4种消毒剂对规模化奶牛场常见病原菌消毒效果的评价

试验旨在探讨常见消毒剂对规模化奶牛场环境气载和动物体表优势病原菌的杀灭效果,为进一步制定科学合理的消毒技术规范提供参考。研究以优势病原菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、产气荚膜梭菌)为指示菌,通过悬液定性和定量试验探讨常见消毒剂(安灭杀、辉胜-30、过硫酸氢钾、聚维酮碘)对细菌繁殖体的杀灭效果。结果显示,1∶100倍稀释的安灭杀消毒液作用1、20及5 min能够有效杀灭金黄色葡萄球菌、产气荚膜梭菌和大肠杆菌;1∶200倍稀释的辉胜-30消毒液作用10、20及15 min能够有效杀灭金黄色葡萄球菌、产气荚膜梭菌和大肠杆菌;1∶200倍稀释的过硫酸氢钾消毒液作用3、5、5 min能够有效杀灭金黄色葡萄球菌、产气荚膜梭菌和大肠杆菌;1∶400倍稀释的聚维酮碘消毒液作用15、20、20 min能够有效杀灭金黄色葡萄球菌、产气荚膜梭菌和大肠杆菌。研究表明,金黄色葡萄球菌和大肠杆菌对安灭杀消毒液敏感,产气荚膜梭菌对过硫酸氢钾复合物粉较敏感,4种消毒剂宜交替使用可避免耐药性菌株的产生。

Tollip敲除猪肾细胞系的构建

旨在探究Toll作用蛋白(toll-interacting protein, Tollip)对口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus, FMDV)增殖的影响,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建Tollip基因缺失的猪肾细胞系(porcine kidney cell line, PK-15),并通过PCR测序和Western blot确认敲除效果,然后利用CCK-8试剂盒测定Tollip缺失后细胞活力变化,确认敲除细胞与野生细胞无显著差异,用FMDV感染敲除细胞后,采用Western blot、间接免疫荧光、实时荧光定量和病毒滴度测定等方法测定病毒在敲除细胞系中复制情况。结果显示:感染FMDV后,敲除细胞与野生细胞相比,显著促进了病毒的复制。综上,在PK-15细胞上,成功构建Tollip缺失细胞系,且试验表明Tollip的缺失有助于FMDV的复制。研究结果为后续Tollip功能研究及抗病毒机制研究提供理论依据。

口蹄疫病毒O/HN/93疫苗株的拯救及病毒活性鉴定

利用定点突变方法,构建含有预期突变的口蹄疫病毒O/HN/93株全长cDNA克隆,将全长cDNA的重组质粒线化后,与表达T7 RNA聚合酶的真核质粒pcDNAT7P共转染BHK-21细胞,转染细胞盲传至第3代50 h后出现典型致细胞病变效应(CPE),第4代10 h出现典型的CPE。对收获的病毒分别用RT-PCR、分子标签测序、间接免疫荧光和电镜观察等进行鉴定,均证实成功拯救到了O/HN/93株FMDV。成功获得O/HN/93株的感染性分子克隆,为进一步研究抗原谱广、免疫原性好的候选疫苗株奠定了骨架基础。

hTERT启动子调控的融合自杀基因CD:UPRT载体的构建及其应用

目的构建hTERT启动子调控的融合自杀基因CD:UPRT表达载体,研究其对人胃癌细胞SGC7901的体外靶向性杀伤作用。方法PCR扩增hTERT核心启动子片段,克隆入荧光素酶报告基因质粒pGL3-Basic,检测hTERT启动子在人胃癌细胞SGC7901和人成纤维细胞HLF中的转录活性。构建hTERT启动子调控的CD:UPRT基因表达载体hTERT-CD:UPRT,将其和CMV启动子调控的CD:UPRT基因表达载体pcDNA3.1-CD:UPRT用脂质体转染法分别转染入SGC7901和HLF细胞,筛选稳定表达细胞系,用RT-PCR和Western blot方法检测CD基因的表达,用MTT法检测5-FC对转染细胞的杀伤作用。结果成功克隆hTERT核心启动子;荧光素酶活性检测显示,hTERT启动子在SGC7901细胞中的转录活性为阳性对照的(21.50±2.15)%,而在HLF细胞中仅有背景活性。成功构建hTERT启动子调控的CD:UPRT基因表达载体,转染pcDNA3.1-CD:UPRT的SGC7901和HLF细胞以及转染hTERT-CD:UPRT的SGC7901细胞在mRNA和蛋白质水平均可检测到CD基因的表达,且对5-FC敏感;而转染hTERT-CD:UPRT的HLF细胞未检测到CD基因的表达,对5-FC不敏感。结论构建的hTERT启动子调控的融合自杀基因系统CD:UPRT/5-FC能在体外靶向性杀伤SGC7901细胞。

