IL-1β通过激活ERK1/2信号通路抑制人脐带间充质干细胞CD200表达抑制巨噬细胞M2极化

目的探究白细胞介素1β(IL-1β)调控人脐带间充质干细胞CD200表达及其对巨噬细胞极化的影响及作用机制。方法无血清培养基分离培养获得人脐带间充质干细胞(hUC-MSC),形态学观察及流式细胞术检测CD73、CD90、CD105、CD14、CD34、CD45、人类白细胞抗原DR(HLA-DR)的表达,确定间充质干细胞属性;20 ng/mL IL-1β处理hUC-MSC 24 h,流式细胞术检测CD200阳性细胞率,实时定量PCR和Western blot法检测CD200 mRNA和蛋白表达水平;佛波酯(PMA)诱导THP-1巨噬细胞活化,并与IL-1β处理感染CD200过表达慢病毒的hUC-MSC共培养,流式细胞术检测CD11c和CD206阳性细胞比例;IL-1β联合细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)特异性抑制剂PD98059处理hUC-MSC,Western blot法检测细胞丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号分子与CD200的表达。结果IL-1β显著下调hUC-MSC CD200蛋白表达与CD200阳性细胞率;过表达CD200显著上调hUC-MSC CD200表达,且CD200过表达hUC-MSC提高巨噬细胞CD206阳性细胞比率;IL-1β激活hUC-MSC的ERK1/2信号通路,PD98059上调IL-1β处理后hUC-MSC中CD200的蛋白表达。结论IL-1β通过激活ERK1/2信号通路抑制CD200的表达,进而抑制hUC-MSC对巨噬细胞向M2型极化的促进作用。

枸杞多糖经自噬抑制烧伤创面角质细胞凋亡的作用机制

背景:枸杞多糖具有多种生物活性,研究发现其具有促进创面愈合的潜在效用。目的:探讨枸杞多糖在肿瘤坏死因子α介导角质细胞凋亡中的作用以及对烧伤创面愈合的作用。方法:①体外实验:将角质细胞分4组培养,正常组加入含体积分数15%胎牛血清及1%谷氨酰胺的α-MEM培养基(完全培养基),阳性对照组加入含枸杞多糖的完全培养基,模型组加入含肿瘤坏死因子α的完全培养基,实验组加入含枸杞多糖与肿瘤坏死因子α的完全培养基。培养24 h后,采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡蛋白Cleaved caspase-8、TNF R1、FADD及自噬蛋白LC3的表达。在正常组、模型组、实验组的基础上,再增加自噬抑制剂组(加入含3-甲基腺嘌呤的完全培养基)、自噬抑制剂+枸杞多糖组(加入含枸杞多糖、肿瘤坏死因子α与3-甲基腺嘌呤的完全培养基),培养24 h后,采用流式细胞术检测角质细胞凋亡情况。②体内实验:采用随机数字表法将6只SD大鼠分为对照组与实验组,每组3只。在每只大鼠背部制作4个直径2 cm的深Ⅱ度烧伤创面模型,造模24 h后,对照组与实验组小鼠创面分别涂抹生理盐水、枸杞多糖溶液,1次/d。治疗后定期观察创面愈合情况,治疗后28 d取材,观察创面病理形态。结果与结论:①体外实验:单独加入枸杞多糖不影响角质细胞的增殖、凋亡与凋亡及自噬蛋白的表达;加入肿瘤坏死因子α后,角质细胞增殖受到抑制、凋亡率增加、凋亡及自噬蛋白的表达升高,枸杞多糖可拮抗肿瘤坏死因子α介导的上述作用;枸杞多糖联合自噬抑制剂组可进一步降低角质细胞的凋亡率;②体内实验:实验组大鼠治疗后12,16,20,24,28 d的创面愈合率均高于对照组(P<0.05,P<0.01);治疗后28 d的苏木精-伊红染色显示,与对照组相比,实验组大鼠创面表皮完整、清晰;③结果表明:枸杞多糖通过抑制角质细胞的自噬及凋亡来保护皮肤表皮组织的完整性,促进创面的愈合。

