养阴宁神方对去势小鼠海马神经元突触的可塑性调节

目的观察养阴宁神方对雌性小鼠去势后认知功能的影响。方法将60只C57BL/6J雌性小鼠随机分为假手术组,模型组,雌激素组,低、中、高剂量组,每组10只。假手术组仅切开皮肤和腹膜,不摘除小鼠的卵巢;其余各组均进行双侧卵巢切除术。假手术组、模型组均给予等容量的生理盐水(0.1 mL/10 g),雌激素[雌二醇(estradiol,E2),0.09 mg/kg]组及低剂量组(9.459 g/kg)、中剂量组(18.459 g/kg)、高剂量组(36.99 g/kg)灌胃药液,均灌胃3周。记录小鼠术后伤口愈合时间,去势前、去势1周、去势4周进行水迷宫潜伏实验和穿梭实验测试小鼠的学习记忆功能。采用ELISA法测定血清E2含量;HE染色观察小鼠海马神经元的形态;尼氏染色观察海马神经尼氏染色阳性细胞的数量;共聚焦显微镜下观察小鼠海马神经元细胞超微结构情况。结果与假手术组相比,模型组伤口愈合时间延长(P<0.05);与模型组、雌激素组及低、高剂量组比较,中剂量组伤口愈合时间缩短(P<0.05)。去势1周,与假手术组比较,模型组、雌激素组及低、中、高剂量组逃避潜伏期延长、穿梭次数减少(P<0.05)。去势4周,与假手术组比较,模型组逃避潜伏期延长、穿梭次数减少(P<0.05);与模型组相比,雌激素组及低、中、高剂量组逃避潜伏期缩短、穿梭次数增加(P<0.05)。去势4周,与假手术组比较,模型组E2浓度明显降低(P<0.01);与模型组比较,雌激素组及低、中、高剂量组E2浓度明显增高(P<0.01)。尼氏染色显示,与假手术组比较,模型组尼氏阳性细胞数减少(P<0.01);与模型组比较,雌激素组及低、中、高剂量组尼氏阳性细胞数增加(P<0.01)。HE染色显示,假手术组,雌激素组,低、中、高剂量组锥体神经元增多,且突起明显;模型组锥体神经元较少、颗粒细胞较多。共聚焦显微镜下见,假手术组,雌激素组,低、中、高剂量组海马神经元囊泡和突触粗面内质网结构增多;模型组海马神经元囊泡和突触减少。结论养阴宁神方可能通过提高血浆E2水平、改善海马神经元突触形态和功能可塑性、增加去势小鼠的认知功能,从而发挥脑保护作用。

