DNA甲基化与肿瘤诊断

包括靶向性治疗在内的新疗法已使癌症患者的整体生存期有所延长，但对晚期恶性肿瘤患者而言，治愈率并无改善。缺乏检出早期癌症的能力是其根本原因。此外，目前应用的肿瘤临床分期和分型方法不能满足临床肿瘤治疗有效性评估的需求。因此，建立、整合包括肿瘤行为在内的表观遗传学病理机制新理念，并提出肿瘤分期和分型系统新标准实属当务之急。

老年急性胆囊炎腹腔镜胆囊切除术

目的总结老年急性胆囊炎腹腔镜胆囊切除术(laparoscop ic cholecystectomy,LC)经验。方法回顾性分析279例LC临床资料,其中急性结石性胆囊炎263例,单纯胆囊腺瘤8例,单纯胆囊息肉样病变5例,无明显原因3例。结果LC手术成功率87.5%(244/279),中转开腹手术35例,无严重并发症,无手术死亡。结论老年人常合并其他脏器疾病,LC围手术期危险性增高,应严格掌握手术适应证,正确处理合并症,术中放宽中转开腹指征是预防和减少并发症的关键。

人卵巢癌相关候选基因HE4(WFDC2)的转录调控主要由Sp1与位于-71和-48的Egr-1位点结合所介导

目的 阐明HE4基因转录调控机制的细节。方法 1.用半定量RT PCR的方法评估HE4基因在肿瘤细胞株中的表达情况 ;2 .以荧光素酶报告基因载体为基础 ,对HE4基因的上游顺序构建了 3′、5′缺失突变和一系列连接体扫描突变 ;3.通过瞬时转染 /体外双荧光素酶报告系统对这些重组质粒中插入片段进行启动子活性的分析 ;4 .针对蛋白和关键顺式区域的结合的特异性和能力 ,开展泳动滞后和抗体介导的超迁移分析。结果 通过对 ( 186 0 /+ 2 9)的HE4基因上游片段及其剪切体的分析 ,将HE4基因最小启动子确定为 10 7/+ 15的DNA片段。通过对连接体扫描突变体的分析 ,将关键的顺式作用元件确定在W4 5 ( 71/ 4 8)片段 ,生物信息学提示该区存在两个Egr 1位点。通过用已知的反式作用因子与报告基因质粒分别进行共转染 ,提示Sp1是最为有效的反式作用因子 ,而不是Egr 1。通过泳动滞后和抗体介导的超迁移实验 ,证实Sp1确实是参与作用的转录因子。结论 HE4基因的转录活性主要是由转录因子Sp1与位于 ( 71/ 4 8)区域的两个Egr 1位点结合所介导的。

3株肺癌细胞中9个肿瘤相关基因的启动子甲基化状态和部分基因表达的相关性

目的 对 3株肺癌细胞中 9个肿瘤相关基因的启动子甲基化状态和部分基因表达的相关性进行评估。方法 通过甲基化特异性多聚酶链反应法 (MSP)结合DNA测序来确定 3株肺腺癌细胞株 (A5 4 9,SH77和SPE A 1)中 9个基因的启动子CpG岛的甲基化状态 :APC ,CDH13,DAPK1,MGMT ,MYOD1,p16 INK4a,p73,RAR β和WT1基因。同时采用半定量RT PCR的方法来量度下列 5个基因的表达 :CDH13,MGMT ,MYOD1,RAR β和WT1基因。结果 在 9个受检基因之中 ,下列 4个基因在三株细胞中均呈同样的甲基化谱式 :仅有去甲基化 :APC和DAPK1,以及兼有甲基化和去甲基化 :p73和p16 INK4a。而其余 5个基因则表现为不同的甲基化模式。尽管 ,这 5个基因的表达谱式大体上符合其启动子CpG岛甲基化的表达静息的原则 ,个别的例外亦是有的。这提示着与DNA甲基化状态无关的机制可能也会参与该基因的表达调控。

