《动物生物技术》第二课堂的教学改革与实践探索

[目的]为了让动物科学专业的大学生能够熟练掌握运用动物生物技术课程的理论和技术。[方法]在《动物生物技术》第二课堂的教学中,理论教学引入了翻转课堂、网络教学和知识竞猜等方式,实践教学采用科研专项衔接、产学研融合、大学生创新项目参与等活动。[结果]在第二课堂教学改革中,通过理论教学的改革探索,学生对课程理论知识有了比较深入的掌握和理解,特别是对于当前动物生物技术研究的前沿和热点掌握效果最好;多种实践方式的改革应用,学生能够较为熟练地应用课程知识设计方案,运用专业技术解决实际问题,获得90分以上的学生人数明显高于未参与动物生物技术第二课堂教学改革创新的学生,没有60分以下的学生。[结论]《动物生物技术》第二课堂教学实践改革创新弥补了传统教学的不足,有利于学生更好地掌握动物生物技术的专业知识和技能,提高了教学效果。

基于“四位一体、三段融合”的动物生物技术教学改革探究

动物生物技术以传统畜牧技术为基础,是一门利用现代生物技术服务动物生产的应用型科学。为了提高动物生物技术课程教学质量、培养优秀生物技术专业人才,开展了课程教学改革。文章基于“四位一体、三段融合”的改革方式,对动物生物技术课程教学改革进行了探究和总结。通过实施“优化教学目标、丰富教学内容、实施德融育人、改进评价体系”和“课前课中课后教学融合”,提高了学生的技术创新能力和理论联系实际能力,提升了动物生物技术课程教学质量。“四位一体、三段融合”的动物生物技术教学改革有助于高校培养满足社会需求且具有创新思维和开拓精神的生物技术领域科创型人才。

《动物生物技术》双元育人模式教学改革探索

文章介绍了《动物生物技术》课程的特点和传统教学中存在的问题,将双元育人模式融入教学过程中并分析教学特点。通过以高校为主体,与企业协同教学,对教学内容、教学方法、科研环节和考核评价方式等方面进行教学改革,学生的理论技术水平和综合能力得到提高,有效促进了动物生物专业技术人才的培养,进一步提高了高校教学水平并推动企业高质量发展。

国审新品种皖临白山羊培育与种质特性

为更好地保护和开发利用安徽省优良地方羊种,增加我国优质肉羊产能。该研究以地方品种安徽白山羊为基础,引入萨能奶山羊和波尔山羊血缘,开展了皖临白山羊新品种培育。选育结果:经过三元杂交以及横交固定选育四个世代后,新品种皖临白山羊2月龄公羔体重为(12.38±1.63) kg,体高、体长和胸围数据分别达到(46.12±1.51)、(44.15±1.55)和(50.10±1.99) cm;6月龄公羔体重为(31.12±3.14) kg,体高、体长和胸围数据分别达到(63.38±1.98)、(58.95±2.15)和(72.20±2.55) cm;12月龄公羊体重为(52.53±4.01) kg,体高、体长和胸围数据分别达到(71.38±4.11)、(68.55±2.99)和(85.85±3.55) cm;18月龄公羊体重为(66.16±4.78) kg,体高、体长和胸围数据分别达到(81.25±4.10)、(73.44±4.21)和(92.21±4.31) cm;产羔率达255.3%;6月龄公羊屠宰率、净肉率和眼肌面积分别达(54.15±1.42)%、(47.08±0.85)%和(13.01±0.44) cm2;6月龄母羊屠宰率、净肉率和眼肌面积分别达(53.21±0.76)%、(46.56±1.52)%和(12.92±0.78) cm2。可见,皖临白山羊新品种体型较大,背毛白色,全身结构匀称紧凑,背腰宽平,四肢粗壮,蹄质坚实,充分发挥了亲本成活率高、抗逆性强、耐粗饲等优良特点。

