨RhoC、Ki67在非小细胞肺癌中的表达状况及其与临床病理学参数间的关系。方法利用免疫组织化学(ElivisionTMplus法),检测肺癌组织芯片中151例非小细胞肺癌患者RhoC、Ki67的表达情况。结果肺癌组织的RhoC蛋白阳性表达率为59.60%(90/151),相应癌旁组织RhoC阳性表达率为32.7%(16/49),差别有显著意义(P<0.05)。RhoC在TNMIII/IV期的NSCLC组织中阳性表达率为68.9%(51/74),明显高于在Ⅰ/II期NSCLC组织中阳性表达率50.6%(39/77,P<0.05);RhoC在出现淋巴结转移的表达率为49.2%(32/65),显著高于没有淋巴结转移的阳性表达率67.4%(58/86,P<0.05);非小细胞肺癌中RhoC高表达同Ki-67高表达呈显著正相关关系(χ2=21.634,r=0.377,P<0.01)。结论RhoC的高表达与非小细胞肺癌的分期,淋巴结转移及增殖有关。

MMP-2 VEGF在肺腺癌细胞中的表达及其意义

目的研究探讨基质金属蛋白酶2（MMP-2）及血管内皮生长因子（VEGF）在胸腔积液、痰液中肺腺癌细胞的不同表达及二者在肺癌细胞侵袭转移过程中的相互关系。方法选择胸腔积液、痰液共计264例癌性及异型增生细胞标本经免疫细胞化学方法分别检测MMP-2 VEGF的表达情况。结果免疫细胞化学结果显示：MMP-2在胸腔积液中腺癌细胞、异型增生上皮细胞的表达率分别为71.7%（99/138）、16.7%（6/36）,在胸膜炎和结核病变典型良性胸腔积液增生上皮细胞中不表达;在痰腺癌细胞中的表达率为39.1%（27/69）,统计结果显示MMP-2在恶性胸腔积液腺癌细胞中的表达率明显高于在异型增生的上皮、增生的上皮及痰腺癌细胞的表达率（P均〈0.05）。VEGF在胸腔积液中腺癌细胞、异型增生上皮细胞的表达率分别为89.1%（123/138）、33.3%（12/36）,在胸膜炎和结核病变典型良性胸腔积液增生上皮细胞中不表达;在痰腺癌细胞中的表达率为47.8%（33/69）,VEGF在恶性胸腔积液腺癌细胞中表达率明显高于在异型增生的上皮细胞、增生的上皮细胞及痰腺癌细胞的表达率（P均〈0.05）,且MMP-2同VEGF总阳性表达率之间成正相关（r=0.867,P=0.049）。结果 MMP-2 VEGF在胸水腺癌细胞中高表达,可能与肺腺癌的转移、侵袭有关;两者联合做免疫细胞化学检查对肺腺癌细胞病理诊断有辅助意义。

GLUT1和MC在肺癌患者胸水中的表达及意义

目的探讨葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)和MC在肺癌患者胸水中的诊断价值。方法应用免疫化学S-P法研究GLUT1和MC在56例肺癌患者胸水中的癌细胞和44例肺良性疾病胸水中的反应性间皮细胞的表达。结果GLUT1在肺癌患者胸水中的阳性率92.8%(52/56),明显高于在良性胸水中的阳性率6.8%(3/44),差异非常显著(P<0.01);而MC在良性胸水中的阳性率93.2%(41/44),明显高于在肺癌患者胸水中的阳性率19.6%(11/56),差异也非常显著(P<0.01);GLUT1和MC联合应用敏感性和特异性分别高达100%和89.3%。结论GLUT1和MC对肺癌患者胸水中癌细胞的诊断及鉴别诊断具有重要的临床应用价值。

胃癌组织中caspase 9的表达及其多态性变化

目的:探讨胃癌中caspase 9基因的表达及其单核苷酸多态位点的分布.方法:应用Western-blot方法检测70例胃癌患者及对应癌旁正常组织中caspase 9的表达情况.应用限制性片段长度多态性技术结合测序,分析70例胃患者及100例正常人caspase 9基因rs1052576位点基因型.应用列联表法统计分析患者组和对照组SNP位点基因型及等位基因频率.结果:51.4%(36/70)的胃癌组织caspase 9基因表达明显下调,与癌旁正常组织相比差异有统计学意义(P<0.05).位于caspase 9基因第5外显子的SNP位点rs1052576的基因型频率和等位基因频率在两组人群中的分布差异有统计学意义.患者组G等位基因频率明显高于对照组(22.9% vs 13.0%,P<0.05),AG基因型频率在有淋巴结转移的患者中明显高于无淋巴结转移的患者(P<0.05).结论:caspase 9基因在胃癌中低表达,rs1052576多态位点G等位基因和胃癌的发生相关,AG基因型和淋巴结转移有关.

