有机介质中酶催化合成己酸乙酯的研究

本实验研究了有机介质中CRL脂肪酶催化己酸与无水乙醇合成己酸乙酯的酯化反应条件,并利用红外光谱、GC-MS、气相色谱等现代方法对合成的产物进行了表征。结果显示,合成的产物为己酸乙酯,其纯度为96.91%,分子量144。酯化反应在以正庚烷为反应介质,反应温度为311K,己酸与无水乙醇的摩尔比为1:1.3,己酸浓度为0.2mol/L的条件下,反应24h后,转化率达到94.6%。

紫堇叶绿素稳定性的研究

用丙酮、石油醚提取紫堇茎、叶中的叶绿素,研究了温度、pH、光照、金属离子等因素对紫堇叶绿素稳定性的影响。结果表明:酸、碱、高温(80℃以上)、光照等因素明显影响紫堇叶绿素的稳定性;柠檬酸、H2O2可引起紫堇叶绿素脱色降解;Vc、Na2SO3(浓度<0.5%)对紫堇叶绿素具有一定的稳定作用;Ca2+、Mg2+、Cu2+离子可引起紫堇叶绿素褪色;Fe3+明显影响紫堇叶绿素的稳定性,加入Fe3+色素溶液逐渐变为黄色。

环氧基化磁性微球的制备及表征

采用反相聚合包埋技术制备以Fe3O4为磁核,琼脂糖为壳层的琼脂糖磁性微球,用环氧氯丙烷对其进行表面化学修饰后制得环氧基化磁性微球.通过傅里叶变换红外光谱、热重分析和振动样品磁力测定等表征其结构和性质,采用酶联免疫吸附试验检测其对乙肝表面抗原的固定能力.结果表明,环氧基化磁性微球平均粒径为30.3μm,环氧基含量为140.19μmol·g-1,磁含量为50.53%,饱和磁化强度为11.25emu·g-1,对乙肝表面抗原的固定能力明显高于琼脂糖磁性微球,具有良好的单分散性、超顺磁性和生物兼容性,可作为筛选乙肝表面抗原特异性核酸适配体的载体.

红三叶预加工废水中叶绿素的提取及其稳定性研究

以红三叶鲜青草预加工废水为原料,研究提取叶绿素的方法。首先,采用醇沉法沉降红三叶预加工废水中的有机物;其次,采用醇提法浸提沉淀物中的叶绿素,并通过单因素及正交实验对提取条件进行了优化。结果显示,从废水中沉降有机物的最佳乙醇浓度为30%,固形物沉降率为39.45%;从沉淀物中浸提叶绿素的最佳条件为乙醇浓度90%、浸提温度60℃、浸提时间6h和料液比1∶25(g/mL),叶绿素提取率为1.72mg/g。稳定性研究表明,该方法制备的红三叶叶绿素具有良好的耐热性和抗氧化性,在弱酸、弱碱条件下较稳定,Fe2+有助于其稳定性的提高,在光照条件下易发生降解。

非水相中脂肪酶催化合成乙酸薄荷酯

研究了脂肪酶(candida rugosa lipase,CRL)在有机溶剂中催化薄荷醇与乙酸进行酯化反应的条件。探讨了脂肪酶加入量、溶剂、薄荷醇与乙酸摩尔比、底物浓度、温度等因素对脂肪酶催化合成乙酸薄荷酯的影响,并利用红外光谱、GC-MS、气相色谱等方法对合成的产物进行了表征。结果显示,合成的产物为乙酸薄荷酯。当溶剂为正己烷、脂肪酶量为1.2%(脂肪酶在薄荷醇和乙酸体系中的质量分数)、薄荷醇与乙酸的摩尔比为1∶1、薄荷醇与乙酸的底物浓度均为0.1mol/L、温度为40℃、反应48h时,乙酸薄荷酯的酯合成转化率达92.4%。产物乙酸薄荷酯的色泽好、气味纯正。