企业研究生工作站背景下畜牧专硕培养的探索

畜牧专业硕士研究生的培养一直是农业高等教育中的重要任务之一。随着企业研究生工作站模式的发展,畜牧专硕培养模式也出现了一些新的探索和实践。文章以企业研究生工作站为背景,探索畜牧专硕培养模式,探讨校内导师和企业导师在畜牧专业硕士研究生培养中的作用与合作方式,并提出一些优化建议,旨在为提高畜牧专业硕士研究生培养的质量和实效提供参考。

小鼠皮肤成纤维细胞的体细胞核移植

取成年小鼠唇部皮肤进行培养, 分离成纤维细胞并血清饥饿培养1 周, 用作核供体。对成年小鼠进行超排, 取卵母细胞用作核受体,核移植重构胚经SrCl2 激活处理6 h后, 同mM16培养液和小鼠输卵管上皮细胞共培养, 把发育到早期囊胚的重构胚转移至小鼠胎儿成纤维细胞饲养层上, 添加ES细胞条件培养液,消化分离ICM,然后接种培养, 对孵出的ES细胞样集落进行鉴定培养。结果显示, 小鼠唇部皮肤成纤维细胞为核供体, 核移植重构胚2 细胞率为54 05%, 桑椹胚率17 14%, 囊胚率6 90 %, 对照组卵丘细胞的核移植重构胚2 细胞率为60 00%, 桑椹胚率21 85%, 囊胚率11 69 %, 但2种供体细胞在支持核移植重构胚发育能力上差异不显著。成纤维细胞重构囊胚中6个囊胚分离出ES细胞样集落, 3个ES细胞样集落可稳定传代; 对照组卵丘细胞重构囊胚中9个囊胚中分离出ES细胞样集落, 5个ES细胞样集落可稳定传代。从核移植重构胚中分离出的ES细胞样集落具有岛状或巢状群体生长形态,生长旺盛的集落可自发分化成单个散在或片状存在的上皮样或梭形细胞, 碱性磷酸酶检测为阳性, 常规冻存复苏, 仍显示ES细胞特征。

小鼠体细胞核移植及ES细胞样集落分离

利用小鼠皮肤成纤维细胞为核供体进行体细胞核移植并从重构胚中分离胚胎干细胞(ES)样 集落,以便对体细胞核移植重构胚来源的ES细胞样集落进行研究.结果显示,小鼠皮肤成纤维细胞 作为核供体,核移植重构胚激活率为60.48％(254/420),囊胚发育率为6.90％(29/420),6个囊胚中 分离出ES细胞样集落,分离率为1.43％(6/420),3个ES细胞样集落能够稳定传代,至第5代时核 型正常率分别为77.84％,75.18％,77.20％.分离出的ES细胞样集落具有岛屿状团状隆起结构, 碱性磷酸酶染色呈阳性,体外可自发分化成上皮样或梭形细胞.实验证实小鼠唇部皮肤成纤维细胞能 够支持体细胞核移植重构胚发育至囊胚,并能分离出可以稳定传代的ES细胞样集落.

小鼠卵母细胞的孤雌激活与ES细胞样集落分离

对小鼠卵母细胞进行孤雌激活用于单性生殖研究。取成年昆明白小鼠进行超数排卵,乙醇激活,同小鼠输卵管上皮细胞共培养并添加mM16培养基培养至早期囊胚阶段,移至小鼠胎儿成纤维细胞饲养层上,换成ES细胞培养液继续培养,分离消化ICM,重新接种,对分离出的ES样细胞集落进行分离培养鉴定。结果显示,小鼠卵母细胞激活率为96.99%,2-细胞发育率为93.17%,桑椹胚发育率为80.33%,囊胚发育率为73.22%。小鼠孤雌激活囊胚中分离的ES样细胞集落具有一系列ES细胞所特有的特征,如呈现出岛屿状形态,碱性磷酸酶染色为阳性,体外能够自发分化成上皮样或单个散在分布的细胞等。试验证明,小鼠孤雌胚中可以分离出ES细胞样集落。

小鼠卵母细胞去核时间对卵丘细胞核移植的影响

对超数排卵的小鼠分别在注射HCG后14～16,16～18,18～20和20～22 h采小鼠卵母细胞用于核移植,观察小鼠卵母细胞的去核时间在体细胞核移植中的作用.结果显示,在注射hCG后14～16,16～18,18～20和20～22 h,小鼠卵母细胞去核效率分别为80.09%(338/422),73.12%(283/387),55.02%(230/418)和48.74%(193/396);重构胚激活率分别为66.20%(190/287),75.43%(175/232),84.78%(156/184)和85.14%(126/148);重构胚的囊胚发育率分别为13.94%(40/287),7.33%(17/232),3.80%(7/184)和1.35%(2/148).试验证实小鼠卵母细胞在注射hCG后14～16 h进行去核较为适宜.

