大骨节病患者血清促炎症细胞因子水平的检测

目的探讨前炎症细胞因子TNF、IL-1β和IL-6在大骨节病(KBD)发病机制中的作用。方法采集62例KBD患者和60例健康对照的血清标本,采用双抗体夹心ELISA法测定血清前炎症细胞因子TNF、IL-1β和IL-6的水平。结果KBD患者血清IL-1β和IL-6的水平分别为(238.4±698.5)ng/L和(164.4±661.4)ng/L,健康人分别为(74.5±130.0)ng/L和(52.2±154.6)ng/L,但它们之间差异均不显著(P>0.05)。然而,KBD患者血清TNF的水平[(109.2±145.3)ng/L]高于健康对照[(40.9±89.7)ng/L],差异非常显著(P<0.01)。患者血清TNF与IL-1β的水平及血清TNF与IL-6水平的相关性均不显著(r值分别为0.0387和0.2135,P>0.05)。血清IL-1β与IL-6的水平呈显著的正相关(r=0.3460,P<0.01)。结论血清前炎症细胞因子水平的升高,可能与大骨节病的发病有关。

二氨基萘分光光度法测定盐硒

目的 建立适合于硒碘（Ｎａ２ＳｅＯ３－ＫＩＯ３）盐中硒的常规监测的分光光度法。方法 研究Ｓｅ４＋ 与二氨基萘反应的吸收光谱特性，干扰物质的干扰情况，对测定波长、试剂用量、反应时间、测定范围等进行了优化选择。结果 方法最低检出限为０．０２μｇ，摩尔吸光系数ε３６５ 为１．８×１０４，对不同硒含量的盐样中硒的测定，批内变异小于６．２％ ，批间变异小于９．７％ ，准确度范围为９７．９％～１０５．６％ ，该方法与其它法测定结果无显著性差异（ Ｐ＞ ０．２ ）。结论 该方法具有简便、经济、灵敏、准确等优点，适合于硒碘（Ｎａ２ＳｅＯ３－ＫＩＯ３）盐中硒的常规监测工作。

用于构建抗人TNF嵌合抗体的鼠单克隆抗体中和活性的鉴定

目的:筛选构建抗人TNF嵌合抗体所需高质量的鼠源性mAb。方法:从一组分泌抗人TNF mAb杂交瘤细胞中,挑取3株D2、E6和F6,按常规方法制备腹水。用饱和硫酸铵盐析后,分别用蛋白A亲和层析和QFF阴离子交换层析法,纯化D2株分泌的mAb(IgG2b)和E6和F6株分泌的mAb(均为IgGl)。纯化前后,3株mAb的效价,采用间接ELISA法测定。纯化的3株mAb的中和活性,通过它们对TNF诱导的L929细胞死亡和上调ECV304细胞上ICAM-1表达的抑制作用来进行鉴定。结果:间接ELISA检测表明,3株mAb D2、E6和F6纯化前的效价分别为1×10-6、1×10-7和1×10-7,纯化后效价分别为0.01、0.002和0.002 mg/L。mAb中和活性的检测表明,浓度为0.16、0.40和0.50 mg/L的D2、E6和F6,可保护2×104U/L TNF诱导的L929细胞半数不发生死亡。1.0 mg/L的mAb D2、E6和F6,对2×105U/L TNF使ECV304细胞上ICAM-1表达上调的抑制率,分别为70.1％、60.1％和60.1％;3株mAb的浓度降到0.1 mg/L时,抑制率仍可达到60.1％、53.7％和59.0％。结论:所选3株mAb的效价及中和活性均较高,可作为抗人TNF嵌合抗体的候选mAb。

2005年陕西省饮用高砷水筛查和砷中毒病情调查

目的筛查陕西省饮用水含砷量，调查砷中毒病情。方法在存在高砷水成因的村，按东、西、南、北、中5个方位，采集20份水源水，水砷采用二乙基二硫代氨基甲酸银分光光度法或砷化氢发生原子荧光光谱法测定：在水砷超过0.05mg／L的村，进行砷中毒流行病学调查。对人群中砷中毒病人的调查，按国家地方性砷中毒诊断标准进行诊断。结果在1893份水源水中，有12份含砷量超过0，05mg／L，分布于商洛市所属3个村，暴露人口3148人。饮用高砷水人群砷中毒的临床检出率为37．0％。结论矿物冶炼和开采引起水砷污染，导致砷中毒在陕西省商洛市流行。