枸杞多糖联合奥沙利铂可逆转结肠癌干细胞的耐药

背景:结肠癌临床主要采用以氟尿嘧啶、伊立替康及奥沙利铂为基础的治疗方法,研究发现这些药物的转运与ABC转运蛋白G家族成员2(ATP-binding cassette transport protein of G2,ABCG2)等膜转运蛋白相关,然而当患者对这些化疗药物产生耐药后,ABCG2的高表达致使治疗效果明显下降,引起了结肠癌的耐药问题。临床急切需要新的药物及治疗方法来提高疗效,枸杞多糖具有广泛的生物学活性,将多糖作为抗肿瘤药物,可以克服化疗和放疗过程中杀死肿瘤细胞的同时对机体正常细胞的损伤。目的:通过体外实验探索枸杞多糖联合奥沙利铂对结肠癌干细胞耐药的逆转作用,进而探讨枸杞多糖逆转结肠癌耐药的可能分子机制。方法:选用结肠癌细胞株HCT116以及奥沙利铂耐药细胞株HCT116-OXR进行体外实验,采用CCK8检测细胞增殖情况确定枸杞多糖和奥沙利铂的最适干预浓度和干预时间,进一步分为HCT116对照组,HCT116-OXR空白处理组,枸杞多糖组(2.5 mg/mL枸杞多糖),奥沙利铂组(10μmol/L奥沙利铂),枸杞多糖+奥沙利铂组(2.5 mg/mL枸杞多糖+10μmol/L奥沙利铂),流式细胞仪检测细胞凋亡情况,免疫荧光和Western blot检测磷酸甘露糖异构酶(phosphomannose isomerase,PMI)和ABCG2的表达,Western blot检测PI3K,AKT,Bcl-2和Bax的蛋白表达水平。结果与结论:①HCT116-OXR相较HCT116对枸杞多糖更敏感(P<0.05);②与HCT116-OXR空白处理组比较,奥沙利铂联合枸杞多糖促进了HCT116-OXR细胞凋亡(P<0.05),Bcl-2蛋白表达明显下调(P<0.05),Bax蛋白表达明显上调(P<0.05),ABCG2、PMI、PI3K、AKT的蛋白表达明显下调(P<0.05);③结果表明枸杞多糖通过抑制PMI/PI3K/AKT通路逆转结肠癌耐药,为研究枸杞多糖增敏化疗作用的分子机制奠定了基础。

干扰素-γ对人胎盘胎儿来源间充质干细胞免疫调节功能的影响

目的:从人胎盘组织中分离胎儿来源间充质干细胞(MSCs),并探讨干扰素-γ(IFN-γ)对人胎盘胎儿来源间充质干细胞(hfPMSCs)免疫调节功能的影响。方法:采用酶消化法分离人胎盘胎儿侧MSCs,通过流式细胞仪检测细胞表面分子CD73、CD90、CD105、CD14、CD34、CD45和HLA-DR,并利用D2S1399、D10S2325、D18S535和GATA198B05四个STR基因座对细胞属性进行鉴定分析;10 ng/mL IFN-γ诱导处理后,利用定量PCR(q-PCR)和ELISA分别测定对照组hfPM-SCs和IFN-γ处理后hfPMSCs IL-6、IL-8、IL-10和HGF基因及蛋白表达水平。结果:所分离细胞表达CD73、CD90和CD105,不表达CD14、CD34、CD45和HLA-DR,并分别具有来自亲本双方上述四个STR位点的等位基因。IFN-γ处理后,hfPMSCs IL-6 mRNA的表达水平显著提高(P<0.05),而IL-10和HGF的表达水平被下调(P<0.05)。ELISA结果表明IL-6蛋白表达水平显著升高,IL-8、IL-10和肝细胞生长因子的表达量降低(P<0.05)。结论:本研究成功的从人胎盘组织中分离和培养出hfPMSCs,且IFN-γ对其免疫抑制功能具有负调控效应。