XRCC 1 Arg399Gln基因多态性对铂类药物化疗胃癌患者预后的影响

目的:研究DNA修复酶X射线损伤交叉互补蛋白1(X-ray repair cross-complementary protein1,XRCC1)基因Arg399Gln多态性对接受铂类药物辅助化疗的胃癌患者预后的影响。方法:选取经病理学确诊的胃癌患者84例,采用含铂类药物的联合化疗方案进行辅助化疗。化疗前采集患者外周血,采用聚合酶链反应-连接酶检测反应(polymerase chain reaction-ligation detection reaction,PCR-LDR)技术检测XRCC1基因Arg399Gln的多态性。结果:84例胃癌患者中,49例(58.3%)携带XRCC1的399Arg/Arg基因型,30例(35.7%)携带Arg/Gln基因型,5例(6.0%)携带Gln/Gln基因型;截止到随访结束,分别有63.1%(53/84)和55.2%(43/84)的患者出现复发和死亡,其中携带Arg/Arg基因型的胃癌患者复发率和死亡率均显著低于携带Arg/Gln或Gln/Gln基因型患者(P<0.05)。COX多因素分析显示,携带Arg/Arg基因型的患者具有较好的无复发生存期和总生存期预后(P<0.05)。结论:XRCC1Arg399Gln基因多态性与术后胃癌患者接受铂类药物化疗后的预后有关,可以在一定程度上判断术后胃癌患者接受铂类药物化疗的预后情况。

ABCC8、CHFR、BMP3B、LOX、PRSS21和RASSF1A基因启动子的甲基化状态可能与3种乳腺癌细胞株对5-FU的敏感性相关

目的:寻找与乳腺癌细胞株间药物敏感性差异相关的基因启动子CpG岛甲基化异常,为DNA甲基化异常作为临床化疗敏感性预测手段提供依据。方法:用MTT法测定3种乳腺癌细胞株(Bcap-37、T47D和ZR-75-30)对9种化疗药物(紫杉醇、紫杉特尔、长春瑞宾、5-氟尿嘧啶(5-FU)、双氟去氧胞苷、表阿霉素、丝裂霉素、依立替康和顺铂)的敏感性;同时用甲基化特异性PCR检测23个基因在3种乳腺癌细胞株中的甲基化状态。结果:受试的3种乳腺癌细胞株仅对5-FU的敏感性有明显差异。其中Bcap-37(IC50:317.386μg/mL)对5-FU相对耐药,而ZR-75-30(IC50:6.676μg/mL)和T47D(IC50:73.076μg/mL)对5-FU相对敏感。23个基因中,有6个基因:ABCC8、CHFR、BMP3B、LOX、PRSS21和RASSF1A在敏感和耐药细胞株中的甲基化状态有差异。其中ABCC8、CHFR和BMP3B在5-FU耐药细胞株中呈相对高甲基化状态,而LOX、PRSS21和RASSF1A则在对5-FU敏感的细胞株中呈相对高甲基化状态。结论:本研究所发现的6个基因的甲基化状态可能与乳腺癌细胞株对5-FU化疗敏感性相关,为下一步进行临床评估和机制探讨提供了依据。

非小细胞肺癌11个肿瘤相关基因启动子CpG岛甲基化的研究

目的观测11个基因在非小细胞肺癌中的甲基化谱,探讨肺癌基因诊断的新途径。方法应用甲基化特异性的PCR(m ethyl-spec ific PCR,MSP)。方法检测甲基化率,回收产物测序。结果11个基因中有6个基因在癌组织中的甲基化率均>40%并且高于癌旁组织,6个基因的甲基化率分别是APC 61%,RASSF1 a 55%,p73 45%,p16 INK4 a 43%,CDH13 43%及RAR-β41%,>65岁组RASSF1 a、p16 INK4 a和RAR-β甲基化率高于≤65岁组;吸烟史组APC、RASSF1 a、p16 INK4 a和CDH13的甲基化率高于无吸烟史组;腺癌组APC、CDH13和RAR-β甲基化率高于鳞癌组,而鳞癌组p16 INK4 a甲基化率高于腺癌组;RASSF1 a和p16 INK4 a甲基率随TNM临床分期而逐渐增加。结论6个基因甲基化率的发生具有肿瘤特异性,并且相关基因的甲基化与NSCLC患者的病理生理密切相关,我们的研究为早期诊断NSCLC提供帮助。

非功能性胰岛细胞瘤31例诊断与治疗

目的探讨非功能性胰岛细胞瘤的诊断与治疗。方法回顾性分析31例非功能性胰岛细胞瘤的临床特点。结果31例中良性16例，恶性15例；位于胰头9例，胰体7例，胰尾12例，累及全胰3例；行肿瘤切除8例，胰体尾切除6例，胰体尾切除加脾切除2例，胰体尾切除加Roux-Y吻合术2例，胰头十二指肠切除4例，全胰切除1例，胆囊空肠吻合术3例，局部活检5例。良性肿瘤者术后除1例死于心肌梗塞外其他均健在。恶性者中，未行根治术者均于26个月内死亡；行根治术者中，2例行胰头十二指肠切除及1例行全胰切除者于9～20月因复发死亡，其他均健在。结论加强对非功能性胰岛细胞瘤的认识，争取手术切除，可取得良好的疗效。

