AMPK、NF-κB、COX-2及PGE2在非小细胞肺癌中的表达

目的探讨腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、核因子κB(NF-κB)、环氧合酶2(COX-2)及前列腺素E2(PGE2)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其关系。方法采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法检测NSCLC和正常肺组织标本中可以直接反映AMPK激活状态的乙酰辅酶A羧化酶磷酸化后的产物(P-ACC)、NF-κB、COX-2的表达,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot检测NSCLC标本及血液、正常肺组织标本及血液中AMPK、COX-2及PGE2受体的表达。结果免疫组织化学法检测发现,P-ACC在NSCLC中低表达,NF-κB和COX-2在NSCLC中高表达,其阳性率分别为33.9%、75.8%和66.1%,且与正常肺组织中的表达差异有统计学意义;qRT-PCR和Western blot检测发现,在NSCLC标本及血液中,AMPK mRNA表达降低,COX-2和PGE2受体mRNA表达升高。结论在NSCLC中,AMPK低表达,NF-κB、COX-2及PGE2高表达,其相互作用可能在NSCLC的增殖、凋亡耐受、侵袭及转移过程中占据重要位置,其表达情况为临床治疗NSCLC提供新的思路。

口咽鳞癌中HPV感染与血管生成的关系

目的:研究口咽鳞癌(oropharyngeal squamous cell carcinomas,OSCC)中人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染与血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、CD31标记的微血管密度(microvessel density,MVD)表达的关系,探讨它们在口咽鳞癌发生中的相互关系。方法:采用多重实时荧光定量聚合酶链反应(multiplex real-time polymerase chain reaction,MT-PCR)检测60例口咽鳞癌HPV DNA及型别,通过HPV DNA分析进行HPV感染状况的测定;同时采用半定量免疫组化检测HPV(+)组和HPV(-)组中VEGF、CD31(MVD标志)蛋白表达情况。结果:口咽鳞癌中HPV感染率36.7%(22/60),HPV-16型占所有感染者的比例86.4%(19/22),明显高于其他型别;VEGF高度表达者出现MVD>15个/高倍视野的几率较VEGF低度表达者高(P=0.001);MVD>15个/高倍视野的肿瘤为低分化的可能性较高(P=0.004);VEGF和MVD表达与患者年龄、性别、TNM分期、HPV感染状况之间无相关性。结论:HPV感染与口咽鳞癌的发生存在相关性。口咽鳞癌中HPV感染状况和VEGF之间无相关性。

巴弗洛霉素A1对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖及自噬的抑制作用

目的探讨巴弗洛霉素A1(Baf-A1)对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖、凋亡及自噬的影响。方法采用终浓度为0.1、0.5μmol/L的Baf-A1处理Tca8113细胞,并设不加药的对照组。MTT比色法测定对照组及不同浓度Baf-A1处理0、24、48、72 h细胞的增殖情况,流式细胞仪检测0.5μmol/L Baf-A1处理72 h的细胞周期,Western blotting、细胞免疫荧光检测自噬标记蛋白LC3B的表达,电子透射显微镜观察细胞自噬体形成情况。结果 Baf-A1呈剂量依赖性抑制Tca8113细胞增殖,0.5μmol/L Baf-A1处理72 h时细胞增殖抑制作用最明显。流式细胞仪检测显示,与对照组比较,Baf-A1组sub-G1期、G1期细胞增多(P<0.05),S期和G2/M期细胞减少(P<0.05)。Baf-A1组LC3B-II蛋白的相对表达量为1.83±0.23,高于对照组的0.79±0.18(P<0.01);细胞免疫荧光检测显示,对照组中可见少量LC3B表达,而Baf-A1组72 h后可见大量LC3B点状聚集物;电镜观察显示,与对照组比较,0.5μmol/L Baf-A1处理后可见大量自噬体形成,自噬溶酶体形成增加。结论 Baf-A1对舌鳞癌Tca8113细胞有增殖抑制作用,可能与其阻滞细胞周期和抑制细胞自噬有关。

