基于网络药理学与分子对接探讨桃核承气汤对血小板活化的作用机制

目的:运用网络药理学和分子对接技术,探讨桃核承气汤对血小板活化的调控机制。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、UniProt数据库、化源网、PharmMapper数据库筛选桃核承气汤中桃仁、大黄、甘草、桂枝、芒硝5味药物活性化合物和相关作用靶点,通过GeneCards等数据库搜索与血小板活化相对应的疾病靶点,采用韦恩图对药物靶点与疾病靶点进行交集获得两者交集靶点,再通过Cytoscape 3.10.1软件构建“药物-成分-靶点-疾病”网络图,将交集靶点导入STRING数据库进行剖析,并绘制蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络图,通过Metascape数据库对“化合物-疾病”交集靶点进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,并使用分子对接技术验证桃核承气汤中的主要成分和血小板活化的相关性。结果:桃核承气汤活性成分对应253个靶点,与血小板活化相关对应2043个靶点,二者取交集获得164个靶点,GO涉及细胞增殖、细胞凋亡等生物过程,KEGG富集为癌症通路、PI3K/AKT等信号通路,分子对接结果显示槲皮素、山柰酚等有效成分亲和力良好。结论:桃核承气汤通过山柰酚等活性成分作用于多靶点、多通路,可以有效调节血小板活化状态。

小鼠睾丸精子细胞的分离与鉴定

目的 :建立一种简单、可有效分离小鼠睾丸精子细胞的方法。 方法 :用组合酶消化成年小鼠睾丸制备睾丸细胞悬液 ,然后经 6层非连续Percoll梯度 (15 %、2 2 %、30 %、4 0 %、5 0 %和 6 0 % )离心法分离 ,通过形态学和流式细胞术鉴定各个Percoll梯度中精子细胞的含量 ,并以伊红Y排斥试验测定细胞的存活率。 结果 :组合酶消化后获得的睾丸细胞悬液中 ,97%以上细胞仍然存活。经Percoll梯度离心 ,共形成 6条细胞带 ,其中 2 2 %梯度中主要为精子细胞 (平均 86 .7% ,P <0 .0 5 ) ,85 .5 %以上细胞存活 ;而 30 %梯度中细胞密度最高 (P <0 .0 5 ) ,含有各级未成熟生精细胞 ,存活细胞超过 92 %。 结论 :采用组合酶消化结合非连续Percoll梯度离心法 。

精子DNA完整性在男性不育中的作用

精子DNA完整性对自然受精或人工授精 ,胚胎、胎儿和婴儿的发育至关重要。研究表明 ,夫妇中丈夫精子DNA受损率超过 30 %时 ,自然受精率很低。精子DNA完整性被认为是优于传统精液参数的男性不育指标 ,已经有多种方法可用于检测 ,而且监测精子DNA完整性可用于评估欲行辅助生殖技术 ,如卵细胞胞质内单精子注射 (ICSI)治疗的夫妇。最后对精液冷冻和制备技术对精子DNA完整性的影响进行了总结。

利用两次血型制减少ABO不相容输血风险的研究

目的评估两次血型制在防止标本差错导致ABO不相容输血中的作用。方法对于需要或可能需要输血的患者,实施输血前采集2份单独的标本测定ABO/RhD血型。记录和分析输血前标本中错误标识和错误采集的比率。结果2007年7月—2009年6月,共接收到79115人份输血前相容性测试标本,检出273份错误标识的标本,错误标识标本比为1/290;校正的错误采集标本比为1/1485(基于47507份多次标本中检出23份错误采集标本,校正因子为1.3912)。在23份错误采集的标本中,9份(39%)可导致ABO不相容的红细胞输注。结论两次血型制可减少因标本错误标识和错误采集所致ABO不相容输血的风险。

临床输血质量管理体系的建立

为确保血液和血液成分的安全和合理使用,必须加强临床输血的质量管理。根据ISO9001:2000标准,文中建立了有效的临床输血质量管理体系,其关键控制点涵盖了人员、设备、试剂、环境、血液储存、运输与发放、输血不良反应和计算机管理系统等。编写的质量管理体系文件包括质量手册、程序文件、标准操作规程和质量记录,所有有效文件必须经授权和受控。