胃切除术后近期上消化道大出血再手术治疗临床分析(附14例报告)

目的 探讨胃切除术后近期上消化道大出血的原因及再手术治疗。方法 对我院 1986～ 2 0 0 2年间收治的 14例胃切除术后近期 (2 4～ 72h内 )上消化道大出血行再手术治疗的病例资料进行回顾性分析。结果 本组 14例 ,术后吻合口出血 4例 ,残胃粘膜损伤出血 2例 ,残胃肠套叠出血 2例 ,十二指肠残端出血 1例 ,遗漏十二指肠球后溃疡及贲门粘膜撕裂出血各 1例 ,原因不明出血 3例 ,均经再次手术治疗后痊愈。结论 胃切除术后近期上消化道大出血原因多为操作不当及病灶遗漏所致 ,出血灶直视下缝扎为有效止血方法。

El Tor 型霍乱弧菌及其细胞壁缺陷型分子遗传学背景的研究

El Tor 型霍乱弧菌(以下简称 El Tor 弧菌)可以在人工培养条件下长期存活。当微环境改变时可形成细胞壁有不同程度缺陷的菌株如抗噬菌体突变株或 L 型菌株。我们以 DNA 酶切图谱和 El Tor 弧菌溶血素、神经氨酸酶基因探针杂交图谱为参数对 El Tor 弧菌的野生型及其细胞壁缺陷型变异株在遗传背景上进行了比较分析研究。结果提示细胞壁缺陷型菌株与其野生型在DNA 水平上高度同源。此外,文中还介绍了一种从 L 型菌株中制备 DNA 的方法。

脾转移性肿瘤临床分析(附22例报告)

目的 分析脾转移性肿瘤的临床特点。方法 对 2 2例脾转移性肿瘤临床资料进行回顾性分析。 结果 原发灶分别为卵巢癌、肺癌及结肠癌各 4例 ,胃癌 3例 ,乳腺癌及肝癌、胰腺癌分别 2例 ,肾癌 1例。 4例为单纯脾转移 ,伴多发脏器转移 1 8例 ,分别经 B超、CT、MRI、选择性脾动脉造影术前诊断 ,手术切除 7例 ,探查活检 1 0例 ,5例未手术。目前死亡 1 6例 ,其中 1年内死亡 1 1例。 结论 脾转移瘤少见 ,影像学检查是脾转移瘤主要术前诊断方法 ,强调以手术中心结合化疗。

垂体生长激素腺瘤靶向性基因治疗系统的构建及实验研究

目的构建并评价垂体生长激素腺瘤靶向性基因治疗系统。方法构建GE7系统介导的生长激素启动子调控的基因治疗系统,通过垂体生长激素腺瘤GH3细胞及对照细胞的体外基因转染实验,观察此基因治疗系统对GH3细胞的转染能力和靶向性。结果成功构建基因治疗系统,基因转染后GH3细胞特异性表达报告基因,对照的HO8910PM和U-2OS细胞报告基因的表达不明显。结论应用GE7转染的生长激素启动子调控的基因治疗系统能靶向性地将目的基因转入垂体生长激素腺瘤细胞。

垂体生长激素腺瘤细胞表皮生长因子受体的表达

目的 了解大鼠垂体生长激素腺瘤 (GH3 )细胞的表皮生长因子受体 (EGFR)的表达情况。方法 应用免疫组化的方法检测GH3 细胞及阴性对照U 2OS细胞和阳性对照HO8910PM细胞的EGFR表达情况。结果 GH3 细胞和HO8910PM细胞明显黄染 ,U 2OS细胞无明显染色 ;GH3 、U 2OS和HO8910细胞表达EGFR的阳性细胞率分别为 90 .5 7%、4 .84 %和 93.33%。结论 垂体生长激素腺瘤细胞中存在着广泛的EGFR表达 ,而且具有较高的表达强度。

