豫医无毛小鼠皮肤组织细胞凋亡及神经细胞黏附分子检测

目的:研究豫医无毛小鼠皮肤组织细胞凋亡及细胞黏附分子(NCAM)的表达情况。方法:以21日龄、4月龄和9月龄昆明小鼠和豫医无毛小鼠背部皮肤为标本,采用TUNEI法检测皮肤细胞凋亡,免疫组织化学染色法检测NCAM。结果:豫医无毛小鼠毛母质和毛乳头均有细胞凋亡,昆明小鼠仅毛母质细胞存在凋亡,毛乳头细胞不发生凋亡。随鼠龄的增长,昆明小鼠及预医无毛小鼠毛乳头NCAM表达均逐渐降低(P<0.05);同昆明小鼠比较,豫医无毛小鼠毛乳头部位NCAM表达较弱(P<0.05)。结论:无毛基因可能通过诱导小鼠皮肤毛乳头细胞的凋亡而影响毛囊的正常生长发育。

豫医无毛小鼠胸腺组织学及淋巴细胞亚群观察

目的:观察豫医无毛小鼠(YYHL)胸腺组织学及淋巴细胞亚群的变化。方法:采用病理组织学和流式细胞术观察2个月龄和6个月龄YYHL和昆明小鼠(n=10)胸腺结构及淋巴细胞亚群改变。结果:6个月龄YYHL胸腺湿质量、胸腺指数、皮质比例、CD4+CD8-、CD8+CD4-/CD4+CD8-分别为(33.80±1.64)g、(0.74±0.05)%、(38.12±1.85)%、(8.85±0.83)%和(0.49±0.02)%,低于6个月龄昆明小鼠的(72.50±4.63)g(t=23.572,P<0.001)、(1.75±0.09)%(t=18.018,P<0.001)、(63.10±3.82)%(t=30.217,P<0.001)、(13.83±1.63)%(t=8.802,P<0.001)和(0.61±0.02)%(t=2.999,P=0.017)。病理组织学观察,6个月龄YYHL胸腺明显萎缩,皮质变薄,淋巴细胞稀疏,髓质区扩大。2个月龄YYHL和2、6个月龄昆明小鼠胸腺组织无显著病理学改变。结论:无毛基因突变诱发了小鼠胸腺萎缩,这可能是造成YYHL寿命短的重要原因。

豫医无毛小鼠皮肤透射电镜观察

采用透射电镜技术对12～28日龄豫医无毛小鼠(YYHL)背部皮肤超微结构进行了观察。结果发现:12日龄时,无毛小鼠皮肤毛囊上皮细胞簇集成团,占据毛球的位置;14日龄时,毛囊上皮细胞出现不同程度的凋亡形态学改变,核染色质凝聚呈"新月形"或形成圆形或椭圆形的凋亡小体;18日龄时,毛囊上皮细胞胞核部分区域退变形成大小不一的类似脂滴的空泡;21日龄时,毛囊上皮细胞退变消失,角化成纤维样的物质;到28日龄时,毛囊上皮细胞完全退变成空洞样结构。由此推断,无毛基因的突变诱发了豫医无毛小鼠皮肤毛囊上皮细胞的凋亡,从而引起小鼠的脱发。

比格犬自发疾病的病理组织学研究

为了解比格犬组织器官的自发疾病,为药物的安全性评价提供背景资料,采用病理组织学方法对8～12月龄的36只比格犬主要脏器进行了观察,发现,肝脏、心脏、脾脏、肺脏、肾脏等组织器官均有不同程度的自发病变。

Hr基因敲除小鼠模型的构建和表型分析

目的建立基因敲除小鼠以深入研究无毛基因(hairless,Hr)的功能。方法利用类转录激活因子效应因子核酸酶(transcription activator-like effector nucleases,TALENs)技术,制备Hr基因敲除小鼠,观察基因敲除小鼠毛发生长发育规律,并取部分皮肤组织石蜡切片,显微镜下分析结果。结果获得一个在Hr基因编码区86~87位有2个碱基缺失的首建鼠,产生了TGA终止密码子。通过与野生型鼠杂交获得阳性子代,进行同窝交配,传至第2代小鼠14 d开始脱发,30 d左右毛发脱净,并终身保持无毛。皮肤组织学观察发现真皮内形成大小不等的包囊。研究结果表明成功建立的Hr基因敲除小鼠表现出毛发生长异常。结论证明了无毛基因与毛发生长发育的密切关系,为研究Hr基因的精确功能提供了良好的动物模型。