CK19和MC在肺癌患者胸水中的表达及意义

目的探讨CK19和MC在肺癌患者胸水中的诊断价值。方法应用免疫细胞化学方法(S-P)研究44例肺癌患者胸水中的癌细胞和26例肺良性疾病胸水中的反应性间皮细胞的表达。结果CK19在肺癌患者胸水中的阳性率95.5%(42/44)明显高于在良性胸水中的阳性率7.7%(2/26),差异非常显著(P<0.01);而MC在良性胸水中的阳性率96.2%(25/26)明显高于在肺癌患者胸水中的阳性率22.7%(10/44),差异也非常显著(P<0.01);当CK19和MC联合应用时为最佳选择,其敏感性和特异性分别高达100%和88.5%。结论CK19和MC对肺癌患者胸水中癌细胞的诊断及鉴别诊断具有重要的临床应用价值。

恶性胸腔积液中肺腺癌的EGFR、VEGF和P53的表达及分子生物学意义

目的探讨在恶性胸腔积液中肺腺癌细胞中EGFR、VEGF、P53表达的状态和关系及对临床治疗的分子生物学意义。方法利用液基薄层细胞学自动涂片技术方法和免疫化学方法筛查出恶性胸腔积液中肺腺癌77例和良性胸水10例,在用免疫细胞化学染色检测EGFR、VEGF、P53的表达情况。结果免疫细胞化学染色显示EGFR在肿瘤细胞中阳性表达55例,表达率为71.4%;VEGF和P53在恶性肿瘤细胞中阳性表达分别为57和31例,表达率分别为74%和40.3%,EGFR与VEGF表达具有相关性(r=0.609;P=0.000)。结论 EGFR、VEGF和P53在恶性胸腔积液的肺腺癌细胞中具有较高的表达率,且表达具有紧密联系,并可以对临床治疗有一定参考性。

脑脊液中转移性腺癌细胞免疫表型的变化

目的探讨脑脊液中转移腺癌细胞在没有血供的条件下的生长特征,是否有血管内皮标记物CD34,CD105,FⅧ,淋巴管内皮标记物D2_40及碱性成纤维生长因子(b-FGF)的表达,并促进肺癌的脑转移及肿瘤细胞自我生存的调控。方法采集109例腺癌脑转移患者的脑脊液为研究对象,其中肺癌脑转移107例(包括49例肺癌术后5年内脑转移,58例无肺癌病史直接经脑脊液穿刺发现肺癌脑转移),乳腺癌2例。以40例主要成分为炎性细胞的脑脊液及40例原发性肺腺癌组织标本为对照,采用免疫化学染色方法检测脑转移腺癌细胞及腺癌组织中CD34,CD105,FⅧ,D2_40,b-FGF,VEGF及vimentin的表达。结果 109例脑脊液标本中,CD34,CD105,FⅧ,D2_40,b-FGF及VEGF在转移癌细胞中的阳性率分别为64.2%,67.9%,66.9%,63.8%,56.8%,70.6%明显高于脑脊液对照组(阳性率均为0)且差异具有统计学意义(P<0.05)。vimentin在脑脊液转移腺癌细胞中阳性表达,表达率为88.1%。在原发肺癌标本中,CD34,CD105,FⅧ和VEGF表达较弱或不表达。D2-40在癌中不表达。B-FGF与Vimentin在原发肺腺癌中的表达率分别为50.1%和29.3%。结论在肺癌脑转移过程中,肿瘤细胞能够表达不同的血管生长因子,提示可能具备内皮细胞的生物学特性,可能有助于增强肿瘤细胞的转移能力和对环境的耐受能力。

