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虫草多糖对日本沼虾免疫机能的影响 被引量:45
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作者 昌鸣先 陈孝煊 +1 位作者 吴志新 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期275-278,共4页
在饲料中添加 1‰的虫草多糖 ,以口服形式对日本沼虾进行免疫。通过连续测定日本沼虾血淋巴吞噬活性 ,血清中抗菌活力、溶菌活力以及酚氧化酶活力 ,研究虫草多糖对日本沼虾免疫机能的作用。结果表明 :除个别情况外 ,虫草组的吞噬百分比... 在饲料中添加 1‰的虫草多糖 ,以口服形式对日本沼虾进行免疫。通过连续测定日本沼虾血淋巴吞噬活性 ,血清中抗菌活力、溶菌活力以及酚氧化酶活力 ,研究虫草多糖对日本沼虾免疫机能的作用。结果表明 :除个别情况外 ,虫草组的吞噬百分比和吞噬指数、抗菌活力、溶菌活力以及酚氧化酶活力 ,均高于对照组。因此 。 展开更多
关键词 免疫机能 虫草多糖 日本沼虾
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两种多糖对日本沼虾酚氧化酶活力的影响 被引量:22
2
作者 昌鸣先 陈孝煊 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期269-272,共4页
在饲料中分别添加 1‰的云芝多糖和虫草多糖 ,对日本沼虾进行投喂 ,通过连续测定日本沼虾血清中的酚氧化酶活力 ,研究两种多糖对日本沼虾免疫机能的作用。结果表明 ,在平均水温为 2 3 8℃± 3 8℃时 ,云芝组、虫草组分别较对照组提... 在饲料中分别添加 1‰的云芝多糖和虫草多糖 ,对日本沼虾进行投喂 ,通过连续测定日本沼虾血清中的酚氧化酶活力 ,研究两种多糖对日本沼虾免疫机能的作用。结果表明 ,在平均水温为 2 3 8℃± 3 8℃时 ,云芝组、虫草组分别较对照组提高了 34 52 %、84 62 % ;在平均水温为 1 0 8± 2 4℃时 ,云芝组和虫草组分别较对照组提高了30 0 2 %、5 1 2 % ,因而云芝多糖和虫草多糖能明显地增强日本沼虾血清的酚氧化酶活力。另经实验表明 ,在王雷所确立的酚氧化酶活力的检测条件下 ,其PO活力为 8 3units/mL ,而在Horowitz所确立的检测条件下 ,其PO活力为2 90units/mL ,并且后者检测方法重复性好 ,能较好地反映日本沼虾的免疫状态。 展开更多
关键词 酚氧化酶活力 云芝多糖 虫草多糖 日本沼虾
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草鱼补体C3基因的克隆及在感染大中华鳋草鱼个体的表达分析 被引量:10
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作者 昌鸣先 聂品 《自然科学进展》 北大核心 2004年第8期870-881,共12页
利用抑制差减杂交技术 ,构建了草鱼与大中华鳋感染相关的差减文库 ,测序得到一些免疫相关基因 ,其中包含与鲤补体C3高度同源的片段 .根据此片段设计引物 ,采用RACE(rapidamplificationofcDNAends)技术 ,克隆了草鱼补体C3的cDNA ,其全长5... 利用抑制差减杂交技术 ,构建了草鱼与大中华鳋感染相关的差减文库 ,测序得到一些免疫相关基因 ,其中包含与鲤补体C3高度同源的片段 .根据此片段设计引物 ,采用RACE(rapidamplificationofcDNAends)技术 ,克隆了草鱼补体C3的cDNA ,其全长5 171bp ,编码 16 77个氨基酸 .与已报道的补体C3一样 ,草鱼补体C3同样具有在功能上比较重要的残基以及保守的硫酯区 .草鱼补体C3与高等脊椎动物鸡、小鼠以及人的C3在氨基酸序列上有着相近的相同率 (37.9%~39.1% ) ,与其他鱼类的比较显示与鲤的相同率最高 ,与鲤的 3个基因型C3 H1,C3 H2 ,C3 S的相同率分别为 80 .5 % ,75 .4 % ,79.2 % .系统发育树也显示了草鱼补体C3与鲤补体C3,尤其是鲤C3 S基因型形成一簇 .Southern杂交显示草鱼补体C3存在多个拷贝 ;虚拟Northern杂交和RT PCR进一步证实所克隆到的补体C3在感染大中华鳋的草鱼中表达量增加 ,表明草鱼补体C3是一个与大中华鳋感染相关的基因 . 展开更多
关键词 补体C3基因 克隆 大中华鳋草鱼 基因表达 抑制差减杂交
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草鱼免疫球蛋白M重链基因的克隆及表达 被引量:26
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作者 王欣欣 孙宝剑 +1 位作者 昌鸣先 聂品 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期13-20,共8页