IFN-γ诱导的自噬抑制人胎盘胎儿侧来源间充质干细胞增殖

目的探讨IFN-γ诱导无血清培养人胎盘胎儿侧来源MSCs自噬的发生,并分析自噬对细胞增殖的影响。方法用酶消化法和无血清培养体系分离培养人胎盘胎儿侧来源MSCs,利用流式细胞仪和分化培养体系鉴定细胞属性;用质量浓度50μg/L的IFN-γ处理人胎盘胎儿侧来源MSCs,以未处理细胞作为对照组,3-Ma处理为自噬抑制组;分别提取总蛋白,Western blot检测自噬标志基因LC3Ⅰ/Ⅱ的表达;mRFP-GFP-LC3腺病毒感染细胞,观察细胞内点状聚集的情况;MTT法检测IFN-γ对细胞增殖的影响。结果所分离细胞呈CD73、CD90和CD105阳性细胞,不表达CD14、CD34和CD45,具有向脂肪和成骨细胞分化的能力;IFN-γ可提高LC3Ⅱ的表达量(P<0.05),荧光共聚焦显微境观察到IFN-γ处理细胞中的点状聚集显著增加;3-Ma可解除IFN-γ对MSCs增殖能力的抑制(P<0.05)。结论 IFN-γ诱导的自噬负调控人胎盘胎儿侧来源MSCs的增殖能力。

人胎盘来源的两种间充质干细胞IL6、IL8、IL10和HGF表达水平的比较研究

目的比较人胎盘母体和胎儿来源间充质干细胞(hmPMSCs/hfPMSCs)IL6、IL8、IL10和HGF表达水平的差异。方法采用酶消化法分离人胎盘母体和胎儿侧间充质干细胞(MSCs),并利用流式细胞仪和D2S1399、D10S2325、D18S535和GATA198B05四个STR基因座对细胞属性进行鉴定分析;通过q-PCR和ELISA分别测定hmPMSCs和hfPMSCs细胞培养上清液中IL6、IL8、IL10和HGF在基因及蛋白水平上的表达。结果所分离两种来源细胞表达MSCs表面标志分子CD73、CD90和CD105,不表达CD14、CD34、CD45和HLA-DR,母体来源细胞中上述四个STR位点的等位基因与母体亲本保持一致性,而胎儿侧来源细胞分别具有来自亲本双方的等位基因。hfPMSCs IL8、IL10和HGF mRNA的表达水平显著高于hmPMSC(sP<0.01),而IL6的表达水平差异无显著性。ELISA结果表明,hfPMSCs IL6、IL8和HGF蛋白表达水平显著高于hmPMSCs(P<0.01),IL10的分泌量两者无差异。结论 hmPMSCs和hfPMSCs中IL6、IL8和HGF三种细胞因子的分泌量差异存在显著性,其中hfPMSCs HGF的分泌量远高于hmPMSCs,提示hfPMSCs在免疫抑制和组织修复中可能更具临床应用潜力。

浅谈基层医院检验科的生物安全管理

检验科集医院内几乎所有患者的血液、体液及排泄物之大全，是医院内一个重要的潜在的生物传染源。目前基层医院检验科部分存在布局不合理、消毒设备落后、工作人员生物安全意识淡薄、生物安全制度落实不到位等现象，操作人员日常操作接触的标本多为生物性危险品，具有致病性，存在现实或潜在的危险，从而可能会对实验室操作人员、后勤服务人员以及其他相关人员带来的危险性更大。

检验科医源性感染防范与对策

检验科是医院重要的医技科室,承担着对各类患者标本进行分析处理的重任.检验科成为各种病毒和细菌聚集的场所,检验科工作人员除了要与患者直接接触外,还要接触患者的各种标本.这些标本多为生物性危险品,具有致病性,存在现实或潜在的危险,从而可能会对实验室操作人员、后勤服务人员以及相关人员带来更大的危险性.由于检验科工作的特殊性,感染管理工作仍存在一些问题.本文就存在问题及防范对策进行分析,旨在提高检验科人员的防范意识、严防事故发生.

