新型冠状病毒感染合并横纹肌溶解症1例

患者男,30岁,长期进行高强度训练运动,新型冠状病毒感染后出现全身肌肉酸痛、乏力等症状持续半月余,体力不能支撑体育运动。3个月后患者自觉身体恢复开始进行适应性训练,1周后出现胸闷、肌肉剧烈疼痛、乏力、尿液呈茶色等症状。入院查体:双上肢肌肉压痛,四肢活动正常,未见明显水肿;实验室检查:血浆中肌酸激酶31 007 U/L,血清肌酸激酶同工酶153 U/L,肌红蛋白2170 ng/mL。诊断:横纹肌溶解症。经过补液、碱化尿液等治疗后,患者肝肾功能、心肌酶谱各项指标均下降至正常范围内,遂出院。

汉坦病毒中国疫苗株Z37M片段的克隆及序列分析

汉坦病毒Z37株是从褐家鼠体内分离到的 ,用于生产双价肾综合征出血热疫苗的病毒毒株之一 ,血清分型为SEO型。利用RT PCR方法扩增Z37株M基因片段cDNA ,克隆入质粒载体 ,进行核苷酸序列测定及分析。Z37株M基因片段由 36 5 1个核苷酸组成 ,只有一个开放读码框架 ,共编码 1133个氨基酸。与HTN型病毒 ( 76 118、A9、HV 114)的核苷酸和氨基酸同源性分别为 71.8%～ 72 .1%、76 .2 %～ 76 .7% ,与SEO型 (R2 2、L99、80 39)的核苷酸和氨基酸同源性分别为 95 .3%～ 96 .1%、95 .3 %～ 98.9%。这一结果的获得进一步从分子水平确定了Z37株的型别 。

人用流感禽流感联合疫苗的研究

目的了解人流感疫苗和H5N1禽流感疫苗联合后的安全性和疫苗之间产生抗体的相互干扰现象。方法制成禽流感单价疫苗、人流感3价疫苗和流感禽流感联合4价疫苗,免疫家兔,测定中和抗体和血凝抑制抗体,并接种小鼠和豚鼠,观察毒性反应和过敏反应。结果人流感疫苗和禽流感疫苗的联合,基本上没有发生疫苗对各自抗体产生的干扰;接种动物无毒性反应。结论 2种疫苗的联合是完全可能的。

SARS病毒核蛋白基因的克隆及其表达研究

从一例输入性传染性非典型性肺炎病人血清中提取病毒RNA,通过RT-PCR方法扩增出SARS病毒核蛋白基因片段,克隆入质粒载体pUCm-T后,进行核苷酸序列的测定及分析,与已公布的SARS病毒基因序列进行比较,证实为SARS冠状病毒核蛋白基因。为了解该病毒核蛋白的抗原特性,将核蛋白基因插入表达载体,构建重组质粒pET28a-SN,转导大肠杆菌BL21(DE3)后,加IPTG诱导表达。产物经SDS-PAGE电泳分析,表达出相对分子量约为50kDa的蛋白,占整个菌体的45％左右。Western-blot分析表明,表达产物仅与SARS阳性病人血清起反应,而与正常血清不起反应。间接ELISA免疫检测,抗原滴度达1:12500。表明表达的核蛋白为SARS特异性抗原,这为SARS病毒的诊断试剂的研制提供了方便而安全的抗原来源。

汉坦病毒核蛋白在免疫荧光诊断技术中的应用

目的从国内生产肾综合征出血热(HFRS)疫苗Z10株中克隆汉坦病毒核蛋白基因,应用杆状病毒-昆虫细胞表达系统使其在昆虫细胞中表达,制成抗原片,用于检测血清中汉坦病毒抗体。方法从汉坦病毒Z10株感染细胞上清液中提取病毒RNA,应用RT-PCR方法扩增S基因,与穿梭质粒连接并转化大肠杆菌,得到重组穿梭质粒。将其转化含杆状病毒基因组的大肠杆菌,筛选出含S基因的重组杆状病毒DNA的大肠杆菌,提取重组杆状病毒DNA转染昆虫细胞,应用ELISA法及间接免疫荧光法检测重组蛋白的抗原性。结果用RT-PCR方法扩增得到S基因,筛选出的重组杆状病毒感染细胞sf9,制成抗原片。此抗原片仅与HFRS阳性患者血清起反应,而与正常人及其它发热患者血清不起反应。检测浙江省各医院送检的97份疑似肾综合征出血热患者血清及36份正常人血清,与传统的抗原片比较,阳性符合率为100%。结论可以应用杆状病毒-昆虫细胞表达系统表达汉坦病毒重组蛋白。以此制备的抗原片,可用于患者血清中汉坦病毒抗体检测,具有特异性强、敏感性高,试剂制备简单、安全,为诊断肾综合征出血热提供新的途径和手段。

