布氏白僵菌菌株JG-17的鉴定及对3种金龟子的毒力测定

【目的】基于金龟子类害虫种类繁多、危害严重的现状以及农业对具有生态友好、可持续治理特点的生物防治的迫切需求,研究布氏白僵菌(Beauveria brongniartii)菌株JG-17对我国3种重要金龟子幼虫和成虫的毒力,为金龟子生防制剂的研发提供优良的菌种资源。【方法】采用稀释挑取法和病原菌回接法,在感病金龟子成虫虫尸上分离获得高毒力病原真菌;通过形态学与rDNA-ITS基因序列分析确定菌株JG-17的分类地位;采用十字交叉测量法和血球计数板法测定不同温度下菌株JG-17的生长速率和产孢量;采用浸渍法测定菌株JG-17对华北大黑鳃金龟(Holotrichia oblita)、暗黑鳃金龟(Holotrichia parallela)和铜绿丽金龟(Anomala corpulenta)成虫和幼虫的毒力;通过盆栽试验测定菌株JG-17对暗黑鳃金龟2龄幼虫的防治效果。【结果】分离获得一株对3种金龟子成虫和幼虫同时具有较高毒力的白僵菌菌株JG-17,结合形态学和rDNA分子鉴定结果,确定菌株JG-17为布氏白僵菌。25—29℃为JG-17的适宜生长温度,生长速率均在4 mm·d^(-1)以上,27℃下,JG-17的生长速率和产孢量最高。JG-171×10^(8)个孢子/mL处理浓度下,华北大黑鳃金龟、铜绿丽金龟和暗黑鳃金龟成虫13 d累计死亡率分别为78.0%、100.0%和86.0%,LT_(50)分别为9.458、6.911和8.391 d。相同处理浓度下,JG-17对暗黑鳃金龟幼虫的毒力高于铜绿丽金龟和华北大黑鳃金龟,1×10^(8)个孢子/mL浓度下,华北大黑鳃金龟、铜绿丽金龟和暗黑鳃金龟1龄幼虫13 d的累计死亡率分别为76.7%、96.7%和100.0%,2龄幼虫13 d的累计死亡率分别为66.7%、36.7%和100.0%;不同孢子浓度下,对暗黑鳃金龟1龄和2龄幼虫的LT50均明显低于铜绿丽金龟和华北大黑鳃金龟。盆栽试验中,相同施用剂量下,中耕期淋灌处理的暗黑鳃金龟幼虫死亡率与沟施处理的幼虫死亡率差异不显著,播种前撒施方式下取得相近的防治效果需要10倍以上的孢子量。【结论】布氏白僵菌JG-17对华北大黑鳃金龟、暗黑鳃金龟和铜绿丽金龟成虫和幼虫均具有较高致死率,对防治金龟子类地下害虫具有较大的开发应用潜力。

韭菜迟眼蕈蚊在北苍术上的发生、鉴定与防治

为明确河北省深泽县北苍术种植田根蛆为害情况、根蛆种类及苏云金芽胞杆菌对根蛆的田间防治效果,采用5点取样法调查北苍术根蛆的为害情况,并利用mtCOI分子标记和成虫形态对比鉴定其种类,同时施用苏云金芽胞杆菌JQD117水剂对北苍术根蛆进行田间防治。结果表明,深泽县北苍术根蛆为害率为2.0%~25.0%,死苗率高达10%,单株平均虫口数量可达27.4头。北苍术根蛆mtCOI基因序列与韭菜迟眼蕈蚊的一致性为100%,其成虫形态特征与韭菜迟眼蕈蚊形态特征一致,确定北苍术根蛆为韭菜迟眼蕈蚊。苏云金芽胞杆菌JQD117水剂8000m L/亩对北苍术根蛆的防治效果和保株效果分别为70.72%和79.21%。本研究明确了为害深泽县北苍术的根蛆种类、为害情况及苏云金芽胞杆菌JQD117的田间防治效果,旨在为今后北苍术根蛆的绿色防控提供科学依据。