基于PPAR-γ/NF-κB信号通路探讨肺心汤对野百合碱诱导肺动脉高压大鼠模型的作用及机制

目的基于过氧化物酶体增殖物激活受体γ/核因子κB(PPAR-γ/NF-κB)信号通路探讨肺心汤(黄芪、桃仁、红花、葶苈子、赤芍等)对野百合碱诱导肺动脉高压(PAH)大鼠模型的作用及机制。方法将48只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、西地那非组(0.025 g·kg^(-1))及肺心汤低、中、高剂量组(11.7、23.4、46.8 g·kg^(-1))。采用单次腹腔注射野百合碱溶液(60 mg·kg^(-1))构建PAH大鼠模型。造模1 h后开始灌胃给药,每日1次,连续28 d。检测各组大鼠的血流动力学及超声心动图指标:右心室收缩压(RVSP)、平均肺动脉压(m PAP)、右心肥厚指数(RVHI)、肺动脉加速时间(PAAT)、肺动脉射血时间(PET)、三尖瓣环缩期位移(TAPSE)、右心室舒张末期内径(RVIDd)和右心室前壁厚度(RVAWT);采用HE染色法观察肺小动脉病理改变;免疫荧光法检测大鼠肺动脉中α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平;ELISA法检测血浆白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;免疫组化和Western Blot法检测PPAR-γ/NF-κB信号通路相关蛋白表达水平。结果与正常组相比,模型组大鼠的RVSP、m PAP、RVHI、RVIDd及RVAWT显著升高(P<0.01),PAAT、PAAT/PET、TAPSE均显著降低(P<0.01);肺小动脉血管壁明显增厚,肺小动脉管壁厚度占血管直径的百分比、血管壁面积占小动脉总横截面积的百分比均显著升高(P<0.01);肺动脉中α-SMA蛋白免疫荧光的阳性表达率显著升高(P<0.01);血浆IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著升高(P<0.01);肺组织中的PPAR-γ蛋白阳性表达率显著降低(P<0.01),NF-κB蛋白阳性表达率显著升高(P<0.01);肺组织中PPAR-γ、IκB-α蛋白表达显著下调(P<0.01);p-NF-κB/NF-κB蛋白表达比值显著升高(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠的RVSP、m PAP、RVHI、RVIDd和RVAWT均显著降低(P<0.05,P<0.01),PAAT、PAAT/PET、TAPSE均显著升高(P<0.05,P<0.01);血管壁厚度明显降低,肺小动脉管壁厚度占血管直径的百分比、血管壁面积占小动脉总横截面积的百分比均显著降低(P<0.05,P<0.01);肺动脉中α-SMA蛋白免疫荧光的阳性表达率显著降低(P<0.05,P<0.01);血浆IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著降低(P<0.05,P<0.01);肺组织中的PPAR-γ蛋白阳性率表达显著升高(P<0.05,P<0.01),NF-κB蛋白阳性表达率显著降低(P<0.05,P<0.01);肺组织中PPAR-γ蛋白表达显著上调(P<0.05,P<0.01),p-NF-κB/NF-κB蛋白表达比值显著降低(P<0.01);肺心汤高剂量组大鼠肺组织中IκB-α蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论肺心汤能改善野百合碱诱导的PAH大鼠肺动脉压力升高、右心功能障碍和肺血管重塑,其机制可能与调控PPAR-γ/NF-κB信号通路抑制炎症反应有关。

基于络病理论探讨靶向肺血管重塑治疗肺动脉高压

肺动脉高压(PH)是一种进行性的肺血管疾病,可导致右心衰竭及死亡。近年来,PH发病率逐年上升且缺乏有效治疗手段。中医辨治PH疗效显著,可发挥重要的协同作用。肺血管重塑是PH的核心病理特征,其与络脉的生理结构及病理变化关系密切。本文基于络病理论阐述PH中西医关键病机肺心脉络病变、肺血管重塑,分析PH中“脉络-血管”的生理,梳理其病理相关性,探讨中医靶向肺血管重塑辨治PH,从而为PH的临床治疗提供新思路。

三补方对自然衰老小鼠认知功能及脂质过氧化损伤的影响

目的观察三补方对自然衰老小鼠认知功能的影响,探讨潜在病理因素和三补方(Sanbu Decoction,SBD)的作用及其可能作用机制。方法18只18月龄自然衰老健康SPF级野生型C57BL/6小鼠,雌雄各半,随机分为衰老组(WT-Aged)、多奈哌齐组(WT-Donepezil)、三补方组(WT-SBD),另选6只3月龄小鼠为青年对照组(WT-Young)。WT-Young小鼠不灌胃,WT-Aged小鼠用蒸馏水灌胃,其余用相应药物处理,灌胃45 d。灌胃结束前6日采用水迷宫实验,记录潜伏期时间、穿越平台次数和平台所在象限游泳路程。用HE染色观察海马神经元形态变化,免疫组织化学法测定小鼠脑海马组织Tau、p-Tau、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、神经上皮干细胞蛋白(neuroepithelial stem cell protein,Nestin)表达水平,检测试剂盒检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。结果与WT-Young相比,第2日起WT-Aged逃逸潜伏期延长(P<0.05),穿越平台次数和平台所在象限经过的路程减少(P<0.05);与WT-Aged相比,WT-Donepezil第3~5日和WT-SDB第4~5日逃逸潜伏期缩短(P<0.05),穿越平台次数和在平台所在象限经过的路程增多(P<0.05)。WT-Aged小鼠出现海马神经元排列紊乱和大面积的神经元坏死,细胞质嗜酸性增强,细胞核固缩、溶解、消失。与WT-Aged小鼠相比,WT-Donepezil和WT-SDB小鼠神经元损伤减少,排列较为紧密,退化固缩的细胞数量则明显减少,少部分细胞可见核固缩及细胞浆嗜酸性变。与WT-Young相比,WT-Aged Tau、p-Tau和GFAP表达增多(P<0.05),Nestin表达减少(P<0.05),SOD、GSH-Px活性降低(P<0.05),MDA含量升高(P<0.05)。与WT-Aged相比,WT-Donepezil和WT-SDB p-Tau、GFAP表达减少(P<0.05),WT-SBD SOD、GSH-Px活性升高(P<0.05),MDA含量降低(P<0.05)。结论三补方可以降低自然衰老小鼠脑海马组织p-Tau表达,减弱星形胶质细胞活化水平,降低脂质过氧化反应,发挥脑保护抗衰老作用,提高老年小鼠学习记忆能力,改善衰老小鼠的衰老状态,延缓衰老进程。

