过表达microRNA-7通过下调CGG结合蛋白1的表达抑制人肺癌细胞生长

目的探讨过表达microRNA-7(miR-7)对人肺癌细胞体内外生长的作用和可能机制。方法利用真核表达载体pcDNA3.1(-)-pri-miR-7(p-miR-7),体外瞬时转染95D人肺癌细胞,MTT法和克隆形成实验检测95D细胞的增殖变化;免疫荧光技术检测95D细胞Ki-67和CGG结合蛋白(CGGBP1)的表达;建立人肺癌裸鼠肿瘤模型,肿瘤局部注射p-miR-7真核表达载体,测量肿瘤大小并观察小鼠生存时间;实时PCR检测肿瘤组织中miR-7表达水平;免疫组织化学技术检测组织中Ki-67和CGGBP1蛋白的表达。结果过表达miR-7可明显抑制肺癌细胞的体外增殖(P<0.05),Ki-67和CGGBP1的表达显著减少(P<0.05);体内实验结果显示,局部注射p-miR-7组中miR-7表达水平明显增加,同时荷瘤裸鼠的肿瘤生长缓慢,生存时间明显延长(P<0.05)。肿瘤组织中Ki-67和CGGBP1蛋白的表达量均显著减少(P<0.05)。结论过表达miR-7可显著抑制人肺癌细胞的体内外生长,可能与其下调肿瘤生长相关蛋白CGGBP1的表达有关。

miRNA-126基因敲减小鼠肠系膜淋巴结T淋巴细胞比例的变化

目的:研究miRNA-126基因敲减小鼠肠系膜淋巴结T及B淋巴细胞数量的变化。方法:检测miRNA-126基因敲减(KD)小鼠肠系膜淋巴结的体积、重量和淋巴结细胞总数;HE染色检测小鼠肠系膜淋巴结的病理形态学变化;流式细胞术(FACS)检测淋巴结中T及B淋巴细胞数量的变化。结果:与野生型(WT)小鼠相比,miR-126KD小鼠肠系膜淋巴结体积、重量和淋巴结细胞总数均显著增加(P<0.05),且病理形态学发生异常;肠系膜淋巴结中B淋巴细胞比例和数量无变化(P>0.05),CD4+T细胞数量无变化,而CD4+T细胞百分数明显减少(P<0.05),CD8+T细胞百分数和绝对数量均显著增加(P<0.05)。结论:miRNA-126敲减后可显著影响肠系膜淋巴结中T淋巴细胞的数量,提示miRNA-126可能影响肠系膜淋巴结的免疫功能。

microRNA-126基因敲减小鼠的鉴定及其血糖水平变化

目的:检测micro RNA-126(mi R-126)基因敲减(knock down,KD)小鼠各组织器官中mi R-126的表达,并观察小鼠血糖的变化,初步探讨其意义。方法:分别提取野生型(wild type,WT)和mi R-126 KD模型小鼠中12种组织器官的总RNA,荧光定量PCR探针法检测mi R-126在12种组织器官的表达水平;检测小鼠血糖的变化,并观察小鼠体质量的变化;HE染色观察肝脏和胰腺的病理改变。结果:与正常小鼠相比,mi R-126 KD模型小鼠的脾、胰腺、肝、肌肉和肺等器官组织中mi R-126的表达显著下调(P<0.05);出生第7周和第16周模型小鼠血糖水平均明显增高(P<0.05),HE染色显示模型小鼠胰腺和肝组织呈明显病理异常;出生第13周后,模型小鼠体质量逐渐增加(P<0.05)。结论:mi R-126KD小鼠血糖水平明显增加,可能与胰腺和肝的病理改变有关,提示mi R-126在血糖代谢中具有重要作用,可能与2型糖尿病的发生发展密切相关。