构建COX2基因慢病毒载体对肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响

目的构建环氧化酶2(COX2)基因慢病毒表达载体并观察其对非小细胞肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响。方法针对COX2基因的不同片段设计3对shRNA的寡核苷酸片段并克隆至慢病毒载体GV248中,构建并筛选最佳抑制效率的靶向COX2基因的慢病毒载体COX2-shRNA。选取对数生长期A549细胞进行慢病毒转染,其中靶向COX2基因的shRNA载体转染A549细胞为shRNA组,以空载体质粒转染作为阴性对照组(NC)及不转染质粒的A549细胞为空白对照组(CON),采用实时荧光定量PCR和Western blotting测定COX2基因和蛋白的表达。分别采用MTT法和流式细胞仪检测干扰COX2表达对A549细胞增殖、凋亡能力的影响。结果成功构建靶向COX2基因的慢病毒载体;稳定转染A549细胞后,COX2基因表达下降,其中以COX2-shRNA1干扰效率最为显著;shRNA组中shRNA1转染的A549细胞COX2 mRNA水平为0.17±0.06,低于NC组的0.81±0.11和CON组的1.09±0.07,差异有统计学意义(P<0.05)。shRNA组细胞增殖活性低于NC组和CON组,shRNA组转染5 d的吸光值为0.976±0.016,低于NC组的1.557±0.015和CON组的1.880±0.034,差异有统计学意义(P<0.05)。shRNA组细胞凋亡率为(6.28±0.31)%,高于NC组的(3.08±0.05)%和CON组的(3.01±0.31)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建靶向COX2基因的慢病毒表达载体,干扰COX2表达可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖并促进细胞凋亡。

EBSS饥饿人鼻咽癌CNE-2细胞株诱导自噬的机制研究

目的:观察饥饿状态下永生化正常鼻咽上皮NP69细胞、鼻咽癌CNE-2细胞的自噬变化及自噬与凋亡的相互作用,为Baf-A1在鼻咽癌中的应用前景提供证据。方法:EBSS溶液替代DMEM溶液在NP69和CNE-2细胞中制造体外饥饿环境,Baf-A1抑制细胞自噬。应用Western blot及透射电镜检测细胞自噬,MTT检测细胞存活率,qRT-PCR检测mRNA表达。结果:与NP69细胞相比,EBSS制造的饥饿环境显著促进CNE-2细胞发生自噬,处理24时后出现大量细胞凋亡,100 nmol/L Baf-A1抑制细胞自噬可延缓饥饿诱导的细胞凋亡。qRT-PCR检测结果:EBSS作用下,LKB1、AMPK、ULK1、Beclin1、ATG5 mRNA水平均显著上升(P <0. 05)。结论:EBSS通过LKB1/AMPK/m TOR通路显著诱导CNE-2细胞自噬的发生。

小剂量普萘洛尔治疗婴幼儿头颈部血管瘤的分析与研究

目的评价小剂量普奈洛尔治疗婴幼儿头颈部血管瘤的近期疗效和不良反应。方法选择2013年6月—2018年6月本院收治的34例符合标准的婴幼儿头颈部血管瘤患者为研究对象,早餐后半小时给予顿服普奈洛尔,月龄<2月者剂量为1 mg/(kg·d),月龄>2月者剂量为1.5 mg/(kg·d),服药时及服药后密切观察患儿血管瘤颜色、瘤体大小及质地与初次服药时的变化,服药后观察患儿面色、血压和心率变化;其次观察患儿精神状态、腹泻、睡眠及体重等情况;患儿随访时间为服药后每月随访1次,停药后每月随访1次,至停药后3个月。结果Ⅰ级疗效3例,Ⅱ级疗效7例,Ⅲ级疗效15例,Ⅳ级疗效9例。显效为24例,占比70.58%;不良反应7例,其中腹泻4例,汗多3例,未给予特殊处理,后症状缓解,未出现停药退出病例。结论小剂量普奈洛尔治疗婴幼儿头颈部血管瘤近期疗效确切,可用于婴幼儿增生期血管瘤的治疗;其不良反应目前发现较少且可耐受,仍需增加病例数及延长随访时间。

