血清ALT串联HBsAg和串联HBV DNA识别HBeAg阳性慢性HBV感染非活动性肝炎的性能评价

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)e抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)阳性的慢性HBV感染依次经历非活动性肝炎(non-aggressive hepatitis,NAH)和活动性肝炎(aggressive hepatitis,AH)2个分期,但仍缺乏界定HBeAg阳性NAH与AH的可靠标准。本文根据179例患者的长期随访队列,以自发性HBeAg血清转换作为终点事件,采用Kaplan-Meier生存分析,指定了丙氨酸转氨酶(alanine transaminase,ALT)、HBV表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)和HBV DNA识别HBeAg阳性NAH的功能截断值;在此基础上,评价了ALT串联HBsAg和串联HBV DNA识别HBeAg阳性NAH的性能。结果显示,ALT≤60 IU/L、HBsAg>4.602 log10IU/mL和HBV DNA>7.477 log10IU/mL为识别HBeAg阳性NAH的功能截断值。基于功能截断值,ALT串联HBsAg的患者中,病理学分级≤G1和“分级≤G1且分期≤S2”的构成比均为100%,病理学分期≤S1和“分级≤G2且分期≤S1”的构成比均为68.2%;ALT串联HBV DNA的患者中,病理学分级≤G1和“分级≤G1且分期≤S2”的构成比均为86.2%,病理学分期≤S1和“分级≤G2且分期≤S1”的构成比均为69.0%;ALT串联HBsAg识别病理学分级≤G1和“分级≤G1且分期≤S2”的阳性似然比均为+∞,识别病理学分期≤S1和“分级≤G2且分期≤S1”的阳性似然比均为2.034;ALT串联HBV DNA识别病理学分级≤G1和“分级≤G1且分期≤S2”的阳性似然比分别为3.000和3.068,识别病理学分期≤S1和“分级≤G2且分期≤S1”的阳性似然比均为2.106。以上结果提示,ALT串联HBsAg和串联HBV DNA均可有效识别HBeAg阳性NAH;且ALT串联HBsAg识别HBeAg阳性NAH的性能优于ALT串联HBV DNA。

ELISPOT辅助临床结核病诊断价值分析

目的探讨ELISPOT在结核病诊断中的应用价值。方法分离TB患者54例和非TB患者52例的外周血单个核淋巴细胞,并采用以结核分枝杆菌特异性蛋白ESAT-6和CFP-10为抗原的ELISPOT试验技术进行结核分枝杆菌(Mtb)特异性T淋巴细胞免疫反应的检测,同时做痰涂片、痰培养、PPD试验和胶体金法检测。以临床明确诊断为标准,比较分析评价不同检测方法的敏感度和特异度。结果 TB-ELISPOT的敏感度(Se)90.7%、特异度(Sp)96.15%、阳性预测值(PPV)0.96、阴性预测值(NPV)0.91、阳性似然比(+LR)23.55和阴性似然比(-LR)0.1;胶体金法的Se 59.26%、Sp 88.46%、PPV0.84、NPV 0.68、+LR 5.14和-LR 0.46;PPD试验的Se 64.81%、Sp 82.69%、PPV 0.80、NPV 3.74、+LR 0.69和-LR 0.43;痰涂片的Se 40.74%、Sp 100.00%、PPV 1.0、NPV 0.62、+LR>10和-LR0.52;痰培养的Se 25.93%、Sp 100.00%、PPV 1.0、NPV 0.57、+LR>10和-LR0.77。统计结果显示ELISPOT检测的敏感度明显高于其它常用结核病诊断方法。ELISPOT在痰涂片和痰培养阴性的TB患者中的阳性检出率分别为84.38%和87.5%。结论 ELISPOT是一种敏感度和特异度均较高的结核病免疫学辅助诊断方法,有助于提高诊断结核感染的阳性检出率,且耗时短,可作为临床结核病诊断尤其是菌阴结核病的重要辅助手段之一,具有较高的临床推广价值。

