血清可溶性髓样细胞触发受体1对活动性肺结核的早期预警和预后判断价值

目的检测活动性肺结核(ATB)患者血清可溶性髓样细胞触发受体1(s TREM-1)含量并分析其临床意义。方法收集东莞市慢性病防治院确诊的ATB患者78例和健康志愿者40例,全自动血球分析仪检测外周血中性粒细胞和单核细胞绝对值,ELISA检测血清s TREM-1含量,Pearson相关分析其相关性。结果 ATB患者外周血中性粒细胞绝对值,单核细胞绝对值和血清s TREM-1含量均显著增高,且痰涂片结核分枝杆菌(MTB)阳性患者显著高于痰涂片MTB阴性患者,常规抗结核药物治疗前显著高于治疗后。以528.14 pg/m L为血清s TREM-1含量检测截断点时,痰涂片MTB阳性的结核确诊率为100%。Pearson相关性分析显示ATB患者外周血中性粒细胞和单核细胞绝对值均与患者血清s TREM-1含量呈正相关。结论 s TREM-1对ATB的早期预警及预后有重要参考价值。

细胞培养及常见污染防治技术进展

细胞培养始发于1885年Roux尝试的组织离体培养，随后Harrison（1907年）和Carrel（1912年）开始将组织培养作为1种方法进行离体动物细胞培养。至今细胞培养已在现代医学和生物科学研究中发挥至关重要的作用。细胞培养是1个无菌操作过程，对细胞培养条件要求比较苛刻。目前，国内外大多数实验室都建有标准化的细胞培养室，来避免微生物及其他有害因素的影响，满足细胞培养的要求，但细胞培养过程中污染问题还是会给研究人员带了极大麻烦。本文结合细胞培养技术，将重点阐述细胞培养过程中的常见污染类型及防治和去除手段，为广大细胞培养工作者提供参考。

卡介苗对人鼻咽癌CNE-2Z细胞周期及凋亡的影响

目的探讨卡介苗(BCG)对鼻咽癌CNE-2Z细胞周期及凋亡的影响。方法碘化丙啶染色法检测细胞周期,Annex-in V-FITC检测细胞凋亡,Western blotting检测周期相关蛋白表达。结果 BCG作用不同时间后,G1期细胞百分率由未处理细胞(对照组)的(47.1±0.9)%升高至72h作用组的(65.3±1.3)%,S期细胞百分率由对照组的(39.2±0.7)%降低至72h作用组的(17.6±0.5)%。不同处理时间组和对照组均未检出明显细胞凋亡。CyclinD1蛋白表达随着BCG作用时间的延长逐渐减弱。结论 BCG体外诱导鼻咽癌CNE-2Z细胞CyclinD1低表达,促使细胞周期发生G1/S期阻滞。

PTEN信号途径与肿瘤相关研究进展

PTEN是一种抑癌基因表达蛋白,具有双特异性磷酸酶活性,参与多种信号途径的调节。PTEN活性的缺失与人类多种疾病相关,特别是在肿瘤的发生上极为常见。近年来,研究人员对PTEN的研究主要集中在自身的转录调控和不依赖于PIP3激酶的信号途径上。本文就PTEN在信号途径及其与肿瘤相关中的研究进行综述。

细胞培养室的建设与管理探索

细胞培养室是综合性实验室的一个重要组成部分,也是生命科学类院校及科研单位科研、教学的核心部分。目前对细胞培养室还没有统一的建设和管理标准,本文结合作者在高校细胞培养室的建设和管理经验,就实验室的设施建设、环境建设、安全管理和质量评估等方面作一探索。

细胞培养过程中恶臭假单胞菌污染的去除及污染去除后细胞增殖和细胞周期的检测

目的鉴定细胞培养过程中恶臭假单胞菌引起的污染,寻找有效的污染去除方法,探讨污染去除对细胞增殖和细胞周期的影响。方法采用细菌鉴定仪对一株未知菌污染的细胞进行细菌鉴定,并采用药敏试验筛选有效的抗生素污染去除方法,CCK-8法检测细胞增殖和PI染色检测细胞周期变化。结果未知菌引起的细胞污染是由恶臭假单胞菌引起的;采用0.3 g/L环丙沙星和0.125 g/L左氧氟沙星联合处理能有效去除恶臭假单胞菌感染引起的细胞污染;污染去除后培养细胞,细胞增殖和细胞周期状态恢复正常。结论采用环丙沙星和左氧氟沙星联用能有效清除恶臭假单胞菌引起的细胞污染,且污染去除后能有效恢复细胞增殖和细胞周期的正常状态。

