MSPD-HPLC法分析云南红豆杉中的10-DAB Ⅲ和紫杉醇

为建立云南红豆杉(Taxus yunnanensis)中10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ(10-DABⅢ)和紫杉醇(Taxol)的分析方法,该研究采用基质固相萃取-高效液相色谱分析(MSPD-HPLC)对云南红豆杉中的10-DABⅢ及Taxol进行定量分析,探究硅胶、佛罗里硅土、酸性氧化铝、中性氧化铝、碱性氧化铝、C_(18)、C_(18)-ME、C_(18)-G1、C_(18)-HC、Diol、Xamide、Xion共12种样品预处理分散剂及各种分散剂的质量、洗脱剂的种类、洗脱剂的浓度、洗脱剂体积对两种成分分析的影响,并对优化后的条件进行方法学验证,同时与超声提取、热回流提取预处理方法进行比较分析证明其有效性。结果表明:(1)12种固相分散剂中,碱性氧化铝具有良好的目标化合物萃取物检出量,并且当碱性氧化铝与样品的质量比为3∶1、6 mL甲醇为洗脱剂洗脱时,10-DABⅢ和Taxol的萃取检出量较高。(2)建立的云南红豆杉枝叶中10-DABⅢ和Taxol的分析方法具有良好的线性关系(r≥0.9999),10-DABⅢ和Taxol的检出限和定量限分别介于0.0239~0.0301μg·mL^(-1)和0.142~0.178μg·mL^(-1)之间;各目标分析物平均加样回收率在93.6%~109.0%之间。(3)比较分析显示,3种方法对2种紫杉烷类化合物的萃取检出量基本无差别,但MSPD法溶剂消耗少、操作简单,分析时间短,净化效率高,可应用于云南红豆杉原料的快速分析。该研究以碱性氧化铝为分散剂应用于云南红豆杉紫杉烷类化合物的萃取,建立了快速、高效的云南红豆杉中10-DABⅢ和紫杉醇的分析方法,为云南红豆杉中的紫杉烷类化合物的定量分析提供了依据。

基质固相分散萃取-高效液相色谱法同时测定五味子中5种木脂素类化合物

研究建立了基质固相分散萃取-高效液相色谱(MSPD-HPLC)分析五味子中5种木脂素类化合物(五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素)的方法。采用反相C_(18)色谱柱进行分离,以0.1%(v/v)甲酸水溶液和乙腈为流动相进行梯度洗脱,在波长250 nm下检测。考察了包括硅胶、酸性氧化铝、中性氧化铝、碱性氧化铝、佛罗里硅土、Diol、XAmide、Xion和C_(18)、C_(18)-ME、C_(18)-G_(1)、C_(18)-HC等在内的12种吸附剂以及吸附剂的质量、洗脱剂的种类、洗脱剂体积对五味子木脂素类化合物得率的影响。选定Xion作为MSPD-HPLC分析五味子中木脂素类化合物的吸附剂;基于吸附剂Xion的萃取参数优化结果表明:以0.25 g五味子粉末为固定值,Xion(0.75 g)为吸附剂,甲醇(15 mL)为洗脱剂,MSPD对五味子中木脂素类化合物具有较高的得率。建立的五味子中5种木脂素类化合物的分析方法,各目标分析物具有良好的线性关系(相关系数R^(2)≥0.9999),检出限与定量限分别介于0.0089~0.0294μg/mL和0.0267~0.0882μg/mL之间。对五味子木脂素类化合物进行低、中、高3个水平的加标回收试验,平均回收率为92.2%~111.2%,相对标准偏差为0.23%~3.54%。日内和日间精密度均小于3.6%。与超声辅助提取和热回流提取前处理相比,MSPD具有萃取和净化相结合、耗时少、所需溶剂量少的优点,且MSPD-HPLC获得的结果优于经典方法。所建立的方法成功应用于17批五味子中5种木脂素类化合物含量的分析。

