羊链球菌CVCC55001、CVCC55002株对昆明小鼠的致病性研究

为研究羊链球菌CVCC55001、CVCC55002株对昆明系(KM)小鼠的致病性,使用羊链球菌CVCC55001、CVCC55002株分别对昆明小鼠进行毒力测定,观察临床和剖检症状,对死亡小鼠进行细菌分离培养,并对典型菌落进行形态、生化特性以及PCR鉴定。毒力测定结果显示CVCC55001对于昆明小鼠的最小致死剂量为9 CFU,CVCC55002对于昆明小鼠的最小致死剂量为11 CFU。感染羊链球菌死亡小鼠主要剖检症状为肝脏出血、肠道液化性坏死、脾脏肿大,病理变化为肝细胞出现大量坏死、肠道黏膜层广泛自溶、脾脏组织广泛坏死出血。本研究建立了羊链球菌CVCC55001、CVCC55002株的昆明小鼠攻毒感染模型,确定了最小致死剂量,对羊链球菌感染和致病性研究展开初步探索,为疫苗研究及评价提供了平台支撑。

羊败血性链球菌病灭活疫苗效力检验小鼠免疫攻毒法研究

为解决羊败血性链球菌病灭活疫苗现行规程中效力检验采用靶动物免疫攻毒法所存在的动物筛选困难、动物质量不稳定、经济花费高等问题,开展了实验动物免疫攻毒替代方法研究。以靶动物免疫攻毒法为基础,确定该疫苗的最小保护剂量和不保护临界剂量,并在确认小鼠品系后开展平行关系研究,从而筛选出在小鼠模型上能够体现疫苗差异的最佳攻毒剂量。结果显示:合格疫苗1/2稀释度为最小免疫剂量,1/4稀释度为不符合规定的临界剂量;KM小鼠为替代方法最合适的小鼠品系;最佳攻毒剂量为使用2 MLD混合菌液,对免疫组和对照组进行攻毒,对照小鼠全部死亡,免疫小鼠至少保护70%。本研究建立了羊败血性链球菌病灭活疫苗效力检验实验动物免疫攻毒替代方法,这将有助于提升该类疫苗效力检验的稳定性和可靠性,为羊败血性链球菌病防控提供有力支撑。

猪链球菌2型的主要毒力因子与先天性免疫逃逸机制

猪链球菌(SS)是一种重要的猪病病原体,能引起猪的高热、脑膜炎、败血症、关节炎和神经症状等。该菌有33个血清型,其中猪链球菌2型(SS2)流行最广、致病性最强,且存在感染人的风险,是一种重要的人兽共患病原菌,严重危害养猪业和公共卫生安全。目前已发现百余种SS2毒力因子,包括荚膜多糖、溶菌酶释放蛋白、溶血素、烯醇化酶、核酸酶、菌毛蛋白、H因子、透明质酸裂解酶、表面蛋白、超氧化物歧化酶和其他代谢和调节因子等。这些毒力因子不仅与致病性密切相关,还在细菌的定殖、入侵、传播和免疫逃逸过程发挥重要作用。先天性免疫应答是病原微生物入侵机体的第一道防线,可以非特异性识别并清除病原微生物。然而,SS2已经进化出多种逃避宿主防御的机制,如逃脱中性粒细胞胞外陷阱、逃逸补体反应、侵袭中枢神经系统、逃逸活性氧的杀伤作用、促进肽聚糖的N-脱乙酰化和逃逸自噬等。目前,SS2的防控多依赖于抗菌药物和疫苗免疫,了解SS2的免疫逃避机制对开发高效的疫苗和靶向药物具有重要意义。

施马伦贝格病的流行病学与综合防控

施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)是一种新型虫媒病毒,于2011年首次在德国被分离到,随后在欧洲牲畜中引起了大规模流行。该病毒主要造成牛、绵羊和山羊等反刍动物临床疾病,成年反刍动物感染后表现以腹泻、高热和产奶量下降为特征的短暂性疾病,妊娠动物感染后表现流产、早产或产死胎,新生动物感染后出现先天畸形。本文综述了施马伦贝格病的流行状况、流行病学特征以及诊断方法和疫苗研发进展情况,提出了SBV传入风险防范措施,以期为预防该病传入我国的生物安全防控策略制定提供参考。