肺癌细胞系中p120-catenin亚型1A和亚型3A对E-cadherin和β-catenin的调节功能

背景与目的p120-catenin(p120ctn)作为catenin家族的重要成员,具有多种功能各异的亚型。由于这些亚型存在着组织和细胞学特异性,因而在不同的组织和细胞当中,p120ctn各亚型可能对细胞粘附发挥不同的调节功能,但至今尚缺乏直接相关的实验证明。方法选取p120ctn低表达的肺癌细胞系A549和NCI-H460,分别向其中转染p120ctn亚型1A和p120ctn亚型3A的cDNA质粒,应用RT-PCR、Western Blot、Transwell检测p120ctn各亚型对E-cadherin/β-catenin复合体的影响,及其对肺癌细胞侵袭和转移能力的调节作用。结果p120ctn亚型1A的高表达能够通过促进E-cadherin/β-catenin的表达,进而明显抑制肺癌细胞的侵袭能力;而p120ctn亚型3A的高表达却没有这样明显的调节作用。结论P120ctn亚型1A和亚型3A可能通过对E-cadherin/β-catenin的不同调节作用,在不同程度上调控肺癌细胞的侵袭能力。

免疫细胞化学染色技术在浆膜腔积液涂片中的应用

对应用免疫细胞化学染色技术检测浆膜腔积液中癌细胞的方法进行了探讨。并谈了个人的体会。

蛋白酪氨酸激酶抑制剂Genistein抑制肺癌细胞A549体外侵袭作用的研究

观察蛋白酪氨酸激酶抑制剂Genistein对人肺腺癌细胞株A549细胞侵袭能力的影响,探讨Genistein抑制肺癌细胞侵袭的可能机制。以不同浓度Genistein(20μmol/L和40μmol/L)作用于A549细胞3 d后,分别用基质胶侵袭模型、黏附基质分析、Transwell小室趋化运动模型、细胞骨架蛋白染色及RT-PCR法来研究药物处理后细胞侵袭、黏附、运动、聚合型骨架蛋白(F-actin)以及基质金属蛋白酶基因表达的改变。经Genistein处理后,A549细胞的F-actin聚合减少,侵袭能力明显下降,趋化运动能力降低,基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1)基因相对表达量增加,但黏附率没有降低。Genistein可降低肺癌细胞的迁移、侵袭能力。F-actin聚合减少,TIMP-1的相对表达量增加,可能是Genistein抑制肺癌细胞侵袭的机制之一。

胸腔积液中肺腺癌细胞发生胶原化的形态观察与研究

目的胶原蛋白是细胞外基质的主要成分之一,我们在临床数千例恶性胸水转移的非小细胞肺癌细胞胞浆中常见到围绕细胞核或局灶状葱皮排列的纤维样结构,由此我们假设肺腺癌细胞在侵袭转移形成胸腔积液过程中发生与细胞外基质相同的结构变化,即肿瘤细胞胶原化形成"盔甲"式保护膜起到对肿瘤细胞结构及功能的支撑,达到抵御化疗药物、毒素的穿透和放射线的轰击,提高了自我保护能力,适应新的肿瘤细胞增生微环境。方法 TCT方法选取224例肺腺癌细胞学标本,其中胸腔积液标本144例,肺泡灌洗液40例,痰液标本40例,24例为良性胸腔积液作为对照。常规制成细胞包埋块,切片、HE染色及CK7、TTF-1、vimintin的免疫细胞化学染色。透射电镜观察肿瘤细胞内部结构。Masson特殊染色,胶原蛋白Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ亚型染色,Western-blot蛋白检测。观察肺腺癌细胞是否存在胶原蛋白亚型及肺腺癌不同标本的表达情况。结果Masson细胞化学染色显示胶原纤维在恶性胸腔积液、支气管肺泡灌洗液及痰肺腺癌标本中的表达率分别为59.7%(86/144)、0%(0/40)、0%(0/40),在良性标本中不表达均为阴性(0/24)。免疫细胞化学结果显示:COL1A1、COL2A1和COL3A1在肺腺癌细胞中的阳性表达率分别为22.6%(38/168),5.4%(9/168),22.6%(38/168),阳性表达主要定位于胞浆,而在增生的上皮细胞中不表达,统计学分析结果显示COL1A1、COL3A1的表达率要显著高于COL2A1的表达率(P=0.024),并且我们发现COL1A1与COL3A1的表达成正相关性(r=0.886,P=0.000)。透射电镜可观察到在肿瘤细胞胞浆中可见多量纤维状物质。结论本研究从形态学上观察到在转移的肺腺癌细胞胞浆内有一些围绕胞核呈葱皮样改变的纤维样结构,结果表明肺腺癌细胞可以产生胶原蛋白,以纤维性胶原Ⅰ,Ⅲ为主,并在转移的肺腺癌细胞中高表达可能与晚期肺癌细胞的抗药性增强有关。