补阳还五汤介导Cav1调控Wnt通路对脑缺血小鼠神经细胞凋亡的影响

目的基于小窝蛋白(Cav1)调控Wnt通路探讨补阳还五汤对脑缺血小鼠神经细胞凋亡的影响。方法将雄性野生型(WT)及Cav1-/-(KO)C57BL/6小鼠分别随机分为假手术组、模型组和补阳还五汤组(18.5 g/kg),采用大脑中动脉栓塞法制备脑缺血小鼠模型,并予药物干预14 d。对小鼠进行神经行为学评分,HE染色观察脑组织缺血侧皮质区形态,TUNEL染色检测缺血侧皮质区神经细胞凋亡情况,免疫组化检测缺血侧皮质区凋亡相关蛋白表达及Wnt1、糖原合成酶激酶3β(GSK3β)、β-连环蛋白(β-catenin)蛋白表达。结果与同基因型假手术组比较,模型组小鼠神经行为学评分显著升高,缺血侧皮质区神经细胞呈空泡样改变,细胞核固缩,细胞间隙增宽,神经细胞凋亡率显著升高,Bax、GSK3β表达升高,Bcl-2、Wnt1、β-catenin表达降低(P<0.01);与同基因型模型组比较,补阳还五汤组小鼠神经行为学评分显著降低,缺血侧皮质区病理损伤改善,神经细胞凋亡率降低,Bax、GSK3β表达降低,Bcl-2、Wnt1、β-catenin表达升高(P<0.01);与WT模型组比较,KO模型组小鼠神经行为学评分升高,缺血侧皮质区损伤加重,神经细胞凋亡率显著升高,GSK3β表达升高(P<0.05);与WT补阳还五汤组比较,KO补阳还五汤组小鼠神经行为学评分升高,缺血侧皮质区损伤加重,神经细胞凋亡率显著升高,Bax、GSK3β表达升高,Bcl-2、Wnt1、β-catenin表达降低(P<0.01)。结论补阳还五汤能抑制脑缺血后神经细胞凋亡,其作用机制可能与介导Cav1调控Wnt信号通路,进而影响凋亡相关蛋白表达有关。

补阳还五汤通过cAMP/PKA/PPARγ通路调控脂质代谢抗大鼠脑缺血再灌注损伤的作用

目的探究补阳还五汤通过cAMP/PKA/PPARγ通路调控脂质代谢抗大鼠脑缺血再灌注损伤的作用机理。方法将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、丁苯酞组及补阳还五汤低、中、高剂量组。采用短暂性大脑中动脉栓塞法制备脑缺血再灌注模型,补阳还五汤低、中、高剂量组予不同剂量补阳还五汤灌胃(6.413、12.825、25.65 g·kg^(-1)),丁苯酞(NBP)组予丁苯酞灌胃(54 mg·kg^(-1)),假手术组和模型组予等体积蒸馏水灌胃,连续14 d。对大鼠进行神经行为学评分,HE染色观察大脑病理变化,试剂盒检测缺血侧磷酸胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、甘油二酯(DAG)、游离脂肪酸(FFA)含量,RT-qPCR和WesternBlot法检测环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)中mRNA及蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组神经功能缺损评分明显升高(P<0.01);缺血侧皮质出现病理形态损伤;PC、PE含量降低,DAG、FFA含量升高(P<0.01);cAMP的mRNA升高(P<0.05)。与模型组比较,补阳还五汤低剂量组神经功能缺损评分降低(P<0.05),补阳还五汤中、高剂量组和丁苯酞组神经功能缺损评分明显降低(P<0.01);各给药组细胞排列相对规整,细胞间隙减小,正常细胞增多;补阳还五汤中、高剂量组和丁苯酞组PC、PE明显升高,DAG、FFA明显降低(P<0.01);补阳还五汤低剂量组PC升高,FFA、DAG明显降低(P<0.05,P<0.01);补阳还五汤低剂量组PPARγ的mRNA表达升高(P<0.05),补阳还五汤中、高剂量组和丁苯酞组cAMP、PKA、PPARγ的mRNA及蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤大鼠具有神经保护作用,其机制可能与调控cAMP/PKA/PPARγ信号通路关键因子的表达,调节脂质代谢有关。