慢性前列腺炎269例病原检测及药敏分析

目的了解慢性前列腺炎与病原体的关系，探讨慢性前列腺炎的细菌感染状况和药物敏感程度。方法对临床采集的269例慢性前列腺炎患者的前列腺液作细菌培养及药敏试验，并对所得结果进行统计分析。结果269例患者前列腺液常规检查WBC〉10／HP，卵磷脂颗粒均有不同程度的减少。普通细菌培养共分离出104株细菌，分离率为38．6％。其中球菌54株，占51．9％；杆菌38株，占36．5％；真菌12株，占11．8％。细菌种类以葡萄球菌、大肠埃希菌和甲型溶血性链球菌为主；特殊培养中共分离出病原体79株，阳性率29．3％，其中沙眼衣原体、支原体、淋球菌分别为50株、17株、12株。结论EPS中病原体检测对临床诊断和治疗慢性前列腺炎具有重要意义。

血脂检验对糖尿病患者的临床价值分析

目的:分析血脂检验对糖尿病患者的临床价值.方法:选取河南省滑县人民医院2014-02/2015-02收治的70例糖尿病患者作为研究对象,设为观察组,选取同时期70例健康体检者设为对照组,对两组患者血脂相关指标进行检验.结果:观察组患者TC、TG、LDL水平分别为(7.7±1.8)、(3.1±0.8)、(5.4±0.9)mmol/L,明显高于对照组的(4.2±1.0)、(1.3±0.3)、(1.6±0.4)mmol/L,观察组患者HDL水平为(0.5±0.5)mmol/L,低于对照组的(0.7±0.2)mmol/L,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:糖尿病患者血脂指标存在异常,临床对血脂进行检验,可帮助临床医生诊断和鉴别糖尿病,提高诊断准确率,值得推广应用.

肾脏生化中分级检验的临床应用效果

目的:观察肾脏生化中分级检验的临床应用效果.方法:选取河南省滑县人民医院2015-02/2016-02收治的100例肾脏生化检验患者,通过随机数字表法分为观察组(n=50)及对照组(n=50),对照组患者采用常规检验,观察组患者采用分级检验,观察两种方法的应用价值.结果:观察组患者CysC阳性率为20.00%,与对照组的18.00%比较,差异无统计学意义(P>0.05),观察组患者BUN、Scr阳性率分别为66.00%、64.00%,明显高于对照组的26.00%、28.00%,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:在肾脏生化指标检验时,采用分级检验,有利于提高阳性检出率,改善检验效果,值得临床推广应用.

重症肝炎患者血清甲胎蛋白水平与预后的关系

目的:探讨重症肝炎患者血清甲胎蛋白水平与预后的关系。方法:采用化学发光法检测AFP:入院时、住院期间及出院时各检测1次,取其最高值作为统计数据,并动态观测其变化。结果:56例重症肝炎患者,随AFP水平升高,病死率下降。结论:急性、亚急性与慢性重型肝炎临床分型无明显关系,但与AFP水平有关。

HBV五项标志物与前S1抗原检测结果的临床分析

目的探讨HBV"五项"与前S1(PreS1)抗原之间的相关性及临床意义。方法 ELISA法采用酶标分析仪检测3606例患者HBV五项血清标志物和PreS1抗原。结果 3606例HBsAg阳性血清前S1抗原阳性2351例;HBsAg阳性的5种模式HBsAg阳性的5种模式为1.HBsAg、HBeAg、HBcAg(+),2.HBsAg、HBeAb、HBcAb(+),3.HBsAg、HBeAg(+),4.HBsAg、HBeAb或HBcAb(+),5.HBsAg(+)其他(-),其前S1抗原的阳性率分别81.16%(1478/1811),53.06%(649/1223),65.45%(36/55),36.14%(180/498),42.10%(8/19),经χ2检验,P>0.05,几种模式之间无显著差异。结论前S1抗原与HBV五项标志物之间有一定的关系,其阳性率高于HBeAg阳性率,是反映HBV复制的重要指标,因此,检测前S1抗原在流行病学调查和临床上都有重要的意义。