高铜对雏鸡血清中含铜酶活性的影响

选用1日龄艾维茵肉鸡420只,随机分为7组,分别喂以对照日粮(Cu11mg/kg)、高铜日粮[Cu100mg/kg(Ⅰ组)、Cu200mg/kg(Ⅱ组)、Cu300mg/kg(Ⅲ组)、Cu400mg/kg(Ⅳ组)、Cu500mg/kg(Ⅴ组)、Cu600mg/kg(Ⅵ组)]6周。结果显示:与对照组相比,Ⅰ、Ⅱ组雏鸡血清铜蓝蛋白活性显著升高,Ⅴ、Ⅵ组显著降低(P<0.05或P<0.01),表明100mg/kg和200mg/kg的铜能显著提高雏鸡血清铜蓝蛋白活性,而铜高于500mg/kg时能使其活性降低;铜锌超氧化物歧化酶活性变化不明显(P>0.05)。

高铜对雏鸡血清中含铜酶活性的影响

选用1日龄艾维茵肉鸡420只,随机分为7组,分别喂以对照日粮(Cu11mg/kg)、高铜日粮(Cu100mg/kgⅠ、Cu200mg/kgⅡ、Cu300mg/kgⅢ、Cu400mg/kgⅣ、Cu500mg/kgⅤ、Cu600mg/kgⅥ)6周。结果显示:与对照组相比,Ⅰ组、Ⅱ组雏鸡血清铜蓝蛋白活性显著升高,Ⅴ组、Ⅵ组显著降低(P<0.05或P<0.01),表明100mg/kg和200mg/kg的铜能显著提高雏鸡血清铜蓝蛋白活性,而高于500mg/kg时能使其活性降低。铜锌超氧化物歧化酶活性变化不明显(P>0.05)。

高铜对雏鸡肝脏影响的研究

为探讨日粮铜添加水平对雏鸡肝脏及相关血液生化指标的影响,将420只1日龄艾维因肉鸡随机分为7组,分别喂以对照日粮(Cu11mg/kg)和高铜日粮(Cu100mg/kg,高铜Ⅰ组;Cu200mg/kg,高铜Ⅱ组;Cu300mg/kg,高铜Ⅲ组,Cu400mg/kg,高铜Ⅳ组;Cu500mg/kg,高铜Ⅴ组;Cu600mg/kg,高铜Ⅵ组)6周。高铜Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组、Ⅵ组雏鸡肝脏出现不同程度的病理损害,肝细胞颗粒变性和脂肪变性;透射电镜观察,肝细胞线粒体肿胀,嵴断裂甚至溶解消失。除高铜Ⅰ组和Ⅱ组外,其余高铜组肝脏铜含量均显著高于对照组(P<0.01)。高铜Ⅴ组和Ⅵ组丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶活性显著升高(P<0.05)。结果表明,日粮铜含量200～600mg/kg可引起肝脏病理损伤。

灯盏花素对肝纤维化大鼠的干预作用及机制

目的基于转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad2/胞外信号调节激酶1(ERK1)通路和Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)/核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)通路,探讨灯盏花素对肝纤维化(HF)大鼠的干预作用及潜在机制。方法将60只大鼠随机分为正常对照组,模型组,灯盏花素低、中、高剂量组(5.4、10.8、21.6 mg/kg)和秋水仙碱组(阳性对照,0.45 mg/kg),每组10只,雌雄各半。除正常对照组外,其余各组大鼠均以四氯化碳诱导构建HF模型。随后,各药物组大鼠灌胃相应药液,每天1次,连续28 d。观察各组大鼠的肝脏外观并计算其肝脏系数,检测其血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平和肝组织中ALT、AST、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,观察其肝组织炎症和纤维化情况,检测肝组织中TGF-β1、Smad、ERK1、Nrf2、Keap1、HO-1蛋白及mRNA的表达情况。结果与正常对照组比较,模型组大鼠肝脏可见大面积的白色结节灶、明显的炎症细胞浸润和胶原纤维沉积;其体重,肝组织中SOD、GSH-Px水平和Nrf2、HO-1蛋白及mRNA的表达水平均显著降低(P<0.05);肝脏系数,Masson染色阳性面积百分比,血清及肝组织中ALT、AST水平,肝组织中MDA水平和TGF-β1、Smad2、ERK1、Keap1蛋白及mRNA的表达水平显著升高(P<0.05)。与模型组比较,各药物组大鼠肝组织病变均有所改善,上述定量指标普遍逆转(P<0.05)。结论灯盏花素对大鼠HF有较好的干预作用,其作用可能与抑制TGF-β1/Smad2/ERK1通路来抗纤维化,调控Keap1/Nrf2/HO-1通路来抑制氧化应激有关。