真核表达载体pEGFP-C2-miR-126-sponge的构建及其表达活性研究

目的构建靶向miR-126的真核表达载体pEGFP-C2-miR-126-海绵体(sponge),并探讨其下调miR-126的表达对肝癌HepG2细胞体外生长的影响,为后续深入研究miR-126在肝癌发生中的作用提供前期实验基础。方法合成miR-126-sponge,构建pEGFP-C2-miR-126-sponge真核表达载体,体外瞬时转染肝癌细胞HepG2,荧光显微镜下观察EGFP的表达情况;Real-time PCR检测细胞中miR-126的表达水平;MTT法和克隆形成实验检测细胞的增殖变化;划痕实验观察细胞的体外迁移能力改变。结果成功构建pEGFP-C2-miR-126-sponge真核表达载体(命名为p-miR-126-sp);Real-time PCR结果显示,与对照组(p-Cont)相比,p-miR-126-sp组中miR-126表达水平显著降低(P<0.05);MTT检测发现,p-miR-126-sp组中细胞增殖数目明显减少(P<0.05);此外,p-miR-126-sp组的克隆形成数和细胞迁移数均明显减少(P<0.05)。结论 miR-126-sponge可显著下调miR-126的表达水平进而抑制肝癌细胞HepG2的体外增殖及迁移能力。

microRNA-7对小鼠肠系膜淋巴结αβT淋巴细胞组成的影响

目的:研究miR-7(MicroRNA-7,miRNA-7)对小鼠肠系膜淋巴结αβT淋巴细胞比例的影响并初步探讨其意义。方法:利用miR-7基因敲减(Knockdown,KD)小鼠模型,观察其肠系膜淋巴结大小、重量和淋巴结细胞总数,以及HE染色的病理学变化;流式细胞术(FACS)检测淋巴结中αβT淋巴细胞亚群(CD3+T细胞、CD4+T细胞和CD8+T细胞)以及CD4+T细胞和CD8+T细胞的活化相关分子CD69、CD62L和功能相关因子IFN-γ表达的情况。结果:与野生型(Wild type,WT)小鼠相比,miR-7KD小鼠肠系膜淋巴结大小、重量指数和淋巴结细胞总数均显著增高(P<0.05),且HE染色显示MLNs有病理性改变;肠系膜淋巴结中αβCD3+T细胞比例增加显著,其中以CD4+T细胞比例变化最为明显(P<0.05),而CD19+B淋巴细胞比例明显下调(P<0.05),但各亚群细胞总数均明显增加(P<0.05);最后,CD4+T细胞和CD8+T细胞中的CD62L+细胞的比例均显著下调(P<0.05),而CD69+细胞和IFN-γ+细胞比例均显著上调(P<0.05)。结论:miR-7敲减后可显著影响肠系膜淋巴结中αβT淋巴细胞的组成比例,提示其对肠系膜淋巴结中淋巴细胞的组成和功能具有重要的调控作用。

CD4^+CD25^+调节性T细胞可塑性分化的研究进展

新近研究显示CD4+CD25+调节性T细胞的分化过程及其功能在一定条件下存在可塑性。这不仅体现了机体免疫调节机制的复杂性,而且还提示该过程与炎症、自身免疫性疾病和肿瘤等临床疾病的发生发展过程密切相关。本文就其相关研究进展做一综述。

MicroRNA-7基因敲减小鼠模型的鉴定

目的鉴定miR-7基因敲减小鼠模型,为进一步研究miR-7的生物学功能奠定基础。方法常规剪取7只miR-7基因敲减(miR-7 knock down,miR-7KD)小鼠的脚趾和尾巴,分别用来提取基因组DNA和总RNA;剪取1只WT(wild-type,WT)小鼠的尾巴,提取其总RNA;将提取的两组小鼠的总RNA逆转录成c DNA;分别以基因组DNA和c DNA为模板,用特异性引物PCR技术扩增目的基因增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)片段;提取WT和miR-7KD小鼠7个不同组织器官的总RNA,利用Real-time PCR探针法检测各组织器官中miR-7成熟体的表达水平;HE染色观察miR-7KD小鼠心脏、肺脏以及结肠的形态学结构改变。结果 PCR结果显示,模型小鼠的脚趾基因组DNA和尾巴c DNA中均能扩增出载体目的基因EGFP片段;Real-time PCR结果显示,miR-7KD小鼠心脏、肝脏和脾脏等组织器官miR-7成熟体的表达水平较WT小鼠均显著下调(P<0.05);HE染色结果显示,miR-7KD小鼠心脏、肺脏以及结肠形态学结构发生了明显的病理性改变。结论成功鉴定了miR-7基因敲减小鼠模型,为后续深入探讨该分子的生物学功能提供重要实验基础。