HPLC/ESI-MS分析淫羊藿黄酮苷类化合物

用HPLC/ESI-MS鉴定、分析淫羊藿黄酮苷类结构。80%乙醇提取,得到淫羊藿的有效成分,采用Sinochrom ODS-BP C18(4.6 mm×250 mm)分析柱,乙腈-水梯度洗脱,流速为1 mL.min-1,检测波长为270 nm,质谱记录总离子流图(TIC)。从淫羊藿醇提取物中鉴定出朝藿定A、Hexandraside F、朝藿定B、淫羊藿苷、箭藿苷A、2-″O-鼠李糖基.大花淫羊藿苷Ⅱ和宝藿苷等7个淫羊藿黄酮苷类化合物。结果表明,HPLC/ESI-MS能快速、准确地鉴定出淫羊藿中黄酮类成分,证明了淫羊藿苷类的有效部位中所含的成分主要为8-异戊烯基取代的黄酮苷类化合物。

仙人掌中总黄酮提取工艺的研究

采用醇提取法,研究仙人掌黄酮类化合物的提取工艺。通 过实验确定乙醇浓度、料液比、提取温度和提取时间的最 佳参数,结果表明,最优提取条件为乙醇浓度75％、料液 比1:20、温度75℃、提取时间4h,并对最优条件下的提取 液进行回收率测定。

动态轴向压缩工业制备色谱分离丹参脂溶性单体化合物

通过HPLC优选提取溶剂,并结合TLC实验筛选得到合适的展开剂以及柱色谱分离条件。柱分离条件直接放大到动态轴向压缩工业制备色谱分离,建立了高纯度丹参脂溶性单体化合物工业化分离工艺。结果表明,二氯甲烷对丹参脂溶性化合物的提取率最高,优选的分离流动相为石油醚-二氯甲烷体系。最终制备得到4个丹参酮类化合物,其中BC-2、BC-4、D-2分别鉴定为纯度达98.5%的丹参酮ⅡA、96.2%的丹参酮Ⅰ以及97.8%的隐丹参酮,化合物的BC-3纯度为95.4%,结构需进一步鉴定。实验证明,动态轴向压缩制备色谱是一种天然活性成分制备的操作简单、分离周期短、效率高的分离设备。

氮蓝四唑光照法评价丹参水溶性成分清除超氧阴离子(O_2^-·)活性

以丹酚酸B为样品,通过对氮蓝四唑光照法评价体系中测定波长,缓冲液pH值、浓度,光照强度及时间等关键因素进行优化筛选,确定丹酚酸类化合物清除O2-.的最佳评价体系,并对丹参中5种水溶性成分进行活性评价。结果表明,最佳测定条件为:测定波长625 nm,磷酸盐缓冲液pH值7.8,缓冲液浓度5 mmol.L-1,光照强度6 000 lx,光照时间30 min,其可靠性好,清除率测定结果的灵敏度较改进前提高20%;丹参5种水溶性成分清除O2-.的能力均随其浓度增加而逐渐增强,线性关系范围内,清除O2-.能力大小依次为:迷迭香酸>丹酚酸A>丹酚酸B>原儿茶醛>紫草酸≈芦丁。

