一种简便的固相单抗富集CD4^+细胞方法

目的 探索建立一种富集CD4 + 细胞的方法 ,藉以提高免疫细胞化学法计数Th1/Th2细胞的准确性。方法 取 2 1份健康人外周抗凝血 ,无菌条件下分离单个核细胞 (PBMC) ,用CD4McAb包被 2 4孔细胞培养板 ,加入PBMC ,温育后吸弃未结合细胞 ,继而吸打使结合于板上的细胞脱落 ,收集细胞 (阳性选择 ) ;用CD8McAb、CD16McAb、WuBMcAb包被 2 4孔细胞培养板 ,加入PBMC ,温育后吸取未结合细胞 (阴性选择 )。用生物素 链霉亲和素免疫细胞化学法检测富集前及用两种选择方法富集所得细胞中CD4 + 细胞 ,计算百分率、活细胞率和CD4 + 细胞回收率。结果 富集前 2 1份样品的PBMC中CD4 + 细胞百分率 4 3.7%± 3.1% ,经阳性选择和阴性选择后CD4 + 细胞百分率分别为 90 .9%± 2 .8%和 76 .2 %± 2 .5 % ,经卡方检验 ,x2 >x20 .0 0 1,差异有非常显著性 ,阳性选择富集的CD4 + 细胞纯度显著高于阴性选择。经阳性选择和阴性选择后 ,CD4 + 细胞回收率分别为 6 4 .3%± 4 .9%和 6 9.7%± 5 .2 % ,经卡方检验 ,x2 >x20 .0 0 1,差异有非常显著性 ,阴性选择法的细胞回收率明显高于阳性选择法。富集后活细胞率保持在 95 %以上。结论 所建立的固相单抗方法可有效富集CD4 + 细胞并保持很高的活细胞率 ,其中阳性选择是首选方法 ;CD4 + 细?

抗HCV抗体和抗TP抗体筛查试验的假阳性问题不容忽视

阐述了抗丙型肝炎病毒(HCV)抗体和抗梅毒螺旋体(TP)抗体筛查试验的假阳性问题和应对措施,强调检测抗HCV抗体和抗TP抗体应包括抗体的筛查试验和针对筛查呈重复阳性反应结果而进行的更特异的补充确证试验,旨在提请临床和采供血机构的免疫学检验工作者对抗HCV抗体和抗TP抗体筛查试验的假阳性问题予以足够重视。

重视乙型肝炎病毒感染者细胞免疫的临床研究

乙型肝炎病毒(HBV)感染者的细胞免疫功能是其识别并清除病毒(急性自限性感染)抑或表现为免疫耐受(慢性持续感染)的关键因素,与疾病的预后和转归密切相关,从而决定了HBV感染者细胞免疫的临床监测的必要性。本文评价了"乙型肝炎病毒感染者细胞免疫的临床监测"专题刊登的综述和论文的特点。基础免疫学研究的发展将给临床免疫学研究提供更广的领域。期待临床和实验室对HBV感染者细胞免疫临床研究的重视。

细胞-酶联免疫吸附试验及其应用

酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）问世数十年来，广泛应用于检测各种体液中的可溶性抗原或抗体。在传统的ELISA中，微孔板上包被的是可溶性的抗体或抗原，然而在免疫学研究和临床检测时，需要了解免疫活性细胞表面表达的特定分子以对细胞特性进行认定和分类，亦需测定抗某种细胞的抗体或评价某种细胞的功能，因而传统的ELISA中的包被物或受检物就要被替代，检测模式有所改变。

检测细胞内细胞因子的生物素-链霉亲和素免疫细胞化学法的建立及初步应用

目的 建立检测细胞内细胞因子的生物素-链霉亲和素免疫细胞化学法（BSA—ICC）并作临床初步应用。方法 从健康人外周血单个核细胞（PBMC）中富集CD4细胞，加入莫能霉素，用不同浓度的佛波醇酯（PMA）和钙离子载体（A23817）诱导CD4细胞不同时间，比较其胞内表达白细胞介素-2（IL-2）／白细胞介素-4（IL-4）的细胞百分率，确定最适诱生条件；用不同稀释度的IL-2McAb、IL-4McAb、不同浓度的生物素化羊抗鼠IgG（bio-SAMIgG）和辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素（HRP-SA）作棋盘配比试验，确认McAb、bio-SAMIgG和HRP—SA的最适浓度，根据上述结果建立了检测细胞内细胞因子的BSA—ICC法。用所建方法检测20名健康献血员、16例妇科良性疾病和18例妇科恶性肿瘤患者CD4细胞中表达IL-2／IL-4细胞的百分率。结果 诱导CD4细胞胞内表达IL-2和IL-4的细胞最高百分率的PMA和A23817浓度分别为100μg/L和2．0μmol／L，诱导高峰时间分别为5和7h，BSA-ICC法中所用IL-2McAb、IL-4McAb最适稀释度分别为1：20和1：40，bio—SAMIgG和HRP-SA浓度分别为10～15μg/ml和15μg/ml。20名健康献血员、16例妇科良性疾病和18例妇科恶性肿瘤患者CD4细胞中分泌IL-2的细胞百分率分别为（45．90±4．39）％、（37．28±2．67）％和（25．19±3．49）％，分泌IL-4的细胞百分率分别为（10．5±1．50）％、（9．94±1．06）％和（16．13±2．50）％，IL-2^＋CD4^＋／IL-4^＋CD4^＋比值分别为3．65±0．94、3．55±0．76和1．27±0．26。结论 所建方法可用于T辅助（Th）细胞亚型的测定，从而判断Th细胞的极化状态。妇科恶性肿瘤患者Th细胞功能失衡极化，呈Th2反应，可能与恶性肿瘤的发生有关。