小鼠BTLA慢病毒表达载体的构建及鉴定

目的构建小鼠BTLA慢病毒表达载体,并对表达产物进行鉴定。方法以pET-28a-mBTLA质粒为模板,通过PCR技术构建pMD18-T-mBTLA质粒,将小鼠BTLA基因全长编码序列克隆到慢病毒转移载体,通过脂质体转染293T细胞包装成小鼠BTLA慢病毒颗粒。PCR技术和基因测序对重组质粒进行鉴定。荧光显微镜观察重组慢病毒感染293T细胞形态学变化。RT-PCR和Western blot法鉴定BTLA在重组慢病毒感染293T细胞中的表达。50%组织培养感染剂量法(TCID50法)检测重组慢病毒滴度。结果成功构建的pMD18-T-mBTLA质粒和pSL6-mBTLA质粒,经双酶切电泳后均出现大小约为1 kb的条带与mB-TLA编码序列的大小相符。基因测序并比对分析进一步证实mBTLA编码序列成功整合到质粒载体。病毒上清PCR扩增和293T细胞形态学观察证实Lenti-mBTLA慢病毒包装成功。TCID50法测定Lenti-mBTLA慢病毒滴度为1.3×108pfu/mL。RT-PCR和Western blot法证实Lenti-mBTLA慢病毒能有效表达mBTLA mRNA和蛋白质。结论成功构建了表达小鼠BTLA的慢病毒。

卡介苗体外诱导鼻咽癌CNE-2Z细胞ICAM-1表达

目的探讨卡介苗(bacillus Calmette-Guerin,BCG)对鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)CNE-2Z细胞及细胞间黏附分子1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)表达的影响及可能的调控机制。方法显微镜观察细胞形态学变化和记录细胞被胰蛋白酶完全消化所用时间;流式细胞术检测细胞表面ICAM-1表达;免疫细胞化学检测细胞NF-κB表达,western blot检测ICAM-1、NF-κB表达。结果 BCG作用24、48和72 h细胞对培养介质的粘附力增加,且被胰蛋白酶完全消化所用的时间明显长于对照组[(5.8±0.4)、(7.8±0.4)、(8.8±0.4)min vs(5.0±0.5)min,F=22.01,P<0.01];流式细胞术检测24、48和72 h组ICAM-1表达的平均荧光强度(MnX)明显高于对照组[(25.2±0.4)、(28.7±1.1)、(37.2±1.6)vs(23.4±0.9),F=112.34,P<0.01];免疫细胞化学结果表明,BCG作用72 h组NF-κB表达水平高于对照组。western blot结果表明,各组NF-κB和ICAM-1表达均明显高于对照组。结论 BCG体外诱导鼻咽癌CNE-2Z细胞ICAM-1表达,且该过程可能与NF-κB信号途径有关。

PTEN、P27和BAG-1在子宫内膜癌中的表达及临床意义

目的研究PTEN、P27和BAG-1在子宫内膜癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法免疫组织化学SP法检测东莞市太平人民医院102例子宫内膜癌组织、90例子宫内膜增生组织和44例正常子宫内膜组织PTEN、P27和BAG-1蛋白的表达并分析其临床意义。结果 PTEN和P27在子宫内膜癌及增生组织呈低表达,BAG-1呈高表达。PTEN和BAG-1表达与肿瘤的组织学分级及肌层浸润相关,BAG-1表达还与患者临床分期相关,而P27表达与患者临床及病理特征均无明显相关性。三者关联性分析显示,PTEN与P27及BAG-1之间存在关联性,而P27与BAG-1之间无关联。结论子宫内膜癌及增生组织中PTEN和P27呈低表达,BAG-1呈高表达,三者在子宫内膜癌的发生发展中起一定的作用。