Hr突变体转基因小鼠的构建和表型分析

无毛基因(Hr)定位于8p12,在染色体上跨越14 kb,包含19个外显子。无毛基因的自发突变能引起人和动物毛发脱落及相关毛发疾病的产生。为深入研究Hr基因的功能,本文利用Gateway技术构建Hr表达载体,在该基因的3 427位引入点突变(G→A),通过显微注射建立转基因小鼠。采用PCR方法鉴定出阳性的转基因小鼠,确定首建鼠,通过与C57BL/6小鼠回交后互交数代建系。观察转基因小鼠毛发生长发育规律。结果表明,成功构建了pRP(Exp)-EF1A>m Hairless mutant>IRES/EGFP真核表达载体,通过与野生型小鼠杂交获得阳性子代,进行同窝交配,第2代小鼠出生后14 d开始脱发,30 d左右脱落的毛发重新长出。取部分皮肤组织做石蜡切片,皮肤组织学观察发现,脱毛期无毛小鼠毛囊瓦解,真皮内形成大小不等的包囊,毛发重新生长时,真皮内见大量新生的毛囊。蛋白印迹实验表明,转基因小鼠脱发时HR蛋白表达量明显高于同龄阴性小鼠。本文成功建立稳定遗传的Hr突变的转基因小鼠品系,推测无毛基因突变引发转基因小鼠的脱发,为研究Hr基因的功能提供了良好的动物模型。

羟丙基倍他环糊精对SD大鼠血常规及血清生化指标的影响

目的观察羟丙基罐他环糊精（HP-β-CD）对大鼠临床症状、血液学、血液生化指标的影响。方法40只SD大鼠随机分为4组，羟丙基倍他环糊精低、中、高剂量组各10只分别给予羟丙基倍他环糊精500、1000、2000mg/kg，对照组给生理盐水，连续尾静脉给药6周。结果1000、2000mg／kg剂量组红细胞计数、血红蛋白含量和红细胞压积降低，尿素氮含量升高（P＜0．05或P〈0．01），2000mg/kg剂量组肌酐水平升高（P〈O．05）。结论羟丙基倍他环糊精1000、2000mg／kg剂量组能引起大鼠溶血和肾功能的减退。

高铜对雏鸡器官组织病理损害的研究

将420只1日龄艾维茵健雏,随机分为7组,分别饲以含铜量11 mg/kg的基础日粮和含铜量分别为100、200、300、400、500和600 mg/kg的6种高铜日粮6周,研究高铜对雏鸡的病理损害。结果显示,日粮含铜100和200 mg/kg对雏鸡有促生长作用。日粮铜水平达300 mg/kg以上时,对雏鸡器官组织造成不同程度的病理损伤,表现为肌胃角质层增厚呈黄褐色；肝呈浅黄色或深褐色,肝细胞脂肪变性；消化道上皮细胞变性坏死；免疫器官和肾、心脏、胰腺、大脑等器官的实质细胞肿胀；淋巴免疫器官体积缩小,淋巴细胞数量减少。超微结构观察发现,肝细胞胞浆和胞核内见有数量不等、大小不一的高电子密度的沉积物；凋亡的淋巴细胞染色质呈花瓣样、半月形或环形,聚集在核膜下。表明,肝、消化道和免疫器官是高铜损害的主要靶器官。