华北大黑鳃金龟致病球孢白僵菌JCF的鉴定和致病力测定

【目的】华北大黑鳃金龟Holotrichia oblita是花生等多种农作物、果林及苗圃的重要害虫,长期以来主要以化学防治为主。本研究测定了球孢白僵菌Beauveria bassiana菌株JCF对华北大黑鳃金龟幼虫和成虫的致病力,为华北大黑鳃金龟的生物防治提供真菌资源。【方法】对罹患病害的华北大黑鳃金龟虫尸上的寄生真菌进行分离及回接试验,分离纯化出致病菌株JCF;利用光学显微镜观察菌株形态学特征,PCR扩增JCF的rDNA-ITS序列并测序,构建JCF系统发育树对菌株进行分子鉴定;采用浸渍法和田间模拟试验测定其对华北大黑鳃金龟成虫和幼虫的致病力。【结果】JCF菌株菌落初期为白色绒状,后期变为黄色或浅黄色絮状,背面无色。产孢细胞呈瓶状簇生于分生孢子梗上,分生孢子梗呈穗状,着生在营养菌丝上;分生孢子单生,透明,近球形,直径(2.0~3.5)μm×(1.5~2.0)μm。rDNA-ITS序列分子鉴定表明菌株JCF为球孢白僵菌。这一球孢白僵菌菌株JCF对华北大黑鳃金龟成虫的致死中浓度(medium lethal concentration,LC_(50))值为2.124×10^(7)孢子/mL,用其2×10^(8),1×10^(8)和5×10^(7)孢子/mL孢悬液处理华北大黑鳃金龟成虫时,致死中时(medium lethal time,LT_(50))值分别为6.267,6.852和7.455 d;球孢白僵菌JCF菌株对华北大黑鳃金龟1,2和3龄幼虫的LC_(50)值分别为5.47×10^(6),1.59×10^(8),2.50×10^(8)孢子/mL;1×10^(8)孢子/mL浓度下,球孢白僵菌JCF菌株对华北大黑鳃金龟1和2龄幼虫的LT_(50)值分别为8.6和18.6 d;5×10^(8)孢子/mL浓度下,球孢白僵菌JCF菌株对华北大黑鳃金龟2和3龄幼虫的LT_(50)值分别为10.3和13.2 d。田间模拟试验2×10^(8)孢子/mL球孢白僵菌JCF孢悬液对华北大黑鳃金龟成虫和幼虫同样表现出良好的致病效果。【结论】球孢白僵菌菌株JCF对华北大黑鳃金龟成虫和幼虫均有较高致病力,为开发白僵菌制剂防治金龟科害虫提供了新的菌种资源,对生物防治金龟科害虫具有潜在的应用价值。

韭蛆肠道细菌分离鉴定及其抗生素敏感性分析

为探究韭菜迟眼蕈蚊Bradysia odoriphaga(韭蛆)幼虫肠道可培养细菌的菌群结构及抗生素敏感性。本研究对韭蛆3龄幼虫肠道细菌进行分离培养和16S rDNA鉴定后,采用23种抗生素对其分别进行药敏试验。研究结果表明,经分离鉴定后的6种肠道细菌属于氧化微杆菌Microbacterium oxydans HQ202813.1,葡萄球菌Staphylococcus vitulinus MN640907.1,蜡样芽胞杆菌Bacillus cereus CP045606.2,芽胞杆菌Bacillus sp.MG914019.1,沙雷氏菌属菌株Serratia fonticola MH379711.1,沙福芽胞杆菌Bacillus safensis MN704552.1,并分别命名为B.o1、B.o2、B.o3、B.o4、B.o5、B.o6。对6种可培养细菌的抗生素敏感性进行测试,结果表明,B.o1对21种抗生素都敏感,其中对多粘菌素和磷霉素表现为耐药;B.o2对21种抗生素都敏感,其中对乙酰螺旋素、林可霉素表现为耐药;B.o3对19种抗生素敏感,对青霉素、氨苄西林和多粘菌素耐药;B.o4对19种抗生素敏感,对青霉素、氨苄西林、林可霉素、多粘菌素耐药;B.o5对15种抗生素敏感,对青霉素、氨苄西林、庆大霉素、萘替米星、红霉素、阿奇霉素、麦迪霉素和多粘菌素耐药;B.o6对氨苄西林、磷霉素耐药,对其余19种抗生素敏感。综上所述,韭蛆幼虫肠道细菌菌群具有多样性,存在天然耐药的现象,本研究为进一步开展韭蛆幼虫肠道细菌微生物区系和功能细菌的研究提供了基础。