由混合配体构筑的三维铽金属有机框架的晶体结构及分子识别性能

本文采用两种多功能有机羧酸配体:2-(对溴)苯基-4,5-咪唑二羧酸(p-BrPhH_3IDC)和对苯二甲酸(H_2DCB)为混合配体与六水合硝酸铽,通过溶剂热反应,成功制备了一个含有一维孔道的复杂三维金属有机框架{[Tb(p-BrPhHIDC)(DCB)_(0.5)H_2O]·H_2O}_n。采用红外光谱、元素分析以及单晶X射线衍射测试了其分子结构。发现所采用的两种羧酸配体均与中心金属Tb(Ⅲ)离子配位进而桥联邻近的金属离子构成了三维框架。采用X-射线粉末衍射技术测试了晶体纯度。热分析表明该金属有机框架显示出比较好的热稳定性。固体荧光测试以及小分子识别研究表明该配合物显示出强的特征荧光发射和一定的乙腈识别能力。

人胎盘胎儿来源间充质干细胞通过旁分泌肝细胞生长因子减轻脂多糖诱导的人肺微血管内皮细胞损伤

目的探讨无血清培养人胎儿来源胎盘间充质干细胞(hfPMSC)旁分泌肝细胞生长因子(HGF)对脂多糖(LPS)诱导内皮细胞损伤的保护作用。方法用无血清培养基培养hfPMSC,流式细胞术检测CD73、 CD90、 CD105、 CD14、 CD34、 CD45、 HLA-DR的表达以确定其干细胞属性;利用Transwell^(TM)共培养体系[人肺微血管内皮细胞(HPMEC)接种于Transwell^(TM)上室, hfPMSC接种于下室],检测hfPMSC旁分泌HGF对LPS处理的HPMEC通透性的影响。实验分为LPS处理组、 hfPMSC共培养组、 HGF中和抗体组、正常HPMEC对照组。在Transwell^(TM)培养上室加入100μg异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖(FITC-dextran),荧光酶标仪检测染料渗透情况; Western blot法检测渗透相关蛋白血管内皮钙黏素(VE-cadherin)和陷窝蛋白1(caveolin-1)及凋亡相关裂解型蛋白胱天蛋白酶3(c-caspase-3)和裂解型多腺苷二磷酸核糖聚合酶1(c-PARP1)的蛋白水平。结果所培养细胞具备间充质干细胞形态,为CD73、 CD90、 CD105阳性及CD14、 CD34、 CD45、 HLA-DR阴性细胞;与LPS处理组相比, hfPMSC共培养可显著抑制LPS环境中HPMEC的通透性,显著上调VE-cadherin的表达水平,降低caveolin-1、 c-caspase-3和c-PARP1的蛋白水平。相反,中和共培养体系中的HGF,可逆转hfPMSC对HPMEC的上述作用。结论 hfPMSC通过分泌HGF抑制LPS诱导的HPMEC通透性增加。

人胎盘胎儿来源间充质干细胞通过下调髓样分化因子88和转化生长因子β信号通路减轻小鼠肺纤维化

目的探讨无血清培养人胎盘胎儿来源间充质干细胞(hf PMSC)对博来霉素所致小鼠肺纤维化的疗效及分子机制。方法培养并采用流式细胞术鉴定hf PMSC,取无特定病原体级雄性6周龄C57BL/6J小鼠随机分为博来霉素组、hf PMSC治疗组和阴性对照组。博来霉素组和hf PMSC治疗组分别经气管内注入50μL博莱霉素(1 g/L)制备肺纤维化模型,阴性对照组经气管内注入50μL PBS。hf PMSC治疗组,在造模3 d后,经尾静脉注射200μL含5×105个hf PMSC。第21天全部处死各实验组小鼠,取肺组织进行HE染色、Masson染色以及胶原蛋白含量测定;提取各组肺组织总蛋白,Western blot法检测髓样分化因子88(My D88)、转化生长因子β(TGF-β)的表达;ELISA检测各组血清中TGF-β的浓度。结果所培养具有典型的间充质干细胞形态特征并表达表面标志分子CD73、CD90和CD105,而不表达CD14、CD34和CD45。与博来霉素组比较,HE和Masson染色显示,hf PMSC治疗组可显著性降低肺组织纤维化程度、降低肺组织胶原蛋白含量以及My D88和TGF-β蛋白水平。结论hf PMSC可通过My D88下调TGF-β的表达减轻小鼠肺纤维化。