CDH1 C-160A基因多态性与胃癌易感性的Meta分析

目的:探讨CDH1C-160A基因多态性与胃癌易感性的关系.方法:检索中国生物医学文献数据库、万方数据库、中国期刊网和PubMed,获取CDH1C-160A基因多态性与胃癌易感性的病例-对照研究.以胃癌组与对照组人群基因型分布的OR值为效应指标,采用固定或随机效应模型进行合并分析,并进行偏倚评估.应用STATA10.0软件进行统计学处理.结果:共纳入文献13篇,研究14项,累计胃癌病例3144例,对照4221例.与野生基因型CC相比,(CA+AA)合并的OR值(95%CI)为0.98(0.84-1.15).按人群进行分层分析,亚洲人群OR值为0.92(0.81-1.04),高加索人群OR值为1.21(0.88-1.67).结论:CDH1C-160A基因多态性与胃癌易感性无关.

利用转录组测序数据分析胃癌长链非编码RNA的研究

目的检测长链非编码RNA(lncRNA)在胃癌中的表达,并初步分析其功能。方法 34对胃癌及癌旁正常组织的转录组测序数据从癌症基因组图谱计划(TCGA)网站下载获得。用Subread和feature Counts分析数据,获得mRNA和lncRNA的表达值。用edgeR分析获得差异表达lncRNA和与差异表达lncRNA共表达的mRNA,并作基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析。结果在胃癌组织和癌旁正常组织中差异表达的lncRNA有1345个,其中在胃癌组织中表达上调758个,下调587个。共表达分析显示,1045个编码基因与lncRNA表达相关。与差异表达lncRNA共表达的mRNA涉及的GO生物学过程包括有丝分裂期、细胞分裂、DNA复制等,涉及的KEGG通路包括细胞周期、细胞粘附分子等。结论 lncRNA在胃癌和癌旁正常组织中的表达有显著差异,提示其在胃癌的发生、发展中起重要作用。

长链非编码RNA在结肠癌中的表达研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)在结肠癌中的表达情况。方法从公共数据平台Gene Expression Omnibus(GEO)下载结肠癌外显子芯片数据集GSE31737,包含40对结肠癌及癌旁组织。对外显子芯片探针进行重排,筛选出在基因水平特异性匹配lncRNA的探针。用Affymetrix Power Tools分析获得lncRNA表达谱,用LIMMA分析在结肠癌和癌旁组织中差异表达的lncRNA。结果共有136 053个探针特异性匹配9294个lncRNA,约包含了Ensembl数据库中76%的lncRNA。分析GSE31737发现,与癌旁组织相比,结肠癌组织中共有87个lncRNA差异表达,其中50个高表达,37个低表达。结肠癌与癌旁组织表达值倍数变化>1.5倍的基因共37个。结论 lncRNA表达在结肠癌组织中发生明显变化,有可能成为结肠癌的分子诊断和基因治疗的新靶点。