用RACE-PCR方法扩增出草鱼免疫球蛋白M(immunoglobulin M,IgM)分泌型的重链全长cDNA。其cDNA全长为1 940nt,包含5′非编码区20nt,3′非编码区189nt,开放阅读框1 731nt,编码576个氨基酸。序列比对分析表明草鱼IgM与鲤的相似性高达68%,与... 用RACE-PCR方法扩增出草鱼免疫球蛋白M(immunoglobulin M,IgM)分泌型的重链全长cDNA。其cDNA全长为1 940nt,包含5′非编码区20nt,3′非编码区189nt,开放阅读框1 731nt,编码576个氨基酸。序列比对分析表明草鱼IgM与鲤的相似性高达68%,与斑马鱼、斑点叉尾鱼回、鳜以及大西洋鳕的相似性分别为61%、43%、33%和30%。ClustalX比对结果显示:草鱼IgM中存在半胱氨酸和色氨酸的保守位点。进化分析表明,草鱼IgM与斑马鱼的IgM聚为一枝。荧光定量PCR显示草鱼IgM的mRNA主要在头肾、中肾和脾脏中表达,表明了这三个免疫器官是IgM表达的主要场所。 展开更多
关键词 草鱼 免疫球蛋白M 克隆 荧光定量PCR
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草鱼干扰素调节因子5的表达研究 被引量:7
5
作者 许巧情 昌鸣先 +2 位作者 肖凡书 李楠 聂品 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期1206-1210,共5页
干扰素调节因子是在研究干扰素转录调控时发现的[1]。到目前为止,在哺乳动物和鸟类中共发现10种干扰素调节因子IRF-1—10。一般认为干扰素调节因子(IRF)通过调节干扰素的表达而行使其抗病毒、应激、免疫调节等功能[2,3]。近年来,研究... 干扰素调节因子是在研究干扰素转录调控时发现的[1]。到目前为止,在哺乳动物和鸟类中共发现10种干扰素调节因子IRF-1—10。一般认为干扰素调节因子(IRF)通过调节干扰素的表达而行使其抗病毒、应激、免疫调节等功能[2,3]。近年来,研究人员发现IRF在细胞凋亡。 展开更多
关键词 干扰素调节因子5 草鱼 柱状黄杆菌 表达
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中华绒螯蟹铁蛋白基因的克隆及表达分析 被引量:4
6
作者 郭慧芝 付建平 +3 位作者 昌鸣先 郭政 朱邦科 聂品 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期725-732,共8页
铁蛋白普遍存在于生物体内,具有铁离子解毒和储存等功能。在构建脂多糖刺激的中华绒螯蟹cDNA文库的基础上,获得了中华绒螯蟹铁蛋白基因EsFer的cDNA序列,其全长为1118bp,包含480bp的开放阅读框,推测编码的蛋白质为159氨基酸,其5′和3′... 铁蛋白普遍存在于生物体内,具有铁离子解毒和储存等功能。在构建脂多糖刺激的中华绒螯蟹cDNA文库的基础上,获得了中华绒螯蟹铁蛋白基因EsFer的cDNA序列,其全长为1118bp,包含480bp的开放阅读框,推测编码的蛋白质为159氨基酸,其5′和3′端的非编码区分别为178bp和461bp,预测的分子量为18.3ku,理论等电点为5.81,在15~37aa处有一个跨膜螺旋。在5′非编码区核甘酸序列的135~162的位置有个特殊的结构,即铁反应元件(iron response element,IRE)。通过荧光定量PCR的方法研究了铁蛋白基因在中华绒螯蟹的组织表达分布,以及经脂多糖刺激后在血淋巴、肠和肝胰腺组织中的表达变化,发现EsFer在中华绒螯蟹血淋巴、肌肉、肠、鳃、心脏、性腺、肝胰腺等组织器官中都有表达,在肝胰腺的表达量最高,血淋巴中表达量最低。经脂多糖诱导后EsFer在血淋巴、肠和肝胰腺呈上调表达。 展开更多
关键词 中华绒螯蟹 铁蛋白 表达 脂多糖
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柱状黄杆菌胞外多糖对草鱼的免疫促进作用 被引量:3
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作者 刘毅 谢海侠 +3 位作者 昌鸣先 隗黎丽 姚卫建 聂品 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期683-689,共7页
将柱状黄杆菌胞外多糖(EPS)溶液经腹腔注射免疫草鱼,以注射灭菌生理盐水作对照。免疫一周后,分别提取受免鱼与对照鱼肝脏、脾脏、体肾和头肾4种组织中的总RNA,并通过RT-PCR半定量的方法检测不同组织中C-反应蛋白(CRP)、白介素1(IL-1)、... 将柱状黄杆菌胞外多糖(EPS)溶液经腹腔注射免疫草鱼,以注射灭菌生理盐水作对照。免疫一周后,分别提取受免鱼与对照鱼肝脏、脾脏、体肾和头肾4种组织中的总RNA,并通过RT-PCR半定量的方法检测不同组织中C-反应蛋白(CRP)、白介素1(IL-1)、主要组织相容性复合体I(MHC I)、免疫球蛋白M(IgM)、干扰素(IFN)等5种免疫基因的表达情况。结果显示,CRP在受免鱼肝脏中的表达显著上升;MHC I在受免鱼脾脏、体肾中的表达显著下降;IgM在受免鱼4种组织中的表达皆显著上升;IL-1在受免鱼4种组织中的表达与对照组没有显著差异;无论受免组还是对照组都只能检测到微弱的IFN表达,且两组之间没有显著差异。结果表明,柱状黄杆菌EPS对草鱼的先天免疫能力以及特异性体液免疫能力具有促进作用。 展开更多
关键词 胞外多糖 柱状黄杆菌 草鱼 免疫促进 免疫基因