结核分枝杆菌动物建模试验中ABSL-3实验室内生物安全评估

目的通过在动物生物安全三级(ABSL-3)实验室内对结核分枝杆菌(MTB)动物建模过程采样监测,为实验室生物安全评估提供依据。方法在经中国合格评定国家认可委员会(CNAS)认可并由卫生部批准的,可从事MTB等高致病性病原微生物实验动物研究工作的ABSL-3实验室内实施MTB动物建模,在实验过程中进行空气和物体表面采样。用快速分子诊断和常规病原学方法对样本进行特异性检测分析。结果生物安全三级(BSL-3)实验室使用后的清场工作可以大大减少实验室环境的细菌量,BSL-3实验室在日常使用中也会存在少量的环境微生物,由于负压强度和使用频率的差异,核心区的环境洁净度明显高于准备间。70%乙醇喷洒消毒及擦拭可以使准备间物体表面的细菌量检出率从59.26%下降到9.38%;核心区物体表面的环境细菌检出率从6.59%下降到1.52%,核心区MTB检出率从10.99%下降到0。在ABSL-3实验室和生物安全柜双重负压环境下,可避免空气中MTB气溶胶污染。结论 ABSL-3实验室的负压环境和正确的防护及消毒措施对实验室操作人员的生物安全有重要的防护作用。

El Tor霍乱弧菌双精氨酸转运系统功能单位的分析研究

本文旨在分析El Tor霍乱弧菌双精氨酸转运(Tat)系统的基因簇构成,对其功能进行分析,确定其最小功能单位。通过与大肠埃希菌Tat系统基因簇的基因同源性比较,推测霍乱国际测序标准株N16961的Tat系统基因簇构成;分别对霍乱弧菌Tat系统的基因簇进行单基因缺失、双基因缺失和全基因缺失,建立缺失株和回补株,并与野生株进行表型比较,进一步分析霍乱弧菌Tat系统的基因构成和最小功能单位。结果显示,霍乱弧菌Tat系统基因簇由tatA、tatB、tatC、tatA_2 4个基因构成,其中tatA、tatB和tatC基因位于霍乱弧菌Ⅰ号染色体,tatA_2基因位于霍乱弧菌Ⅱ号染色体。tatB和tatC基因缺失影响霍乱弧菌Tat系统功能,tatA或tatA_2单基因缺失后均可基本保持Tat系统功能,但同时缺失则导致菌株Tat系统功能丧失。提示霍乱弧菌Tat系统最小功能单位是tatA-tatB-tatC或tatA_2-tatB-tatC,tatA与tatA_2功能重复。

新版《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断》中临床实验室检测部分更新内容解读

人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)感染是一个严重的医学和社会学问题。HIV感染的临床症状不典型,确诊依赖于实验室检测。《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断》(WS 293-2019)已正式颁布,其提升了HIV RNA检测的地位,强调HIV核酸定性或定量检测结果也可作为HIV感染的诊断依据。本文主要就新版《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断》中临床实验室检测部分的更新内容进行解读,同时对HIV感染的分子诊断相关研究进展作一概要介绍。

T细胞斑点试验联合隐球菌乳胶凝集试验对肺结核合并肺隐球菌病诊断的初步研究

目的评价结核分枝杆菌感染T细胞斑点试验(TB ELISPOT)和乳胶凝集试验(LA)联合检测对肺结核合并肺隐球菌病的诊断价值。方法选择2006年3月—2008年9月我中心呼吸科收治的疑诊肺结核合并肺隐球菌病患者76例,均同时作TB ELISPOT、LA检测和肺组织病理检查。结果76例患者中,经病原学和病理学确诊为肺隐球菌病15例,肺结核22例,其中肺结核合并肺隐球菌病8例。经检测LA的灵敏度和特异度均为100%,TB ELISPOT的灵敏度和特异度分别为91%和94.4%,8例肺结核合并肺隐球菌病患者LA和TB ELISPOT均为阳性。结论LA和TB ELISPOT联合检测对肺结核合并肺隐球菌病具有诊断价值。

三个品系小鼠流感病毒气溶胶感染模型的比较

目的通过气雾攻击产生气溶胶的感染方式对三个品系的小鼠分别进行感染,比较三个品系小鼠在感染过程中的感染差异,从而对三个品系小鼠流感模型的特点进行分析,为流感发病机制的研究及疫苗和药物的开发选择合适的感染模型提供参考。方法选用A/Puerto Rico/8/34(H1N1)病毒株,采用气雾攻击的方法感染近交系C57BL/6、BALB/c和远交群ICR三个品系的小鼠,每日称小鼠体重,肉眼观察小鼠状态,分别于感染后3、7、14 d处死小鼠,取肺脏称其湿重,进行肺脏的病毒测定及病理观察。结果三个品系小鼠均可感染,其中C57BL/6小鼠的存活率低于其他两个品系,3 d的肺指数和病毒载量均明显高于ICR小鼠(P<0.05),镜下病理结果显示较其他两个品系也更明显。BALB/c小鼠与其他两个品系小鼠相比,体重在后期的恢复最慢,存活率比C57BL/6高但比ICR低;肺指数和病毒载量与其他两个品系相比差异无显著性;镜下病理改变相似,但弱于C57BL/6强于ICR。ICR小鼠的发病进程与其他两个品系小鼠基本相似,但体重、存活率、肺指数、病毒载量及镜下病理改变等指标均弱于其他两个品系。结论三个品系小鼠均可建立流感气溶胶模型,但感染后的三个模型各有特点,在实验中可以根据不同的研究目的来选用合适的小鼠品系建立模型。

