蝎毒素基因分子生物学研究进展

介绍了克隆蝎毒素ｃ Ｄ Ｎ Ａ 和基因组基因的策略以及蝎毒素ｃ Ｄ Ｎ Ａ 的结构和毒素蛋白前体的翻译后加工过程， 同时综述了蝎毒素基因组基因的组织结构及其ｍ Ｒ Ｎ Ａ

两步PCR快速扩增东亚钳蝎BmKIT3 3'cDNA末端序列

对3′RACE方法进行了修改,采用一条特异性引物和一条通用OligodT引物成功地克隆了东亚钳蝎BmKIT33′cDNA末端,与常规3′RACE方法相比,两步PCR方法具有节约成本、节省时间、增加反应特异性等优点,尤其适用于生物活性肽基因的快速克隆和鉴定.

蝎Na^+通道毒素的结构及功能研究进展

蝎Na+ 通道毒素为低分子量肽类物质 ,由 6 0～ 76个氨基酸残基组成 ,含有 4对二硫键。这类分子为电压门控Na+ 通道功能门控机制的高亲和性配体 ,具有重要的理论价值和应用前景。本文对Na+ 通道毒素的初级和高级结构。

两个东亚钳蝎神经毒素cDNA的克隆和序列分析

构建了东亚钳蝎毒腺组织 c DNA文库 ,用 PCR筛选到两个新的神经毒素全长 c DNA,其开放阅读框(ORF)包括 :信号肽、成熟毒素和 /或额外氨基酸序列 ,它们编码的成熟毒素分别命名为 BmαTX9和 Bm IT( cp) 2 .序列分析表明 ,BmαTX9为抗哺乳动物神经毒素 ;Bm IT( cp) 2为痉挛型昆虫毒素 .文章还对东亚钳蝎神经毒素的命名 ,分类以及进化等问题进行了初步的探讨 .

蝎毒液肽基因内含子剪接信号分析

从中国蝎ButhusmartensiiKarsch基因组DNA中分离到两个毒液肽基因的内含子。在此基础上 ,通过编辑和分析目前已出版的蝎毒液肽基因内含子序列 ,确定了这类基因内含子剪接信号的共有序列 ,并将其与其它物种进行了比较。

蝎α-毒素的分子进化:加速突变与功能趋异

蝎α-毒素为一类空间结构高度相似而药理学功能趋异的蛋白质家族.cDNA序列分析表明蝎α-毒素5＇非翻译区和信号肽编码区序列的保守性显著高于成熟毒素编码区,3＇非翻译区在药理学组内高度保守.而且,成熟毒素编码区密码子第1,2和3位核苷酸突变率相似.非翻译区内每个位点的核苷酸替代数(K)小于成熟毒素编码区内每个同义位点的核苷酸替代数(Ks),而且成熟毒素编码区内每个非同义位点的核苷酸替代数(Ka)接近或大于Ks值.上述数据表明,蝎α-毒素成熟肽编码区内的突变为加速进化方式.这一结论得到进化树结果的支持.此外,研究还表明稳定3D结构的15个保守性残基靠近分子内部,这可能作为蝎α-毒素结构性限制因素在进化过程中维持CSαβ结构的恒定;4个热点突变区分布于分子表面的潜在功能区,表明正性Darwin选择驱动了蝎α-毒素的加速进化.研究结果合理地解释了蝎α-毒素保守性3D结构与趋异的药理学功能之间的关系.

棉铃虫增殖SfaMNPV的产量试验

用棉铃虫作为芹菜夜蛾核型多角体病毒的替代宿主，研究了影响该病毒产量的几个因素．结果发现，当３龄棉铃虫用４．９４×１０５ＰＩＢｓ／ｍＬ饲喂６０ｈ得到的ＰＩＢ产量最高．每头棉铃虫平均产量达到７．６５１×１０９ＰＩＢＳ．全程死亡天数１１ｄ．同时发现幼虫死亡体重与ＰＩＢ产量之间存在显著的直线回归关系，斜率为０．０１３７２，即死亡幼虫体重每增加１ｍｇ，ＰＩＢ数目就要增加１．３７２×１０７．在比较温度对ＰＩＢ产量影响的试验中，２６℃比３０℃更有利于病毒生产，其增殖曲线典型，有较长的对数增殖期，最终病毒滴度高．

进化基因组学在昆虫天然免疫研究中的应用前景

整合基因组学和进化论而发展起来的进化基因组学正在逐渐改变传统昆虫学的研究模式。对昆虫天然免疫的研究已不再仅仅依靠实验学方法。3种全基因组序列被破译的模式昆虫(黑腹果蝇、冈比亚按蚊和意大利蜜蜂)将为这些研究引入新的方向。该文将以模式昆虫为代表,简要介绍如何利用进化上的趋同和趋异概念建立一特定昆虫物种的抗微生物肽基因蓝图;以及如何利用基因组数据和进化分析方法鉴定控制昆虫Toll信号通路关键组分Spatzle配体的进化优势位点。

