高等医学院校免疫学双语教学的实践与思考

实施双语教学是我国高等教育与国际接轨,迎接新世纪挑战和教育改革发展的必然趋势,也是当前教学改革的重点和热点,目前双语教学正在全国各高校如火如荼地进行。免疫学是一门重要的医学基础课程,其理论和技术涉及基础医学和临床医学的各个领域,发展日新月异。国内多所高等医学院校已经陆续在免疫学课程的双语教学方面以不同的形式进行了探索[1-4]。

医学免疫学双语教学模式探讨

从教学对象的选择、教材的选用、教学大纲的制订、教学方式与方法、教学配套资源、教学效果考查与评估以及存在的问题等方面对医学免疫学双语教学模式进行总结和探讨,以期能够为推进高等院校医学课程双语教学改革提供一定的参考。

慢性乙型肝炎患者外周血CD4^+CD25^+调节性T细胞的检测与意义

目的:探讨慢性乙型肝炎患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)频率的变化及其意义。方法:分离20例慢性乙型肝炎(CHB)患者和10例健康者的外周血单个核细胞,以CD4、CD25、CD127单克隆抗体标记细胞后以流式细胞仪检测并分析Treg频率。采用实时荧光定量RT-PCR检测血清HBV DNA载量。结果:CHB组的Treg频率高于健康对照组(P<0.05),HBeAg阳性CHB组Treg频率高于HBeAg阴性CHB组(P<0.01),乙型肝炎肝硬化组Treg频率高于无肝硬化CHB组(P<0.01);CHB患者的Treg频率与HBV DNA载量成直线正相关(r=0.87,P<0.01)。结论:慢性乙型肝炎患者外周血Treg频率明显升高,且与病毒复制和肝脏慢性病变程度有关。

抑制LSD1酶活性对HBV模型小鼠的作用

目的研究组蛋白赖氨酸去甲基化酶1(LSD1)酶活性下降对乙型肝炎病毒(HBV)模型小鼠的作用。方法尾静脉高压注射重组HBV1.3质粒建立HBV小鼠模型;将雌性BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、LSD1小干扰RNA(siRNA)处理组和反苯环丙胺(TCP)治疗组。取各组小鼠外周血,通过酶联免疫吸附试验、全自动微粒子化学发光法和Real-Time PCR检测小鼠体内乙肝表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)和HBV DNA的表达;免疫组织化学法检测HBsAg在肝脏中的分布;Western blotting检测小鼠脾淋巴细胞LSD1的表达。结果 HBV模型小鼠造模成功;LSD1 siRNA处理组和TCP治疗组小鼠HBsAg、HBV DNA和LSD1的表达水平均较模型组明显下降(P<0.01),肝组织中HBsAg的分布也明显减少。结论抑制LSD1酶活性对HBV模型小鼠体内HBV的清除有一定的作用。

急慢性乙肝患者外周血Th17与Treg细胞的表达

目的:探讨急慢性乙型肝炎患者外周血Th17与Treg细胞的表达情况。方法:采集17例慢性乙肝(chronic hepatitis B,CHB)患者、13例急性乙肝(acute hepatitis B,AHB)患者和14例健康者(对照组)外周血,流式细胞术分析Th17和Treg细胞的频率,实时荧光定量PCR法检测外周血单个核细胞中转录因子(retinoic acid receptor-related orphan nuclear receptorγt,RORγt)和(forkhead family transcription factor 3,FoxP3)的mRNA表达水平。结果:AHB组和CHB组外周血Th17细胞频率和RORγt mRNA表达水平均高于对照组,但CHB组低于AHB组(P<0.05);CHB组外周血Treg细胞频率和FoxP3 mRNA表达水平均显著高于AHB组和对照组,而AHB组和对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:急慢性乙肝患者外周血中存在Th17和Treg细胞表达异常,提示Th17和Treg细胞可能在乙型肝炎的发病机制中起着一定的作用。

慢性乙型肝炎外周血树突状细胞的功能障碍机制的初步探讨

目的:探讨慢性乙型肝炎者树突状细胞(DCs)的功能状态及机制。方法:以直接荧光法进行表型分析、CCK8法测定DCs对同种异体淋巴细胞的刺激作用、AnnexinV/FITC法测定细胞凋亡率进行分析。结果:慢性乙型肝炎患者外周血单核细胞经诱导分化形成的DCs,与正常人相比,表达协同刺激分子CD80、CD86水平均较低;刺激同种异体淋巴细胞增殖能力也低于正常人;DCs凋亡率明显增高。结论:慢性乙型肝炎患者外周血的DCs免疫功能处于抑制状态,而HBV感染导致的DCs凋亡增多可能是引起DCs功能障碍的原因之一。