补阳还五汤通过Cav-1抑制铁死亡对脑缺血小鼠的神经保护作用

目的 探讨补阳还五汤通过小窝蛋白-1(Cav-1)抑制铁死亡对脑缺血后小鼠的神经保护作用。方法 将雄性Cav-1敲除(KO)及同源野生型(WT)小鼠分别随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组(18.5 g/kg),采用大脑中动脉栓塞(MCAO)复制脑缺血模型,给药干预7 d后,对小鼠进行神经行为学评分以评估神经功能缺损情况,HE及尼氏染色观察脑皮层形态结构,透射电镜下观察线粒体结构,采用生化试剂盒检测脑组织总铁、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活性,免疫组化及RT-qPCR法检测铁死亡相关分子谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的蛋白及mRNA表达。结果 WT小鼠脑缺血后表现为神经功能缺损明显,神经元及线粒体损伤严重,伴随铁及MDA水平增加,而GSH水平、SOD活性及GPX4蛋白和mRNA表达降低;补阳还五汤可促进神经功能恢复,并且降低脑内总铁及MDA水平,增加脑内GSH水平、SOD活性及GPX4蛋白和mRNA表达。然而,与WT模型组比较,Cav-1 KO脑缺血小鼠表现出更严重的神经功能受损、神经元损伤及铁死亡程度,并且Cav-1缺失在一定程度上逆转补阳还五汤对脑缺血的改善作用。结论 补阳还五汤可能通过Cav-1抑制神经元铁死亡,减轻脑缺血诱导的铁死亡。

基于网络毒理学及实验验证探讨槟榔对口腔黏膜下纤维化的影响

目的基于网络毒理学方法和体内实验验证探讨槟榔对口腔黏膜下纤维化的影响及作用机制。方法通过TCSMP和Swiss数据库筛选槟榔潜在活性成分对应靶点,利用GeneCards、Disgenet数据库得到口腔黏膜下纤维化(oral submucosal fibrosis,OSF)疾病相关靶点。将交集靶点上传至STRING数据平台构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,再采用Metascape数据平台进行基因本体(gene ontology,GO)功能和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析。采用槟榔水提取液低、中、高浓度干预大鼠口腔黏膜,大鼠开口度、病理形态学、免疫组织化学等检测对网络毒理学结果进行验证。结果网络毒理学结果表明槟榔52个成分中含有587个相关靶点,OSF相关靶点761个,二者交集靶点72个。PPI网络分析结果显示,白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、细胞凋亡调节因子Bcl-2(apoptosis regulator Bcl-2,BCL2)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、细胞肿瘤抗原p53(cellular tumor antigen p53,TP53)可能是槟榔影响OSF的关键靶点。KEGG通路富集分析获得PI3K-Akt信号通路、AGE-RAGE信号通路、松弛素信号通路、EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药等信号通路。动物实验结果显示,中、高剂量组开口度值较对照组、低剂量组差异有统计学意义(P<0.05),HE染色、Masson染色表明中、高剂量组出现不同程度的纤维化病变,免疫组织化学结果提示槟榔水提取液上调IL-6、TNF-α等炎性因子,且呈一定的剂量相关性。结论槟榔可能通过上调IL-6、TNF-α等关键炎性因子以介导炎症反应诱导口腔黏膜下纤维化的发生。