CFP10-ESAT6融合蛋白用于结核分枝杆菌感染诊断ELISA方法的初步研究

目的制备结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白,探讨CFP10-ESAT6融合蛋白在结核分枝杆菌免疫诊断中的应用价值。方法 PCR扩增得到CFP-10、ESAT6基因片断,将其先后克隆入pET-28a表达载体。优化表达条件、用镍亲和层析的方法纯化带His标签的重组CFP10-ESAT6融合蛋白(rCFP10-ESAT6)。制备兔多克隆抗体,建立rCFP10-ESAT6为抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,以健康者血清为对照,检测170例结核患者血清的抗体。结果重组质粒pET28a-CFP10-ESAT6靶基因测序结果与预计设计完全一致。融合蛋白在E.coli BL21(DE3)工程菌中均为可溶性表达,表达量占菌体总蛋白的40%。利用金属螯合亲和层析直接纯化重组蛋白,纯度达到95%以上。Western blot分析表明,重组蛋白能与结核患者血清发生特异性免疫结合反应,与健康者血清不发生反应。CFP10-ESAT6的兔多克隆抗体的效价为1∶8 000,CFP10-ESAT6作为包被抗原的检测结核病人血清中特异性抗体的间接ELISA最佳包被浓度为0.002μg/mL,患者血清的最佳稀释度为1∶500。检测结果与临床诊断的符合率,ELISPOT>ELISA(rCFP10-ESAT6)>ELISA(kit)。结论CFP10-ESAT6融合蛋白具有较高的抗原特异性和免疫反应性,有可能成为结核病免疫学诊断的特异抗原,对结核的诊断具有重要参考价值。

H1N1流感与H7N9禽流感感染BALB/c小鼠发病特点初步研究

目的本实验旨在初步探讨A/Shanghai/4664T(H7N9)和A/Puerto Rico/8/34(H1N1)病毒感染BALB/c小鼠的发病特点,为H7N9致病机制与防治的研究提供数据支持。方法将同等剂量(5×103TCID50)流感病毒滴鼻感染BALB/c小鼠,分析其在感染后体重、肺指数、病毒载量和肺组织病理的变化情况。结果 H1N1PR8感染组和H7N9感染组小鼠在7 d内体重均持续减低,H1N1 PR8组较H7N9组降低更为明显;在感染后3 d H7N9组与PBS组肺指数无显著差异(P>0.05),但感染后7d H7N9组与PBS组相比显著增高(P<0.05);H1N1PR8组比H7N9组感染后3 d肺指数显著增高(P<0.05),但感染后第7天无显著差异(P>0.05)。H1N1 PR8组和H7N9组病毒载量在感染后第3天均显著升高,但两组无显著差异;第7天两组病毒载量均有所降低,但H7N9组病毒载量显著高于H1N1 PR8组(P<0.05)。H1N1 PR8在感染后3 d主要病理变化为炎症细胞浸润和水肿,而H7N9组主要轻度炎症细胞浸润;在感染后7 dH1N1 PR8组可见大量炎症细胞浸润,出现大面积肺水肿;H7N9组表现为大量炎症细胞浸润。结论 H7N9和H1N1 PR8感染BALB/c小鼠均可发病,但发病特点有所差异,H7N9病毒对鼠的适应性比H1N1 PR8差。

流感病毒气溶胶感染小鼠模型的初步研究

目的对模拟流感自然感染方式建立的小鼠流感模型进行初步探索。方法分别选用H1N1FM1和H1N1PR8两种病毒采用气雾攻击的方法感染ICR小鼠，每日称小鼠体质量，肉眼观察小鼠状态，于感染后5d、12d、21d处死小鼠，取肺脏称其湿重，分别做肺脏的病毒测定及病理观察。结果感染两种毒株的ICR小鼠在感染早中期临床症状明显，体质量严重下降，肺指数明显升高，病理变化明显，出现了典型肺水肿，肺间质炎及肺充血等病变，并在感染早期小鼠肺脏中检测到流感病毒。感染晚期小鼠症状逐渐减轻，未检测到病毒。结论通过气雾攻击的方法来建立流感病毒气溶胶感染小鼠模型是可行的。