PTEN缺失型子宫内膜癌中ER、PR的表达及意义

目的探讨ER、PR在PTEN缺失型子宫内膜癌中的表达及PTEN、ER和PR表达特征与子宫内膜癌组织临床病理特征的关系。方法采用免疫组化En Vision法检测100例子宫内膜癌组织中PTEN、ER和PR表达。结果 PTEN在子宫内膜癌患者的缺失率为52.0%(52/100);PTEN缺失型子宫内膜癌组织中ER和PR阳性率分别为15.4%(8/52)和19.2%(10/52),PTEN高表达子宫内膜癌组织中ER和PR阳性率分别为72.7%(8/11)和63.6%(7/11);子宫内膜癌患者中PTEN-ER-PR-的比率为42.0%(42/100),均明显高于其它类型(P<0.05)。不同PTEN、ER和PR表达特征与子宫内膜癌患者组织学分级和病理分期有关(P<0.05),与肌层浸润无关。结论 PTEN、ER、PR三者联合检测可能对子宫内膜癌患者预后及治疗具有重要参考价值。

美沙拉嗪对DSS诱导小鼠溃疡性结肠炎模型Th1、Th17及Treg细胞亚群的影响

目的:观察葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠溃疡性结肠炎(UC)模型中辅助性T细胞(Th1、Th17亚群)及调节性T细胞(Treg)细胞亚群的变化,探讨美沙拉嗪(MSLZ)治疗UC的免疫学机制。方法:采用流式细胞分析术检测DSS诱导的小鼠UC模型结肠组织及外周血单个核细胞中白细胞介素17(IL-17)、γ-干扰素(IFN-γ)及核转录因子Foxp3的表达,并检测MSLZ预治疗对小鼠UC模型Th1、Th17和Treg亚群的影响。结果:在DSS诱导的小鼠UC模型中,其外周血单个核细胞(PBMC)中CD3+T细胞高表达IL-17、IFN-γ及Foxp3,肠黏膜单个核细胞(LPMC)中CD3+T细胞高表达IFN-γ和Foxp3,但IL-17的表达与对照组无差异。进一步发现UC模型小鼠LPMC中Th17、Th1和Treg均显著高于对照组,但PBMC中只有Treg高于对照组。MSLZ预治疗能显著下调UC模型小鼠PBMC和LPMC中Th17、Th1和Treg细胞亚群。结论:DSS诱导的小鼠UC模型中CD4+T细胞亚群Th1、Th17及Treg细胞显著升高,提示CD4+T细胞亚群在UC发病中起重要作用,美沙拉嗪可能通过调节Th1、Th17及Treg细胞亚群发挥抗炎及治疗UC作用。

活动性肺结核患者血浆IL-37的检测及其临床意义

目的检测活动性肺结核(ATB)患者血浆中IL-37的含量,探讨其临床意义。方法采用ELISA夹心法检测30例ATB患者血浆中白细胞介素37(IL-37)的含量,并对15例患者进行了治疗后跟踪检测,21例健康志愿者作为对照组。结果 ATB患者血浆中的IL-37含量明显高于健康对照组,15例跟踪患者治疗后血浆中IL-37含量较治疗前明显下降;结核抗体阳性患者血浆IL-37含量高于结核抗体阴性患者,痰涂片阳性患者血浆IL-37含量显著高于痰涂片阴性患者;ATB患者血浆IL-37含量与患者外周血白细胞总数呈负相关。结论 ATB患者血浆中的IL-37含量明显升高,血浆IL-37的检测有可能成为ATB疗效评估的指标。

联合检测血清HE4和CA153对乳腺癌早期诊断的价值

目的探讨联合检测血清人附睾分泌蛋白4(HE4)与糖类抗原153(CA153)在乳腺癌早期诊断中的应用价值。方法收集乳腺癌患者40例,乳腺良性疾病患者50例及体检健康者30例,采用免疫组化法检测组织中HE4的表达,采用化学发光法检测血清CA153和HE4的表达水平,并分析比较血清CA153和HE4单项或联合检测对女性乳腺癌的诊断价值。结果乳腺癌组织HE4高表达率明显高于乳腺良性肿瘤组织(P<0.05),乳腺癌患者血清HE4和CA153水平均明显高于乳腺良性疾病患者和体检健康者(P<0.05),同时乳腺癌患者血清HE4与CA153呈正相关(P<0.05)。血清HE4和CA153单一指标检测乳腺癌的检出率分别为85.0%、65.7%;而两者联合检测的检出率高达92.5%,明显高于单项检测。结论血清HE4对乳腺癌的早期诊断具有参考价值,同时联合血清CA153检测能提高乳腺癌的检出率,可成为乳腺癌筛查和早期诊断的可靠模式。