超声心动图评估低氧性肺动脉高压小鼠模型右心室收缩压

目的以超声心动图监测单纯低氧及低氧联合血管内皮生长因子受体抑制剂SU5416诱导低氧性肺动脉高压(PH)小鼠模型心脏相关参数,据此建立预测右心室收缩压(RVSP)方程。方法将24只C57BL/6J雄性小鼠随机分为单纯低氧组(A组)、低氧联合SU5416组(B组)及对照组(C组),每组8只。对A、B组分别以单纯低氧法及低氧联合SU5416构建低氧性PH模型。于造模前及后(开始干预后2、3、4周)行超声心动图检查,获得相关参数;于末次超声检查后以心导管法测量RVSP。观察各组超声参数变化,以及造模后4周超声参数与RVSP的相关性,建立直线方程预测RVSP。结果开始干预后,随时间延长,A、B组肺动脉内径(PAD)、PAD/主动脉内径(AOD)及右心室前壁厚度(RVAWT)均增大,心率、肺动脉射血加速时间(PAAT)、PAAT/肺动脉射血时间(PAET)及三尖瓣环收缩期位移(TAPSE)均下降(P均<0.05)。开始干预后3、4周,B组PAET、PAAT/PAET、TAPSE均低于A组(P<0.05)。开始干预后4周,A、B组RVSP均与PAD/AOD、RVAWT、PAAT、PAAT/PAET及TAPSE呈高度相关(P均<0.05)。以PAAT/PAET、TAPSE预测单纯低氧PH小鼠模型RVSP的直线回归方程为RVSP=-161.7×(PAAT/PAET)+63.85、RVSP=-36.53×TAPSE+71.55,预测低氧联合SU5416 PH小鼠模型RVSP的直线回归方程为RVSP=-266.4×(PAAT/PAET)+91.59、RVSP=-69.14×TAPSE+116.5。结论开始干预后4周,以单纯低氧及低氧联合SU5416构建的PH小鼠表型更为明显;根据超声心动图所获PAAT/PAET及TAPSE构建的预测PH模型小鼠RVSP方程可为相关研究提供参考。

肺心汤通过RELM-β/DRP1信号通路调控线粒体损伤改善低氧性肺动脉高压的作用及机制

目的探讨肺心汤对低氧性肺动脉高压(HPH)大鼠的保护作用及潜在机制。方法将48只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、肺心汤低、中、高剂量组(5.85、11.7、23.4 g·kg^(-1))及西地那非阳性对照组(25mg·kg^(-1)),每组8只,每日灌胃给药后置入低氧舱8h,连续3周;右心导管法测定各组大鼠右心室收缩压(RVSP),小动物心脏超声系统测定三尖瓣环收缩期位移(TAPSE)、右心室壁厚度(RVAWT)、右心室肥厚指数(RVHI)、肺动脉血流加速时间(PAAT)及肺动脉射血时间(PET);苏木精-伊红(HE)染色评估大鼠肺动脉重构情况;透射电镜观察肺动脉线粒体亚显微结构;腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)试剂盒检测肺组织ATP水平;活性氧(ROS)测试剂盒检测肺组织ROS水平;RT-PCR检测大鼠肺组织抵抗素样分子β(RELM-β)、动力相关蛋白1(DRP1)及线粒体分裂蛋白1(FIS1)mRNA水平;免疫组化测定大鼠肺动脉RELM-β表达水平;免疫荧光检测大鼠肺动脉DRP1、FIS1表达水平。结果与对照组比较,模型组RVSP、RVAWT明显升高,TAPSE、PAAT明显降低,肺血管出现明显重塑,线粒体超微结构损伤明显(P<0.01),ROS水平上升(P<0.01),ATP生成减少(P<0.01),RELM-β、DRP1和FIS1 mRNA及蛋白水平明显上升(P<0.01);与模型组比较,肺心汤中、高剂量组RVSP、RVAWT明显降低,TAPSE、PAAT明显升高,肺动脉重塑及线粒体损伤明显改善(P<0.01),ROS水平减少(P<0.01),ATP生成增加(P<0.01),RELM-β、DRP1和FIS1 mRNA及蛋白水平明显下调(P<0.01)。结论肺心汤可能通过抑制RELM-β/DRP1通路改善线粒体损伤分裂,减少ROS水平,回调ATP生成,缓解HPH大鼠的肺血管重构及右心功能。