微小RNA在乳腺癌中的研究进展

微小核糖核酸（miRNA ）是一种长度为21‐23nt （nucleo‐tide）的非编码RNA ，其通过与靶分子mRNA的3′末端非翻译区（3′untranslated region）结合，从而抑制靶分子 mRNA 的翻译及蛋白质的合成，发挥负性调控作用［1］。新近研究表明， miRNA不仅在细胞功能和机体组织器官生长发育中发挥重要调控作用，而且与多种临床肿瘤的发病过程密切相关。近年来大量研究显示，miRNA参与了乳腺癌的发生、生长、转移和侵袭过程，并且有望成为乳腺癌临床诊治的潜在新靶标。

pG-miR-7-Sponge转基因小鼠载体的构建及鉴定

目的构建pG-miR-7-Sponge转基因小鼠的真核载体并检测其表达活性,为转基因小鼠的建立提供前期实验基础。方法利用miRNA sponge(海绵体)技术原理,合成miR-7-Sponge序列,酶切连接入真核表达载体eGFP-C2并转化Stbl3感受态细胞,克隆PCR、酶切和测序鉴定重组载体eGFP-C2-miR-7-Sponge(简称pG-miR-7-Sp);将重组载体pG-miR-7-Sp体外瞬时转染人肺癌95D细胞,荧光显微镜下观察细胞的GFP表达情况;Real-Time PCR检测细胞中miRNA-7的表达;MTT法检测细胞的增殖变化。结果经克隆PCR、酶切鉴定及测序分析,成功构建了真核表达载体pGmiR-7-Sp;pG-miR-7-Sp瞬时转染95D细胞48 h后,与对照组细胞相比,miR-7表达水平明显降低(P<0.05);同时细胞的生长明显加快(P<0.05)。结论成功构建pG-miR-7-Sp真核表达载体。

微小RNA-7过表达对人肺癌细胞体内外转移的影响

目的探讨过表达miR-7对人肺癌细胞体内外转移的影响。方法将真核表达载体pcDNA3.1(-)-pri-miR-7(命名为p-miR-7)体外瞬时转染人肺癌95D细胞后,划痕法检测细胞的体外迁移情况;侵袭实验检测细胞侵袭能力的改变;建立人肺癌裸鼠体内转移模型,HE染色观察过表达miR-7对肺部肿瘤转移的影响;免疫荧光技术检测肿瘤转移相关蛋白Sema4C蛋白的表达。结果过表达miR-7可显著抑制人肺癌细胞的体外迁移和侵袭能力(P<0.05);与对照组相比,过表达miR-7组未观察到明显的肺部肿瘤细胞转移灶(P<0.05);免疫荧光结果显示,过表达miR-7组中,肿瘤细胞内Sema4C蛋白表达量显著降低(P<0.05)。结论过表达miR-7可以显著抑制人肺癌细胞体外及体内的转移能力,提示miR-7有望成为肺癌后续基因治疗的新靶点。

microRNA-7基因敲减对小鼠CD4^+SP细胞胸腺发育的影响

目的:研究microRNA-7(miRNA-7,miR-7)基因敲减对小鼠CD4+SP细胞胸腺发育的影响。方法:检测miR-7基因敲减(miR-7 knock down,miR-7KD)和野生型(Wild-type,WT)小鼠胸腺重量及细胞总数变化;HE染色观察miR-7KD小鼠胸腺的形态学结构改变;FACS检测胸腺CD4+单阳性(Single positive,SP)细胞的比例并计算细胞总数,同时检测CD4+SP细胞CD44及CD62L表达变化;核抗原Ki-67染色法检测CD4+SP细胞的增殖情况;FACS检测CD4+SP细胞的凋亡变化;Western blot技术检测胸腺中总ERK1/2和磷酸化ERK1/2表达水平变化。结果:与WT小鼠相比,miR-7KD小鼠胸腺体积、重量以及细胞总数均显著减少,且形态学结构发生改变(P<0.05);FACS结果显示,miR-7KD小鼠胸腺CD4+SP细胞比例明显降低,且细胞总数减少(P<0.05)。此外,CD4+SP细胞的CD44表达水平显著增加,而CD62L表达水平明显减少(P<0.05);同时,CD4+SP细胞增殖及凋亡比例均显著增加(P<0.01);最后,miR-7KD小鼠胸腺中ERK1/2以及磷酸化ERK1/2的表达均明显下调(P<0.05)。结论:miR-7基因敲减后可显著影响CD4+SP细胞的胸腺发育,这可能与细胞活化水平及ERK1/2信号通路改变有关。