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非洲爪蟾短型肽聚糖识别蛋白基因的克隆与鉴定 被引量:3
8
作者 齐志涛 高谦 +2 位作者 黄贝 昌鸣先 聂品 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期922-926,共5页
采用生物信息学方法首次对非洲爪蟾短型肽聚糖识别蛋白(xePGRP-S)基因进行了克隆,并对其在胚胎发育和成年爪蟾各组织中的表达状况进行了分析。xePGRP-ScDNA全长720bp,开放阅读框为549bp,编码182个氨基酸。序列比对显示xePGRP-S与其他物... 采用生物信息学方法首次对非洲爪蟾短型肽聚糖识别蛋白(xePGRP-S)基因进行了克隆,并对其在胚胎发育和成年爪蟾各组织中的表达状况进行了分析。xePGRP-ScDNA全长720bp,开放阅读框为549bp,编码182个氨基酸。序列比对显示xePGRP-S与其他物种PGRP-S的序列相似性在42.4%—50.5%之间。RT-PCR显示在非洲爪蟾胚胎发育至3d时可以明显检测到xePGRP-S的表达,之后呈持续性表达,且在所检测的心、肝、脾、肺、肾、肠和胃这7种组织器官中呈组成型表达。 展开更多
关键词 非洲爪蟾 肽聚糖识别蛋白 克隆 同源性 组织表达
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Cloning and expression analysis of a long type peptidoglycan recognition protein(PGRP-L) from Xenopus tropicalis 被引量:2
9
作者 齐志涛 张启焕 +4 位作者 王资生 王爱民 黄贝 昌鸣先 聂品 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期371-378,共8页
Peptidoglycan recognition proteins(PGRPs) are a family of pattern recognition receptors(PRRs) of the immune system,which bind and hydrolyze bacterial peptidoglycan.Here,a long type PGRP(PGRP-L) was first cloned ... Peptidoglycan recognition proteins(PGRPs) are a family of pattern recognition receptors(PRRs) of the immune system,which bind and hydrolyze bacterial peptidoglycan.Here,a long type PGRP(PGRP-L) was first cloned in the lower vertebrate species Xenopus tropicalis(Xt).The XtPGRP-L possessed a conserved genomic structure with five exons and four introns.The alignment and phylogenetic analysis indicated that XtPGRP-L might be a type of amidase-like PGRP.The 3-D model showed that XtPGRP-L possessed a conserved structure compared with the Drosophila PGRP-Lb.During embryonic development,XtPGRP-L was not expressed until the 72 h tadpole stage.In adult tissues,it was strongly expressed in the liver,lung,intestine,and stomach.Furthermore,after LPS stimulation,the expression of XtPGRP-L was up-regulated significantly in the liver,intestine and spleen,indicating that XtPGRP-L may play an important role in the innate immunity of Xenopus tropicalis. 展开更多
关键词 Peptidoglycan recognition protein Gene clone Expression analysis Xenopus tropicalis
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鲢(Hypophthalmichthys molitrix)IL-10基因的克隆及表达分析 被引量:3
10
作者 肖凡书 昌鸣先 +2 位作者 孙军 肖调义 聂品 《自然科学进展》 北大核心 2006年第2期183-189,共7页