肺心汤通过调控AMPK/mTOR信号通路抑制自噬对低氧性肺动脉高压大鼠的保护作用

目的探究肺心汤通过调控腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路对低氧性肺动脉高压(hypoxic pulmonary hypertension,HPH)大鼠的治疗作用及机制。方法36只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、西地那非组以及肺心汤低、中、高剂量组。除正常组外,将其余5组置于氧气浓度为10.0%±0.5%的低氧舱内造模28 d,每天8 h,造模同时灌胃给药。4周后检测大鼠心肺血流动力学指标[右心室收缩压(right ventricular systolic pressure,RVSP),右心室肥厚指数(right ventricular hypertrophy index,RVHI),肺动脉加速时间/肺动脉射血时间(pulmonary acceleration time/pulmonary ejection time,PAT/PET)、三尖瓣环收缩期位移(tricuspid annulus plane systolic excursion,TAPSE)、右心室前壁厚度(right ventricular anterior wall thickness,RVAWT)];HE染色法检测肺动脉重塑;免疫荧光法检测α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白共定位表达;透射电镜观察自噬溶酶体的数量;免疫组织化学法检测肺组织中p-AMPK、p-mTOR、微管相关蛋白1轻链3B(microtubule-associated protein light chain 3B,LC3B)、Beclin1和p62蛋白阳性表达。结果与正常组相比,模型组大鼠RVSP、RVHI及RVAWT显著升高(P<0.01),PAT/PET和TAPSE显著降低(P<0.01);肺小动脉壁明显增厚,管腔狭窄,肺小动脉管壁厚度占血管直径的百分比(the percentage of wall thickness of pulmonary arterioles to vascular diameter,WT%)显著升高(P<0.01);α-SMA和PCNA共定位表达显著增加;自噬溶酶体数量增加;肺组织中p-AMPK、LC3B和Beclin1蛋白阳性表达上调(P<0.01),p-mTOR及p62蛋白阳性表达下调(P<0.01)。与模型组相比,各给药组大鼠RVSP、RVHI及RVAWT显著下降(P<0.01),PAT/PET、TAPSE显著升高(P<0.05,P<0.01);肺小动脉壁增厚程度减轻,WT%显著降低(P<0.01);α-SMA和PCNA共定位表达减少;自噬溶酶体数量减少;肺组织中p-AMPK、LC3B和Beclin1蛋白阳性表达显著下降(P<0.05,P<0.01),p-mTOR及p62蛋白阳性表达显著上调(P<0.01)。与西地那非组相比,肺心汤低、中剂量组TAPSE降低(P<0.01);肺心汤低、中剂量组肺动脉中膜增厚程度增加,WT%增加(P<0.01);肺心汤低、中剂量组p-AMPK蛋白阳性表达升高(P<0.01),肺心汤高剂量组p-AMPK蛋白阳性表达降低(P<0.05);肺心汤低剂量组p-mTOR蛋白阳性表达降低(P<0.01)。结论肺心汤可能通过下调AMPK/mTOR信号通路抑制自噬,发挥改善HPH的作用。