浙江省建立疫情、疾病监测微机信息通讯网

浙江省建立疫情、疾病监测微机信息通讯网浙江省卫生防疫站（３１０００９）朱函坪李莉薛兵我站继建立传染病疫情报告微机通讯网后，今年又建立了２０个疾病监测点的计算机信息通讯网。这样，在我省既有覆盖１００％人口的传染病疫情报告网，又有对１％人口的监测点的疾病...

SARS荧光免疫诊断技术研究

目的 应用基因工程技术 ,在昆虫细胞中表达SARS核蛋白基因 ,产生无感染性的核蛋白抗原 ,利用此蛋白制备抗原片 ,用于检测血清中SARS特异性抗体。方法 从非典型性肺炎病人血清中提取病毒RNA ,通过RT PCR方法扩增出SARS核蛋白基因片段 ,将核蛋白基因插入杆状病毒 ,构建重组昆虫杆状病毒 ,转染昆虫细胞 ,收获细胞 ,经丙酮固定 ,制成SARS抗原片 ,建立了SARS荧光免疫方法 (IFA)。结果 用此抗原片检测多份血清 ,仅与SARS病人血清起反应 ,而与正常人及其它发热病人血清不起反应。结论 利用该方法制备抗原片 ,不需要P3实验室 ,操作简便 ,为诊断与研究SARS提供了方便而安全的方法。

分组交换电子信箱信息网络在卫生防疫中的应用

分组交换电子信箱信息网络在卫生防疫中的应用浙江省卫生防疫站（杭州３１０００９）朱函坪李莉随着卫生防疫事业的迅速发展，信息交流日益繁多，对信息的准确性、及时性提出越来越高的要求。以往使用点对点的传输方式，常规文件需要定时、定点传送，非例行性文件需要双方...

肾综合征出血热中国疫苗株Z_(37)M片段的克隆及序列分析

肾综合征出血热是属布尼亚病毒属的一组抗原相关病毒引起的以发热、出血、肾损害为主的急性传染病。它至少有8个血清型,我国仅存在2个血清型,即HTN型(姬鼠型)和SEO型(家鼠型),Z_(37)株是我站1989年11月从褐家鼠分离到,后经酶斑选育出的一株具有血凝滴度高、抗原性强等特点的病毒,与我站分离的姬鼠型病毒Z_(10)株一起,

市地级卫生防疫站建立计算机信息网的方法与应用

市地级卫生防疫站建立计算机信息网的方法与应用朱函坪１李莉１薛兵１为了给文件传输及各类信息的交换提供多种途径，使计算机在卫生防疫工作中发挥它应有的作用，现将我省各市地卫生防疫站建立计算机信息通讯网的方法介绍如下。１通讯方式１．１点对点远程通信该技术使用...

狂犬病毒核蛋白基因的克隆及表达

目的获得狂犬病毒CVS株核蛋白(N)基因并在大肠杆菌中表达,为进一步研发狂犬血清学检测试剂盒提供抗原。方法RT-PCR扩增狂犬病毒CVS株核蛋白测序、并定向克隆入原核表达载体pET-28a,构建原核重组表达质粒pET-28a-N,转化大肠杆菌E.coliBL21,并经IPTG诱导在大肠杆菌中表达CVS株核蛋白。结果与结论扩增的CVS株N基因与发表的CVS株N基因序列完全一致,并在大肠杆菌中得到了高效表达,且表达产物具有免疫反应性,为进一步研发狂犬血清学检测试剂盒提供了抗原。