新型冠状病毒肺炎合并新生隐球菌感染1例报道

新型冠状病毒肺炎(corona virus disease 2019,COVID-19)是继严重急性呼吸综合征冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus,SARS-CoV)和中东呼吸综合征冠状病毒(middle east respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)后出现的又一种能引起人严重呼吸系统疾病的新型冠状病毒——严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARSCoV-2)感染引发的传染病[1]。COVID-19传染性强、临床表现多样,给疫情防控和疾病治疗带来了一定的困难[2]。

肺结核残留空洞的诊断再评价

目的探讨初治肺结核患者临床治愈后残留空洞的诊断再评价。方法2003年1月-2007年6月,67例初治痰菌阳性肺结核患者在完成短程化疗后痰菌阴转,达到临床治愈,但X线胸片检查仍残留空洞,通过支气管肺泡灌洗(BAL)和经皮肺穿刺活检(PLB),对肺结核合并疾病的诊断进行再评价。结果67例患者均进行BAL,证实结核分枝杆菌阴性,经知情并同意后,其中的59例患者进行PLB62例次,发现肺癌2例次(鳞癌1例次、腺癌1例次),真菌感染5例次(曲霉感染2例次、隐球菌感染2例次、白假丝酵母感染1例次),结核分枝杆菌阳性5例次,细菌培养阳性3例次(铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、产酸克雷伯菌各1例次)。结论即使在肺结核诊断成立并且治疗有效,对肺结核合并疾病的诊断仍应受到高度重视,临床治愈后若残留空洞,仍有必要对诊断进行评价,以免延误肺结核合并的肿瘤和感染性疾病的诊断,必要时需进行BAL或PLB明确诊断。

HIV病毒过滤器过滤效率的评估实验研究

目的:检验某公司生产的一次性人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)过滤器的HIV去除率。方法:使用某公司生产的一次性HIV过滤器,将含有HIV的血浆通过该过滤器加压过滤,通过检测过滤前后血浆中的HIV RNA含量,判断该HIV病毒过滤器的滤过效率。结果:本研究共纳入10份血样,一次性HIV过滤器平均去除率为96.62%,过滤前后的血浆HIV含量差异有统计学意义(P=0.001),过滤率高低与过滤前HIV含量高低间未发现线性关系(P=0.9242)。结论:一次性HIV过滤器对HIV病毒的病毒去除率处于较高水平,结果提示采用物理吸附过滤HIV病毒的方法是较可行的。

上海某医院2011年1至5月住院病例2044份血及体液标本血培养结果分析

目的监测和分析上海市公共卫生临床中心血及体液标本血培养分离各种细菌的分布趋势,评价全自动血培养仪阳性结果中的菌群类型和假阳性/假阴性情况。方法采用法国生物梅里埃公司全自动血培养仪和细菌鉴定仪对2011年1至5月收集的2 044份血及体液标本进行培养和鉴定,并进行结果分析。结果不同标本的细菌阳性检出率不同,穿刺液标本的细菌阳性检出率最高(38.10%),其次为血液标本(30.74%)。共分离出231株细菌,总阳性检出率为11.30%,均为单一菌种。其中凝固酶阴性葡萄球菌最多(41.13%),其次为真菌(18.18%),金黄色葡萄球菌所占比例最少(0.87%)。结论了解血及体液标本培养的菌群类型和分布情况,对致病菌和污染菌进行综合鉴别和分析,将有助于指导或帮助临床用药,预防败血症的发生。