通过TCT检测恶性胸腔积液非小细胞肺癌血管拟态现象

目的探讨恶性胸腔积液(malignannt pleural effusion,MPE)中的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞向血管内皮和淋巴管内皮细胞分化情况,从细胞学角度深入探讨NSCLC血管形成的原理和分子机制。方法运用液基细胞薄层检测(thinprep cytology test,TCT)技术对1425例胸水标本进行检测,对阳性及可疑阳性标本进行沉渣包埋。通过HE染色切片确定每张切片血管新生及血管拟态(vascufogenic mimicry,VM)现象及数量,采用免疫组化SP法、免疫荧光法检测脉管样管型结构中NSCLC标志物和脉管内皮标志物的表达情况。结果通过沉渣包埋切片HE染色诊断,NSCLC各组织学分型中平均每高倍视野脉管样管型结构的形成数量用中位数表示分别为肺腺癌10(10,20)个、肺鳞状细胞癌12.5(10,20)个、肺腺鳞癌12.5(5,17.5)个、肺大细胞癌10(5,20)个,各组间差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化检测发现,由肿瘤细胞构成的脉管样管型结构中NSCLC标志物和脉管内皮标志物均有不同程度的表达。结论MPE中NSCLC细胞具有分化为脉管内皮细胞的潜能,存在VM现象。

CK^(LMW),CEA及MC检测卵巢癌腹腔液内游离癌细胞的临床意义

目的 :探讨一组正反互补单克隆抗体在卵巢癌腹腔液内游离癌细胞中的表达及意义。方法 :应用低分子量细胞角蛋白 (CKLMW)、癌胚抗原 (CEA)、间皮细胞 (MC)及波形蛋白 (VIM) 4种标志物 ,对 6 7例腹腔液中的细胞成分进行免疫细胞化学 (ICC)标记。结果 :ICC阳性率 (86 .2 % )明显优于细胞病理学阳性诊断率 (5 8.6 % ,P <0 .0 5 ) ;ICC阳性率随病期进展而增加 ;CKLMW 、CEA、MC及VIM 4种抗体的敏感度及特异度分别为10 0 .0 % ,5 9.5 % ;72 .0 % ,97.6 % ;85 .7% ,92 .0 % ;85 .7% ,5 2 .0 %。结论 :CKLMW、CEA及MC联合应用检查卵巢癌腹腔液内游离癌细胞 ,对腹腔液良恶性的鉴别、疾病的临床分期、治疗及预后具有重要的临床应用价值 。

结肠癌组织中CASP9的表达及其多态性

目的:探讨CASP9基因在结肠癌中的表达及其SNP多态位点在结肠癌患者和正常人中的分布情况.方法:应用RT-PCR方法检测170例结肠癌患者及对应癌旁正常组织中CASP9的表达情况;应用限制性片段长度多态性技术结合测序,分析结肠癌患者及100例正常人CASP9基因2个SNP位点基因型;应用列联表法统计分析患者组和对照组各SNP位点基因型及等位基因频率.结果:47%(80/170)的结肠癌组织CASP9基因表达明显下调,与癌旁正常组织相比差异有统计学意义(P<0.05).位于CASP9基因第5外显子的SNP位点rs1052576的基因型频率和等位基因频率在两组人群中的分布差异有统计学意义;患者组G等位基因频率明显高于对照组(χ2=9.99,P=0.001);基因型频率的分布与结肠癌的组织分化程度有关(χ2=15.8,P=0.003).结论:CASP9基因在结肠癌中低表达,rs1052576多态位点G等位基因和结肠癌的发生相关.