火灾后钢筋混凝土结构强度性能测量方法研究

研究火灾后钢筋混凝土结构强度性能的准确测量问题。火灾过后,钢筋混凝土结构强度由于外界环境的改变会发生很大结构特征和材料属性上的变化,造成测量中的超声波特征频谱发生较大形变,传统方法都是根据反射的超声波频谱特征进行强度测量的,一旦发生火灾造成反射的超声波频谱变化,将造成测量结果的不准确。为此,提出了一种基于超声波谱关联性算法的钢筋混凝土结构强度性能测量方法,利用超声波传感器采集钢筋混凝土结构信息,并对其进行抗干扰处理,利用超声波数据,测量钢筋混凝土结构强度性能。实验结果表明,新算法提高了火灾后钢筋混凝土结构强度性能测量的准确性。

hTERT启动子调控的CD:UPRT/5-FC自杀基因对人胃癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的:研究人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控的胞嘧啶脱氨酶:尿嘧啶磷酸核糖转移酶/5-氟胞嘧啶(CD:UPRT/5-FC)融合自杀基因系统在体内对人胃癌SGC7901细胞的杀伤作用。方法:构建胃癌皮下移植瘤模型,随机分成3组处理。观察30天,测量肿瘤体积,计算抑瘤率。肿瘤组织做常规病理检查,免疫组化检测CD蛋白的表达。结果:成功构建胃癌皮下移植瘤模型。治疗30天后,B组(瘤内注射hTERT-CD:UPRT+腹腔注射PBS)和C组(单纯腹腔注射PBS)的肿瘤生长迅速,肿瘤体积分别为(2.72±0.35)cm3、(2.67±0.30)cm3,A组(瘤内注射hTERT-CD:UPRT+腹腔注射5-FC)的肿瘤生长受到明显抑制,第30天体积为(1.10±0.13)cm3,与前两组相比差异有统计学意义(P<0.05),其抑瘤率为59.6%。裸鼠移植瘤病理切片镜检,A组可见大量肿瘤细胞排列稀疏,部分肿瘤细胞核固缩、核碎裂;B组和C组则见大量肿瘤细胞排列紧密,细胞形态和细胞核呈多形性,核大深染,核分裂像多见。免疫组化显示,A组和B组可见CD的表达,C组CD表达呈阴性。结论:hTERT启动子调控的CD:UPRT/5-FC融合自杀基因系统对裸鼠胃癌皮下移植瘤有显著的杀伤作用,为胃癌的基因治疗提供了一种可能的方法。

土木工程专业生产实习教学方法改革的研究与探索

生产实习是土木工程专业教学过程中的重要环节,对于应用型院校的学生而言,这一教学过程尤为关键。本文分析了现阶段生产实习的现状和存在的问题,阐述了生产实习教学方法改革的意义,并针对存在的问题提出了提高土木工程专业生产实习教学效果的具体措施。

hTERT启动子的克隆及在胃癌细胞中的转录活性研究

目的:克隆人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)核心启动子,研究hTERT启动子在人胃癌细胞SGC7901和正常人成纤维细胞HLF中的转录活性。方法:以Hela细胞的基因组DNA为模板,PCR扩增hTERT核心启动子片段,将其克隆入荧光素酶报告基因质粒pGL3-Basic构建hTERT-pGL3Basic表达载体。将该载体用脂质体转染法转染SGC7901和HLF细胞,检测hTERT启动子在这两种细胞中的转录活性。结果:成功克隆hTERT核心启动子;双酶切和PCR鉴定均显示hTERT-pGL3Basic表达载体构建成功;荧光素酶活性检测显示hTERT启动子在SGC7901细胞中的转录活性为阳性对照的21.5%,而在HLF细胞中无活性。结论:hTERT启动子具有肿瘤特异性,可以用于肿瘤的靶向基因治疗。

考虑面板影响的土钉支护轴力分析

土钉抗拔力受土钉钢筋强度和土钉拔出力的影响。依据混凝土板冲切和剪切破坏标准,给出考虑面层影响的土钉抗拔力的计算方法。结合工程实例,分析了考虑考虑面层影响的土钉轴力以及安全系数的变化特征。