野生型PTEN基因在乳腺癌细胞中对表阿霉素的增敏作用

目的探讨野生型PTEN基因在人乳腺癌细胞系MCF-7和ZR-75-1中对表阿霉素的增敏作用。方法腺病毒介导野生型PTEN基因导入人乳腺癌细胞系MCF-7和ZR-75-1,RT-PCR检测PTEN mRNA的表达,Western blot检测转染后PTEN蛋白的表达;Ad-PTEN感染联合不同浓度的表阿霉素处理细胞,采用CCK-8法测定细胞增殖抑制率和联合效应。结果腺病毒介导的PTEN基因导入法可明显地增加细胞中PTEN基因的表达,野生型PTEN基因转染联合表阿霉素使乳腺癌细胞MCF-7对表阿霉素的敏感度增加了两倍,而使乳腺癌细胞ZR-75-1对表阿霉素的敏感度增加了十倍。结论腺病毒重组的野生型PTEN基因联合表阿霉素对人乳腺癌细胞增殖具有显著的协同抑制效应。

类风湿关节炎患者外周血中可溶型HVEM及IL-17和TNF-α的检测

目的检测类风湿关节炎(RA)患者血清中可溶性单纯疱疹病毒侵入介体(sHVEM)、IL-17和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平并探讨其临床意义。方法用夹心ELISA检测RA患者血清中sHVEM、IL-17和TNF-α水平,并比较患者组与对照组血清sHVEM、IL-17、TNF-α的差异,分析血清sHVEM与IL-17、TNF-α的相关性。分析sHVEM与红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)、抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体和抗角蛋白抗体(AKA)之间的相关性。组间均数的比较采用t检验,数据间的相关性分析采用Spearman等级相关及多元回归分析。结果 RA患者组血清sHVEM、IL-17、TNF-α水平分别为(140.2±47.4)μg/L、(61.4±19.4)pg/mL、(43.6±17.0)pg/mL,与正常人水平(94.4±23.6)μg/L、(30.7±15.1)pg/mL、(14.3±9.0)pg/mL比较均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。RA患者组血清sHVEM水平与IL-17、TNF-α、CRP、RF、抗CCP抗体呈正相关,与ESR、AKA水平无相关性。结论 RA患者血清中sHVEM含量增高,RA患者血清IL-17、TNF-α水平增高可能与sHVEM异常增高有关。

血清CA153、CA125、CEA和CA19-9联合检测对乳腺癌早期诊断的价值

目的探讨血清CA153、CA125、CEA和CA19-9联合检测对乳腺癌早期诊断的价值。方法采用电化学发光法检测健康体检者和乳腺癌患者血清CA153、CA125、CEA和CA19-9的水平。结果乳腺癌患者血清CA153、CA125、CEA和CA19-9的水平明显高于健康体检者,差异有统计学意义(p<0.05)。CA153、CA125、CEA和CA19-9单独检测乳腺癌的灵敏度分别为79.2%、63.7%、72.2%和65.3%,四者联合检测乳腺癌的灵敏度为93.8%,特异度为90.4%。结论血清CA153、CA125、CEA和CA19-9检测在乳腺癌诊断中具有重要临床意义,联合检测血清CA153、CA125、CEA和CA19-9能提高乳腺癌的诊断率。

系统性红斑狼疮患者血清单纯疱疹病毒侵入介体和白细胞介素-17的水平及意义

目的检测系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中可溶性单纯疱疹病毒侵入介体(HVEM)和白细胞介素17(IL-17)的水平并探讨其临床意义。方法应用ELISA法检测48例SLE患者和16例健康体检者血清中可溶性HVEM和IL-17水平,并分析其相关性。结果 SLE患者血清可溶性HVEM水平为(168.5±106.7)μg/L,健康者血清可溶性HVEM为(42.9±11.8)μg/L,两者比较差异有统计学意义(P<0.05);患者血清IL-17水平为(295.5±151.7)pg/mL,健康者血清IL-17水平为(229.3±97.1)pg/mL,两者比较差异有统计学意义(P<0.05),且血清可溶性HVEM水平与L-17水平呈正相关(r=0.433,P<0.05)。结论 SLE患者血清可溶性HVEM可能是SLE的一种新型诊断标志物,检测血清HVEM对SLE的辅助诊断及疗效评估有一定的参考价值。