尼妥珠单抗在头颈部鳞状细胞癌患者术前新辅助治疗中的应用效果和安全性

目的探讨尼妥珠单抗在头颈部鳞状细胞癌患者术前新辅助治疗中的应用效果和安全性。方法采用随机抽签法将30例头颈部鳞状细胞癌患者分为A组和B组,每组15例,两组患者术前均进行新辅助治疗,A患者予以顺铂+氟尿嘧啶(PF)方案化疗,B组患者予以PF方案化疗+尼妥珠单抗治疗。比较两组患者的临床疗效、不良反应发生情况、后续治疗情况及生活质量。结果B组患者的总有效率高于A组,差异有统计学意义(P﹤0.05);两组患者的疾病控制率比较,差异无统计学意义(P﹥0.05)。两组患者1~2级和3~4级不良反应发生率比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05)。B组患者保留器官功能根治术实施率明显高于A组,差异有统计学意义(P﹤0.01)。治疗后,两组患者的生活质量评分均高于本组治疗前,B组患者的生活质量评分高于A组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论尼妥珠单抗应用于头颈部鳞状细胞癌患者的术前新辅助治疗中疗效显著,安全性较高,可提高器官功能保留手术的实施率和生活质量,值得推广应用。

肿瘤浸润淋巴细胞的研究进展

在实体瘤临床研究,往往会存在大量淋巴细胞浸润原发肿瘤部位。此类聚集在肿瘤位置的肿瘤浸润性淋巴细胞(tumo r-i nfil t ra ring lym phocytes,TIL)的数量和患者的预后有显著的联系,浸润水平越高则预后表现愈好,能够成为是预后指标。TIL被当前视为较好的代表了机体对肿瘤的特异性免疫体现。大量的研究发现,TIL中存在克隆性增殖T细胞,也许是机体针对肿瘤相关抗原(tuomorassociate dantigens,TAA)的一种体现。通过T细胞受体(Tcellreceptor,TCR)基因重排时其互补决定区3(Complementarity dertermining region,CDR3)的高度多样性和VB基因24个亚家族的属性,应用反转录-多聚酶链反(RT-PCR)和基因扫描分析(genescan)的方法检测T细胞Vβ亚家族分布及其克隆洼(clonality)是最近几年来国内外最新实施的研究肿瘤免疫的形式。

人乳头状瘤病毒相关头颈部鳞状细胞癌的研究进展

近年来，人乳头状瘤病毒（HPV）相关头颈部鳞状细胞癌的发病率呈上升趋势，尤其表现在口腔鳞状细胞癌中。HPV 相关头颈部鳞状细胞癌具有独特的临床特征、生物学特点及良好预后，且不暴露于吸烟、饮酒等危险因素，其生物标记物及治疗是国际的研究热点。

扁桃体原发神经内分泌癌1例

1病例报告患者,男,60岁,2017年3月初无明显诱因发现右颈部肿物,约＂板栗＂大小,无耳鸣、鼻塞、鼻出血、流涕、声嘶等不适,当时未予重视,2017年4月初肿物增大,伴咳嗽、咳痰及吞咽不适,于当地医院就诊,予抗感染等对症治疗,疗效不佳,肿物呈进行性增大,于2017年7月入我院。

AMPK过表达慢病毒载体的构建及稳定转染肺癌A549细胞株的建立

目的通过构建表达载体，建立稳定转染腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）的肺癌A549细胞株，观察过表达AMPK后对A549细胞增殖、侵袭能力的影响。方法扩增AMPK全长序列，双酶切目的基因并插入GV358载体，共转染293T细胞进行慢病毒包装，收集慢病毒上清液后感染A549细胞，建立稳定过表达AMPK的A549细胞株。实时荧光定量PCR（qRT—PCR）和Westernblotting检测AMPK的表达情况，四甲基偶氮唑蓝（MTF）及Transwell法检测A549细胞增殖、侵袭能力的变化。结果经限制内切酶鉴定及测序分析，成功构建了GV358．AMPK慢病毒表达载体质粒。与转染空载体相比，转染GV358慢病毒载体的A549细胞AMPK蛋白表达升高5．87倍（P=0．002），mRNA水平升高16．12倍（P〈0．001）；A549细胞过表达AMPK后，第4-5天细胞增殖活性显著降低（第4天：0．53±0．03：0．64±0．05，P=0．021；第5天：0．58±0．04：0．80±0．07，P=0．002），侵袭能力显著减弱[（1．6±0．5）×10^5：（3．4±0．3）×10^5，P=0．004]。结论成功构建了AMPK慢病毒表达载体和稳定表达A549细胞株，过表达AMPK可抑制A549细胞增殖及侵袭能力。