缺氧诱导因子-1在非小细胞肺癌胸水中的表达及其与肿瘤血管生成的关系

目的探讨缺氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)在非小细胞肺癌胸水细胞中的表达及其与肿瘤血管生成的关系。方法利用免疫组织化学、免疫细胞化学分别检测1180例非小细胞肺癌标本中HIF-1α和HIF-1β蛋白的表达以及非小细胞肺癌胸水细胞中血管生成标记物CD34和VEGF的表达情况,其中包括1060例非小细胞肺癌胸水标本以及用于对照的120例肺穿刺非小细胞肺癌组织标本。结果 HIF-1α在非小细胞肺癌穿刺组织中的表达率72.50%(87/120)明显高于非小细胞肺癌胸水中表达率17.55%(186/1060),差异有统计学意义(P<0.05);HIF-1β在非小细胞肺癌穿刺组织中的表达率为77.50%(93/120),而在非小细胞肺癌胸水中表达率为81.42%(863/1060),差异无统计学意义(P>0.05);CD34、VEGF在非小细胞肺癌胸水细胞中阳性表达率分别为77.92%(826/1060)、82.92%(879/1060)。HIF-1α与HIF-1β的表达呈显著正相关(r=0.093,P=0.002),HIF-1α与VEGF的表达呈显著正相关(r=104,P=0.001),HIF-1β与VEGF的表达无相关性(P>0.05)。结论 HIF-1α在非小细胞肺癌穿刺组织与非小细胞肺癌胸水中的差异性表达,可能与非小细胞肺癌胸水细胞缺氧适应性调节有关,HIF-1与肿瘤血管生成密切相关。

多效蛋白PTN在肺腺癌血清、组织和胸水细胞中的表达及意义

目的通过检测肺腺癌患者术前血清标本及相对应的术后切除肺癌组织标本,和肺腺癌转移胸水标本中的PTN蛋白的表达,探讨PTN蛋白在肺腺癌患者三种不同标本中的表达及意义。方法利用Western-blot、免疫组织化学、免疫细胞化学方法分别检测189例上述三种不同标本中PTN蛋白的表达,其中有29例对应的术前血清,肺腺癌术后组织和术后3-4个月的转移胸水标本,同时分别以50例正常献血者血清、50例来自于189例肺腺癌癌旁组织和50例胸水良性增生细胞作为对照。结果肺腺癌患者血清、组织、胸水中PTN蛋白的表达分别高于对照组PTN蛋白的表达。PTN蛋白在肺腺癌患者胸水细胞中的表达率57.7%(109/189)高于组织中的表达率42.9%(81/189)、组织中的表达率42.9%(81/189)高于肺腺癌患者血清中的表达率18%(53/189),差异均具有统计学意义(P<0.05)。在189例肺腺癌患者的胸水标本中PTN和Vim-entin的表达呈正相关关系(P<0.01,r=0.728)。并且,在29例分别来源于同一例患者的这三种标本中,27例PTN在血清和肺腺癌组织中阴性表达,但在相对应的恶性胸水腺癌细胞中PTN呈阳性表达。同时,在这27例对应的标本中,PTN阳性表达的标本Vimentin亦阳性表达,而E-ca阴性表达。结论 PTN蛋白在肺腺癌患者血清、组织和胸水中高表达,且PTN和Vimentin的表达一致说明PTN在肺腺癌的EMT转化过程中可能起到重要的作用。

TTF-1和HBME-1在肺癌患者胸水中的表达及意义

目的探讨TTF-1和HBME-1在肺癌患者胸水中的诊断价值。方法应用免疫细胞化学方法(S-P)研究51例原发性肺癌患者和10例继发性肺癌患者胸水中的癌细胞及44例肺良性疾病胸水中反应性间皮细胞的表达。结果TTF-1在原发性肺癌患者胸水中的阳性率为78·4%(40/51),而在继发性肺癌患者和肺良性疾病患者的胸水中未见阳性表达;HBME-1在肺良性疾病患者胸水中的阳性率95·5%(42/44)明显高于在原发性肺癌患者胸水中25·5%(13/51)和继发性肺癌患者胸水的阳性率20·0%(2/10);在不同病理类型原发性肺癌患者胸水中,TTF-1的阳性率在腺癌组90·7%(39/43)明显高于鳞癌组12·5%(1/8);当TTF-1和HBME-1联合应用时为最佳选择,其检测肺癌患者胸水的敏感性和特异性分别高达96·7%和95·5%。结论TTF-1和HBME-1对原发性、继发性肺癌患者胸水中癌细胞的诊断及鉴别诊断具有重要的临床应用价值。