动物繁殖学教学改革新思想体系探析

鉴于目前一些大学生所面临的实践技能薄弱、适应社会工作能力较低等问题,在大学培养和教育过程中,以增强当代大学生解决实际问题的能力及全面且更好地提升大学生的专业技能为目的的教学实践改革就具有十分重要的意义。针对当前部分大学生专业实践能力不足的问题,探讨了动物繁殖学教育教学改革的实践经验,以期达到更好的教育教学效果。

慢病毒直接诱导形成猪iPS细胞无需限定因子

为了证实慢病毒对细胞具有遗传修饰和重编程作用,在本实验中使用慢病毒感染猪胎儿成纤维细胞.结果显示:慢病毒介导的EGFP在猪胎儿成纤维细胞中稳定和高效表达,使用添加LIF和bFGF的细胞培养液,部分猪的胎儿成纤维细胞逐渐改变原有的纤维状形态,形成圆形的细胞,细胞逐步增殖形成细胞集落,细胞集落边界清晰,在饲养层上细胞集落生长迅速,具有稳定的生长性能和正常核型,细胞碱性磷酸酶染色为阳性,表达干细胞特有的标记Oct4、Nanog和SSEA1,在体外能够形成拟胚体,在体内分化形成包含三个生殖层的畸胎瘤.作为核移植的供体细胞,克隆胚的卵裂率为53.33%、桑椹胚率为9.03%、囊胚率为2.07%、孵化囊胚的总细胞数为26.5,在桑椹胚率和囊胚率方面显著低于猪普通胎儿成纤维细胞核移植克隆胚的发育能力(P<0.05).结果证实慢病毒能够直接使猪的胎儿成纤维细胞转变成iPS细胞,因此慢病毒将成为一种理想的材料和工具用于细胞的遗传修饰和细胞重构等方面的研究.

改进的培养体系在小鼠体细胞核移植及重构胚ES细胞分离培养中的应用

取8周后的雌性昆明小鼠进行超排,取卵母细胞用作核受体,收集卵母细胞周围的卵丘细胞作核供体,进行体细胞核移植。核移植重构胚经SrCl2激活处理6h后,与改良的M16培养液和小鼠输卵管上皮细胞共培养;将发育到早期囊胚阶段的重构胚转移至小鼠胎儿成纤维细胞饲养层上,添加含心肌细胞培养液的ES细胞培养液;把孵出的ICM进行消化接种培养,对孵出的ES细胞集落进行鉴定培养。结果显示,以小鼠卵丘细胞为核供体,体细胞核移植重构胚激活率为65.23%,囊胚发育率为11.69%;9个核移植重构囊胚中分离出ES细胞集落,分离率为2.77%;分离出的核移植ES细胞集落具有岛屿状团状隆起结构、碱性磷酸酶染色呈阳性,体外分化可形成类胚体,并能分化成上皮样或梭形细胞。ES细胞集落经常规冻存和复苏后,显示出同冻存前相似的集落形态,并具有较强的增殖能力。实验证实小鼠输卵管上皮细胞、改良的M16培养液及含心肌细胞培养液的ES细胞培养液可以更为成功地运用于小鼠的体细胞核移植及ES细胞的分离培养研究。