抗人TNF单克隆抗体对TNF诱导的NF-κB核转位的抑制作用

目的 :鉴定 3株抗人TNF单克隆抗体 (mAb)D2、E6和F6对TNF诱导的NF κB核转位的抑制作用。方法 :将不同浓度的 3株mAb及无关mAb分别与TNF溶液孵育后 ,加入到ECV30 4细胞培养液中。孵育 1h后收获细胞 ,从中提取核蛋白并测定其含量 ,用电泳迁移率变动分析 (EMSA)检测核提取液中NF κB的核转位。结果 :3株抗TNFmAb均可抑制TNF诱导的ECV30 4细胞中NF κB的核转位。其中mAbD2的抑制作用最强 ,其次为mAbF6和E6 ,无关对照抗体也有一定的非特异性反应。抑制作用与加入的mAb呈良好的剂量依赖关系 ,在 10mg/L和 0 .1mg/L条件下 ,mAbD2的抑制率分别为 94 .2 %和75 .1% ,mAbE6分别为 6 4 .9%和 2 8.6 % ,mAbF6分别为 70 .3%和 4 9.5 % ,无关对照抗体分别为 2 0 .0 %和 11.1%。结论 :mAbD2、E6和F6可特异性地抑制TNF诱导的NF κB核转位 。

陕西省饮水氟砷测定实验室间质量控制结果与分析

目的评价实验室对饮水氟、砷分析的能力。方法参加实验室对2种质量浓度的氟、砷质控样品进行测定,采用方框图评价质控结果。结果对参考值为1．00、2．00 mg／L氟质控样品的测定结果分别为 (1．005±0．057)mg／L和(1．972±0．128)mg／L,室间相对标准差分别为5．0％和6．5％,室间相对误差分别为0．5％和1．4％;55个实验室中有50个合格,合格率为90．9％。对参考值为0．100、0．200 mg／L砷质控样品的测定结果分别为(0．098±0．022)和(0．196±0．043)mg／L,室间相对标准差为22．4％和21．9％,室间相对误差均为 2．0％;32个实验室中有29个合格,合格率为90．6％。结论通过饮水氟、砷测定室间质量控制,为陕西省饮水氟、砷筛查项目筛选出了合格的实验室。

细胞因子调节血管内皮细胞凋亡相关配体和受体在大骨节病病理机制中的作用

目的探讨细胞因子调节血管内皮细胞凋亡相关配体和受体在大骨节病病理机制中的作用。方法用IFN-γ、IFN-α和TNF刺激ECV304细胞48 h后,采用流式细胞术分析细胞膜表面Fas、TRAIL、DR4和DR5的表达水平。结果静止ECV304细胞膜表面有Fas、TRAIL、DR4和DR5等分子不同水平的组成性表达,IFN-γ、IFN-α和TNF等细胞因子刺激后,Fas、TRAIL和DR4表达增加,其中IFN-γ对Fas的上调作用最显著,可使表达Fas细胞的阳性率从77.8%上升至98.4%;3种细胞因子对DR5的上调作用不明显。结论IFN-γI、FN-α和TNF等细胞因子通过上调内皮细胞死亡配体/受体Fas、TRAIL、DR4和DR5的表达,诱导内皮细胞凋亡,影响软骨细胞的血液和氧供应,导致软骨细胞发生坏死,很可能参与大骨节病的病理损伤的分子机制。

抗T-2毒素单克隆抗体的制备与初步鉴定

目的制备和鉴定抗T-2毒素单克隆抗体。方法将T-2毒素与牛血清白蛋白(BSA)交联,制备T-2毒素与BSA交联物(T-2-BSA),以T-2-BSA免疫BALB/c小鼠,取其脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合,以HAT培养液筛选杂交瘤细胞,用有限稀释法进行克隆化。用筛选的阳性单克隆细胞株,按常规方法制备腹水,腹水用饱和硫酸铵沉淀后,用阴离子交换法纯化,获得纯化的单克隆抗体。采用ELISA鉴定抗体的亚类,并测定血清和腹水中抗体的效价。结果制备出T-2毒素与BSA交联物T-2-BSA,免疫小鼠血清的效价在1×10-6以上。获得1株能稳定分泌抗T-2毒素抗体的杂交瘤细胞系,该抗体(T2mAb)属于IgG1亚类,轻链为κ链。腹水效价为1×10-6。ELISA法证明T2mAb可与T-2毒素发生特异性反应。结论成功制备出抗T-2毒素单克隆抗体,为建立测定食品、饲料和组织液中T-2毒素的免疫学方法打下了坚实的基础。