波浪形一维链状镉配合物的合成、结构及分子识别性能

以四水合硝酸镉(Cd(NO_3)_2·4H_2O)与2-(邻溴)苯基-4,5-咪唑二羧酸(o-BrPhH_3IDC)和草酸铵通过水热反应,合成了一个波浪形一维链状配合物{[Cd(o-BrPhH_2IDC)_2(H_2O)]·H_2O}_n(1)。并通过元素分析、傅里叶变换红外光谱、热重分析和单晶X射线衍射等技术手段对配合物1进行了表征。结果表明,配合物1为正交晶系,Pbca空间群。配合物1在316 nm波长激发下,在356 nm处有最大的荧光发射峰。配合物1对小分子具有识别性能,乙腈使配合物荧光强度明显增强,甲醇、乙醇使配合物荧光强度明显减弱,而吡啶处理后的样品在356 nm附近的发射峰消失,显示对吡啶有识别作用。

体外分步诱导人母体来源胎盘间充质细胞分化为胰岛素分泌细胞

目的建立体外诱导人母体来源胎盘间充质细胞分化为胰岛素分泌细胞的分步诱导分化体系。方法分离纯化人母体来源胎盘间充质细胞,体外扩增后进行分步诱导分化,收获的胰岛素分泌细胞分别行免疫细胞化学和ELISA检测,并通过葡萄糖刺激的胰岛素释放试验(GSIS)评价其体外功能。结果分离纯化的人母体来源胎盘间充质细胞经培养及六步诱导分化后最终可形成胰岛素分泌细胞。免疫细胞化学检测诱导后细胞GLP-1、PDX-1和C-Peptide染色为阳性,ELISA结果显示该诱导细胞培养上清中胰岛素有较高的表达。诱导后的胰岛素分泌细胞在低糖和高糖刺激下的胰岛素释放量分别为(20.42±1.58)μIU/mL和(65.1±7.43)μI-U/mL(P<0.01)。结论通过建立体外人母体来源胎盘间充质细胞分化为胰岛素分泌细胞的分步诱导分化体系,获得具有一定胰岛素分泌能力的细胞,为胰岛移植的细胞来源提供了更有效的新途径。

应用小鼠早期胚胎活性因子诱导小鼠成纤维细胞再程序化为多能干细胞的实验研究

目的:研究并建立应用早期胚胎活性因子诱导成体细胞再程序化的实验体系。方法:通过体外受精方法大量收集小鼠3.5 d囊胚,从小鼠囊胚中提取早期胚胎蛋白,加入到小鼠成纤维细胞培养体系中,诱导其再程序化为多能干细胞。对得到的多能干细胞采用PCR鉴定Oct3/4基因表达;在诱导多能干细胞分化为脂肪细胞和成骨细胞后,采用油红O及茜素红染色确定其多向分化潜能。结果:诱导再程序化后获得的多能干细胞能够长期传代培养,表达干细胞特异性基因Oct3/4,采用油红O及茜素红染色确定其具有向脂肪和成骨诱导分化潜能。结论:本研究成功应用小鼠囊胚活性因子诱导小鼠成纤维细胞再程序化生成小鼠多能干细胞。

宁夏滩羊血清脂蛋白含量与肉质脂肪酸相关性的探讨

为了探索宁夏滩羊肉质与血清脂蛋白含量的相关性,采用醋酸纤维素薄膜平板电泳法对放牧组3个组别共24只宁夏滩羊血清脂蛋白的含量进行了定量分析,并与其相对应各羊只肌肉脂肪酸的含量进行了相关分析。结果表明:3个组别的各脂蛋白含量差异不显著,绵母羊血清VLDL含量与硬脂酸含量呈负相关,CM和LDL的含量与亚油酸和亚麻酸之和的含量呈正相关性,为肉质检测提供参考生化指标依据。