雷公藤有效成分制备的研究进展

简要介绍了近年来有关中药雷公藤有效成分的制备方法及研究进展 。

球孢白僵菌不同感染方式侵染棉铃虫幼虫的毒性比较及组织病理变化

为明确球孢白僵菌在不同感染方式下对棉铃虫的侵染能力,采用饲喂法和浸渍法测定了球孢白僵菌HFW-05对棉铃虫Helicoverpa armigera(Hbner)2龄幼虫的致病力,并通过组织切片显微技术、扫描电镜技术观察了球孢白僵菌HFW-05对棉铃虫的致病方式。结果表明:白僵菌HFW-05可通过消化道(饲喂法)成功侵染2龄棉铃虫,接种感染6d后的校正死亡率为75.8%。经由体表(浸渍法)接种白僵菌HFW-05的试虫,试验中体重的变化和取食量与对照相近(6d校正死亡率仅为17.3%,不能通过体表达到致病效果)。组织病理学变化表明:26±1℃条件下,HFW-05菌株对棉铃虫以消化道侵染为主,侵染后可导致寄主中肠微绒毛脱落严重,肠壁组织溶解并最终只剩余底膜;马氏管变形萎缩,边缘向外突出隆起,管径变大;脂肪体萎缩解体,结构松散;表皮下的细胞被菌丝侵染破坏。浸渍法接种的试虫,切片观察处理6d后试虫,体内未发现菌丝,肠壁组织正常完整。扫描电镜观察,浸渍法接种的分生孢子未能穿透棉铃虫表皮,而是贴于寄主表皮表面生长,在湿度合适的条件下,菌丝生长到一定时间后断裂成为芽生孢子。白僵菌HFW-05可经由消化道对棉铃虫达到较高的致病效果,在一定程度上弥补外界环境对白僵菌侵染的不利影响,对今后应用白僵菌进行生物防治具有重要意义。

球孢白僵菌生物学特性与其对不同昆虫侵染差异相关性分析

球孢白僵菌对不同目标昆虫的侵染能力存在很大差异。应用4株不同寄主来源的球孢白僵菌对2龄小菜蛾和棉铃虫幼虫进行毒力测定,扫描电镜观察分生孢子在试虫体表的萌发及侵染过程,同时测定了4菌株的生长速率、产孢量和孢外酶水平等生物学特性。结果表明,供试菌株中HFW-05的生长速率及酶活性均高于其余3菌株;菌株HFW-05对小菜蛾致病力较高,处理6 d后校正死亡率为87.1%,其余3株为30%左右;4菌株对棉铃虫6 d后校正死亡率均低于20%。扫描电镜观察结果表明,菌株HFW-05附着在小菜蛾表皮12 h后,孢子萌发后直接或产生较短芽管穿透表皮,36 h后,未穿透小菜蛾表皮的菌丝体断裂为芽生孢子;其余处理分生孢子在试虫表皮均能萌发,但芽管多呈蔓延生长直至断裂为芽生孢子,未能有效穿透寄主表皮,且孢子生长周期均长于菌株HFW-05。单纯依据孢子萌发率、产孢量或酶活评价筛选高毒力菌株是不够的。

球孢白僵菌与低剂量化学杀虫剂对小菜蛾的协同增效作用

本文联合应用球孢白僵菌Beauveria bassiana HFW-05与低剂量化学杀虫剂,评价其是否对小菜蛾防治具有协同增效作用,为小菜蛾的有效防控提供新的途径。结果表明,低剂量的化学杀虫剂对菌株HFW-05分生孢子的萌发率、菌丝生长和胞外蛋白酶活性没有影响,甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和氯虫苯甲酰胺的增效作用最明显。低剂量甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和氯虫苯甲酰胺与HFW-05混用均可明显提高对小菜蛾2龄幼虫的杀虫速度。氯虫苯甲酰胺最低设定浓度10×与HFW-05 3个浓度(1.0×10~6、1.0×10~7、4.0×10~7孢子/mL)混用对小菜蛾的理论LT_(50)均低于1 d,显著低于单独使用HFW-05孢悬液。甲氨基阿维菌素苯甲酸盐4×与HFW-05 3个浓度(1.0×10~6、1.0×10~7、4.0×10~7孢子/mL)混用对小菜蛾的LT_(50)分别为2.4、2.2和1.2 d,显著低于单独使用HFW-05孢悬液。甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和氯虫苯甲酰胺均没有影响HFW-05对小菜蛾的僵虫率。表明白僵菌HFW-05与低剂量甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和氯虫苯甲酰胺联合应用,在保证白僵菌侵染作用的同时,可有效提高对小菜蛾的致病力,是防治小菜蛾的一项新的有效措施。