一种筛选中和活性抗人TNF单抗细胞模型的建立及其应用

目的:建立一种筛选中和活性抗人肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor,TNF)mAb细胞模型,并从一组抗人TNFmAb中筛选出具有相对较高中和活性的mAb.方法:用含100mL/LFCS的DMEM细胞培养液将L929细胞的浓度调整到1×108/L,按每孔100μL,加入至96孔细胞培养板中,培养过夜.弃细胞培养上清后,将200μL的实验液转入培养板中,继续培养16h.活细胞用结晶紫染色,脱色后,于570nm波长测定A值.结果:浓度在0.3～0.5mg/L范围内的放线菌素D(antinomycinD,ActD)对L929细胞的生长抑制作用比较稳定;TNF的浓度高于20kU/L时,能够使95%以上的实验细胞发生凋亡;浓度在12.5～50.0μg/L范围的mAb对TNF的中和作用具有明显的剂量依赖关系;在ActD,TNF和mAb的浓度分别为0.35mg/L,20kU/L和25.0μg/L的条件下,发现D2的中和活性与阳性对照抗体无显著性差异(P>0.05),但高于阴性对照抗体,E6,D12,E11(P<0.01).与阴性对照抗体比较,E6,E11也具有一定的中和活性(P<0.05),而D12无中和活性(P>0.05).结论:本研究建立的mAb抑制TNF诱导L929细胞凋亡的细胞模型可用于筛选中和活性抗TNFmAb;D2的中和活性相对较高,可作为构建治疗性嵌合抗体的制剂.

用过硫酸铵做氧化剂测定尿碘方法的研究

目的探索用过硫酸铵做为氧化剂测定尿碘方法的适宜因素。方法尿样经过硫酸铵消化后，又经过Ｓａｎｄｅｌ－Ｋｏｌｔｈｏｆ反应，最后用分光光度法测定尿碘含量。结果该方法的灵敏度为７μｇ／Ｌ；批间和批内变异系数均小于１０％；硫氰酸钾、维生素Ｃ和维生素Ｂ２对方法均无干扰；加入不同浓度标准后回收率在１００％～１０３％之间；与氯酸法有显著的线性相关关系（Ｐ＜０．０１）。结论该方法具有无爆、消化时无有害气体溢出、经济、方便等优点，特别适合发展中国家用于碘缺乏病监测。

改水后高碘甲状腺肿病例转归的观察

改饮低碘水 4年后 ,水碘和尿碘水平均降至正常范围 ,用 B超法复查 14名高碘甲状腺肿病例 ,其中 13名病例甲状腺容积恢复至正常水平 ,康复率为 92 . 9%。提示解除高碘危害后 。

病区的搬迁措施对大骨节病流行的影响

为了解陕西省大骨节病区的搬迁措施对大骨节病流行的影响 ,我们于 1999年 12月在永寿县两个实施搬迁的病村 ,进行了大骨病流行病学调查。结果表明 ,随着社会的发展和硒盐防治大骨节病措施的落实 ,病区的生活条件和营养状况已有明显的改善 ,搬迁措施进一步改善了居民的饮水、居住和粮食储存条件 ,使大骨节病病情下降。建议病区进一步落实搬迁任务 ,坚持食用硒碘盐 ,开展植树造林 ,种植经济作物 ,减少粮食作物的种植 ,改善生态环境 。

改灶预防燃煤污染型氟中毒效果观察

目的 了解实施改灶措施后的病情变化 ,评价防治措施的效果 ,为制定防治对策提供依据。方法 在选定的观察点 ,调查 8～ 12岁儿童氟斑牙和成人症状、体征 ,采样分析食品、室内空气和 8～ 12岁儿童尿氟含量。结果 儿童氟斑牙患病率和氟斑牙指数呈下降趋势 ,成人病情稳定。室内空气氟浓度一次最大允许浓度和日平均浓度的超标率均有降低 ,地炉造成的氟污染重于灶炉 ,地炉在旺火期释放的氟比焖火期和封火期多 ,燃用地炉是造成室内空气氟污染的主要原因。玉米氟含量上下波动 ,辣椒氟含量逐年降低 ,但 2 0 0 0年出现回升。儿童尿氟升降交替 ,未见明显下降。结论 改良炉灶是燃煤污染型氟中毒行之有效的防治措施 ,但应加强对病区居民正确使用炉灶的技术指导 ,并注意及时维修受损炉灶 。

抗人RANTES分子单克隆抗体的制备及特性鉴定

目的:制备抗人RANTES分子单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定,为研究RANTES分子的组织分布和功能提供实验手段。方法:应用淋巴细胞杂交瘤技术,制备小鼠源性抗人RANTESmAb。用ELISA法鉴定腹水mAb的效价。用Q FastFlow阴离子交换柱纯化mAb。用Westernblot鉴定mAb的抗原结合活性。用免疫组化染色法,对RANTES分子在进行小肠移植术的大鼠移植肠组织中的分布进行鉴定。结果:获得4株分泌抗RANTESmAb的杂交瘤细胞株。间接ELISA法测定腹水mAb的效价均达1×10-6,3株mAb为IgG1亚类(κ),1株为IgG2b(κ)。Westernblot的结果显示,3株mAb与人RANTES均有良好的结合活性。用3株mAb进行免疫组化染色的结果显示,RANTES分子在进行小肠移植术的大鼠小肠腺上皮细胞胞质中呈高表达。结论:获得4株能特异性识别天然RANTES分子的mAb。大鼠小肠移植后其肠上皮细胞中可高水平地表达RANTES。