检测肌红蛋白的半定量金免疫层析法的研究

目的建立一种半定量检测人血清肌红蛋白的金免疫层析方法,用于急性心肌梗死的快速检测。方法一株抗人肌红蛋白单克隆抗体标记胶体金,另一株抗人肌红蛋白单克隆抗体包被膜作为检测线,兔抗鼠IgG抗体包被膜作为对照线,建立半定量金免疫层析测定方法。结果本法测定结果分为3个半定量判定区段：〈70、70-150和〉150μg/L;与化学发光免疫测定对照检测83份血清标本,符合性良好。结论金免疫层析测定法具有半定量的特点,方法简便、快速、准确,适用于急性心肌梗死的早期检测。

结直肠癌C-erbB-2基因启动子CpG岛甲基化状态及其与C-erbB-2蛋白表达的关系

目的了解结直肠癌组织C-erbB-2基因启动子区CpG岛甲基化状态、C-erbB-2蛋白表达水平及两者之间的关系。方法取经病理确诊的43例结直肠癌组织和相应癌旁组织,分别用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和免疫组织化学法(IHC)检测C-erbB-2启动子区CpG岛的甲基化和C-erbB-2蛋白表达水平。结果癌组织和癌旁组织中C-erbB-2启动子区CpG岛甲基化率分别为44.2%和74.4%,差异具有统计学意义(P=0.004)。癌组织和癌旁组织中C-erbB-2蛋白过度表达率分别为67.4%和27.9%,差异具有统计学意义(P=0.000)。C-erbB-2蛋白表达水平与肿瘤分期相关。结直肠癌组织C-erbB-2启动子区CpG岛甲基化状态与C-erbB-2蛋白表达水平呈显著相关(r=0.331,P=0.03)。结论结直肠癌中C-erbB-2基因启动子区CpG岛的低甲基化可能在C-erbB-2蛋白过度表达中起一定作用,有望成为有用的肿瘤分子诊断标记和治疗靶点。

乳腺癌C-erbB-2蛋白表达与基因CpG岛甲基化状态和mRNA表达的关系

目的探讨乳腺癌C-erbB-2蛋白表达与基因CpG岛甲基化状态和mRNA表达的关系。方法取经病理确诊的52例乳腺癌组织,分别用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)、免疫组织化学法(IHC)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测C-erbB-2启动子CpG岛甲基化状态、C-erbB-2蛋白表达水平和C-erbB-2 mRNA的表达。结果 C-erbB-2蛋白阴性和阳性的2组乳腺癌组织的非甲基化率分别为0%和23.5%,CpG岛低甲基化与C-erbB-2蛋白表达呈显著正相关(r=0.413,P=0.03)。C-erbB-2蛋白阴性和阳性组织中C-erbB-2 mRNA表达量分别为0.098±0.041和0.20±0.062,与C-erbB-2蛋白表达呈显著正相关(r=0.356,P=0.03)。结论 C-erbB-2启动子CpG岛的低甲基化和C-erbB-2 mRNA的表达均与C-erbB-2蛋白的高表达相关,C-erbB-2基因启动子的低甲基化可能在C-erbB-2蛋白过度表达中起一定作用。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌PBP2a的原核表达及多克隆抗体的制备

目的研究耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)青霉素结合蛋白2a(PBP2a)的原核表达,及PBP2a多克隆抗体的制备。方法根据基因文库登录的mecA基因的编码序列,设计合成了1对寡核苷酸引物,应用PCR法从MRSA基因组中获得编码PBP2a全长的DNA,将此目的基因片段克隆至pET32a(+)载体,转化E.coliBL21(DE3);经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达后,利用Ni2+亲和层析技术纯化目的蛋白;用目的蛋白免疫小鼠3～8次后,收获血清并鉴定。结果成功构建了PBP2a原核表达载体,并获得了高效表达;利用纯化的蛋白制备了理想的多克隆抗体。结论利用分子克隆技术,获得了高纯度的PBP2a蛋白并制备了多克隆抗体,为其进一步研究奠定了基础。