小鼠皮肤成纤维细胞与早期胚胎共生体系的构建

【目的】构建小鼠早期胚胎与皮肤成纤维细胞共生的微环境体系。【方法】分离培养EGFP纯合阳性成年ICR小鼠皮肤成纤维细胞。取激素超排合笼后2.5d小鼠8-细胞胚胎，通过显微操作系统将4～6个EGFP阳性小鼠皮肤成纤维细胞注射到小鼠早期8-细胞胚胎中，转移发育到囊胚阶段的共生胚胎至小鼠胎儿成纤维细胞饲养层上，在小鼠胚胎干细胞分离培养条件下进行培养。【结果】EGFP阳性小鼠成纤维细胞注射到小鼠胚胎后，荧光显微镜下显示，EGFP阳性小鼠成纤维细胞分布到小鼠囊胚组成细胞中，参与小鼠囊胚组成。在发育到囊胚的共生胚胎中，EGFP阳性小鼠成纤维细胞分布到小鼠囊胚细胞中的比例为93．73％（269／287）。在小鼠胚胎干细胞的分离培养条件下，2．60％（7／269）共生胚胎中EGFP阳性小鼠成纤维细胞参与小鼠胚胎内细胞团的组成。【结论】小鼠皮肤成纤维细胞与小鼠早期胚胎能够形成共生的微环境体系。

拟胚体对成体细胞参与胚胎嵌合的影响

试验尝试构建成体细胞同小鼠早期胚胎的嵌合共生胚胎。取成年人皮肤组织的成纤维细胞,慢病毒转染皮肤成纤维细胞标记EGFP荧光蛋白,同小鼠早期8-细胞胚胎进行嵌合。结果显示慢病毒高效标记人皮肤成纤维细胞表达EGFP荧光蛋白,通过皮肤成纤维细胞与小鼠胚胎干细胞形成的拟胚体环境作用后,皮肤成纤维细胞成功与小鼠胚胎形成嵌合胚,嵌合囊胚形成率为38.08%,表达EGFP荧光蛋白的皮肤成纤维细胞能够嵌合到小鼠胚胎的不同部位。嵌合胚在胚胎干细胞分离培养环境下进行培养,嵌合到小鼠内细胞团的皮肤成纤维细胞参与小鼠内细胞团的组成,参与小鼠内细胞团组成的胚胎占嵌合胚比率为1.74%。小鼠胚胎干细胞拟胚体环境作用可以成功介导人皮肤成纤维细胞同小鼠早期胚胎形成嵌合共生体系。

增强型青色荧光蛋白慢病毒表达载体的构建

目的:通过多点突变构建增强型青色荧光蛋白(ECFP)慢病毒表达载体。方法与结果:根据增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和ECFP基因序列的差异设计3对引物,以pLentiLox3.7-EGFP为模板进行分段PCR扩增,再以分段PCR扩增产物为模板扩增出突变的ECFP基因片段,将其与载体连接,得到ECFP慢病毒表达载体pLentiLox3.7-ECFP,测序结果证实经过多点突变扩增的ECFP片段基因序列完全正确;磷酸钙介导pLentiLox3.7-ECFP在293T细胞中表达,48h后在荧光显微镜下观察到青色荧光蛋白。结论:通过多点突变的方法得到了ECFP慢病毒表达载体。

慢病毒载体介导成纤维细胞高效稳定表达绿色荧光蛋白

试验尝试建立稳定表达外源基因的人成纤维细胞系。取成年男性包皮皮肤的皮下组织,分离培养人皮肤成纤维细胞,分别采用脂质体和慢病毒载体介导转染人皮肤成纤维细胞表达绿色荧光蛋白。结果显示,来自成年人包皮皮下组织的成纤维细胞呈梭形,具有快速的增殖和稳定的生长性能。脂质体介导转染的人皮肤成纤维细胞绿色荧光蛋白表达不稳定,阳性细胞表达率低,转染后的人成纤维细胞变得更为细长,细胞生长速度降低。慢病毒载体介导人皮肤成纤维细胞高效稳定表达绿色荧光蛋白,转染后细胞生长性能和形态没有变化,经过多次传代和冻存复苏对人皮肤成纤维细胞绿色荧光蛋白的表达没有影响,通过流式细胞仪对慢病毒介导表达绿色荧光蛋白的人皮肤成纤维细胞检测显示,绿色荧光蛋白表达阳性率为99.85%,并且表达绿色荧光蛋白的人皮肤成纤维细胞细胞均一程度为76.05%。试验证实了慢病毒载体能够高效稳定介导人皮肤成纤维细胞表达绿色荧光蛋白。