花生果腐病拮抗菌贝莱斯芽胞杆菌Hsg1949鉴定与防效

花生果腐病是由复合病原真菌引起的病害,直接严重影响花生的产量和品质。为筛选花生果腐病的生防微生物,以花生果腐病主要病原菌镰孢菌为靶标菌,采用稀释涂布平板法和平板对峙培养法,在花生根际土壤中筛选到一株对镰孢菌具有拮抗作用的生防细菌Hsg1949。经形态学观察、Biolog微生物自动鉴定系统及16S rDNA和gyrA序列构建系统发育树等综合分析,鉴定菌株Hsg1949为贝莱斯芽胞杆菌。菌株Hsg1949对3株镰孢菌分离株具有稳定的的拮抗活性,继代培养40代时,对3株镰孢菌的抑菌率分别为77.0%、69.7%和61.9%,与初始菌株F0代的抑菌活性无显著差异。其无菌上清液活性物质耐高温,耐强酸但不耐强碱,在pH 11的环境下拮抗活性显著降低。田间试验结果表明,Hsg1949菌悬液2×10^(8)和5×10^(8) cfu/mL可显著降低花生果腐病发病率,对花生果腐病的防治效果分别为66.54%和71.27%,与化学药剂多菌灵防效(75.11%)相当。菌株Hsg1949对花生白绢病菌、棉花立枯病菌、棉花枯萎病菌和棉花黄萎病菌也具有较强的拮抗作用,在植物真菌病害的生物防治中将具有较大的应用潜力。

球孢白僵菌与11种新型化学杀菌剂的相容性评价

本研究测定了当前市场上常用的11种化学杀菌剂对球孢白僵菌HFW-05萌发、生长速率、产孢量、胞外蛋白酶产生水平及杀虫活性的影响。结果表明,常规浓度下,除68.75%氟菌霜霉威对菌株HFW-05菌丝生长没有抑制作用、50%啶酰菌胺对菌株HFW-05产孢量没有抑制作用外,其余杀菌剂对HFW-05孢子萌发、菌丝生长、产孢量和胞外蛋白酶产生水平均有显著抑制作用。60%唑醚代森联对菌株HFW-05的抑制作用最强,常规浓度、5倍稀释和10倍稀释浓度下均显著抑制菌株HFW-05孢子萌发、菌丝生长、产孢量及胞外蛋白酶的产生。多数杀菌剂随处理浓度的降低和时间推移对菌株HFW-05的抑制作用逐渐减弱。白僵菌-杀菌剂同时使用时,42.4%唑醚氟酰胺、10%苯醚甲环唑和50%咯菌腈没有降低HFW-05的杀虫活性,小菜蛾2龄幼虫的校正死亡率和僵虫率与单独使用菌株HFW-05差异均不显著;25%双炔酰菌胺、50%啶酰菌胺、50%烯酰吗啉、68.75%氟菌霜霉威、50%醚菌酯、60%唑醚代森联和32.5%苯甲嘧菌酯则显著降低了菌株HFW-05对小菜蛾2龄幼虫的杀虫活性,其中60%唑醚代森联对菌株HFW-05的致病力影响最大,对小菜蛾2龄幼虫的校正死亡率降低了49.9%;25%吡唑醚菌酯对小菜蛾2龄幼虫有一定致死作用,校正死亡率为46.2%,与菌株HFW-05同时使用时小菜蛾2龄幼虫的校正死亡率提高了20%。