结合胆红素和非结合胆红素的直接测定在高胆红素血症中的应用

目的评价结合胆红素(CBil)和非结合胆红素(UBil)的直接测定在胆汁瘀积性黄疸(CJ)、肝细胞性黄疸(HJ)和新生儿溶血性黄疸(NHJ)中的价值以及δ胆红素/总胆红素(δBil/TBil)比值对CJ患者手术疗效判断的意义。方法用Vitros 250型干式生化仪及配套干片测定18例CJ患者和20例HJ患者血浆TBil、CBil和UBil,汁算δBil;13例CJ患者在行胆总管切开引流术后3 d、5 d、7 d复测。同法测定22例NHJ患儿血浆CBil和UBil,计算新生儿总胆红素(NBil)。结果CJ组CBil/TBil比值与HJ组比较差异有统计学意义(P=0.000),而UBil/TBil比值、δBil和δBil/TBil比值2组间差异均无统计学意义(P=0.241、0.067、0.090)。6例经胆总管切开引流术治疗后排泄良好的CJ患者的TBil、CBil和UBil在术后第3 d起逐渐下降,δBil缓慢下降,δBil/TBil比值由术前的0.16～0.44升至0.52～0.78。7例治疗后排泄不良的CJ患者其TBil、CBil和UBil在术后5 d～7 d缓慢减低,δBil变化甚微,δBil/TBil在0.20～0.46范围内波动。NHJ患儿血浆NBil、UBil及UBil/NBil比值均明显增高。结论CBil和UBil的直接测定及δBil/TBil比值对CJ、HJ和NHJ的诊断和/或鉴别诊断以及CJ患者手术疗效的判断均有很好的应用价值。

流式细胞术检测抗中性粒细胞抗体方法的建立及临床初步应用

目的建立适用于临床的流式细胞术(FCM)检测抗中性粒细胞抗体(ANA)的方法,并作临床初步应用。方法采用FCM,以前向散射和侧向散射参数区分全血标本中的淋巴细胞和粒细胞,设定粒细胞门,用CD16b-藻红蛋白(PE)和CD177-别藻蓝蛋白(APC)单克隆抗体分别检测中性粒细胞中表面表达CD16b和CD177抗原细胞的百分率。用所建方法检测健康对照32名,确定参考范围,以此作为判断受检者血液中抗CD16b或CD177抗体存在与否的依据。检测外周血白细胞(WBC)总数<4.0×109/L且中性粒细胞绝对计数(ANC)<2.8×109/L的59例患者的CD16b和CD177百分率,并对其中中性粒细胞表达CD16b和/或CD177百分率低于参考范围(即判为相应抗体阳性)的患者给予激素治疗,观察疗效。结果健康人群中性粒细胞中表达CD16b和CD177的百分率分别为98.36%±1.53%和74.95%±11.07%,据此分别确定了健康人群中性粒细胞表达CD16b和CD177的参考范围分别为CD16b>95.36%、CD177>53.25%(即>x珋-1.96s)。59例患者中有23例(39.0%)ANA阳性,其中ANC<2.0×109/L患者的ANA阳性率(50.0%)远高于ANC>2.0×109/L患者(27.6%)。ANA阳性患者经激素治疗后,WBC和ANC上升。结论 FCM检测抗中性粒细胞CD16b和CD177抗体是自身免疫性中性粒细胞减少症(AIN)实验简便、快捷的诊断方法,有助于AIN的诊断、鉴别诊断和疗效判断。

一个有希望的卵巢癌新标志物——人附睾上皮分泌蛋白4

卵巢癌（ovarian cancer,OC）是严重威胁女性健康的恶性肿瘤,发病率和死亡率在妇女恶性肿瘤中分别占第5位和第4位[1],在妇科恶性肿瘤中高居第3位和第1位[2]。由于OC早期症状隐匿,组织学筛查取材困难,检测方法缺乏,超过70%的患者发现时已为中晚期。90%以上Ⅰ期检出的OC患者可以通过常规治疗痊愈[3,4]。