自动真空液相色谱装置的研制及其在五味子成分分离中的应用

为满足天然产物高效分离的需求,本文研制了自动真空液相色谱（AUTO-VLC）装置并用于五味子石油醚萃取物的分离。该装置由自主设计的流动相储备系统、10通分流切换阀、3通切换阀、3个不同规格的动态轴向压缩色谱柱、10通馏分收集阀和馏分收集器组成,采用可编程逻辑控制器（PLC）S7-200实现了分离过程的不同比例流动相切换、不同规格色谱柱选择、分离时间设定及馏分收集的自动控制及监测。应用于五味子成分分离的结果表明：采用150 mm直径动态轴向压缩色谱柱的VLC,从100 g五味子石油醚萃取物中一次分离得到6个组成明显不同的样品（S1～S6）。建立了通过多次薄层色谱（TLC）展开筛选VLC分离条件的方法,并进行了分离验证。VLC分离条件选择方法：自动真空液相色谱的初始洗脱剂的比例以首次TLC展开时全部目标化合物的比移值（Rf）介于0～0.45时展开剂的组成为宜;梯度洗脱比例变化以k值（展开次数（n）与Rf的线性函数斜率）和TLC分离度为依据选择;不同Rf范围内洗脱次数由n≈ΔRf/k计算。采用选择的条件从样品S5中分离得到了13个组分和4个纯度在85%以上的化合物,仅耗时17 h。AUTO-VLC的研制对于中药成分的自动和系统性分离具有重要价值。

二维反相液相色谱制备五味子中的木脂素

应用自主研发的具有分离-富集模式的制备色谱工厂,建立了分离制备五味子木脂素有效部位及其单体化合物的方法。该方法首先以C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,水和甲醇为流动相,分离度和保留时间为考察指标,采集4个不同梯度的色谱信息,通过XTool色谱专家系统软件模拟,确定五味子木脂素第一、二维色谱条件;然后采用线性放大的方法,以C_(18)(250 mm×30 mm,10μm)为第一、二维分离柱,C_(18)(80 mm×30 mm,10μm)为富集柱,水为富集稀释液,对五味子木脂素进行二维色谱分离纯化;最后第一维分离得到9个可重复组分,第二维分离得到20个高纯度化合物,其中有6个单体化合物。结果表明该法重现性良好,可以实现五味子木脂素的系统性分离,对五味子化学成分的研究具有重要意义。

丹酚酸B对大鼠动脉粥样硬化的影响

采用腹腔注射的给药方式,研究丹酚酸B对高脂饲料饲养大鼠动脉粥样硬化的影响。选取SD大白鼠60只,建立动脉粥样硬化模型,采用腹腔注射的给药方式进行干预实验,并以辛伐他汀作对照。实验期间定期收集大鼠的血样,采用酶法检测血液中总胆固醇,磷钨酸-镁沉淀法检测血液中高密度脂蛋白的含量,酶联免疫法测定大鼠血液中高灵敏度C反应蛋白(hs-CRP)的含量。实验表明,丹酚酸B干预组血液中TC/HDL显著低于动脉粥样硬化模型组,丹酚酸B干预组血液中高灵敏度C反应蛋白(hs-CRP)含量显著低于动脉粥样硬化模型组。因此,丹酚酸B及辛伐他汀能够通过降低血脂及血液中hs-CRP水平,治疗动脉粥样硬化及其相关疾病。

牡丹皮化学成分系统化色谱分离方法研究

以牡丹皮为研究对象,探索中药复杂成分系统化色谱分离方法。通过对牡丹皮甲醇提取物进行系统溶剂萃取,TLC、HPLC分析化合物组成变化,确定牡丹皮化学成分色谱分离的前处理方法;以系统化TLC方法筛选确定了牡丹皮Fr1.3组分制备色谱分离条件;预测了台阶梯度洗脱条件下待分离物质的保留体积。结果显示:牡丹皮甲醇提取物经正己烷、乙酸乙酯依次萃取是有效的色谱分离前处理方法,减少了分离样品复杂性;建立的系统化TLC方法可以快速选定制备柱色谱的分离条件;台阶梯度洗脱分离情况下,分离目标化合物在初始洗脱溶剂下,其0.10<Rf≤0.65时,多阶梯梯度预测方法准确预测了Fr1.3组分制备柱分离各化合物的保留体积;选定台阶梯度洗脱条件下,1/3理论上样量、理论上样量、最大上样量的三次制备柱色谱分离实践表明,Fr1.3组分中的6个化合物均得到TLC单点的纯化合物,其中3个化合物的HPLC纯度在95%以上。该方法也可用于其它中药成分的系统化分离。