战时应急采供血工作中的法律、伦理学与技术问题

战场危重伤员的救治严重依赖血液制品的输注，战时军队医疗机构实施应急血液采集有助于解决血液供需矛盾，足血液保障体系的重要组成部分。我国《献血法》等法律和规范对血液的采集、检测、制备、运输、储存、

人类血小板抗原1～6和Gov系统的PCR-SSP同步基因分型

目的：采用序列特异性引物PCR（PCR—SSP）对人类血小板抗原（HPA）1-6、Gov系统进行同步基因分型，以确定中国大陆汉族人群中的HPA等位基因频率。方法：随机采集100名中国大陆汉族无偿献血者外周血标本，采用酚／氯仿方法提取基因组DNA。设计合成21条序列特异性引物，在相同的PCR循环条件下对HPA-1-6和Gov进行PCR-SSP同步基因分型。结果：100名随机供血者中观察到的基因频率分别是HPA-1a和1b为1．000和0．000，HPA-2a和26为0．995和0．005，HPA-3a和36为0．655和0．345，HPA-4a和46为1．000和0．000，HPA-5a和56为0．990和0．010，HPA-6a和66为0．980和0．020，Gov^a和Gov^b为0．515和0．485。中国人HPA—1．6、Gov的基因频率与亚洲其他人群相一致，HPA-3a／3b和Gov^a／Gov^b基因频率在包括高加索人在内的不同人群中基本相等。结论：中国大陆汉族人群中Gov和HPA-3等位基因分布有其自身特点。

用PCR筛查献血者血液中HBV和HCV

目前,尽管已用HBsAg、抗-HCV及ALT等指标筛选献血者,但输血后肝炎(PTH)仍时有发生。其中,输血后丙型肝炎预后更差,更易转为慢性,发展为肝硬化和肝癌。自聚合酶链反应(polymoerase chainreaction,PCR)技术问世以来,由于其能从分子水平直接检测HBV-DNA和HCV-RNA,因此有望用于常规筛选献血者,以减少PTH的发生。笔者就此问题作一简单综述。1 PCR筛查HBV感染 HBsAg是乙型肝炎感染最常见的标志,检测HB-sAg用于献血者的筛选,大大减少了输血后乙型肝炎的发生率,但是HBsAg阴性并不能完全排除HBV感染。据报道,在输注HBsAg阴性血液成分后仍有0.3％～1.7％的乙型肝炎发生率。

支持细胞体外培养研究进展

总结了支持细胞 (Sertolicell,Sc)原代培养的 3种方法 :Sc分离培养、生殖细胞 Sc共培养及组织培养 (器官培养 )。采用胰蛋白酶、胶原酶及透明质酸酶等消化方法从动物睾丸分离Sc ,将纯化的Sc平铺在Matrigel包被的培养皿中作体外原代培养 ,培养基通常为 1∶1(vol/vol)无血清Ham sF12营养液和Dulbecco改良Eagle培养基 (DulbeccomodifiedEaglemedium ,DMEM) (F12 /DMEM)。培养条件 :5 %CO2 、35℃。生殖细胞 Sc共培养可模拟体内精子发生的微环境 ,用于研究生殖细胞与Sc之间的相互作用。同时也总结通过转基因动物建立的永生Sc株 。

不育病人精液中精子细胞的分离与鉴定

目的 :建立一种可从不育病人精液中分离出较多、较纯精子细胞的新方法。 方法 :收集 15例含细胞成分的不育病人精液 ,利用一种改良的非连续Percoll梯度 (15 %、2 2 %、30 %、4 0 %、5 0 %和 6 0 % )离心法分离精子细胞。于 18℃ 2 0 0 0r/min离心 30min后 ,精液细胞被分成单个的细胞组分 ;然后通过细胞计数、形态学、流式细胞术 (FCM )和免疫细胞化学等方法进行分析 ,选择含精子细胞纯度最高的组分。 结果 :经Percoll梯度离心后获得6个细胞组分 ,形态学和FCM分析表明 ,2 2 %组分中主要为精子细胞 [(91.85± 5 .18) % ,P <0 .0 0 5 ],平均密度为(1.0 10± 0 .786 )× 10 5/ml;30 %组分中含包括精子细胞在内的各种未成熟生精细胞 ;而白细胞主要位于 6 0 %组分中。 结论 :利用这种改良的非连续Percoll梯度离心法 ,可从不育病人的精液中分离到较多。