核苷类似物拉米夫定与恩替卡韦对大鼠慢加急性肝衰竭的影响

目的观察核苷类似物拉米夫定与恩替卡韦对大鼠实验性慢加急性肝衰竭(ACLF)的影响,并初步探讨其机制。方法将40只SD大鼠随机分为对照组8只、实验组32只。实验组腹腔注射40%CCl4及猪血清4周以诱导慢性肝损伤,将其再随机分为模型组8只、拉米夫定组12只、恩替卡韦组12只,均给予腹腔联合注射D-氨基半乳糖、脂多糖以诱导ACLF;诱导6 h后,拉米夫定组及恩替卡韦组分别给予拉米夫定10 mg/kg及恩替卡韦0.05mg/kg灌胃,每日1次,连续3 d。对照组给予相同体积生理盐水腹腔注射或灌胃,模型组大鼠予以相同体积生理盐水灌胃。分别于慢性肝损伤造模4周和诱导ACLF后24、72 h采血,采用全自动生化分析仪检测肝功能(ALT、AST、TBIL),ELISA法检测诱导ACLF后72 h血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素17(IL-17);诱导ACLF后72 h处死大鼠,肝组织切片行HE染色及Masson染色。结果慢性肝损伤造模4周,实验组肝功能指标均高于对照组(P均<0.05)。诱导ACLF后24 h,拉米夫定组和恩替卡韦组肝功能指标均高于模型组(P均<0.05),拉米夫定组肝功能指标均高于恩替卡韦组但差异无统计学意义。在诱导ACLF后72 h,模型组、拉米夫定组、恩替卡韦组肝功能指标较24 h时均下降(P均<0.01);但拉米夫定组血清ALT、TBIL均仍高于模型组(P均<0.05),拉米夫定组血清AST虽高于模型组但差异无统计学意义;恩替卡韦组肝功能指标虽均高于模型组但差异均无统计学意义,其肝功能指标虽均低于拉米夫定组但差异无统计学意义。诱导ACLF后72 h,模型组、拉米夫定组、恩替卡韦组血清TNF-α、IL-17均高于对照组,但此两种因子水平在四组间的差异均无统计学意义。拉米夫定、恩替卡韦组肝组织病理镜下所见与模型组大致相仿,但肝细胞局灶性坏死较模型组多见,可见片状坏死,且拉米夫定组较恩替卡韦组重。结论在ACLF急性发作期,应用核苷类似物拉米夫定和恩替卡韦均可能一过性加重肝组织的损伤,且以拉米夫定为重。

角色扮演在留学生《医学免疫学》教学中的应用及体会

探讨角色扮演教学模式在留学生《医学免疫学》教学中的应用及效果。在2014级留学生(83人)《医学免疫学》补体激活途径及相关成分章节的教学中实施角色扮演式教学,并对其教学成效进行分析与评价。在留学生《医学免疫学》教学中运用角色扮演式教学,有助于培养留学生主动学习和整体全面理解知识难点的能力;提高教学效率与质量;培养学生团队协作和人际沟通能力;增进师生感情。角色扮演教学模式是符合留学生的学习习惯、特点、内容和规律的一种教学方法,可提高教学品质和效果。

壳聚糖、月见草、舒降之降血脂作用及机制研究

目的研究壳聚糖、月见草、舒降之的降血脂作用及机制。方法运用新西兰家兔制备高脂血症模型,各实验组分别同时饲喂壳聚糖、月见草、舒降之10周,然后分别测定给药前、后血脂水平的变化,并提取肝组织和肾皮质组织蛋白,用免疫印迹法观察受体相关蛋白的表达水平变化。结果壳聚糖、月见草与舒降之都可使血脂不同程度下降,高脂饮食加壳聚糖组实验动物肾、肝脏组织中受体相关蛋白表达水平较其他各组明显增高。结论壳聚糖、月见草、舒降之均具有一定的降血脂作用,调节受体相关蛋白RAP的表达可能是机制之一。