二维液相色谱分离制备热毒宁注射液主要成分

通过结合动态轴向压缩工业色谱和制备型液相色谱,从热毒宁注射液中分离制备栀子苷、绿原酸和断氧化马钱子苷,对产物进行组分和纯度分析。以C18色谱柱(250 mm×1000 mm,10μm)为第一维色谱柱,流动相为乙腈水溶液;流动相为乙腈和体积比为0.1%甲酸水溶液的C18色谱柱(50 mm×250 mm,10μm)作为第二维色谱柱,检测波长均为238 nm,对3个化合物所在的3个组分进行进一步的分离,并评价正交度和峰容量。结果表明,该二维色谱分离方法具有856的峰容量和25%的正交度,并分离制备出纯度均在98%以上的3个化合物。制备型离线二维色谱可从热毒宁注射液中同时分离克级高纯度化合物,既可用于对照品,也可用于热毒宁注射液质量控制。

超临界流体萃取-色谱法提纯鱼油乙酯中EPA-EE和DHA-EE

基于自主研发的超临界流体萃取-色谱一体装备,将超临界流体精馏技术和超临界流体色谱技术相结合,对乙酯化鱼油原料在超临界CO2中的溶解情况进行了系统研究,经多种单因素考察,探索了二十碳五烯酸乙酯、二十二碳六烯酸乙酯的分离纯化工艺,并探讨其影响因素。结果表明,鱼油乙酯中的EPA-EE和DHA-EE的最佳分离纯化条件:萃取温度梯度40~90℃,萃取压力14 MPa,CO2体积流量100mL/min,鱼油进样速率2 mL/min,以硅胶为色谱柱填料,色谱分离温度40℃,色谱分离压力14 MPa。在此条件下,鱼油乙酯中EPA-EE和DHA-EE质量分数由30%提升到87%。

淫羊藿黄酮的高效液相色谱分析方法

研究建立了淫羊藿黄酮的高效液相色谱分析方法。采用Sinochrom ODS-BP色谱柱；乙腈-水为流动相，乙腈浓度梯度：0～12min（20％～30％），12～20min（30％～36％），20～30min（36％～58％）；洗脱时间：30min体积流量：1．0mL／rain；检测波长：270rim；进样量：20μL。对淫羊藿水提物进行分离得到13个分离良好的色谱峰，并确认这13个峰具有淫羊藿黄酮类化合物的紫外特征吸收。以淫羊藿苷为标准品对这13个黄酮进行了定量分析。该方法分析时间短，精密度、稳定性和重现性良好，可用于淫羊蕾水提物的质量控制。

苦皮藤β-二氢沉香呋喃多元醇酯类化合物分离及结构解析

采用反复正相硅胶层析与半制备型高效液相色谱结合方法提取、分离苦皮藤中化学成分,用1H NMR1、3C NMR和HPLC/Q-TOF液质联用技术对化合物结构进行鉴定。结果表明,从苦皮藤中分离得到3个化合物,经光谱分析鉴定其结构分别为化合物1（1β,6α,8β-三乙酰氧基-2β,12-二异丁酰氧基-9α-苯甲酰氧基-4α-羟基-β-二氢沉香呋喃）;化合物2（1α,2α,8β-三乙酰氧基-9α-苯甲酰氧基-13-二异丁酰氧基-4β,6β-二羟基-β-二氢沉香呋喃）;化合物3（1α,2α,6β,13-四乙酰氧基-8α-异丁酰氧基-9β-呋喃甲酰氧基-4β-羟基-β-二氢沉香呋喃）,并在Q-TOF MS正离子模式下对化合物1~3裂解方式进行探讨。