用小鼠血液淋巴细胞构建核移植重构胚的研究

本实验用小鼠血液淋巴细胞为核供体进行了核移植研究。用淋巴细胞分离液(比重1.088)分离出小鼠血液中的淋巴细胞,直接用作核移植供体细胞,采用胞质内注射法成功构建的重构胚经常规培养2h后,SrCl_2激活处理6h,然后添加mM16培养液和小鼠输卵管上皮细胞饲养层共培养。把发育至早期囊胚阶段的重构胚转移至小鼠胎儿成纤维细胞饲养层上,添加ES细胞培养液继续培养。对孵化出的内细胞团进行消化,然后接种培养。结果显示,小鼠血液淋巴细胞可以支持体细胞核移植重构胚的发育,核移植重构胚2-细胞率41.03%(128/312),桑葚胚和囊胚发育率分别为9.29%(29/312),1.92%(6/312)。重构囊胚在小鼠胎儿成纤维细胞饲养层上分离出2个内细胞团,分离率为0.64%(2/312)。实验证实利用小鼠血液淋巴细胞进行体细胞核移植是可行的,可用于深入研究。

羔羊超数排卵与胚胎体外生产技术研究进展

自从幼畜体外胚胎移植(JIVET)技术问世以来,因其在优秀种畜快繁、育种世代间隔缩短、遗传资源保护等方面具有广阔的应用前景,引起了很多科研机构的关注。为提高JIVET的生产效率,研究人员对该技术的多个环节进行了探索,但总体效率还不是很高。论文就羔羊超数排卵与胚胎体外生产技术实施中的关键环节,即羔羊超排供体的年龄、超排季节生殖激素的使用、羔羊超排反应、卵母细胞发育效率、卵母细胞的基因表达、体外胚胎的冷冻耐受性和卵母细胞及受精卵培养体系的优化等影响因素进行总结与分析,提出羔羊超排存在的问题并展望其发展前景,为这一技术能在更多家畜繁殖领域的应用和商业化生产提供参考资料。

应用Solexa测序技术挖掘山羊卵巢组织microRNA

【目的】旨在构建、分析山羊卵巢组织miRNA表达谱,为进一步研究特定miRNA与山羊卵泡发育及性激素分泌等相关生殖活动的关系奠定理论基础。【方法】首先从山羊卵巢组织总RNA中分离小片段RNA,然后进行Solexa测序和生物信息学分析,最后利用q-PCR技术验证miRNA在山羊卵巢组织中的表达。【结果】共鉴定出508个山羊卵巢组织表达的miRNA和19个对应的miRNA*,这些miRNA在哺乳动物(绵羊、牛、猪、马、狗)进化过程中高度保守;q-PCR验证了8个miRNA在山羊卵巢组织中的表情况,定量结果与测序结果一致。【结论】成功构建了山羊卵巢组织miRNA表达文库,山羊卵巢组织miRNA表达丰富且其表达量各异。

季节对放牧条件下安格斯和海福特肉牛超数排卵的影响

采用放置CIDR和FSH-PG注射法,于2004年5至6月和8至9月间对进口的安格斯和海福特肉牛进行超数排卵研究,并对安格斯和海福特肉牛随机分组。通过对超排有效率、平均采胚数、平均可用胚数、胚胎可利用率和A、B级胚胎在可用胚胎中的比率进行统计,结果为草原放牧条件下,5至6月间安格斯肉牛平均采胚数为10.78枚,平均可用胚数为5.75枚,其中平均A级胚胎数为4.52枚,海福特肉牛的平均采胚数为12.18枚,平均可用胚数为7.86枚,其中平均A级胚胎数为6.5枚。在8至9月间安格斯肉牛平均采胚数为12.55枚,平均可用胚数为8.14枚,其中平均A级胚胎数为6.62枚,海福特肉牛平均采胚数为10.25枚,平均可用胚数为5.75枚,其中平均A级胚胎数为4.32枚。