球孢白僵菌HFW-05的诱变筛选及其对烟粉虱若虫的毒力测定

对田间分离到的球孢白僵菌进行孢子紫外诱变选育,获得一毒力较高、性能稳定的突变株HFW-05。初步研究结果表明,该菌株在SDAY、PDA、PCA平板培养基上8d内的平均菌落直径生长速度分别为3.13、2.25、2.75mm/d。在感染浓度(1×108孢子/ml)下,HFW-05菌株对2龄烟粉虱若虫的6d平均累计致死率为96.4%;对1、2龄烟粉虱若虫的LC50分别为1.87×106孢子/ml2、.09×106孢子/ml,其毒力分别为出发菌株的2.68和3.2倍。

化学杀虫剂对苏云金杆菌芽孢及伴胞晶体的影响

研究了 7种常用化学杀虫剂对苏云金杆菌芽孢及伴胞晶体的影响及作用 ,结果表明 ,常用浓度下 ,2 .5 %溴氰菊酯乳油、4 8%毒死蜱乳油对苏云金杆菌芽孢及伴胞晶体无影响 ,可与苏云金杆菌制剂事先做成混剂 ;4 .5 %高效氯氰菊酯乳油、2 .5 %高效氯氟氰菊酯乳油、2 0 %灭多威和 4 0 %辛硫磷在短时期内对芽孢及伴胞晶体无明显影响 ,可与苏云金杆菌制剂现混现用 ;80 %敌敌畏乳油(5 0 0倍稀释 )对苏云金杆菌伴胞晶体有明显损伤作用 。

常用化学农药对球孢白僵菌HFW-05菌株的影响及其混用对小菜蛾的联合毒力

球孢白僵菌HFW-05对粉虱有很高的杀虫活性,为扩大该菌株的杀虫范围及明确其与常用化学农药的混用效果,测定了HFW-05菌株对小菜蛾的杀虫活性及化学药剂对HFW-05菌株孢子生长发育的影响。结果表明,HFW-05菌株对小菜蛾幼虫表现出很高的杀虫活性,5×107孢子/mL浓度下,HFW-05菌株对小菜蛾2,3龄幼虫的6 d校正死亡率分别为86.7%和76.7%,各试验浓度下对2龄小菜蛾幼虫的毒力显著高于3龄幼虫。随浓度降低化学药剂对孢子萌发的抑制作用均明显减弱,药剂对孢子的影响与菌药混用时对昆虫的毒力影响没有明显的相关性。常规用量下,抑太保、三氟氯氰菊酯和辛硫磷强烈抑制孢子萌发,孢子萌发率为0,0和7.9%,药剂5倍稀释液与1×106孢子/mL孢悬液混用,辛硫磷、灭多威、灭幼脲Ⅲ号对小菜蛾表现为拮抗作用,校正死亡率分别为23.4%,16.2%和20.5%,其余药剂均表现为毒力相加作用,抑太保、氟虫脲的增效作用显著,对小菜蛾的校正死亡率分别为93.3%和98.0%。可见菌药合理混用对改善小菜蛾的生物防治有一定的指导意义。

生长调节剂对球孢白僵菌产孢和分生孢子性能的影响

球孢白僵菌在农林害虫生物防治中发挥着重要的作用,发酵周期和产孢量是其发酵工艺中的主要评价指标。本试验研究了生长调节剂对球孢白僵菌JG-17菌株产孢的促进作用。结果表明,通过外源法在菌落表层施用微量乙烯利,可以明显提高菌株JG-17的产孢量,以对8日菌龄表层施用100 ng/cm^(2)乙烯利处理最佳,产孢量为未处理对照的6.28倍。经乙烯利处理后形成的分生孢子,其耐热性、抗紫外线能力和对靶标害虫的杀虫活性与未处理对照没有显著性差异。在白僵菌培养过程中科学施用乙烯利,可有效提高白僵菌的产孢效率,研究为真菌生物农药工业化生产的效率提升提供了新的思路。

转Bt基因工程菌BioP8在环境中的消长动态及生物学效应

2001～2004年，在河北省保定市对转Bt基因荧光假单胞菌工程菌BioP8进行了环境释放，并跟踪调查该工程菌在田间的定殖、扩散、田间防效以及对田间节肢动物群落的影响．结果表明，BioP8在甘蓝叶、根及土壤中均能定殖、存活，在植物根部存活能力较强．在施药后d3，BioP8菌密度均达最高值，之后趋于衰减；BioP8对甘蓝田中天敌有较明显的保护作用，对田间节肢动物群落物种丰富度有一定的影响，BioP8防治区的节肢动物个体总量介于化防区和空白对照区的个体总量．