一个新的东亚钳蝎毒素(BmKT_1)全长cDNA的克隆和分析

首先构建了东亚钳蝎毒腺组织 c DNA文库 ;根据已知的东亚钳蝎哺乳动物毒素氨基酸序列保守区设计引物 ,并用 PCR从 c DNA文库中扩增出一个 c DNA片段作为筛选 c DNA文库的探针 ;从 c DNA文库中筛选到二个编码同一个新的蝎毒素多肽的 c DNA,它们除 3′- UTR外 ,其余序列完全一致 .它们均含有 2 55bp长的开放阅读框 ,编码 85肽的前体毒素 ,包括 1 9个氨基酸残基的信号肽 ,66个残基的成熟毒素 (命名为 Bm KT1) ;Bm KT1氨基酸序列与已知的蝎毒素具有较大的同源性 ,与 Bm KM1,Lqq ,Lqhα IT和 Bm K M10 的同源性分别为 77%、67%、67%和 65% .Bm KT1的 C端不存在末端修饰步骤且具有一个与这些毒素不相同的特征结构 ,即在末端延伸了两个氨基酸残基 - P- S,推测 Bm KT1具有新的活性功能特征 .

替代宿主传代后的SfaMNPV的毒力测定及电镜观察

对四种替代宿主传代后的芹菜夜蛾核型多角体病毒（ＳｆａＭＮＰＶ，Ｓｙｎｇｒａｐｈａｆａｌｃｉｆｅｒａｍｕｌｔｉｐｌｅｎｕｃｌｅａｒｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓ）进行毒力测定，表明其对棉铃虫和小菜蛾仍具较高毒性，ＬＣ＿(５０)值分别为３．８０７×ｌ０￣４ＰＩＢ／ｍＬ和２．３６４×１０￣６ＰＩＢ／ｍＬ。超薄切片电镜观察，经过替代宿主传代后，ＳｆａＭＮＰＶ的包理类型发生了变化，表现在以多粒包埋为主向以单拉包埋为主的转变。

丰碑永存——大型电视片《邓小平》观后

翻开党史的长卷,追寻伟人的足迹,邓小平的身影,依然那么清晰——一把雨伞,撑着风雨,一双草鞋,踏着崎岖,从江西到陕北,二万五千里,终于,在东方的地平线上,与毛泽东一起,托出了一个崭新的世纪。

东亚钳蝎中一个中性哺乳动物神经毒素全长cDNA的克隆和分析

构建了东亚钳蝎毒腺cDNA文库 ,根据东亚钳蝎中性哺乳动物神经毒素BmKM4的氨基酸序列设计并合成引物 ,用PCR方法从文库中筛选到BmKM4全长cDNA序列。它由 5′UTR、可读框和 3′UTR组成。与其他东亚钳蝎哺乳动物神经毒素cDNA的相应区域相比 ,BmKM4cDNA的 5′UTR高度保守 ,而其 3′UTR则变异较大。AUG的旁侧序列为AAAATGAA ,与绝大多数蝎毒素基因一致。在BmKM4mRNApoly(A)尾上游 17nt处 ,有一典型的腺苷化信号 (AATAAA)。可读框编码 84个氨基酸的毒素前体 ,包括N端 19个氨基酸残基组成的信号肽 ,中间 6 4个氨基酸残基组成的成熟毒素 ,以及C末端的额外碱性氨基酸Arg。椐据一般规律 ,尾端Arg在毒素前体的成熟过程中会被切除。

抑制剂胱氨酸结多肽的抗菌和杀虫活性及进化

抑制剂胱氨酸结(inhibitor cystine knot, ICK)多肽是胱氨酸结(cystine knot, CK)多肽的三大家族成员之一。这种类型的多肽含有反向平行的3个β折叠,由3对二硫键形成稳定的拓扑学打结。它们广泛地分布在动物、植物、真菌甚至原核生物中,具有蛋白酶抑制剂,离子通道毒素以及抗微生物、抗疟疾及抗病毒活性等多种生物学功能。本文首先总结了昆虫中已发现的抗微生物活性和离子通道毒素活性的ICK肽;然后介绍了有毒动物尤其是蜘蛛、蝎子,以及植物中一些神经毒素活性的ICK肽,它们通常靶向昆虫体内的各种离子通道,从而发挥杀虫效果;最后结合ICK肽的基因序列特征,结构域和二硫键数目以及物种分布,对其进化多样性进行了探讨。

蛇三指环毒素家族的研究进展

蛇毒是其毒腺分泌的,主要由有生物活性的蛋白和多肽等混合物组成.这些蛋白和多肽大部分可归为两大类:酶类和非酶类.三指环毒素家族是其中最大的非酶类毒液蛋白类群,虽然该家族的蛋白质都是由β-折叠片组成的三指环结构,但是却呈现出了多样的功能活性.神经毒素是该家族中很重要的组分.三指环毒素家族中不同的功能群体结构的差异,导致了其生物功能的多样性以及每个功能类群的特殊性.蛇的三指环毒素家族很可能起源于无毒的三指环祖先蛋白.研究表明,正选择在该毒素家族的进化和多样性形成中起重要作用.