垂体生长激素腺瘤基因治疗的动物实验研究

目的利用GE7系统介导的生长激素启动子调控毒性基因治疗裸鼠垂体生长激素腺瘤,评价该系统的治疗效果。方法构建GE7系统介导的生长激素启动子调控基因治疗系统,对垂体生长激素腺瘤裸鼠模型进行治疗,并观察其治疗效果。结果治疗组裸鼠肿瘤体积缩小,而各对照组肿瘤体积均有不同程度的增加;基因治疗后荷瘤裸鼠生存期超过120d,明显超过对照组的40d左右(P<0.01)。结论GE7系统介导的生长激素启动子调控自杀基因治疗系统能有效治疗垂体腺瘤动物模型。

启动子甲基化对抑癌基因转录的影响及其5-Aza-CdR干预作用的研究

目的在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株水平观察基因启动子CpG岛甲基化与mRNA转录之间的关系,探讨5AzaCdR(5azaeoxycytidine)的干预作用。方法应用甲基化特异性的多聚酶链反应(MSP)和RTPCR分别检测甲基化的发生和mRNA的转录水平。结果细胞株A549甲基化的基因为MGMT、RASSF1a,SH77甲基化的基因为MGMT、RASSF1a和RARβ,NCl甲基化的基因包括APC和RARβ。4个抑癌基因发生甲基化的细胞株mRNA均不转录,而经5AzaCdR处理后均恢复转录。结论NSCLC细胞株中抑癌基因启动子甲基化导致mRNA转录失活,5AzaCdR具有潜在的去甲基化作用使基因恢复转录。

高职软件技术专业项目化课程的探索与思考

本文按照教育部16号文指出的高职教育改革方向,对高职软件技术专业的教学改革过程中课程项目化的问题进行了探讨。项目化课程以培养学生的实际工作能力为主要目标,围绕与专业相对应的职业岗位的需要,组织课程教学内容,并以完成具体的工作任务为主要教学和学习方式的课程模式。通过项目化课程的实践,发现了学生对项目化课程的需求,项目化课程把学生的能力培养放在首位,便于学生化最少的时间得到关键的训练,让学生获得项目经验和成就感,增强自信心。同时也探索了项目化课程对教师的挑战,教师角色的转换,"双师型"能力的提高等等。最后指出了课程项目化的意义。

ETS-2转录因子与启动子的+1^+40区结合是肝癌相关基因HCCS1的转录所必需

目的:阐明HCCS1基因启动子的转录调控机制。方法:引物延伸法确定HCCS1基因的转录起始点,通过限制性内切酶酶切介导对HCCS1基因全长启动子做进行性的5'缺失,用瞬时转染/双荧光素酶报告系统确定最小启动子,连接体扫描突变分析来确定启动子功能的关键顺式序列区,电泳迁移率实验并附以抗体介导超迁移实验来确定关键的反式因子。结果:HCCS1基因的转录起始点被定位于-177/-178处的C残基(ATG为+1)。最小启动子位于-60^+148区(转录起始点为+1)之中。在关键的调控区(+1^+40)所含的已知顺式序列中有2个ETS转录因子识别序列,而不是p53或NF-κB,识别序列与其相应的转录因子(ETS-2)的结合有着重要的功能内涵。结论:ETS-2转录因子与启动子的+1^+40区中相应的顺式序列结合,在肝癌相关基因HCCS1的转录活性中起着关键作用。

GE7导入系统介导I型单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因联合5-FU治疗卵巢癌的研究

目的 :观察HSV1 tk/GCV基因治疗系统与 5 FU序贯应用 ,对卵巢上皮癌SKOV3细胞的体内杀伤效应。方法 :建立裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型 ,免疫组化检测移植瘤组织中表皮生长因子受体 (EGFR)的表达 ;于瘤周分别注射GE7 β gal、GE7 HSV1 tk复合物 ,用X gal及RT PCR检测两种基因的表达 ;取 2 4只荷瘤裸鼠随机分成空白对照组、5 FU组、GE7 HSV1 tk/GCV组及GE7 HSV1 tk/GCV/5 FU组进行实验 ,观察肿瘤体积及重量的变化 ,计算各组抑瘤率。结果 :移植瘤中有较高的EGFR表达 ,β gal基因及HSV1 tk基因经瘤周注射导入移植瘤后均有不同程度的表达 ,5 FU组、GE7 HSV1 tk/GCV组及GE7 HSV1 tk/GCV/5 FU组抑瘤率分别为 14 .6 %、39.4 %和 6 0 .5 % (P <0 .0 5 )。结论 :HSV1 tk/GCV和 5 FU序贯治疗能有效地抑制肿瘤生长 ,并能有效地抑制单纯使用HSV1 tk/GCV系统治疗后的远期反跳作用 ,提高卵巢癌基因治疗的远期疗效。