一株猫疱疹病毒Ⅰ型的分离与鉴定

采集哈尔滨某猫舍中表现为上呼吸道感染的患病猫眼、鼻拭子,PCR初步确诊为猫杯状病毒(FCV)和猫疱疹病毒(FHV-1)混合感染。利用猫肾细胞(CRFK)对样本进行病毒分离,前两代细胞培养物的核酸检测结果为FHV-1和FCV阳性,第三代开始只有FCV阳性,由此分离出FCV。制备此株FCV的鼠源多克隆抗体,并中和混合培养物中的FCV,从而分离出FHV-1,命名为HRB2019株。通过病毒粒子形态观察、间接免疫荧光试验(IFA)和基因序列分析等方法鉴定HRB2019株,并研究其体外生长动力学。结果显示,HRB2019株可在CRFK细胞上产生典型病变,测得其第四代病毒滴度为1×10^(8.43) TCID 50·mL^(-1);电镜下可观察到球形、有囊膜、直径约为200 nm的病毒粒子;IFA结果显示,分离株可与FHV-1阳性血清结合,出现特异性荧光;扩增分离株的gD基因,其与国内外流行株高度同源。病毒一步生长曲线表明,HRB2019株感染细胞12 h后开始复制增殖,12~36 h为快速增殖期,48~72 h进入增殖平台期且滴度达到高峰,84 h病毒滴度开始下降。本研究首次从FCV与FHV-1混合感染的病料中成功分离出FHV-1,为FHV-1的流行病学调查和病原学研究提供了重要数据,为混合感染中生长弱势毒株的分离提供了方法学依据。

犬瘟热病毒F蛋白融合信号肽单克隆抗体的制备及其表位的鉴定

为制备犬瘟热病毒(CDV)F蛋白融合信号肽(FSP)的单克隆抗体(MAb),本研究通过原核表达系统表达CDV HLJ1-13株重组FSP蛋白(rFSP)。将其免疫BALB/c小鼠,通过间接ELISA方法筛选到1株能够稳定分泌抗FSP蛋白MAb的杂交瘤细胞株G8D6E3E5,亚类鉴定结果显示该株MAb重链为Ig G2a型,轻链为κ型。构建一系列表达部分重叠的重组FSP片段,经western blot鉴定该株MAb识别的抗原区域为aa1~aa55,通过合成一系列重叠多肽,经ELISA进一步鉴定该株MAb识别的抗原表位为^(21)QQHSTRSTET^(30)。采用western blot检测该株MAb与r FSP的反应原性;采用间接免疫荧光试验(IFA)检测该株MAb与天然FSP的反应原性。Western blot结果显示,CDV Snyder Hill和HLJ1-13株r FSP蛋白样品在34 ku左右均出现特异性条带;IFA结果显示,感染CDV Snyder Hill株48 h后的vero细胞出现红色荧光。以上结果表明,该株MAb既能够与原核表达的CDV Snyder Hill和HLJ1-13株的r FSP蛋白反应,也能够与天然表达的CDV Snyder Hill株FSP蛋白反应。上述研究结果为CDV的检测以及FSP生物学功能的研究奠定了坚实基础。

仙台病毒F基因在昆虫/杆状病毒系统中的表达及抗原性分析

为真核表达仙台病毒(SeV)融合蛋白(F)基因,本研究根据GenBank登录的SeV F基因序列设计合成一对特异性引物,以pMD18-T-F阳性重组质粒为模板扩增F基因,并将其克隆至杆状病毒穿梭质粒pFastBac HTa中,经酶切、PCR及测序鉴定正确后,转化感受态细胞DH10Bac,提取重组杆粒rBacmid-F,经PCR鉴定正确将rBacmid-F转染Sf9细胞,连续传代后,细胞病变明显。经SDS-PAGE分析,成功表达了相对分子量为65ku左右的F蛋白,western blot和ELISA分析表明重组F蛋白具有良好的抗原性。

穴位接种猪TGE苗家兔β－EP与免疫活性细胞动态研究

本试验用酶标组化方法对穴位接种猪传染性胃肠炎（ＴＧＥ）苗家兔外周血、脾、淋巴结的β－内啡肽（β－ＥＰ）进行了动态定量和定位研究，外周血β－ＥＰ在穴位注苗后３０ｍｉｎ有一个峰值，迅速下降后缓慢升高，第５天达第２个峰值，然后缓慢下降；脾和淋巴结仅在注苗后５天出现一个峰值。首次发现活化Ｔ细胞存在β－ＥＰ阳性反应细胞，而Ｂ细胞不存在。