日粮高铜对雏鸡血清免疫球蛋白含量的影响

选用1日龄艾维茵肉鸡健雏420只,随机分为7组,分别喂以对照日粮(Cu11mg/kg)和高铜日粮(Cu100mg/kg,高铜Ⅰ组;Cu200mg/kg,高铜Ⅱ组;Cu300mg/kg,高铜Ⅲ组;Cu400mg/kg,高铜Ⅳ组;Cu500mg/kg,高铜Ⅴ组;Cu600mg/kg,高铜Ⅵ组)6周。结果显示,高铜Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组雏鸡血清免疫球蛋白含量与对照组比较差异不显著(P>0.05);高铜Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组雏鸡血清免疫球蛋白含量显著降低(P<0.05或P<0.01),并与日粮含铜量呈负相关。结果表明,日粮铜含量在400mg/kg及其以上可抑制免疫球蛋白的合成,导致雏鸡体液免疫功能受损。

高铜对雏鸡肝细胞周期和凋亡影响的研究

420只1日龄艾维茵肉鸡随机分为7组,分别喂以对照日粮(Cu 11 mg/kg)和高铜日粮(Cu 100 mg/kg,高铜Ⅰ组;Cu 200 mg/kg,高铜Ⅱ组;Cu 300 mg/kg,高铜Ⅲ组;Cu 400 mg/kg,高铜Ⅳ组;Cu 500 mg/kg,高铜Ⅴ组;Cu600 mg/kg,高铜Ⅵ组)6周,以流式细胞术和原位末端标记法(TUNEL)研究了高铜对雏鸡肝细胞周期和凋亡的影响。结果表明,日粮铜水平达到300 mg/kg以上时,肝细胞DNA直方图出现位于G1峰之前的亚G1峰(又叫AP峰),凋亡细胞比例与对照组比较差异显著(P<0.05)。TUNEL法检测,肝脏组织切片中出现被染成黄褐色的凋亡细胞,且检出率随日粮铜水平的升高而升高。日粮铜水平达到400 mg/kg以上时,肝细胞增殖分化受阻。

豫医卷毛大鼠与SD大鼠主要脏器系数及生长发育情况比较

目的:探讨豫医卷毛大鼠与SD大鼠主要脏器及生长特性的差异。方法:分别在21d龄、28d龄、60d龄和90d龄时测量20只豫医卷毛大鼠和20只SD大鼠(雌雄各半)的主要脏器质量、体质量及体长、尾长,计算各脏器占体质量的百分比(脏器系数)。结果:28d龄卷毛大鼠体长小于SD大鼠(P<0.05),60d龄卷毛雄鼠体质量、尾长大于SD大鼠(P<0.05)。28d龄、90d龄雄性卷毛大鼠脾脏系数小于SD大鼠(P<0.05),60d龄雄性卷毛大鼠胸腺系数小于SD大鼠(P<0.05),其余日龄2种大鼠之间比较各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:卷毛突变基因对大鼠的中期生长及免疫力有一定影响。

高铜对雏鸡淋巴细胞凋亡影响的研究

1日龄艾维茵肉鸡健雏420只,随机分为7组,分别喂以对照日粮(Cu 11 mg/kg)和高铜日粮(Cu 100mg/kg,高铜Ⅰ组;Cu 200 mg/kg,高铜Ⅱ组;Cu 300 mg/kg,高铜Ⅲ组;Cu 400 mg/kg,高铜Ⅳ组;Cu 500 mg/kg,高铜Ⅴ组;Cu 600 mg/kg,高铜Ⅵ组)6周,以流式细胞术和透射电镜的方法观察研究了高铜对雏鸡免疫器官淋巴细胞凋亡的影响。电镜下观察,与对照组比较,高铜Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ组免疫器官淋巴细胞发生凋亡的频率明显增高。发生凋亡的淋巴细胞表现为染色质凝聚、边集,细胞核呈新月形、“C”形、花环状(或圆斑状)及花瓣状。流式细胞术测定显示,高铜Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ组免疫器官淋巴细胞凋亡百分率也明显高于对照组和高铜Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组。上述研究结果表明,饲粮铜含量超过300 mg/kg可以诱导淋巴细胞凋亡。