我国第一座高山冰场

长白山高山冰雪场,是我国第一座高山冰场。它位于吉林省安图县境内,一九六○年建成,承担着吉林省和国家冰雪运动员的训练、比赛任务。这个基地多少年来培养了一批又一批冰雪健儿,他们在重大国际比赛中,为国争了光。

一个东亚钳蝎K^+通道阻断剂cDNA的克隆和序列分析

蝎毒液中的K+通道阻断剂对于研究细胞特定K+通道的药理学特性和生理学作用具有重要的价值 .根据已报道的一种Ca2 +激活K+通道阻断剂BmP0 1的氨基酸序列设计 1对“背对背”简并引物 ,运用反向PCR策略从中国东亚钳蝎毒腺组织中首次克隆到其全长cDNA ,它由 5′UTR ,ORF和 3′UTR 3个部分组成 .翻译起始密码子ATG旁侧序列AAAATGA在蝎Na+通道毒素和原生生物基因中高度保守 ,表明这类基因可能存在共同的翻译起始机制 ;3′UTR含有poly(A)信号 .ORF编码 5 7个氨基酸残基 ,N端 2 8个残基为信号肽序列 ,富含疏水性氨基酸 ,其长度显著不同于已报道的蝎Na+通道毒素信号肽 ,C端 2 9个残基为成熟毒素 ,其氨基酸序列与天然BmP0 1完全一致 .

两个东亚钳蝎毒素非编码转录本:蝎毒腺细胞存在NMD途径的证据

从中国东亚钳蝎(Buthus martensii Karsch, BmK)毒腺组织cDNA文库中分离到两个毒素基因的非编码转录本, 命名为BmαTX15-SP和BmTXKβ-SP. 核苷酸序列分析表明它们的5′端序列分别与BmαTX15和BmTXKβ毒素cDNA的5′UTR和上游ORF序列一致, 下游则缺乏任何同源性. 两个非编码转录本含有多个短的ORF(≤34 aa), 3′端含有一个AATAAA加尾信号, 距poly (A) 尾14 - 18 nt. 基因组织结构分析表明, 两个非编码转录本并非错误剪接的产物. 研究结果为蝎毒腺细胞可能存在类似于哺乳动物和酵母的无义介导的mRNA降解途径提供了证据.

靶向离子通道的神经毒素起源于抗微生物防御肽(英文)

靶向离子通道的神经毒素和抗微生物防御肽(defensin)享有三个共同的蛋白折叠(fold)类型,即半胱氨酸稳定的α-螺旋和β-片层折叠(cysteine-stabilizedα-helix andβ-sheet,CSαβ),抑制剂胱氨酸结折叠(inhibitor cystine knot,ICK)和β-防御肽折叠(β-defensin,BDF)。序列、结构和功能等多维证据显示靶向离子通道的神经毒素起源于相关的古老防御肽。毒素和防御肽系统正在成为研究保守结构支架功能新颖化(neofunctionalization)进化机制的理想体系。阐明蛋白质功能新颖化的进化机制不仅有利于回答进化生物学的基本科学问题,而且对于合理的药物设计具有重要的指导意义。本文综合阐述了神经毒素起源于抗微生物防御肽方面的最新研究进展。

原花青素调节MAPK信号通路抑制炎性损伤的Meta分析

目的通过Meta分析,探索原花青素通过抑制丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路来抑制炎性反应的具体机制。方法对Cochrane、PubMed、Spinger、Web of Science、CNKI和万方等数据库检索相关中、英文的实验性研究,利用STAIR清单对文献质量进行评价,提取分析数据应用Rev Man 5. 3和Stata.12. 0软件进行Meta分析。结果共纳入23个实验性研究。研究结果表明原花青素对于促炎性因子IL-1β(SMD=-1. 17,P=0. 05)、IL-6(SMD=-1. 72,P<0. 0001)和TNF-α(SMD=-2. 98,P<0. 00001)具有抑制作用,降低了促炎介质COX-2(SMD=-7. 10,P<0. 00001)、TLR-4(SMD=-1. 24,P <0. 28)的活性,抑制了P-P38(SMD=-0. 95,P <0. 00001)、P-JNK(SMD=-4. 09,P<0. 08)、P-ERK(SMD=-3. 71,P<0. 00001)的活性,其抑制MAPK信号通路的作用在不同亚组中有差异。结论原花青素通过抑制MAPK信号通路中P38、ERK和JNK的磷酸化来抑制促炎性因子的产生从而降低炎性损伤,并且其作用效果受时间、剂量的影响。