分光光度法与活菌计数法测定副鸡禽杆菌菌液浓度的相关性研究

为建立一种快速测定副鸡禽杆菌菌液浓度的方法,本研究选取副鸡禽杆菌血清A、B和C型代表性菌株(CVCC254株、CVCC257株和CVCC256株),培养制备菌液,分别在450、540、600、650 nm波长测定其吸光度值(OD值),同时测定活菌计数值。回归分析两组数据,获取回归方程及标准曲线,分析回归方程的测定系数(R^(2))和标准曲线的点线离散度,确定最适测定波长。再选取不同培养时间点(10、12、14、16、18、20 h)的菌液,在最适波长下测定其OD值并代入回归方程获取活菌数,同时采用活菌计数法获取活菌计数值,将两组数据使用SPSS 17.0软件进行统计分析,进一步验证分光光度法与活菌计数法测定菌液浓度的相关性。结果显示,3株菌液在600 nm波长测定的OD值与活菌计数值之间均呈最佳的线性关系,确定其菌液浓度最适测定波长均为600 nm,其回归方程分别为y=14.302x-0.1441(R^(2)=0.9962)、y=14.464x-0.2746(R^(2)=0.995)和y=14.681x-0.01326(R^(2)=0.9989),y为活菌计数值(×10^(8)CFU/mL),x为OD600值。3株培养至衰退期前的菌液在600 nm波长测定的OD值代入回归方程计算获得的活菌数值与其活菌计数值无显著差异(P>0.05)。研究结果表明,衰退期前副鸡禽杆菌菌液的分光光度法与活菌计数法具有良好的相关性。因此,该分光光度法可用于快速测定衰退期前副鸡禽杆菌菌液浓度。

副猪嗜血杆菌4型灭活疫苗攻毒菌株的筛选

为筛选副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)4型攻毒菌株,对8株HPS进行血清型鉴定,并绘制细菌生长曲线;用豚鼠攻毒实验对其中5个菌株进行毒力测定,同时记录发病豚鼠的临床症状和剖检病变。结果显示8个菌株均为HPS4型,确定了候选菌株的最佳扩大培养时间为8~10h,筛选出毒力最强的CVCC4355。本研究确定CVCC4355可作为HPS4型疫苗产品效力检验的攻毒菌株。

我国家畜布鲁氏菌病防控面临形势及思考

布鲁氏菌病(简称“布病”)是由布鲁氏菌引起的一种重要人兽共患传染病,世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须通报的重要动物疫病,我国将其列为二类动物疫病。布病也是《国家中长期动物疫病防治规划(2012—2020年)》中优先防治的16种动物疫病之一[1-2]。人感染布病主要来自于患病动物及其产品,我国与人布病有关的传染源主要是患病羊、牛[1-2]。自2000年以来,我国人畜布病疫情开始反弹,并高位维持,防控形势十分严峻。近年来,人间布病聚集性事件频发,严重危害公共卫生安全[3-4],防控任务依然艰巨。

仔猪副伤寒活疫苗合成培养基发酵工艺应用研究

为确定仔猪副伤寒活疫苗合成培养基发酵参数,根据发酵过程中的关键技术,设计3种不同工艺,分别发酵培养21 h,每隔3 h取样进行活菌计数表明,培养15~21 h均可达细菌稳定期,工艺3培养菌数高于其余2种,其最适培养时间为18 h;将合成培养基以1%、2%和3%的接菌量按工艺3分别发酵18 h,发现3者培养菌数基本一致。进一步比较4批合成培养基和普通肉汤发酵18 h的培养效果,期间15、18 h抽样的合成培养基培养菌数分别比普通肉汤高12%和25%;发酵18h的菌液对小鼠安全性及对兔的免疫原性,两者基本一致,接种小鼠均10/10健活,免疫攻毒兔均达4/5~5/5保护,对照攻毒兔5/5死亡。结果表明,发酵培养工艺3可行,可实现仔猪副伤寒活疫苗合成培养基高密度培养,且发酵菌体安全性及免疫原性良好。

猪瘟诊断方法研究进展

作者从抗原和抗体两方面对国内外相关猪瘟诊断方法的报道进行全面概述,并对各种方法的优缺点进行评价,最后提出对猪瘟诊断方法研究的一些展望。

胸膜肺炎放线杆菌血清学分型多重PCR方法的建立

10株胸膜肺炎放线杆菌参考菌株,经过纯化、扩增、提取基因组DNA,设计一套特异性引物,运用多重PCR技术,对外毒素基因apxⅠ、apxⅡ和apxⅢ进行扩增,产物经1.6%琼脂糖凝胶电泳,可将10株参考菌株分为5个血清群。血清Ⅰ群由259(血清1型)、263(血清5型)、267(血清9型)组成。血清Ⅱ群由260(血清2型)、262(血清4型)、264(血清6型)、266(血清8型)组成。血清Ⅲ群、血清Ⅳ群和血清Ⅴ群分别由261(血清3型)、265(血清7型)和268(血清10型)单独组成。对于血清Ⅰ群和血清Ⅱ群,通过apxⅣ进行扩增,结果259(血清1型)、263(血清5型)和267(血清9型)分别扩出2.4kb、2.8kb和1.6kb片段;262(血清4型)、264(血清6型)、260(血清2型)或266(血清8型)分别扩出1.6kb、2.0kb、2.8kb片段。