IL-17在乳腺癌中的表达及意义

目的探讨白细胞介素17(IL-17)在乳腺癌患者血清和T细胞中的表达及与乳腺癌功能指标的相关性。方法采用流式细胞仪分析乳腺癌患者外周血CD3+CD4+IL-17+T细胞百分数;ELISA法测定血清IL-17水平;化学发光免疫分析法检测CA153和CA125的水平,并分析IL-17水平与各指标的相关性。结果乳腺癌患者外周血中CD3+CD4+IL-17+T细胞百分数与健康对照组差异有统计学意义(P<0.05);血清IL-17水平与健康对照组差异有统计学意义(P<0.05);血清IL-17水平与CD3+CD4+IL-17+T细胞百分数及CA153水平均呈正相关;血清IL-17水平与CA125水平无显著相关性。结论 IL-17水平与乳腺癌有关。

白细胞介素-35在鼻咽癌患者组织和外周血中的表达及意义

目的探讨鼻咽癌患者组织和外周血白细胞介素-35（IL-35）的表达及意义。方法收集鼻咽癌患者50例,其中21例为角化型鳞状细胞癌,29例为非角化型鳞状细胞癌;发生颈部淋巴结转移者30例,未发生颈部淋巴结转移者20例;T1期10例、T2期16例、T3期19例和T4期5例。ELISA法检测组织和外周血IL-35含量。结果鼻咽癌组织中IL-35含量显著高于癌旁黏膜组织（t=2.415,P=0.018 8）和鼻咽黏膜慢性炎组织（t=2.368,P=0.021 1）。T3~T4期组织IL-35含量显著高于T1~T2期（t=2.139,P=0.037 7）;非角化型鳞癌组织IL-35含量显著高于角化型鳞癌（t=2.550,P=0.014 1）;有颈部淋巴结转移癌组织IL-35含量显著高于无颈部淋巴结转移癌（t=3.147,P=0.002 9）。鼻咽癌患者外周血中IL-35含量显著高于健康志愿者（t=2.776,P=0.007 3）和鼻咽黏膜慢性炎患者（t=2.122,P=0.038 4）。T3~T4期患者外周血IL-35含量显著高于T1~T2期（t=2.427,P=0.019 7）;非角化型鳞癌患者外周血IL-35含量显著高于角化型鳞癌患者（t=2.109,P=0.041 1）;有颈部淋巴结转移患者外周血IL-35含量显著高于无颈部淋巴结转移癌患者（t=3.469,P=0.001 2）。鼻咽癌患者组织与外周血之间IL-35含量呈正相关（r=0.405,P=0.003 5）。结论 IL-35可能在鼻咽癌的发生、发展中发挥重要的作用。

肺结核合并支气管扩张患者外周血中IL-35的检测及临床意义

目的检测单纯活动性肺结核(ATB)患者、ATB合并支气管扩张患者及健康志愿者外周血血浆白细胞介素-35(IL-35)水平,并分析其临床意义。方法收集东莞市第六人民医院呼吸科确诊的ATB患者外周血,分为ATB合并支气管扩张组和单纯ATB组,以健康志愿者作为对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆IL-35水平,全自动血球分析仪检测外周血中性粒细胞、淋巴细胞百分比及绝对值。结果 ATB合并支气管扩张患者和单纯ATB患者血浆IL-35水平显著高于健康志愿者,且ATB合并支气管扩张患者血浆IL-35水平亦显著高于单纯ATB患者。ATB合并支气管扩张患者外周血中性粒细胞绝对值及百分比较健康志愿者显著增高,但淋巴细胞百分比显著低于健康志愿者。相关性分析显示ATB患者外周血中性粒细胞绝对值与患者血浆IL-35水平呈显著正相关。结论 IL-35在肺结核合并支气管扩张的发病中可能起一定作用,检测IL-35对肺结核合并支气管扩张的辅助诊断有重要参考价值。