思维导图在五年制临床医学本科PBL教学中的实践研究

问题导向式学习(Problem-Based Learning, PBL)教学改革在我院五年制临床医学本科的实践促进了学生从被动式向主动式学习的转变,激发了学习的兴趣,提升了学生的综合能力。但是学生在构建知识体系、临床发散性思维等能力方面仍存在不足。为此,我们在PBL案例讨论时引导学生构建思维导图,并且小组协作完善思维导图。教学实践表明,思维导图的应用促进了学生构建知识体系的逻辑性,提升了学生的临床思维能力,帮助学生主动性和创造性思维的发展。

细胞表面β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ在免疫突触形成中的作用

目的:研究细胞表面β-1,4-半乳糖基转移酶-I(β-1,4-galactosyltransferase I,β-1,4-GalT-I)在免疫突触形成中的作用。方法:以抗CD3、CD28单克隆抗体活化Jurkat细胞,应用实时荧光定量PCR及流式细胞术检测分析β-1,4-GalT-I的表达变化,激光共聚焦显微镜观察β-1,4-GalT-I在Jurkat细胞活化前后的表达与定位;将Jurkat细胞与SEB负载的Raji细胞共培养以构建Jurkat-Raji细胞免疫突触,观察β-1,4-GalT-I在免疫突触中的定位。结果:β-1,4-GalT-I mRNA表达水平随着Jurkat细胞的活化逐渐增高,在细胞活化后36小时达到高峰;活化后细胞表面β-1,4-GalT-I分子的表达较静止状态高;共聚焦显微镜显示在活化的Jurkat细胞表面及Jurkat-Raji细胞免疫突触部位β-1,4-GalT-I表达信号增强且其分布发生重排和簇集,且与CD3分子共定位,与CD28分子部分共定位。结论:Jurkat细胞表面的β-1,4-GalT-I分子参与了免疫突触的形成。

医学免疫学PBL教学的实践与思考

PBL(Problem-based learning)是以问题为基础的新型教学方法,对PBL在医学免疫学教学中的实践应用进行了初步探索,分析总结了免疫学PBL教学的特点及目前存在的主要问题。

一种新型酸奶对小鼠肠道菌群影响的研究

目的 :探讨一种新型发酵剂酸奶对小鼠肠道菌群的影响。方法 :新型酸奶灌胃为实验组 ,市售某品牌酸奶灌胃为对照组 ,连续喂养 2 0天。末次喂养 2 4h后留取粪便进行肠道菌群分析。结果 :实验表明实验组受试后乳杆菌增多 (P<0 .0 1) ,且增幅明显高于对照组 (P<0 .0 5 )、肠杆菌减少 (P<0 .0 1)、肠球菌无明显变化。结论 :受试酸奶对小鼠肠道菌群有一定的调节作用。

SSeCKS对施万细胞TNF-α自分泌的作用

目的探讨Src抑制的蛋白激酶C底物(SSeCKS)对施万细胞TNF-α自分泌的作用。方法予TNF-α处理施万细胞及siRNA干扰SSeCKS表达后,ELISA法检测培养基上清中TNF-α的含量,蛋白免疫印迹检测SSeCKS、磷酸化p38、磷酸化JNK、总p38、总JNK的表达。结果 TNF-α可以诱导施万细胞自分泌及SSeCKS表达的增加;干扰SSeCKS表达可以抑制TNF-α的自分泌及p38与JNK通路的激活。结论在施万细胞中,SSeCKS可能通过影响p38及JNK激活对TNF-α的自分泌发挥正向调控作用。