仔猪副伤寒活疫苗生产用菌株生长曲线的建立及合成培养基初步应用

建立了仔猪副伤寒活疫苗生产用菌株生长曲线,获取菌株培养参数,从而实现合成培养基初步应用。将猪霍乱沙门氏菌（CVCC79500株）运用试管和三角瓶分别静置和振荡培养30 h,期间取4、8、12、18、24、30 h等6个点进行活菌计数并建立生长曲线,确定37℃静置培养18-24 h,37℃、200 r/min振荡培养8-24 h为培养稳定期。不同接菌量比较结果表明,37℃静置培养24 h,37℃、200 r/min振荡培养12 h均可达到菌体稳定期。在稳定期参数条件下,比较合成培养基与常规普通肉汤培养基对该菌的增殖效果,结果表明,37℃静置培养24 h,试管及三角瓶培养菌数分别为27×108-31×108、33×108-41×108CFU/m L;37℃、200 r/min振荡培养12 h,试管及三角瓶培养菌数分别为58×108-66×108、78×108-88×108CFU/m L。而同条件3批普通肉汤培养菌数均低于合成培养基,且批次间稳定性较合成培养基差。将合成培养基振荡培养12 h的菌液接种小鼠均10/10存活;免疫后攻毒家兔达4/5-5/5保护,与普通肉汤基本一致。合成培养基保存期试验表明,25℃避光保存28 d与当天配制的液体合成培养基,振荡培养菌数基本一致。获取的培养参数适合用于合成培养基的初步评价,研制的合成培养基培养菌数优于普通肉汤,且不影响菌体安全性及免疫原性,室温保存期可达28 d。

猪瘟疫苗研究进展及我国传统疫苗的研究现状

简要介绍了国内外传统猪瘟疫苗和新型猪瘟疫苗的研究进展,着重对我国猪瘟传统疫苗的特点、生产工艺、生产和应用中的问题进行了概述,并对猪瘟疫苗研究做了展望。

经济新常态下的大学生就业问题剖析与对策

大学生就业问题是关系社会发展的重要问题,在我国经济由持续高速增长向经济新常态模式转变过程中,大学生就业存在经济产业结构不合理和大学生自身的认识等问题,然后对产生的这些原因进行剖析,最后提出解决这些问题的建议。

生产用培养基对猪丹毒杆菌G_4T_(10)株安全及免疫原性试验的比较研究

为明确生产用培养基对猪丹毒杆菌G4T10株安全性及免疫原性影响,采用2种不同批次的肉肝胃膜消化汤(20120123批和130226批)及马丁琼脂(20120904批和130129批)进行猪丹毒杆菌G4T10株培养和选菌,然后进行安全及免疫原性试验。结果共筛选出4种不同优势菌落,其中一株的菌落(20120123批肉肝胃膜消化汤+20120904批马丁琼脂)形态最好,具有良好的安全性及免疫原性(小鼠全试验9/10存活,其免疫后攻毒达9/9保护);而有一株菌落(20120123批肉肝胃膜消化汤+130129批马丁琼脂)形态最差,其安全性及免疫原性试验结果差(小鼠安全试验仅6/10存活,其免疫后攻毒仅达2/5保护)。试验表明,不同批次生产用培养基对猪丹毒活疫苗(G4T10株)质量影响大。

鸡梭菌性肠炎研究概论

从病原学、流行病学、症状及病变、致病机理、诊断、治疗及预防、免疫进展等方面对鸡梭菌性肠炎进行介绍,并对该病未来研究热点进行了展望,为开展鸡梭菌性肠炎的基础研究、疾病预防控制提供参考。

A型产气荚膜梭菌合成培养基使用参数及培养毒素浓缩工艺研究

经过对A型产气荚膜梭菌合成培养基pH值、灭菌方式和配制用水进行优化,确定最适pH值为8.0～8.5,灭菌方式为116℃30 min,配制用水为去离子水。合成培养基培养产气荚膜梭菌CVCC37株6 h后毒力达50～100 MLD/mL,随着时间的延长,毒力不再增强;培养温度为36℃或37℃时,产毒效果最佳。比较不同截留分子量的超滤膜浓缩效果,10 ku截留分子量的收获率为40%,其透出液静脉接种0.2 mL,小鼠2/2死亡;而8 ku收获率达75%,其透出液静脉接种0.2 mL,小鼠0/2死亡。因此,8 ku截留分子量膜包适宜对A型菌培养毒素的浓缩。

病毒保护剂在鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒活疫苗生产中的应用

2种不同的病毒保护剂A和B,应用于鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒活疫苗生产中,3批试验结果表明:裂解后SPGA4万倍稀释,保护剂B的蚀斑数比对照平均增加121%,保护剂A最低使减少14%。保护剂B的最佳添加浓度筛选试验结果表明:1次添加浓度为1%或2%,2次添加浓度为2%。3批病毒保护剂B扩大中试试验结果表明:裂解后SPGA4万倍稀释,试验组比对照组蚀斑数平均增加66.5%。HVT活疫苗(病毒保护剂B)特异性试验结果表明,马立克氏病标准阳性血清对其特异性识别;平行冻干后,试验组比对照组蚀斑数高200%;经37℃10d耐热试验表明,试验组比对照组蚀斑数高242%;试验苗免疫攻毒保护率为75%,对照苗为33.4%。