人用H5N1禽流感疫苗免疫动物效果观察

目的将用禽流感毒种R1203株按3种生产工艺生产的疫苗进行动物接种,观察疫苗的免疫效果。方法用不同剂量的3种工艺生产的禽流感疫苗,分别免疫大鼠和家兔,肌肉接种2针(隔14 d),首针后14和28 d静脉采血,测定接种1针和2针后,动物血清中血凝抑制抗体和中和抗体的产生情况。结果大鼠的抗体反应较家兔敏感;大鼠和家兔在疫苗接种1针后14 d,都能产生血抑抗体,滴度可达1∶40,但中和抗体滴度都很低,几乎测不到;接种2针后,血抑抗体或中和抗体反应都显著高于第1针;裂解-2苗接种大鼠和家兔后的抗体反应普遍高于另2种疫苗,且家兔量-效反应明显。结论裂解-2疫苗优于其他2种;中和抗体能正确反应疫苗的质量;H5N1禽流感疫苗的效力试验可用于免疫家兔测定中和抗体和临床前研究的动物试验,用15μg血凝素(HA)接种家兔2针,血清中和抗体滴度达1:40或以上。

肾综合征出血热疫苗后备毒株的分离和生物学特性研究

目的从肾综合征出血热(HFRS)疫区阳性鼠肺中分离汉坦病毒(HV),并对分离到的病毒进行型别鉴定和生物学特性研究,为HFRS疫苗后备毒种库的建立打下基础。方法疫区阳性鼠肺研磨液接种长爪沙鼠分离病毒,并将分离到的HV经乳沙鼠脑内连续传代,采用直接免疫荧光法和酶联免疫吸附试验,检查毒株的型别,研究传代后毒株的繁殖特性、病毒滴度和抗原滴度。结果从疫区32份阳性鼠肺中分离到9株HV,经单克隆直接荧光血清检查6株为汉滩病毒株,3株为汉城病毒株,经乳沙鼠脑内连续传代,其中4株毒株的病毒滴度和抗原滴度较高,汉滩和汉城毒株的病毒和抗原滴度最高分别达106.50、106.00和1∶5120、1∶5120。结论4株毒株的病毒滴度和抗原滴度均较高,可作为HFRS疫苗后备毒种的筛选毒株。

2006年浙江省肾综合征出血热监测报告

目的探索2006年浙江省肾综合征出血热(Hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS)流行规律,为制定防制对策提供科学依据。方法采用描述流行病学方法分析疫情,间接免疫荧光法(IFAT)检测人血清中HFRS抗体,直接免疫荧光法(FAT)检测鼠肺汉坦病毒(HV)抗原。结果全省748例病例,主要分布在宁波、台州、绍兴、丽水、金华、衢州等市,占全省发病总数的89.84%(672/748)。夏季和冬春季有二个发病高峰,青壮年农民发病居多。结论浙江省出血热疫情近年呈下降趋势,但一些县市发病率居高不下,仍需关注疫情的动态,进行重点控制。

浙江省猪血清中乙脑病毒的分离鉴定及抗体的测定

目的对浙江嘉兴地区采集的猪血清进行乙型脑炎病毒分离鉴定以及了解该地区猪感染乙型脑炎病毒的状况。方法在浙江省嘉兴地区采集猪血清标本,利用病毒分离方法检测猪血清是否携带乙脑病毒,利用间接免疫荧光法对猪血清进行抗体检测。应用荧光定量RT-PCR方法对新分离病毒进行鉴定;设计特异性引物,利用RT-PCR方法扩增新分离乙脑病毒PrM—E基因,并对新分离病毒进行基因分型和E基因的分析。结果共采集240份猪血清标本,抗体检测阳性率为61.6%。其中6月中旬50%以上的猪乙脑病毒抗体呈阳性。分离出3株病毒。经荧光定量RT-PCR鉴定3株病毒均为乙脑病毒,基因分析表明3株病毒均属于基因I型乙脑病毒。对这2株乙脑病毒的E基因区段进行分析,它们之间核苷酸和氨基酸的同源性均为100%。与疫苗株SA14-14-2相比,核苷酸同源性在87.7%,氨基酸同源在97.0%以上。结论浙江省嘉兴地区猪群中存着乙脑病毒的隐性感染或曾经感染过,提示在该地区自然界中存在着乙脑病毒。

肾综合征出血热的4周龄长爪沙鼠模型

目的 肾综合征出血热长爪沙鼠模型的建立。方法 4周龄左右的长爪沙鼠 ,脑内接种肾综合征出血热 (HFRS)病毒 ,在 - 1、+1、+2、+4天注射环磷酰胺 30mg/kg体重 (第 0天感染病毒 )。结果 沙鼠由隐性感染变为急性致死性感染 ,病死率为 93%。在病死动物的脑、肺、肝、脾和肾等器官中 ,均检查到HFRS病毒抗原。结论 4周龄长爪沙鼠模型可用于本病的研究。