医学免疫学留学生教学实践及体会

就医学留学生教学中存在的教学语言、教材、教学目的和要求等问题进行了探讨。以期进一步提高医学留学生的教学质量,扩大教学规模,增强国际间医学教育的合作。

慢性乙型肝炎患者CD4^(+)Th细胞中LSD1表达及其作用

目的:探讨慢性乙型肝炎(乙肝)患者外周血CD4^(+)Th细胞内赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1(histone lysine specific demethylase 1,LSD1)表达水平与Th1/Th2平衡的关系,初步探讨LSD1介导的组蛋白修饰对慢性乙肝患者CD4^(+)Th细胞分化的作用。方法:选择2017年6月至12月在南通大学附属医院感染科住院的慢性乙肝患者65例,分为丙氨酸转氨酶(ALT)高水平[>4×ULN(正常上限)]组与低水平(≤4×ULN)组,HBV-DNA高载量(≥10^(6)拷贝/mL)组与低载量(<106拷贝/mL)组。以同期在该院体检的30例健康人为对照。采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,免疫磁珠法分选CD4^(+)Th细胞;提取CD4^(+)Th细胞总蛋白,以Western印迹法检测LSD1表达水平。采用ELISA法检测血清中干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)含量;用微粒子化学发光法检测血清乙型肝炎表面抗原(HBsAg)含量;用实时定量PCR法检测血清HBV-DNA载量。结果:慢性乙肝组患者外周血CD4^(+)Th细胞中LSD1表达水平高于健康人(0.52±0.21 vs 0.28±0.09,t=-7.49,P<0.001)。慢性乙肝患者中,CD4^(+)Th细胞中LSD1表达量在ALT高水平组(n=38)低于低水平组(n=27,0.39±0.18 vs 0.64±0.16;t=-5.79,P<0.001),在HBV-DNA高载量组(n=32)高于HBV-DNA低载量组(n=33,0.69±0.08 vs 0.35±0.16;t=10.80,P<0.001)。与健康人相比,慢性乙肝组血清IFN-γ含量降低、IL-4含量增高、IFN-γ/IL-4比值减小(P<0.05)。慢性乙肝患者外周血CD4^(+)Th细胞中LSD1表达量与其血清ALT水平(r=-0.590)、IFN-γ水平(r=-0.379)及IFN-γ/IL-4(-0.285)负相关(P<0.01),与HBV-DNA载量正相关(r=0.880,P<0.001),与血清IL-4水平无相关性(r=0.169,P=0.102)。结论:LSD1高表达可能是慢性乙肝患者体内Th1/Th2失衡、Th1反应水平下降的原因之一,并导致机体清除HBV能力减弱或抑制HBV复制能力减弱。

乙肝患者外周血Th17与Treg细胞的表达与临床意义

目的:探讨乙肝患者外周血Th17与Treg细胞的表达情况及与临床指标的相关性。方法 :采集17例慢性乙肝患者(CHB组)、13例急性乙肝患者(AHB组)和14例健康者(对照组)外周血,流式细胞术分析Th17和Treg细胞的频率;酶联免疫吸附测定血清IL-17的水平,实时定量PCR法检测HBV DNA载量,速率法检测ALT水平。结果:AHB组、CHB组外周血Th17细胞频率和IL-17水平高于对照组(P<0.05);CHB组外周血Treg细胞频率高于对照组(P<0.01),而AHB组和对照组之间差异无统计学意义(P>0.05);与对照组相比,AHB组外周血Th17/Treg比值显著增高而CHB组明显降低(P<0.05);AHB组、CHB组外周血Th17细胞频率和Th17/Treg比值与ALT水平成正相关,Treg细胞频率与HBV DNA载量成正相关。结论:乙肝患者外周血存在Th17、Treg细胞表达异常和Th17/Treg相对失衡,并与ALT水平、HBV DNA载量具有一定的相关性,提示Th17和Treg细胞可能在乙型肝炎的发病机制中起着比较重要的作用。

CIITA基因沉默对小鼠骨髓来源的树突状细胞表型及功能的影响

研究MHCII类反式作用因子(CIITA)基因干扰对小鼠骨髓来源的树突状细胞(dendritic cells,DC)的表型及功能的影响。体外培养小鼠骨髓来源DC,将CIITA siRNA通过脂质体法转染DC,实时荧光定量PCR(qPCR)、western Blot及流式细胞术(FCM)检测转染前后CIITA mRNA、蛋白表达量及MHC-II分子表达;混合淋巴细胞反应检测干扰CIITA基因后的DC对异基因淋巴细胞增殖能力的影响,ELISA检测共培养上清中细胞因子IL-4、IFN-γ和IL-10的表达水平。qPCR结果显示,DC转染CIITA siRNA后,CIITA mRNA与control siRNA组相比明显降低;western blot结果显示转染CIITA siRNA后,DC中的CIITA的蛋白表达量降低,FCM结果显示,转染的DC表面的MHC-II分子表达降低,同时CD40、CD80/CD86分子表达也有一定的降低;转染CIITA siRNA的DC,其刺激异基因淋巴细胞的增殖能力与对照组DC相比显著减弱,细胞产生IL-4和IL-10的水平提高而IFN-γ的水平降低。表明CIITA siRNA通过抑制DC的CIITA基因表达来降低MHC-II及共刺激分子CD40、CD80/CD86分子水平,减弱DC将抗原提呈给T细胞的能力,从而使免疫反应处于低激活状态。