实验性慢性氟中毒家兔肝、肾动态超微病理学研究

２４只２０～３０日龄体重０．７～１．２ｋｇ新西兰白兔随机分为实验组１５只（每日每只随饮水摄取ＮａＦ４５ｍｇ／ｋｇ体重）及健康对照组９只（饮用自来水）．两组在相同饲养管理条件下实验观察．分别在实验第３０，６０．９０ｄ时迫杀，对肝和肾进行超微病理学研究．结果表明，肝和肾实质细胞膜系统损伤明显，胶原原纤维再生增多，且有再生障碍及再生后的损伤性变化．

非洲猪瘟研究进展

非洲猪瘟（ＡｆｒｉｃａｎＳｗｉｎｅＦｅｖｅｒ，ＡＳＦ）是由ＡＳＦ病毒引起的猪的急性烈性传染病，以全身出血、呼吸障碍和神经症状为主要特征，其发病率和死亡率几乎达１００％，对养猪业危害巨大，是各国严密防范的传染病，也是世界猪病研究的重点。１流行病学ＡＳＦ...

慢性氟中毒家兔肝肾碱性磷酸酶和三磷酸腺苷酶的细胞化学研究

本试验复制了慢性氟中毒家兔病理模型,并对其肝和肾碱性磷酸酶(ALPase)和三磷酸腺苷酶(ATPase)进行了动态细胞化学研究。结果表明,肝和肾的 ALPase 和 ATPase 活性减弱,且随氟中毒时间延长而活性进一步减弱。对其活性抑制的机制以及氟中毒的膜系统损伤机制进行了初步探讨。

穴位接种IBD双价细胞苗鸡的抗原定位及免疫活性细胞监测

１５日龄滨白鸡后海穴接种鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）双价细胞苗，采用免疫荧光组化跟踪抗原定位和免疫活性细胞的免疫形态学监测，以评价其免疫效果。同时与口服和肌肉免疫途径进行了对比试验。结果表明，后海穴穴位免疫优于口服免疫和肌肉免疫。

鸡新城疫V_4弱毒疫苗免疫效果观察

选用v_4弱毒疫苗免疫SPF来航鸡,结果表明:接种该苗,10天即产生免疫,HI效价均值为5.0log2,免疫后20天达到免疫高峰,HI效价均值为5.6log2,免疫持续期为30天。此时,HI效价均值为5.0log2。V_4弱毒疫苗稍优于clone-30弱毒疫苗,但两者差异不显著。

经蓝舌病病毒云南株攻击绵羊的颊部超微病理学观察

用蓝舌病病毒云南株强毒攻击绵羊,对其颊部进行了超微病理学研究。结果表明,颊粘膜棘细胞层严重损伤,表现为棘细胞核浓缩,崩解,线粒体肿胀变圆,乃至破裂,粗面内质网扩张,脱颗粒,间桥断裂,形成大量空泡;固有层血管内皮细胞翘起,脱离基膜,内皮细胞内也可见大量空泡;在攻毒后期,固有层有嗜中性粒细胞,巨噬细胞和淋巴细胞浸润,成纤维细胞增生,胶原原纤维增多且排列紊乱。上述病理学变化说明,蓝舌病病毒云南株主要危害绵羊颊棘细胞层和固有层血管内皮细胞,造成其损伤,从而揭示出蓝舌病病毒可能是在绵羊颊棘细胞和固有层血管内皮细胞内增殖的,颇棘细胞和血管内皮细胞都是蓝舌病病毒的靶细胞。

鸡新城疫V_4株油乳剂灭活苗免疫效果观察

鸡新城疫V_4株油乳剂灭活苗接种1月龄SPF来航鸡,进行了正常免疫剂量的安全性试验和接种前后血凝抑制抗体效价的动态监测。结果,此灭活苗是安全的;接种后10d产生免疫力,效价为6.8log2,40d效价达高峰10.3log2;210d其效价仍为6.4log2。同时在免疫接种后40d进行了攻毒试验,5/5保护。