结核感染T细胞斑点试验在结核性腹膜炎诊断中的临床应用

目的探讨结核感染T细胞斑点试验(enzyme-linked immunospot assay in detection of mycobacterium tuberculosis infection,T-SPOT.TB)在临床诊断结核性腹膜炎中的应用价值。方法对临床明确诊断结核性腹膜炎及可疑结核性腹膜炎患者(n=37)同时实施T-SPOT.TB、结核菌素试验(PPD)、结核抗体、血清腺苷脱胺酶(ADA)等检测,同时设非结核性腹膜炎患者为对照组(n=25)。结果利用T-SPOT.TB试验诊断结核性腹膜炎的阳性率为97.3%(36/37),明显高于PPD的45.5%(15/33)、结核抗体检查的15.2%(5/33)、血清ADA的33.3%(7/21),差异有统计学意义(P<0.01)。T-SPOT.TB试验诊断结核性腹膜炎的敏感性和特异性分别为97.3%和92.0%,显著高于PPD的45.5%和61.9%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 T-SPOT.TB酶联免疫斑点法是一种具有较高敏感性和特异性的检测结核感染的技术,对快速而准确地诊断结核性腹膜炎具有重要的临床应用价值。

Cameralink图像数据光纤传输技术

介绍了Cameralink接口结构,分析了基于TLK2711的Cameralink光纤传输的弊端,提出了基于MAX9259/MAX9260的Cameralink光纤传输方案,该方案大大缩短了系统的开发周期,提高了系统的适应性。

口蹄疫病毒Asia1/JS/China/2005株基因组全长感染性克隆的构建

利用长距离RT-PCR技术扩增病毒基因组3′端覆盖口蹄疫病毒Asia1/JS/China/2005株近全长的3个片段(共约7.5 kb),并利用单一酶切位点将其分别克隆到pBluescriptSK+载体上。利用融合PCR扩增到基因组5′端含有15个C碱基的基因片段(约700 bp),并将其连接至pGEM-T载体。最后将这4个片段的阳性克隆装配至剔除T7启动子的低拷贝载体pcDNA3.1/Zeo(+)中构建该病毒株的全长cDNA克隆。以构建的FMDV Asia1/JS/China/2005株全长cDNA为模板,使用T7RNA聚合酶在体外转录得到病毒RNA,通过脂质体将其导入BHK细胞获得拯救病毒。对收获的病毒分别用RT-PCR、间接免疫荧光、电子显微镜观察和乳鼠致病性分析结果证实,通过体外转录获得了具有感染性的口蹄疫病毒。该株感染性克隆的构建为深入研究口蹄疫病毒的致病机制及研制新型疫苗等奠定了基础。

Sorcin高表达与胃癌细胞株SGC7901多药耐药的关系

背景与目的:长春新碱耐药胃癌细胞SGC7901/VCR是具有P-糖蛋白(P-gp)高表达的典型多药耐药细胞,但P-gp抑制剂维拉帕米(VRP)不能完全逆转其耐药,说明还存在其它耐药机制。我们运用差异蛋白质组学技术研究发现,可溶性耐药相关钙结合蛋白(Sorcin)在SGC7901/VCR中表达较SGC7901细胞明显上调。为进一步阐明Sorcin与胃癌细胞耐药的关系,本研究构建了FLAG-Sorcin融合表达载体,探讨Sorcin在胃癌多药耐药中的作用。方法:采用逆转录聚合酶链反应法(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增Sorcin cDNA片段编码区序列全长,DNA重组技术构建FLAG-Sorcin融合表达载体,经脂质体介导稳定转染SGC7901细胞,RT-PCR及Western blot分别检测转染细胞Sorcin mRNA表达的变化;噻唑蓝(MTT)法测定转染细胞及对照细胞对化疗药物的敏感性。用Sorcin反义核苷酸转染SGC7901-F-SOR细胞,RT-PCR检测Sorcin表达水平的变化,MTT法测定转染后细胞对VCR敏感性的变化。结果:RT-PCR法扩增出616bp全长Sorcin cDNA片段,成功构建了FLAG-Sorcin融合表达载体;RT-PCR及Western blot证实,Sorcin在SGC7901转染细胞中高表达;Sorcin高表达的SGC7901细胞对长春新碱(VCR)、阿霉素(ADM)、紫杉醇(Taxol)、氟尿嘧啶(5-FU)分别产生了8.87倍、6.13倍、6.67倍和2.80倍耐药。Sorcin反义核苷酸转染SGC7901-F-SOR细胞后,RT-PCR验证Sorcin表达被抑制,MTT结果显示细胞对VCR敏感性增加。结论:Sorcin高表达可致SGC7901细胞产生低倍数的多药耐药,说明Sorcin与SGC7901细胞多药耐药密切相关,有望成为逆转胃癌多药耐药的靶点。