急性胰腺炎细胞因子检测及Binder评分临床分析

目的 了解细胞因子及器官功能和代谢合并症Binder评分在急性胰腺炎的变化从而早期识别重症急性胰腺炎(SAP)以利治疗。方法 应用化学发光免疫分析法检测83例急性胰腺炎及正常对照组30例的血清细胞因子IL6、IL8和TNF-α,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL10的含量,结合Binder评分作出临床分析。结果 重症和轻症急性胰腺炎(MAP)细胞因子较正常对照组F明显增高(P<0.05),SAP组又较MAP组增高(P<0.05),Binder评分相应升高(P<0.01),差别有显著意义。结论 细胞因子检测结合Binder评分有助临床识别轻、重症急性胰腺炎且简捷易行。

慢性乙肝患者外周血单个核细胞mIL-2R的检测

用生物素-链霉亲和素免疫细胞化学法检测慢性乙型肝炎（CH－B）患者外周血单个核细胞（PBMC）静息状态及PHA诱导后膜白介素-2受体（mIL－2R）表达水平，结果显示CH－B患者T淋巴细胞处于部分激活状态，其对PHA的应答能力未见明显低下．CH－B患者PHA诱导后mIL－2R表达水平可作为评价病情和考核疗效的指标之一。

B淋巴细胞的活化标志及其在慢性肾衰竭的临床意义

目的 以CD2 3分子作为B淋巴细胞活化的标志 ,观察慢性肾衰 (CRF)维持性血液透析 (HD)患者B淋巴细胞激活状态。方法 以金黄色葡萄球菌CowanI株菌体 (SAC)与健康人外周血单个核细胞 (PBMC)数 5 0∶1的比例 ,以终浓度 5 0 μg/L的佛波醇酯 (PMA)分别培养PBMC 12h、2 4h和 5 0h ;用生物素链霉亲和素免疫细胞化学法 (BSA ICC)检测CD2 3 +细胞百分率 ;以速率散射比浊法检测SAC或PMA刺激 5 0h的上清液中IgG水平 ;以双抗体夹心ELASA检测血清可溶性CD2 3 (sCD2 3 )。结果 未经刺激的健康人和CRF HD患者PBMC中CD2 3 +细胞百分率分别为 ( 6.6± 0 .9) %和 ( 17.9± 3 .7) %差异有显著性 (P <0 .0 1)。健康人PBMC经SAC刺激12h、2 4h、5 0h后CD2 3 +细胞百分率分别为 ( 8.8± 1.7) %、( 13 .0± 1.6) %和 ( 16.2± 1.9) % ,与无药对照管比较差异有显著性 (P <0 .0 1) ;经PMA刺激 12h、2 4h后CD2 3 +细胞百分率分别为 ( 17.0± 2 .3 ) %、( 3 1.5± 2 .9) % ,与无药对照管比较差异有非常显著性 (P <0 .0 0 1) ;经SAC或PMA刺激 5 0h培养上清液IgG含量分别为 ( 9.1± 4.6) g/L和 ( 14.6± 5 .7)g/L ,后者与无药对照管 ( 7.3± 3 .7g/L)差异有显著性 (P <0 .0 1)。健康人和CRF HD患者血清sCD2 3含量分别为 ( 1.8± 0 .

联合高压氧治疗肝硬化腹水疗效观察

目的 观察联合高压氧(HBO)治疗肝硬化失代偿期腹水的疗效。方法 肝硬化失代偿期腹水60例，随机分为两组。治疗组29例，在内科常规治疗的基础上，联用中型医用高压氧舱。对照组3l例仅接受内科常规治疗。观察治疗前后肝功能、体重、血、尿电解质变化、凝血酶原时间（PT)及血中吲哚氰绿15min潴留率(Indocynine Green Ratel5，简称ICGR15)变化。结果 联用高压氧治疗组病人的肝功能改善明显，腹水明显消退，ICGRl5下降，差异有显著意义(P＜0．01)。治疗组疗效明显优干对照组，治疗组总有效率为86．21％，对照组总有效率为64．52％。差异有显著意义(P＜0．05)。结论 高压氧治疗肝硬化腹水可增加肝细胞供氧．明显改善肝功能，有利于腹水消退。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌PBP2a的真核表达及其在抗体鉴定中的应用

目的利用杆状病毒表达系统表达耐甲氧西林金黄色葡萄球菌青霉素结合蛋白2a（PBP2a）。方法用EcoRI和BamHI双酶切pGEMT-meeA重组质粒DNA，回收目的基因mecA，与pFastBacl质粒连接转化入含有穿梭载体bacmid的大肠埃希菌DHl0Bac中，筛选重组穿梭载体Bacmid-mecA并转染Sf9细胞，获取完整的重组杆状病毒。用免疫荧光（IFA），Westernblot法进行蛋白鉴定。结果成功地获得含mecA基因的重组杆状病毒。杆状病毒感染Sf9细胞形态变化明显，能够表达出与PBP2a多克隆抗体相结合的蛋白。结论利用Bac—to—Bac杆状病毒表达系统成功地表达了PBP2a蛋白。