ABO血型正反定型不符标准操作规程的建立与应用

目的探讨ABO血型正反定型不符标准操作规程的建立。方法我院2010年10月～2011年4月检出14例正反定型不符样本，按ABO血型正反定型不符的标准操作规程进行处理，包括重新测试，核查标本、试剂，复习临床资料、分类和验证等。结果14例正反定型不符问题均得到解决。4例因技术原因所致，经过重新测试，核查样本和试剂，仔细判读结果，得到解决。余分别系多发性骨髓瘤等疾病（3例）、ABO亚型（2例）、同种异基因造血干细胞移植（2例）、先天性抗体缺乏（1例）、输异型血（1例）、cisAB型（1例）等导致。结论建立处理ABO血型正反定型不符的标准操作规程有助于规范疑难血型的鉴定过程，提高输血安全性。

O型悬浮红细胞ABO抗体效价研究

目的:测定O型悬浮红细胞ABO抗体效价,探讨未交叉配合O型悬浮红细胞紧急输注的安全性和可行性。方法:采集100份O型全血,分离制备成悬浮红细胞和血浆制品,测定全血、悬浮红细胞储存第1、7、14 d时的IgM、IgG抗A、抗B抗体效价,并进行比较。结果:全血IgM抗体效价主要分布于4～128,IgG抗体效价主要分布于16～256;悬浮红细胞IgM抗体效价主要分布于4～32,IgG抗体效价主要分布于8～128,与全血相比均明显下降(P<0.01)。悬浮红细胞储存第1、7、14 d间抗体效价虽有所下降,但差异无显著性意义(P>0.05)。结论:O型悬浮红细胞的ABO抗体效价较低,推断其未经交叉配合的紧急输注也是安全的。

双精子嵌合体致ABO血型正反定型不符1例

目的对1例正定型呈混合凝集的ABO正反定型不符样本进行鉴定。方法采用微柱凝胶法进行ABO、RhD血型鉴定、直接抗球蛋白试验和不规则抗体筛查,PCR-SSP法进行ABO基因分型,并分析外周血染色体核型。结果先证者ABO正定型为红细胞混合凝集,反定型检出抗-A1;母亲和父亲分别为O型和AB型。先证者ABO基因座位存在O1、A201和B三个等位基因,其中O1来自母亲,A201和B来自父亲。核型分析显示先证者血液中存在46,XX和46,XY两种细胞,而父母核型正常。结论先证者为孤雌分裂产生的两个相同的卵子被两个精子受精后所产生的嵌合体。

哺乳动物睾丸生精细胞的体外培养

哺乳动物精子发生是一个十分复杂的过程,影响因素众多.体外培养生精细胞一般有组织培养和细胞培养两类方法.目前,已有生精细胞成功地在体外从细线期精母细胞经2次减数分裂分化为精子细胞的报道,但精原细胞的分化和精子细胞的成熟仍是两个难点.建立生精细胞体外培养模型有助于研究精子发生的调控机制,可用于辅助生育技术,治疗精子发生阻滞的患者；对精子发生机制的进一步阐明,也会促进生精细胞体外培养研究的发展.

赴海地执行紧急医疗救护任务的血液保障

目的总结中国赴海地医疗防疫救护队的血液保障经验,增强应急状态下的血液保障能力。方法血液保障采取以人员储备为主、实物储备为辅的模式。携行的20 UO型悬浮红细胞装在自行研制的运血箱中,以相变保温材料为冷媒。采用飞机运输,在运输途中每4 h观察一次血液温度。抵达海地后采用磁珠法快速分离血浆观察质量,并通过胶体金法快速检测血浆游离血红蛋白含量。撤回的血液在4℃继续储存,至d 35有效期时采用电镜观察红细胞形态。结果救护队从南京出发至海地太子港全程共计约90 h,从太子港营地返回至南京全程共计约62 h。尽管运输途中环境温度变化较大,但运血箱内血液温度始终处于1～10℃。磁珠法快速分离血浆及胶体金法检测显示运至海地的红细胞溶血指标没有超过标准。电镜检查显示,撤回的红细胞在继续储存至d 35时异常形态者增加,但与正常对照组相比并无明显区别。结论利用自行研制的运血箱和相变保温材料,悬浮红细胞经长时间运输后,温度和溶血指标均正常,圆满完成血液保障任务。