浙江省1997至2000年肾综合征出血热监测分析

目的 :通过对肾综合征出血热 (HFRS)监测分析 ,掌握全省HFRS的流行规律 ,控制其暴发流行 ,进一步降低该病的发病率 ,为制定防制措施提供依据。方法 :采用直接免疫荧光 (FAT)法 ,检测鼠肺HV抗原 ;采用间接免疫荧光 (IFAT)法检测HFRS病人、健康人血清及鼠血中HV抗体。结果 :1997～ 2 0 0 0年全省共发病 90 41例 ,年均发病率为 5 .0 8/ 10万 ,死亡 48人 ,病死率为 0 .5 3%。病例仍主要分布在沿钱塘江两岸的浙东和浙西丘陵区 ,浙南山区次之 ,浙北平原区和海岛区病例较少 ,全省 11个地市均有发病 ,以浙东和浙西丘陵区的绍兴、宁波、台州、衢州、杭州和金华 6市发病最多。宿主动物野外以黑线姬鼠为优势种 ,占 80 .79% ,室内以褐家鼠为优势种 ,占 80 .91%。结论 :需要进一步加大监测力度 。

汉坦病毒Vero细胞灭活疫苗候选毒种筛选

目的将肾综合征出血热疫苗后备筛选毒株适应于Vero细胞，并对其抗原性和免疫原性进行研究。方法将新分离的4株汉坦病毒接种敏感动物，在乳沙鼠脑内连续传代。比较脑内病毒抗原的含量以及乳鼠的发病情况；在Vero细胞中传代，比较培养液中的病毒滴度和抗原滴度以及细胞的病变情况；利用筛选出的毒株研制Veto细胞灭活疫苗。研究疫苗的免疫原性。结果4株病毒经乳沙鼠脑内传代，鼠脑悬液的病毒滴度和抗原滴度分别达7．00～7．75LgCCID50／ml和1：3201：1280；4株毒株经Vero细胞连续传5代，培养液病毒滴度和抗原滴度分别达6．50～7．50LgCID50／ml和1：160～1：768；疫苗免疫家兔2针后，其中出血热病毒株Z34与ZJ5株疫苗免疫血清对同型毒株的中和效价达到1：10。结论ZJ4与ZJ5两毒株已适应于Vero细胞，且具有病毒滴度高和免疫原性良好的特性，适合用作Vero细胞肾综合征出血热疫苗理想的候选毒株。

肾综合征出血热灭活疫苗的纯化

目的为提高肾综合征出血热（ＨＦＰＳ）疫苗的免疫效果和减少副反应。方法用ＥＬＩＳＡ检测ＨＦＲＳ 病毒抗原的方法，比较疫苗原液通过不同孔径滤膜的浓缩效果；比较离子交换和凝胶过滤的纯化效果。结果用 孔径３０万相对分子质量滤膜浓缩时，过滤液中仍有部分病毒抗原检出，经１０万相对分子质量滤膜过滤后，过滤液 中检测不到病毒抗原；用 Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４ＦＦ凝胶柱层析浓缩时，经波长 ２８０ ｎｍ检测到 ３个吸收峰，其中仅在第 １峰中检 测到病毒抗原，收集第１峰，几乎回收全部病毒抗原，去除杂蛋白约９０％左右。结论本纯化方法适合于ＨＦＲＳ疫 苗的规模化生产。

人用H5N1禽流感裂解疫苗的制备工艺

目的设计3种工艺,制备不同裂解程度的禽流感疫苗,并观察其免疫效果。方法用禽流感毒种R1203株制备3种禽流感疫苗(全病毒、裂解-1和裂解-2),并分别以不同剂量免疫大鼠和家兔,肌肉接种2针(间隔14d),初免后14d和28d静脉采血,检测动物血清中血凝抑制抗体和中和抗体。结果两种动物在疫苗接种1针后14d,血抑抗体和中和抗体滴度均较低;接种2针后14d,均显著高于1针;裂解-2疫苗接种两种动物后的抗体反应均高于其他两种疫苗,且家兔的中和抗体量-效反应明显。结论裂解-2疫苗的工艺优于其他两种疫苗,其中和抗体能正确反映疫苗的质量。