生物化学实验教学原则和教学策略初探

探讨了生物化学实验教学原则 ,并在此基础上提出了一系列与之相适应的生物化学课堂教学策略 .提出“教思想 ,教方法 ;学思想 ,学方法”是生物化学实验教学的基本指导思想 .同时认为 。

葡聚糖凝胶层析法分离纯化纤维素酶的研究

用绿色木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｖｉｒｉｄｅ）高产变异菌株４１３１产生的纤维素酶粗酶分别过ｓｅｐｈａｄｅｘＧ２５、ｓｅｐｈａｄｅｘＧ５０、ｓｅｐｈａｄｅｘＧ７５、ｓｅｐｈａｄｅｘＧ１００和ｓｅｐｈａｄｅｘＧ１５０柱层析．结果表明：ｓｅｐｈａｄｅｘＧ７５对纤维素酶的分离效果最佳，并获得了一个ＣＭＣ酶组份，其比活力提高到原来的４９倍，回收率为４１６％．

改性离子交换树脂固定化漆酶及其动力学性质研究

环氧基改性的丙烯酸系树脂含环氧基,环氧基可在温和条件下与蛋白质上的亲核基团氨基反应而实现其固定化.研究了环氧基改性的离子交换树脂固定化漆酶的最优条件和固定化漆酶的酶学性质,结果表明,固定化漆酶时,在硫酸铵浓度为1.5 mol· L-1、加酶量0.2U· g-1、pH6.5、温度35℃条件下固定3h,测得固定化酶活性最好,比活力为0.026 U·g-1,活力回收率为3.67％;该固定化酶催化反应的的最适温度为45℃,最适pH 4.5,米氏常数（Km）为1.233×10-3mmol·L-1.锰离子、铁离子和钙离子在4×10-3～4×10-4 mol· L-1浓度之间时对固定化漆酶活性有抑制作用,在4×10-5～4×10-6 mol· L-1浓度之间时有激活作用.

AOT反胶束体系中脂肪酶催化合成乙酸薄荷酯

在AOT正/己烷构建的反胶束体系中,以CRL脂肪酶为催化剂,乙酸和薄荷醇为原料,合成了乙酸薄荷酯,考察了反应温度、底物浓度、薄荷醇与乙酸摩尔比和反应时间等因素对其转化率的影响,并进行了折光率和红外光谱分析。结果表明,当薄荷醇与乙酸摩尔比为1∶2,乙酸浓度为0.2 mol/L,反应温度为40℃,缓冲溶液的pH值为7.0,含水量W0=10和反应时间为48h时,乙酸薄荷酯的酯合成转化率达到85.3%。

癌胚抗原特异性单克隆抗体(Anti-CEA)核酸适配体的筛选

目的 :筛选癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)特异性单克隆抗体(Anti-CEA)的核酸适配体(aptamers),为肺癌血清肿瘤标志物核酸适配体的筛选奠定实验基础。方法:利用羧基化琼脂磁珠作为筛选介质,以Anti-CEA为筛选的目标靶分子,通过消减SELEX技术及实时定量PCR技术,从随机ss DNA文库中筛选出与Anti-CEA特异性结合的aptamers,并通过凝胶阻滞实验(EMSA)鉴定筛选到的Anti-CEA-aptamer复合物,然后将得到的第10轮富集文库扩增为双链DNA,通过切胶纯化后,连接PMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,同时利用交错PCR技术鉴定阳性克隆,经测序,获得aptamers的序列。结果:经过10轮筛选得到了4条与Anti-CEA结合的aptamers,测序结果显示均为不同序列。结论:验证筛选出的与Anti-CEA结合的aptamer,特异性检测结果表明2号aptamer与靶分子结合的特异性很高,且与非特异蛋白无明显吸附,筛选出的aptamers用于识别Anti-CEA,将为肺癌的早期诊断和早期治疗提供新的突破口。