抗3种标签蛋白单克隆抗体的制备及特性鉴定

目的:制备并鉴定抗GST、His×6及FLAG的单克隆抗体(mAb)。方法:分别以含GST、His×6及FLAG标签的融合蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合制备抗相应标签蛋白的mAb。用Westernblot检测mAb对变性融合蛋白的反应性。用流式细胞术(FCM)检测抗FLAGmAb对细胞膜表面融合蛋白的反应性。结果:共获得12株可稳定分泌抗3种标签蛋白mAb的杂交瘤细胞(其中5株可分泌抗GSTmAb,5株可分泌抗His×6mAb,2株可分泌抗FLAGmAb)。11株mAb均可用于相应融合蛋白的Westernblot检测。1株抗FLAGmAb检测细胞膜表面融合蛋白的阳性率,与商品化的mAbM2相接近。用1株抗His×6mAb制备亲和层析柱,并用于纯化IL-8-His融合蛋白,也获得较满意的结果。结论:成功地制备了抗GST、抗His×6及抗FLAG的mAb,为含标签的融合蛋白的研究和应用提供了重要的工具。

陕西省梅毒血清学检测室问质量评价结果分析

目的了解陕西省二级及以上医疗卫生机构梅毒血清学检测能力,加强性病检测实验室质量管理,提高全省实验室梅毒检测水平。方法每个参评单位发放5份质控样、质控品说明书和结果回报表,每个质控样须用该实验室现开展的梅毒血清学检测方法分别做梅毒螺旋体抗原血清学试验,以及非梅毒螺旋体抗原血清学定性和定量试验,在规定时间内将检测结果等信息回报,经汇总后进行统计分析。结果共有341家单位参加此次室间质评活动,总合格率为70.97%。非梅毒螺旋体抗原血清学定性和定量试验结果符合率分别为97.69%和76.16%;梅毒螺旋体抗原血清学试验结果符合率为99.93%。结论陕西省梅毒血清学检测的总体水平有待提高,非梅毒螺旋体抗原血清学定量试验结果符合率较低,应加强相关检验人员的业务培训,建立并完善梅毒血清学检测室间质量管理体系。

TRAIL及其受体在正常心脏组织的免疫组织化学定位

目的 :观察正常人心脏组织中 TRAIL 及其受体 DR4、DR5、Dc R1和 Dc R2的表达分布情况 ,为进一步明确这些分子在心肌损伤中的作用机制提供形态学依据。方法 :用抗 TRAIL及其受体的单克隆抗体 (m Ab) ,应用免疫组织化学染色技术 ,检测正常人心脏组织中 TRAIL及其受体 DR4、DR5、Dc R1和 Dc R2的表达。结果 :TRAIL及其受体 DR4、DR5、Dc R1和 Dc R2在正常人心脏组织中均有表达 ,表达产物主要分布于胞浆内 ,胞膜上也有表达。结论

2018~2019年陕西省临床实验室梅毒血清学室间质评结果分析

目的了解陕西省二级及以上医疗卫生机构临床实验室梅毒血清学检测能力,提高全省梅毒血清学检测水平。方法 386家参控实验室每家发放5份梅毒参控样本,按各自实验室常规检测方法分别进行梅毒螺旋体血清学试验和非梅毒螺旋体血清学定性与定量试验,并在规定时间内检测并回报结果。结果经汇总后进行统计分析。结果 386家参控实验室上报率为100%,总合格率为99.48%。梅毒螺旋体血清学试验符合率为99.79%,非梅毒螺旋体血清学定性和定量试验符合率分别为98.91%和91.32%。结论陕西省二级及以上医疗卫生机构梅毒血清学检测总体能力较以往有所提升,需加强非梅毒螺旋体血清学定量试验技术培训。

石墨炉原子吸收分光光度法测定食品中镉

目的:研究石墨炉原子吸收分光光度法测定食品中镉含量的实验条件及影响因素。方法:采用500℃干灰化法和硝酸、高氯酸混合酸消化法处理样品,以(NH4)3PO4做基体改进剂,采用石墨炉原子吸收分光光度法测定食品中镉含量。结果:方法最低检出限、批内相对标准偏差、批间相对标准偏差和回收率分别为0.014μg/L、2.09%～3.33%、5.79%和92.0%～106%;标准曲线线性范围0.50～4.00μg/L,回归方程Y=0.0506X+0.00999,相关系数r=0.9990。测定国家标准物质(GBW07604,镉标准值:0.32±0.07μg/g)中镉的含量为0.311μg/g,相对误差2.81%。结论:该方法具有较高的灵敏度、准确度和精密度,适用于食品中微量镉的测定。