家禽的骨骼疾病(综述)

在现代家禽生产中,骨骼疾病无论对肉鸡还是蛋鸡生产都造成了巨大损失。需要营养的缺乏和内环境改变都可引起骨骼疾病。最近的调查研究表明,骨骼疾病可导致2—8％的肉鸡死亡,8周龄的雄性鸡死亡率更高一些。火鸡大约3—4％死于骨骼疾病。高产蛋鸡至产蛋结束,由于骨骼的脆性可导致大约30％的鸡发生骨折。

家兔外用免疫器官β－内腓肽的免疫组织化学研究

采用荧光免疫组织化学方法，对家兔外周免疫器官β－内腓肽（β－Ｅｐ）进行定位研究．β－Ｅｐ阳性反应细胞存在于Ｔ淋巴细胞区，而Ｂ淋巴细胞区不存在。推恻β－Ｅｐ对外周免疫器官调节作用是通过Ｔ淋巴细胞完成的。在Ｔ淋巴细胞区即有细胞膜上的β－Ｅｐ阳性细胞反应，又有细胞浆内β－Ｅｐ阳性细胞反应，说明β－Ｅｐ对免疫器官的调节作用可能存在反馈调节机制。

关注禽流感的综合预防

2001年5月16日继1997年香港出现因感染H5亚型禽流感病毒致人死亡事件,使全港百余万只鸡全部被扑杀销毁后,再次宣布在活鸡市场发现H5N1病毒。

番鸭细小病毒与鹅细小病毒PCR鉴别诊断方法的建立

根据番鸭细小病毒(MDPV)和鹅细小病毒(GPV)基因组的非同源序列各设计了1对引物MDPVF1/R1和GPVF1/R1,建立了一种PCR方法,用该PCR方法分别对GPV、MDPV、鸭瘟病毒(DPV)、鸭肝炎病毒(DHV)、鸭呼肠孤病毒(DRV)、犬细小病毒(CPV)和猫泛白细胞减少症病毒(FPLV)的病毒培养物及其核酸进行扩增。结果,引物MDPVF1/R1仅特异性扩增出MDPV的900 bp核酸片段,引物GPVF1/R1仅特异性扩增出GPV的465 bp核酸片段。表明,建立的PCR方法可用于GPV和MDPV的鉴别诊断。

家禽的骨骼疾病(综述)

佝偻病(Rickets) 佝偻病是由维生素D_3、钙磷缺乏或比例失调而引起的。其特征是生长板增厚,矿物质沉着减少,骨化受阻。在肉仔鸡,经常可见长骨屈曲,引起跛行。常发部位是胫骨近端。亚临床型的佝偻病报道并不多。佝偻病也可由过度劳累而引起。 佝偻病常见的是低血钙型和低血磷型。低血钙型佝偻病是由于软骨细胞数量增多而骺软骨增厚,伴随血液供应障碍,这是典型常发的佝偻病,是低血钙引起的。低血磷型佝偻病表现为软骨细胞肥大,而使骺软骨增厚。两型佝偻病均可见钙化软骨减少。钙磷比例直接影响佝偻病的发生发展。

猪断奶后多系统衰竭综合征诊断方法的系列研究

本研究对猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)的诊断方法临床症状和病理变化、病毒的分离与鉴定、聚合酶链式反应(PCR)、间接免疫荧光试验(IFA)、间接酶联免疫吸附试验(IELISA)、免疫组织化学试验(IHC)等进行了系列研究,这些方法适用于猪断奶后多系统衰竭综合征的诊断。

犬细小病毒VP2基因的原核表达及间接ELISA方法的建立

根据GenBank上发表的犬细小病毒(CPV)VP2蛋白基因序列,设计并合成1对引物,通过PCR扩增VP2基因全长。将其克隆到pET-30a载体中,构建了原核表达载体pET-VP2,转化大肠杆菌Rosetta,表达并纯化了重组蛋白,Western-blotting证明该重组蛋白具有免疫原性。利用重组蛋白为抗原,通过方阵试验确定了包被抗原的最佳包被量为15.8 ng/孔,血清的最佳稀释倍数为1∶100,建立了检测CPV血清抗体的间接ELISA方法。