印迹脂肪酶催化己酸乙酯合成

对印迹脂肪酶CRL催化合成己酸乙酯的反应,以及印迹酶的活性、稳定性等进行了初步研究,并对合成的产物结构进行了表征。结果显示,合成的产物为己酸乙酯,印迹酶活性的提高依赖于反应介质、含水量,以及印迹模板等因素。酯化反应在以正庚烷为反应介质,反应温度为40℃,加水量为80μL,印迹模板为正辛酸的条件下,印迹酶的活性较游离酶提高了6倍,稳定性也有相应的提高。

大豆过氧化物酶基因随机突变文库的构建

为提高大豆过氧化物酶(soybean peroxidase,SBP)的活性及研究该酶一级结构与酶活性间的关系,采用连续易错PCR方法对大豆过氧化物酶基因(sbp)进行了2轮随机突变,将第二轮易错PCR产物与质粒载体pPICZα-A分别进行双酶切,经T4DNA连接酶催化连接后,CaCl2法转化重组质粒pPICZα-A-sbp至大肠杆菌DH5α中,成功构建出sbp随机突变文库,库容量约为1.77×106 cfu。

以红三叶鲜青草预加工废水发酵培养苏云金芽孢杆菌

红三叶鲜青草预加工废水是在提取红三叶草中的异黄酮时产生的废水,含有大量的糖、蛋白质等有机质,可作为净化废水的材料而被充分利用。实验以红三叶鲜青草预加工废水为原料,采用Plackett-Burman设计(PBD)、最陡爬坡设计(SAD)和Box-Behnken设计(BBD)等实验方法,对利用红三叶草预加工废水发酵培养苏云金芽孢的条件进行了研究。结果显示:红三叶草废水经预处理、热处理和去除沉淀物后,添加3.08 g/L(NH4)2SO4、1.0 g/L KH2PO4、0.25 g/L MgSO4、0.15 g/L CaCl2和0.50 g/L MnSO4,可制得苏云金芽孢杆菌液体发酵培养基。利用该发酵培养基,在起始pH 7.3、温度30℃和接种量7.5%(v/v)的条件下,发酵培养苏云金芽孢杆菌66.7 h,苏云金芽孢杆菌菌体生物量可达8.75 g/L,是基础发酵培养基产生生物量的1.2倍。

木霉4131菌株纤维素酶的分离纯化和部分性质研究

绿色木霉（ＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａＶｉｒｉｄｅ）突变菌株４１３１［１］产生的纤维素酶经过ｓｅｐｈａｄｅｘＧ－７５和ＤＥＡＥ－ｓｅｐｈａｄｅｘＡ－２５两种层析分离，分离得到具有内切β－葡聚糖酶（ＣＭＣａｓｅ）活性的纯组分，提纯后酶的比活力提高到原来的２６．２倍，回收率为３２．８％，分子量为５６９００，等电点为４．０，最适反应温度为５５℃，最适ｐＨ为４．５，金属离子Ｋ＋，Ｎａ＋，Ｃａ２＋，Ｍｇ２＋对其具有一定的激活作用，Ｈｇ２＋，Ａｇ＋，Ｆｅ３＋，Ｚｎ２＋等具有不同程度的抑制作用．

乳酒隐球酵母变种CK-1产β-半乳糖苷酶发酵条件优化

β-半乳糖苷酶是一类非常重要的糖苷水解酶,已被广泛应用于食品工业降低乳制品中的乳糖含量.本文通过单因素实验和L9(34)正交实验,对乳酒隐球酵母变种CK-1产生β-半乳糖苷酶的培养基组成和发酵条件进行了优化.结果表明,在以乳糖2.0%、硫酸亚铁铵2.0%、磷酸二氢钾0.4%、起始pH6.0的培养基中,按接种量8%接种后,于30℃,120 r.min-1培养CK-1菌株2 d,β-半乳糖苷酶活力可达(17.02±0.38)U.mL-1,是优化前(基础发酵培养基酶活力(5.39±0.20)U.mL-1)的3.16倍.通过优化培养条件提高了CK-1菌株的产酶量,为商业化β-半乳糖苷酶的大量生产降低了成本.