结肠细胞Retnlb基因敲除小鼠的构建及初步表型分析

目的:基于CRISPR/Cas9技术构建Retnlb基因的floxp敲入小鼠Retnlbflox/+,进一步根据Cre-LoxP重组酶系统,构建肠道上皮Retnlb基因敲除小鼠(Retnlb-CKO),为后续探究Retnlb基因在炎性肠病中的发病机制提供动物模型。方法:选取8周龄基因型均为Retnlbflox/+的雌、雄C57BL/6N小鼠合笼杂交,筛选出基因型为Retnlb^(flox/flox)的小鼠,将该基因型的小鼠与肠道上皮细胞特异性表达Cre重组酶(Vil1-Cre)工具鼠进行杂交繁育,筛选获得基因型为Retnlb^(flox/+,Cre+)小鼠;再将Retnlb^(flox/+,Cre+)小鼠与Retnlb^(flox/flox)小鼠杂交获得Retnlb^(flox/flox),Cre+目的小鼠(Retnlb-CKO)。选取8周龄Retnlb^(flox/flox),Cre+小鼠与同窝Retnlb^(flox/flox)小鼠各6只进行后续实验。采用RT-qPCR和免疫组化分别检测结肠上皮Retnlb mRNA和蛋白水平。观察每组小鼠的身长、体重、饮食和生殖能力等表型,计算其各组织重量与体重的比值以分析小鼠的生长发育情况。检测小鼠的肠道屏障完整性和结肠免疫炎症因子的表达情况。结果:通过基因鉴定、mRNA及蛋白水平证实肠道上皮细胞特异性条件敲除小鼠构建成功。与对照组小鼠相比,Retnlb-CKO小鼠的身长、体重、饮食和生殖能力均未发生明显的变化,心、肝、脾、肺、肾和结肠的重量与体重之比无差异,各组织无形态学差异。检测Retnlb-CKO小鼠结肠组织的紧密连接蛋白ZO-1、Occludin和Claudin3的mRNA表达显著降低(P<0.01),PAS染色和免疫组化结果分别显示Retnlb-CKO小鼠结肠组织的杯状细胞数量和溶菌酶阳性细胞数量均显著减少(P<0.01)。HE染色观察Retnlb-CKO小鼠的结肠组织显示没有明显的炎症细胞浸润,RT-qPCR进一步显示结肠组织的促炎因子NLRP3、白细胞介素6(IL-6)、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达显著下调(P<0.01),同时,炎症信号通路蛋白TLR4、MyD88和NF-κB表达也显著下调(P<0.01)。结论:成功构建并验证了条件性结肠细胞Retnlb基因敲除小鼠模型。结肠细胞缺失Retnlb会导致肠道屏障受损,结肠组织促炎因子mRNA表达显著降低,炎症通路蛋白TLR4、MyD88和NF-κB的mRNA表达显著下调。

NLRP3调节Th17/Treg失衡对哮喘小鼠气道上皮间质转化的影响

目的探讨发生上皮间质转化的哮喘小鼠中NLRP3水平变化与Th17/Treg失衡的相关性。方法用卵清蛋白(OVA)构建哮喘小鼠模型,将小鼠随机分为哮喘模型组和正常对照组。给药结束后,无创肺功能仪检测气道反应性,HE、Masson染色分别观察肺组织病理损伤、肺组织纤维化程度。用RT-qPCR检测上皮间质转化的标志基因Snail、E-Cadherin、N-Cadherin和NLRP3、RoRγt、Foxp3,用Western blot检测NLRP3、E-Cadherin、N-Cadherin蛋白。流式细胞术检测脾脏中Th17、Treg百分比。ELISA法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中NLRP3、IL-17、IL-10炎症因子水平。结果与正常对照组相比,模型组小鼠气道阻力增加,肺通气顺应性降低;气道上皮层增厚,气道狭窄,炎症细胞浸润,气管周围有大量胶原纤维沉积;上皮间质转化标志蛋白E-Cadherin表达明显减少(P<0.001),N-Cadherin和NLRP3肺组织蛋白表达显著升高(P<0.001),上皮间质转化标志基因N-Cadherin、Snail表达上调以及E-Cadherin的表达下调,差异均有统计学意义;模型组小鼠肺组织中NLRP3的表达明显增加(P<0.05);脾脏中Th17细胞百分比显著高于对照组(P<0.05),肺组织中Th17转录因子RoRγt表达增加(P<0.05),促炎细胞因子IL-17增加;而Treg细胞百分比较对照组明显降低(P<0.01),Treg细胞转录因子Foxp3表达减少(P<0.001),抗炎因子IL-10(P<0.05)水平显著降低。Pearson相关性分析结果显示,哮喘小鼠肺组织中NLRP3 mRNA水平与RoRγt mRNA比值呈明显正相关性,与Foxp3 mRNA呈显著负相关性;BALF中NLRP3与IL-17呈正相关性,与IL-10呈负相关性。结论NLRP3可能通过影响Th17/Treg细胞免疫失衡,诱导哮喘小鼠上皮间质转化,导致哮喘小鼠气道重塑。