支持细胞功能和分化的激素调控

支持细胞 (Sertolicell)是启动青春期发育和维持成年精子发生的上皮细胞 ,其功能和分化受多种因素调控 ,包括激素、细胞因子和细胞粘附分子等。卵泡刺激素 (follicle stimulatinghormone ,FSH)是调节支持细胞大部分分化功能的内分泌激素 ,刺激合成雄激素结合蛋白 (androgenbindingprotein ,ABP)、抑制素 (inhibin)和转铁蛋白 (transferrin ,Tf)等 ,主要信使为cAMP和Ca2 + 。另一个重要的调控激素是甲状腺素 (thyroidhormone ,T3 ) ,可调节支持细胞增殖过程、成熟支持细胞数量以及睾丸产生精子的能力。

精子细胞显微受精技术的研究进展

采用卵胞质内圆形精子细胞注射 (roundspermatidinjection ,ROSI)或长形精子细胞注射 (elongatedspermatidin jection ,ELSI)技术治疗完全不能产生精子的非梗阻性无精子症 (NOA)病人已获成功 ,精子细胞可从病人精液或从睾丸活检组织中获取。但精子细胞的受精率和妊娠率令人失望 ,限制这项技术成功和阻碍其临床应用的许多问题仍然没有解决 ,包括精子细胞的核蛋白不完全成熟。

前列腺特异性抗原前体用于前列腺癌早期诊断

PSA前体(proPSA)是血清游离PSA的特殊形式,由天然proPSA及其各种剪接的亚型组成,其中[-2]proPSA和[-4]proPSA和前列腺癌(PCa)的相关性高于[-7]proPSA和[-5]proPSA。临床研究表明,[-2]proPSA可以显著提高PCa的检测能力,特别是血清PSA低于4μg/L时。本文对proPSA的形成机制、特点及其对PCa早期诊断的影响进行了综述。

血液安全筛查联合检测系统的研制

目的研制一种应用于应急采供血的血液安全筛查联合检测系统(联合系统)。方法将ABO/RhD血型、血红蛋白(Hb)、丙氨酸转氨酶(ALT)、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎(HCV)抗体、艾滋病病毒(HIV)抗体和梅毒(TP)抗体筛查等整合在一张血液安全筛查联合检测卡上,利用相应的血液安全筛查联合检测仪检测和判读结果。随机选择47例住院患者血液样本,应用联合系统检测,并分别与酶联免疫吸附测定法(ELISA法)、微柱凝胶法、血细胞分析仪和全自动生化分析仪测定结果进行比较。结果传染病四项检测以ELISA检测结果为标准,联合系统检测HBsAg、TP抗体符合率100%,HIV抗体和HCV抗体存在一定假阳性。ABO/RhD血型鉴定结果与微柱凝胶法完全一致。联合系统检测ALT(17.7±11.3)U/L,Hb(137.1±20.8)g/L,与血细胞分析仪和全自动生化分析仪测定结果比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论联合系统操作简单快捷,准确性较高,可满足突发事件时血液应急保障的需求。

抗－D、抗－C、抗－E致溶血性输血反应1例

抗－Ｄ、抗－Ｃ、抗－Ｅ致溶血性输血反应１例２１０００２南京军区南京总医院朱培元，周同彬，胡瑛Ｒｈ抗体引起的溶血性输血反应屡见报道，但国内因输血引起的抗－Ｄ、抗－Ｃ和抗－Ｅ的报道很少［１］，笔者于１９９４年１２月发现１例抗－Ｄ、抗－Ｃ和抗－Ｅ引起的严重...