大豆过氧化物酶基因在毕赤酵母中的表达

大豆过氧化物酶(Soybean peroxidase,SBP)是一类主要催化过氧化氢的氧化还原酶,具有耐热性高和pH适用范围宽等优点。利用已构建好的重组表达载体pPICZα-A-sbp,通过氯化锂化学转化法将重组质粒转化进入毕赤酵母GS115中,并在甲醇诱导下进行表达。利用SDS-PAGE法和愈创木酚法测定了重组菌株的SBP表达活性。结果显示,重组毕赤酵母表达了分子量约为40 KD的SBP蛋白,同时发酵24 h后SBP表达活性开始迅速增高,发酵72 h SBP表达活性达到最大,并筛选出表达活性高的菌株。

红三叶叶绿素锌钠的制备及其稳定性研究

用乙醇浸提红三叶鲜青草预加工废水中的叶绿素,经皂化、浓缩、萃取、酸化、锌代和成盐等步骤制备叶绿素锌钠.利用Plackett-Burman实验对影响叶绿素锌钠制备的8个因素进行了评价,结果显示皂化pH值、锌代时间和硫酸锌用量为影响叶绿素锌钠制备的主要因素.以最陡爬坡实验确定Box-Benknken实验的中心试验点,在此基础上设计Box-Benknken实验,并对其结果进行响应面分析,得到叶绿素锌钠制备的最佳条件为皂化pH值11.50、锌代时间85.44min和硫酸锌用量25.40mL,对应的产率为31.76mg.L-1.叶绿素锌钠稳定性研究显示,本实验条件下制备的叶绿素锌钠的热稳定性、耐光性和耐氧化与还原能力良好,在pH值为6.0～10.0的环境中稳定性良好,在4%Fe2+或Al 3+的溶液中较为稳定,与蔗糖、葡萄糖或食盐等接触时稳定性好.

转录因子Sp1在DNA损伤修复中的作用及其与肿瘤治疗的研究进展

细胞受到外界刺激导致DNA损伤时,DNA修复蛋白被激活并发挥功能,受损DNA得到修复。近年来研究表明,转录因子特异性蛋白1(specificity protein 1,Sp1)在DNA损伤修复中起重要作用,是参与调控DNA损伤应答与修复的重要蛋白之一。Sp1在多种肿瘤中高表达,通过调节细胞增殖、迁移和侵袭促进肿瘤的发生和发展,不利于肿瘤治疗。本文首先介绍Sp1特有的结构及其生理功能,由此引入Sp1通过转录依赖方式调控DNA损伤应答,其次介绍Sp1通过非转录依赖方式参与DSB修复,以及Sp1在肿瘤治疗中的研究进展,最后展望研究Sp1的意义及可能具有的应用前景。

羟基磷灰石粉体及其多孔体的制备和结构表征

本文以Ca(NO3)2.4H2O和(NH4)2HPO4为原料,采用化学沉淀法制备羟基磷灰石粉体,并用浸渍法制备了多孔羟基磷灰石.采用IR、XRD、SEM、解剖镜观察等方法对羟基磷灰石粉体和多孔羟基磷灰石的组成、晶粒形貌等进行了分析表征.结果显示,制备的多孔羟基磷灰石硬度高,比表面积增大,贯穿性良好,含有大量的OH-和PO43-基团,可作为固定化酶的载体.

大豆过氧化物酶基因的克隆及其表达载体的构建

大豆过氧化物酶(soy bean peroxidase,sbp)基因的克隆及其表达载体的构建将有利于人们更深入的从分子生物学角度研究sbp基因的结构与功能。首先从大豆根中获取总RNA,通过RT-PCR获得sbp基因。再将sbp基因与表达载体pPICZα-A双酶切后连接,构建重组表达载体pPICZα-A-sbp。将pPICZα-A-sbp转化大肠杆菌筛选阳性克隆体并测序。结果表明:获得的sbp基因序列与已报道的sbp[U51191(GmEpa1)]基因序列有92%的同源性。重组表达载体pPICZα-A-sbp的成功构建为其在毕赤酵母中表达奠定了基础。