土木工程专业分散管理式生产实习模式研究

土木工程专业分散管理式生产实习模式不是集中实习和分散实习的简单组合,而是一种新的实习模式。分散管理式生产实习可以保证学生有足够的生产实习工地和更好的实习指导,促进学生融入施工生产,但在实习指导管理、实习内容和生产实习基地等方面还存在不足,笔者从明确实习指导教师的职责;提高指导教师的指导能力和积极性;建立稳定的生产实习基地;注重学生能力培养;严格生产实习考核等5个关键环节就提高生产实习效果展开了讨论,以期为同类高校开展生产实习提供借鉴。

细胞内转录拯救Asia1型口蹄疫病毒

【目的】建立口蹄疫病毒(FMDV)感染性分子克隆的体内拯救技术平台,为深入研究该病毒基因组的结构与功能奠定基础。【方法】将置于T7启动子下的FMDVAsia1/JS/China/2005株全长cDNA的真核重组质粒pFMDV-A经NotI线化后和表达T7RNA聚合酶的真核质粒pcDNAT7P共转染BHK-21细胞,进行病毒体内拯救的研究。【结果】转染细胞盲传第3代48h后出现致细胞病变(CPE),第4代10h出现典型的CPE。RT-PCR、间接免疫荧光、电镜等均检测到了拯救的FMDV,而且存在分子标签,表明构建的FMDV全长cDNA分子克隆在BHK-21细胞内成功包装出FMDV。拯救毒与亲本毒对乳鼠的致病力(LD50)差异不显著,具有相似的生物学特征。共转染试验重复多次,均拯救到FMDV病毒。【结论】成功建立了基于质粒为基础的FMDV的体内拯救方法。

凸隆病毒研究进展

凸隆病毒(torovirus)作为套式病毒目(Nidovirales)冠状病毒科(Coronaviridae)家族的重要成员,包括马凸隆病毒(EToV)、牛凸隆病毒(BToV)、猪凸隆病毒(PToV)和人凸隆病毒(HToV),该病毒感染人和动物,主要引起消化道和呼吸道疾病。自该病毒首次于1982年在美国Lowa州被分离得到,迄今已有30余年的研究历史,随着分子生物学和病毒分离培养技术的不断发展,病毒与其宿主间相互作用的机制也得以不断被认知,此篇综述介绍了有关凸隆病毒的最新研究进展,包括病毒的发现及分类,病毒粒子特征、基因结构及功能,引起细胞凋亡的机制,同时包含了病毒变异、血清流行病学、病理变化、诊断方法和关于研究前景的概括。

外来口蹄疫流行毒株跟踪分析与防控

2008年以来,外来口蹄疫流行毒株不断侵入,给我国造成巨大危害。分子流行病学研究表明,我国现有的主要流行毒株,如A/Sea-97、O/Mya-98、O/PanAsia和O/Ind-2001等,均系外来毒株。结合全球口蹄疫流行形势和毒株遗传衍化关系推测,这些毒株由东南亚地区传入我国的可能性最大。此外,常年流行于中亚、西亚等国家的O/PanAsia-2、A/Iran-05和Asia1/Sindh-08等毒株,以及在印度等南亚地区流行的A/G VII和Asia1/G VIII等毒株传入我国的风险依旧存在。为及时判定外来口蹄疫威胁,做好诊断、免疫等阻断技术储备,本文就外来口蹄疫毒株流行情况和国家口蹄疫参考实验室有关技术储备工作进行总结,以期为我国外来口蹄疫防控提供参考。