上海地区328例新型冠状病毒肺炎患者实验室数据分析

目的分析常用感染与炎症指标及细胞因子检测在新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疾病进展中的意义。方法选取2020年1—2月上海市公共卫生临床中心COVID-19患者328例,按疾病程度分为轻型及普通型组和重型及危重型组。回顾性比较各组患者的C反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、肝素结合蛋白(HBP)、乳酸脱氢酶(LDH)、降钙素原(PCT)、白细胞(WBC)计数、淋巴细胞(LPC)计数、白细胞介素(IL)-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12P70、IL-17、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、α-干扰素(IFN-α)和γ-干扰素(INF-γ)等20项感染与炎症相关血液学指标的差异。结果与轻型及普通型组比较,重型及危重型组患者年龄更高[68.5(11.5)岁,P<0.01]、住院天数更长[21(10)d,P<0.01]、出院率更低(32.14%,P<0.01);与轻型及普通型组比较,重型及危重型组CRP[55(84.5)mg/L,P<0.01]、hs-CRP[43.58(76.46)mg/L,P<0.01]、HBP[61.37(111.01)ng/mL,P<0.01]、LDH[354.5(150.5)U/L,P<0.01]、PCT[0.09(0.21)mg/L,P<0.01]、IL-5[0.49(1.6)pg/mL,P=0.01]、IL-6[10.78(56.24)pg/mL,P<0.01]、IL-8[12.97(19.4)pg/mL,P<0.01]及IL-10[0.82(1.94)pg/mL,P=0.03]水平升高,LPC[0.77(0.5)×10^9/L,P<0.01]、IL-4[0(0)pg/mL,P<0.01]及IL-17[0(0)pg/mL,P=0.01]水平降低。结论轻型及普通型COVID-19患者的感染与炎症相关指标与重型及危重型患者间存在明显差异。CRP、HBP、hs-CRP和PCT的异常升高提示COVID-19患者病情可能转向重症,LPC、IL-4、IL-6、IL-8和IL-10水平对预测患者病情进展,特别是炎症风暴的发生有重要意义。

3种方法检测艾滋病患者血和脑脊液中隐球菌的结果分析

目的比较真菌培养、墨汁染色、侧向免疫层析法(LFA)检测艾滋病患者脑脊液和血标本中隐球菌的阳性率差异,以期为临床医生提供隐球菌感染理想的检测方法。方法采用回顾性分析,收集2017年本院就诊的1 049例AIDS患者的血液和脑脊液标本,进行真菌培养、侧向免疫层析法和脑脊液墨汁染色。数据分析应用SPSS 14.0软件。结果 1 049例AIDS患者,其血培养、隐球菌抗原检测、脑脊液培养和墨汁染色阳性率分别为2.8%(19/688)、10.96%(115/1 049)、9.18%(29/316)、17.99%(59/328),其中201例患者同时做了脑脊液和血标本的隐球菌抗原检测,阳性率分别为27.86%和37.31%,差异有统计学意义(P<0.05)。292例AIDS患者同时做了脑脊液的墨汁染色和隐球菌抗原检测,阳性率分别为19.52%和23.97%,隐球菌抗原检测的阳性率大于墨汁染色法,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 3种方法检测结果显示侧向免疫层析法阳性率最高,比较脑脊液和血标本侧向免疫层析法阳性率,血标本阳性率较高,所以血标本侧向免疫层析法检测是诊断AIDS是否合并隐球菌感染的理想方法之一。

Micro-CT对急性肺结核小鼠模型动态演变的监测价值

目的:探讨micro-CT对急性肺结核小鼠动态演变过程的监测价值。方法:用滴鼻法建立急性感染C57BL/6J小鼠肺结核模型,设为实验组,同时设立对照组。两组分别在实验组滴鼻后第1、4、8、12周进行micro-CT扫描,并与病理学检查结果对比。结果:实验组共40只小鼠,死亡9只,3只肺内阴性,余28只小鼠分为4个亚组(分别7、6、8、7只)。对照组4亚组,每组5只。实验组小鼠感染第1周,71.4%表现为磨玻璃密度影(GGO),57.1%表现为支气管充气征,对应病理表现为肺泡腔渗出和肺泡间隔增宽;感染第4周,micro-CT主要表现为GGO和小灶性实变(66.7%),对应病理表现为肺泡腔渗出和实变,可见类上皮细胞、多核巨细胞和泡沫细胞;感染第8周,结节、支气管充气征和实变3种表现比例相当,病理对应实变和结核小结;感染第12周,结节出现比例最高(57.1%),对应病理表现为结核肉芽肿形成。结论:急性小鼠肺结核模型的肺部micro-CT及病理动态演变基本一致,可用于模拟人类肺结核感染过程,评估疾病进程。

新型冠状病毒肺炎实验室检测技术进展

新型冠状病毒肺炎是当今世界最受关注的公共卫生问题,实验室检测是其疫情防控的关键环节之一。本文主要介绍现常用的新型冠状病毒实验室检测方法,尤其是核酸、抗原/抗体等检测方法,同时就已见报告的部分新型冠状病毒实验室检测新技术作一简要介绍。