四磨汤对腹部非胃肠手术后大鼠胃肠运动的影响

目的观察四磨汤对腹部非胃肠手术后大鼠胃肠运动的影响。方法48只大鼠随机分成正常组,假手术组,模型组,四磨汤高、中、低剂量组,腹部手术后灌胃给药,检测半固体糊在体内的胃内残留率和小肠推进率。结果与正常组比较,模型组大鼠胃内残留率明显升高(P<0.05),小肠推进率显著降低(P<0.05);四磨汤各剂量组均能降低手术后大鼠胃内残留率(P<0.05)、增加肠推进率(P<0.05),四磨汤高剂量组与中、低剂量组之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论腹部非胃肠术可导致大鼠胃肠运动紊乱,四磨汤能促进术后大鼠胃肠功能的恢复。

脑得健方对大鼠局灶性脑缺血后神经功能及梗死面积的影响

目的探讨脑得健方对大鼠局灶性脑缺血后神经功能及脑梗死面积比的影响。方法将大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组、脑得健方高、中、低剂量组,每组20只,大脑中动脉线栓法复制局灶性脑缺血模型,于手术后3 d和7 d评价其神经功能,每组随机取5只做TTC并计算梗死面积比,5只计算大脑干湿重比。结果脑缺血后模型大鼠有神经功能障碍、出现大面积梗死和组织水肿,治疗7 d后,脑得健方各剂量和补阳还五汤均能改善模型大鼠的神经功能缺失症状,减小梗死面积,减轻脑组织水肿,分别与模型组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论脑得健方和补阳还五汤均能改善模型大鼠的神经功能缺失症状,减少梗死面积,减轻脑组织的水肿,药物以中剂量最佳。

活性氧对细胞凋亡和增殖的调控作用

活性氧(ROS)是生物体内需氧细胞在代谢过程中产生的一系列衍生物,包括O2-、H2O2、HO2-及·OH等。近来研究表明,当ROS的生成与清除平衡被打破时,ROS可通过损伤线粒体、激活死亡受体,影响细胞因子的表达,激活转录因子,参与和影响细胞信号传导等一系列生物学作用,在细胞凋亡和增殖的调控中发挥重要作用。

ROS在幽门螺杆菌对胃上皮细胞DNA损伤中的作用

目的:探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)感染过程中活性氧(reactive oxygen species,ROS)的变化与DNA损伤之间的关系.方法:将H.pylori ACTC43504(Cag A+,Vac A+)感染正常胃黏膜系GES-1细胞,分别通过活细胞工作站观察细胞内ROS变化和多功能酶标仪定量检测细胞内ROS含量.采用凯基彗星实验法(单细胞凝胶电泳)检测DNA损伤.结果:ROS的水平和H.pylori的作用浓度呈正比,至MOI 300∶1时ROS荧光最强.不同浓度的N-乙酰半胱氨酸(N-acety-L-cysteine,NAC)均可抑制H.pylori感染所引起的ROS的生成.H.pylori可导致DNA损伤,NAC预处理后,GES-1细胞的尾长、彗星长、尾矩及Olive尾矩数值均较H.pylori组有明显下降趋势.结论:H.pylori作用GES-1细胞后,可使ROS生成增多,损伤DNA.抑制ROS的生成可减轻H.pylori感染导致的DNA损伤.

压电驱动精密流量阀流场分析

为实现对流量的精密控制,利用压电陶瓷的逆压电效应来驱动阀芯运动,建立压电陶瓷驱动精密流量阀和内部流场三维模型,利用Fluent软件分析了阀内部的流场特性,取得了阀稳态时的内部压力场、速度场的分布规律和内部流体的迹线规律。分析结果表明:阀芯节流口处压力损失较大,并形成局部负压,流体在此处速度达到最大且以喷射流形式流入低压腔,阀芯与阀体接触处应采用抗冲刷及高强度材料;阀出口处进行倒圆角处理,可有效消除负压并使流体迹线稳定。

现代美育是一种感性的情感的生命教育

现代美育是一种偏于感性的教育，是一种情感的教育。

论现代美育深刻的人道主义内涵

现代美育是人们“按照美的规律”塑造人自身,从中获取某种自我愉悦,自我完善,自我优化,自我实现的审美教育活动,具有深刻的人道主义内涵。