浅析初中政治课学习学法指导的着力点

学法的指导，是教师教学过程的一个重要的任务，也是实施素质教育和新课程改革的重要目标之一。在某种意义上来说，培养和指导学生学会学习比传授知识更为重要。首先，教学是一个双边活动，不仅要求教师要有较高的教学水平，而且要求学生要有一定的学习水平，是师生这两个方面的对立统一。教学效果的好坏取决于教和学双边的积极性和科学性的有效配合。对学生而言，积极性是指学习的态度。科学性是指对学习内容的准确掌握与对学习规律的正确认识和利用。

校长怎样实践教学管理

教学管理是学校管理的核心,校长作为教学管理的核心人物,一定要注意加强自身学习与工作,努力革新理念,践行以人为本的教学管理新思路。站在一线教学管理的角度对校长如何完善教学管理进行分析。

微小RNA-7敲减对小鼠脾脏中T淋巴细胞体外功能的影响

观察微小RNA-7(microRNA-7,miR-7)敲减(Knock down,KD)对小鼠脾脏T淋巴细胞体外功能的影响并探讨其意义。常规分离野生型(wild type,WT)小鼠脾脏T淋巴细胞,经CD3和CD28抗体刺激后,Real-time PCR检测不同时间点(0h;24h;48h)细胞中miR-7的表达变化;进一步用Con A、CD3和CD28抗体刺激miR-7KD小鼠脾脏T淋巴细胞,CCK8检测细胞增殖率;Real-time PCR检测miR-7KD小鼠脾脏T淋巴细胞IL-12、IL-4、IL-6、TNF-α、IFN-γ和IL-10表达的变化;FACS检测CD4+T和CD8+T细胞的数量变化及CD4+T细胞膜分子CD44、CD62L和IL-4、IFN-γ的表达变化。结果显示,WT小鼠脾脏T淋巴细胞活化后,miR-7的表达水平显著上调(P<0.05);与WT小鼠相比,在Con A、CD3和CD28抗体作用下miR-7KD小鼠脾脏T淋巴细胞增殖明显增加(P<0.05);miR-7KD小鼠脾脏T淋巴细胞IL-12、IL-4、IL-6、TNF-α和IFN-γ水平均明显上调(P<0.05),而IL-10表达显著下调(P<0.05);FACS检测结果显示CD4+T细胞比例明显上调(P<0.05),而CD8+T细胞的比例变化不显著(P>0.05);CD4+T细胞膜分子CD62L水平显著下降,CD69及IL-4、IFN-γ的表达水平均显著上调(P<0.05)。结果表明,miR-7敲减以后可显著影响小鼠脾脏T淋巴细胞的功能,本实验为后续深入探讨其在T淋巴细胞功能调控中的作用提供实验依据。

CCR6与免疫细胞关联性研究进展

趋化因子受体6(chemokine receptor 6,CCR6)是趋化因子受体CCR亚家族成员之一,可表达在单核细胞、树突状细胞、T细胞、B细胞等多种免疫细胞上。新近研究显示,CCR6在免疫细胞介导的炎症反应、移植排斥反应以及肿瘤免疫逃逸等中发挥了重要作用。本文就其相关研究进展做一综述。

天然CD4^+CD25^+调节性T细胞在胸腺中发育的研究进展

天然CD4+CD25+调节性T细胞是CD4+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的重要功能亚群,其主要在胸腺中发育成熟,对维持自身免疫耐受具有重要意义。新近研究显示,胸腺微环境中多种分子和相关信号途径在天然CD4+CD25+调节性T细胞的发育中具有重要作用,这不仅促进了人们对天然CD4+CD25+调节性T细胞的认识,而且对于机体免疫耐受机制的探讨均具有重要意义。本文就其相关研究进展做一综述。