高产S-腺苷蛋氨酸的酿酒酵母发酵条件的响应面法优化

利用Design Expert软件,采用Plackett-Burman(PB)设计和响应面法(RSM)对产S-腺苷蛋氨酸(SAM)的酵母菌株的发酵条件进行优化,PB实验设计及分析结果表明,接种量、L-Met质量浓度、发酵时间是影响SAM胞内产量的3个显著因素。在此基础上通过最陡爬坡实验逼近最大响应区域,并采用Box-Behnken实验设计及响应面分析确定了发酵产SAM的最佳条件为接种量10%,L-Met质量浓度为4.0g/L,发酵时间56h,发酵温度30℃,pH为6.0,在250mL三角瓶中装液量60mL,种龄24h,摇床转速180r/min。最终优化后的SAM胞内产量达到287.615 7mg/g,比初始产量提高1.38倍。

β-二氢沉香呋喃类化合物构效关系的研究新进展

归纳总结了近年来从卫茅科植物苦皮藤(Celastrus angulatus Max.)中分离得到的具有杀虫活性成分的β-二氢沉香呋喃为骨架的多元醇酯类化合物。并根据目前新的研究结果,对已经有文献报道的该类化合物的杀虫活性、取代基结构等进行系统的归类和分析,总结出该类化合物化学结构与杀虫活性之间存在的特定规律,为进一步探索苦皮藤中杀虫成分的构效关系,尝试合成新的具有不同取代基团的β-二氢沉香呋喃类化合物,起到一定的指导作用。

苦皮藤中二氢沉香呋喃倍半萜类化合物分离纯化方法的优化

为了优化苦皮藤中二氢沉香呋喃倍半萜类化合物分离纯化的方法,应用正相及反相高压制备柱层析相结合的方法进行分离纯化,以TLC及HPLC确定制备流动相条件并跟踪检测其分离效果.结果表明,对苦皮藤中富含二氢沉香呋喃倍半萜类化合物部分进行分离的过程中,采用正相、反相高压制备柱层析交替进行的方法最为有效.通过该方法,已得到两个二氢沉香呋喃倍半萜类化合物,纯度均在95%以上.

红薯茎叶化学组成的研究进展

本文综述了近年来国内外对红薯茎叶化学组成的研究成果,着重介绍了其中具有生物活性的成分,同时展望了红薯茎叶今后的研究方向。

海参中主要生物活性成分研究进展

海参作为传统珍贵的食品及名贵的海洋生物,其保健价值由古至今一直为人们所称道。本文对近20年来国内外研究中发现的海参主要活性成分:多糖、海参皂苷、脑苷脂、神经节苷脂的分子结构进行总结,并对其抗肿瘤、抗癌、提高免疫活性、抗菌等生物活性进行综述,为海参资源的合理开发利用提供科学依据。

杀虫植物苦皮藤毒杀成分的研究

从苦皮藤CelastrusangulatusMax .根皮中分离出 5个对粘虫Mythimnaseparata (Walker)具有毒杀活性的新化合物 .经高分辨质谱和核磁共振谱鉴定其结构为 1α,2α ,6 β 三乙酰氧基 4 β 羟基 8α 异丁酰氧基 9β 呋喃甲酰氧基 13 异戊酰氧基 β 二氢沉香呋喃 (1) ,1α ,2α ,6 β 三乙酰氧基 4 β 羟基 8α ,13 二异丁酰氧基 9β 苯甲酰氧基 β 二氢沉香呋喃 (2 ) ,1α ,2α ,6 β 三乙酰氧基 4 β 羟基 8α 异丁酰氧基 9β 苯甲酰氧基 13 异戊酰氧基 β 二氢沉香呋喃 (3) ,1α ,6 β ,8α ,13 四乙酰氧基 2α 羟基 9α 苯甲酰氧基 β 二氢沉香呋喃 (4) ,1α ,2α 二乙酰氧基 4 β ,6 β 二羟基 8β 异丁酰氧基 9α 苯甲酰氧基 13 异戊酰氧基 β 二氢沉香呋喃 (5 ) .它们对5龄粘虫的致死中量LD50 分别为 91 4 ,2 71 5 ,16 8 8,388 0和 135 3μg/g .