球孢白僵菌HFW-05对烟粉虱的致病力及组织病理影响

环境温湿度是影响白僵菌菌株致病力的关键因素,本文测定了不同温、湿度下白僵菌Beauveria bassiana HFW-05对烟粉虱Bemisia tabaci若虫及卵的致病力,同时观察了烟粉虱感病若虫的组织病理变化。结果表明,各浓度下烟粉虱若虫的校正死亡率随时间变化曲线基本一致,接种3-4 d时出现死亡高峰,白僵菌HFW-05对烟粉虱1龄、2龄、3龄若虫的LC_(50)分别为5.94×10~4、1.06×10~5、5.08×10~5孢子/mL,LT50分别为2.54 d、2.68 d、3.18 d;白僵菌HFW-05对卵的致病力很低,1×108孢子/mL接种浓度下,卵的6 d感染率仅为24.9%。在25℃、30℃下,HFW-05对烟粉虱若虫表现出最强的致病力,高于或低于此温度时,烟粉虱若虫死亡速度减慢,死亡率降低。相对湿度发生变化时,烟粉虱若虫死亡速度和死亡率明显不同,相对湿度高于90%时,烟粉虱若虫死亡速度最快,死亡率最高,相对湿度介于70%-90%时,白僵菌HFW-05对烟粉虱若虫的致病力无明显差异,但校正死亡率显著低于环境湿度大于90%的处理,相对湿度低于70%时,烟粉虱死亡率也达到60%左右。组织病理学观察显示尾部舌状突是HFW-05侵染烟粉虱若虫的关键部位。研究结果表明白僵菌HFW-05在烟粉虱的生物防治中有较大的潜力。

不完全边值问题的极小二乘解及其稳定性

定义了一类在部分边界上函数值为0函数的Sobolev空间,并用以讨论部分边界缺乏边值的二阶散度型椭圆型微分方程与其最小范数极小二乘解的稳定性.

儿童病毒性脑炎T淋巴细胞亚群的变化及治疗观察

目的探讨儿童病毒性脑炎外周血T淋巴细胞亚群的变化及与临床病情变化的关系,并观察胸腺肽治疗效果。方法用流式细胞仪检测30例病毒性脑炎患儿的T淋巴细胞亚群,并与健康儿童对照,用胸腺肽辅助治疗15例儿童病毒性脑炎并与常规治疗组对照。结果病毒性脑炎组T细胞亚群CD3、CD4、CD4/CD8比值均明显低于对照组(P均<0.01);CD8明显高于健康儿童(P<0.05);胸腺肽治疗组疗效及T细胞亚群的恢复明显高于常规治疗组(P<0.01)。结论病脑患儿存在T淋巴细胞及其亚群数量与功能的紊乱,其临床病情变化与T细胞亚群的变化存在一致性,胸腺肽辅助治疗病脑有良好的疗效。

抗生素类作为防腐剂对苏云金杆菌芽孢及伴胞晶体的影响

报道了 1 4种抗生素作为防腐剂对苏云金杆菌CH菌株芽孢萌发的抑制作用和对伴胞晶体的影响。结果表明 ,红霉素、盐酸环丙沙星对CH菌株芽孢萌发有较强的抑制作用 ,在 0 5μg/mL低剂量下可抑制芽孢的萌发 ;氧氟沙星和麦迪霉素抑制作用稍差 ,在 5μg/mL的剂量下抑制作用随时间延长而减弱 ,96h后基本丧失抑制作用。其它几种抗生素对苏云金杆菌芽孢萌发的抑制终浓度均在 30 μg/mL以上 ;SDS -PAGE分析和生物测定表明 ,红霉素、盐酸环丙沙、氧氟沙星和麦迪霉素对伴胞晶体均无明显损伤作用 ,其中氧氟沙星 45oC条件下放置 4d,发酵液毒力保持率为 96 2 %。

Harnack不等式

在最高项系数无界的条件下讨论了二阶椭圆型微分方程弱解的局部极大值原理及Ｈａｒｎａｃｋ不等式．