白细胞介素10(IL-10)是一种作用广泛的抗炎细胞因子,主要功能是限制和最终终止炎症反应.用RACE(rapid amplification of cDNA ends)-PCR方法扩增出鲢白细胞介素10(IL-10)的 cDNA,其全长为1248nt,包含5’非编码区156 nt,3’非编码区552... 白细胞介素10(IL-10)是一种作用广泛的抗炎细胞因子,主要功能是限制和最终终止炎症反应.用RACE(rapid amplification of cDNA ends)-PCR方法扩增出鲢白细胞介素10(IL-10)的 cDNA,其全长为1248nt,包含5’非编码区156 nt,3’非编码区552nt,开放阅读框540nt.鲢IL- 10的开放阅读框编码179个氨基酸,其中包含构成两对二硫键的4个保守半胱氨酸.RT-PCR结果显示鲢IL-10 mRNA主要在脾脏、鳃、头肾和肌肉中表达.将鲢IL-10完整开放阅读框克隆到原核融合表达载体pET-32a-c(+)上,转入大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)内进行表达,经SDS- PAGE电泳后显示重组融合蛋白在分子量约39 ku处有明显表达带,与预期分子量大小一致,且主要以不可溶的包涵体形式存在.变性条件下利用His·Bind树脂成功纯化了融合蛋白,将其免疫家兔,获得兔多克隆抗鲢IL-10抗体,Western blot检测到兔多克隆抗鲢IL-10抗体可有效地与重组蛋白结合.这些结果为进一步研究IL-10的功能奠定了基础. 展开更多
关键词 IL-10 克隆 组织表达 原核表达
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鱼类和哺乳类Bcl-2家族蛋白的研究进展 被引量:1
11
作者 齐志涛 闫冬 +1 位作者 熊凡 昌鸣先 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期935-944,共10页
细胞凋亡,即细胞程序性死亡,在多细胞生物的发育和稳态调控过程中发挥关键作用。Bcl-2家族蛋白是凋亡过程中的主要调控因子,关于Bcl-2家族蛋白在凋亡过程中的功能及其作用机制一直是研究的热点。已有研究显示Bcl-2家族蛋白不仅作用于线... 细胞凋亡,即细胞程序性死亡,在多细胞生物的发育和稳态调控过程中发挥关键作用。Bcl-2家族蛋白是凋亡过程中的主要调控因子,关于Bcl-2家族蛋白在凋亡过程中的功能及其作用机制一直是研究的热点。已有研究显示Bcl-2家族蛋白不仅作用于线粒体引发凋亡,并且参与了包括对细胞内质网Ca^(2+)的调控、DNA损伤的修复及与自噬的相互作用等多种反应,从多方面对细胞的生存状态进行调控。Bcl-2家族蛋白保守存在于脊椎动物和无脊椎动物中,其功能在进化中存在异同。文章以高等脊椎动物(哺乳动物)和低等脊椎动物(硬骨鱼类)为代表,总结了近年来Bcl-2家族蛋白在调控宿主凋亡与自噬、DNA损伤及新陈代谢等方面取得的最新进展。该研究为深入了解鱼类和哺乳类Bcl-2家族蛋白的功能和作用机制提供了重要参考。 展开更多
关键词 BCL-2家族 凋亡 Ca^(2+)调控 自噬 新陈代谢
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鳜肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体Trail基因的原核表达
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作者 高原 昌鸣先 聂品 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期762-766,共5页
关键词 TRAIL 原核表达 多克隆抗体
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大鲵短型肽聚糖识别蛋白PGRP-S的克隆及其功能研究
13
作者 任诗思 齐志涛 昌鸣先 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期473-479,共7页
实验构建了大鲵短型肽聚糖识别蛋白PGRP-S的真核表达质粒,并对其功能进行了初步的研究。序列分析显示,所克隆的大鲵PGRP-S的N端不含有信号肽;其编码的氨基酸序列具有2个相距较近的半胱氨酸残基以及2个Zn2+结合位点。Western-blotting检... 实验构建了大鲵短型肽聚糖识别蛋白PGRP-S的真核表达质粒,并对其功能进行了初步的研究。序列分析显示,所克隆的大鲵PGRP-S的N端不含有信号肽;其编码的氨基酸序列具有2个相距较近的半胱氨酸残基以及2个Zn2+结合位点。Western-blotting检测结果显示大鲵PGRP-S既可分泌到胞外,也可滞留在胞内。体外抗菌实验的结果表明,过表达大鲵PGRP-S能显著抑制迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)在HEK293T细胞内和胞外培养基中的增殖。此外,过表达大鲵PGRP-S能诱导NF-κB启动子的活性;能结合Lys-type和Dap-type的肽聚糖但不能降解它们。研究结果表明大鲵PGRP-S在功能上类似于哺乳动物而有别于硬骨鱼类短型的肽聚糖识别蛋白。 展开更多
关键词 PGRP-S 真核表达 NF-κB 抗菌活性 肽聚糖结合活性 酰胺酶活性 大鲵
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