沉默G6PD表达对人皮肤黑色素瘤细胞生长及抗氧化应激的影响(摘要)

目的鉴定G6PD缺陷型人皮肤黑色素瘤稳转细胞株;观察其生长增殖及对Diamide、H2O2或UV诱导的氧化应激反应;比较与外源性抑制G6PD剂作用的异同;探讨G6PD与肿瘤细胞生长和抗氧化应激的关系.方法通过荧光显微镜观察GFP表达的稳定性、Western blotting检测G6PD蛋白表达量和紫外法测定G6PD比活性,以鉴定G6PD缺陷型人皮肤黑色素瘤A375稳转细胞株(A375-G6PD△);MTT法、平板克隆法和流式细胞仪(FCM)检测观察A375-G6PD△与野生细胞(A375-WT)生长增殖能力和凋亡率的差异;比较两种细胞对巯基氧化剂二酰胺(Diamide)处理后细胞存活率以及NADPH、GSH和H2O2指标的改变;通过FCM对比Diamide、H2O2或UV处理前后A375-G6PD△和A375-WT细胞凋亡率和凋亡蛋白(P53、Bcl-2、Casepase-3)的变化;并观察G6PD非竞争抑制剂DHEA协同Diamide作用与Diamide单独作用相比,两种细胞抗氧化能力和凋亡结果的异同.结果通过反复冻存及多次传代,A375-G6PD△的GFP荧光表达稳定,与A375-WT相比,G6PD表达降低了88.8%,比活性减少了78.5%;A375-G6PD△的生长速度比A375-WT减慢了24.4～37.5%,单细胞克隆形成率也降低25%,凋亡率增加了40%;A375-G6PD△和A375-WT的Diamide半致死量分别为1.2mM和1.8mM;用1.8mMDiamide处理后,与A375-WT相比,A375-G6PD△的NADPH和GSH下降了2.4倍和8.8倍,H2O2增加了7.3倍;FCM检测的凋亡结果显示,A375-G6PD△在Diamide、H2O2或UV作用后,较A375-WT的凋亡率增加了1.8倍、1.7倍和1.1倍;与A375-WT相比,A375-G6PD△在Diamide处理后P53下降2.3倍、Casepase-3升高2.5倍,而在UV作用后P53增加1.4倍;两种细胞Bcl-2的水平在Diamide、H2O2和UV作用后均有所下调;此外,DHEA对A375-G6PD△和A375-WT的G6PD比活性的抑制程度相近,在Diamide联合DHEA的作用后的凋亡数值也相似,二者的P53表达均降低约60%、Casepase-3增加近1倍.结论 A375-G6PD△是稳转的G6PD缺陷人皮肤黑色素瘤细胞株;沉默G6PD表达可减慢A375细胞生长增殖速度,与外源性G6PD抑制剂DHEA作用相似,都能使A375细胞对氧化应激诱导的凋亡更敏感.这说明G6PD不仅能促进人皮肤黑色素瘤细胞的生长增殖,也对调节该肿瘤细胞内由ROS所致的氧化--抗氧化失衡起重要作用.

siRNA沉默G6PD表达对人皮肤黑色素瘤细胞生长及凋亡的影响

研究表明,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)与肿瘤的发生、发展、临床表型及治疗和预后有关.为阐明G6PD与肿瘤的关系及其机理,针对人G6PD基因设计3条siRNA和一条无关序列,再据每一序列,合成两条互补并含siRNA正反义链的DNA,退火后与含GFP的载体pRNAT-U6.2/Lenti连接,转染人皮肤黑色素瘤A375细胞,Real-timePCR筛选有效的一条siRNA,经病毒颗粒包装和病毒生产并感染A375细胞,G418筛选后,挑取单个阳性克隆放大培养,Western blotting检测siRNA干扰G6PD效率为88.83%,构建成G6PD缺陷型A375稳转细胞(A375-G6PD!).与野生型A375细胞(A375-WT)比较,A375-G6PD!的G6PD活性仅为21.53%,细胞倍增时间延长,增殖被抑制,克隆形成率降低25%(P<0.05),凋亡细胞数增加2.86倍(P<0.01),SPF增加33.8%(P<0.05),PI增加59.7%(P<0.01),G0/G1期下降27.7%(P<0.01),凋亡相关蛋白P53下降54.7%(P<0.01)、Caspase-3增加2.2倍(P<0.01)和Bcl-2降低21.7%(P>0.05),提示,G6PD缺陷可能通过下调P53蛋白表达和上调Caspase-3的表达,抑制G2/M期向G0/G1期转换的进程,促进A375的凋亡,机理有待于进一步探讨.

云南阿昌族G6PD基因突变G487A在DF213中的表达

为获得阿昌族G6PDWT和G6PDG487A重组蛋白,研究G6PDG487A的结构和功能改变,从云南省德宏州梁河县杞木寨乡湾中村阿昌族聚集地的G6PD缺陷家系先证者和正常阿昌族个体全血提取RNA,经RT-巢式PCR得cDNA,将cDNA克隆至pMD18-Tsimple载体中并测序;错配碱基经定点突变修复后,目的基因亚克隆至pThioHis(A)载体,构建了阿昌族G6PD基因野生型和G487A突变型原核表达载体:pThioHis(A)-AChang-G6PDWT和pThioHis(A)-AChang-G6PDG487A。用重组质粒转化E.coli Competent Cells DF213(G6PD defeciency),经IPTG诱导G6PD表达、10%SDS-PAGE电泳检测表达蛋白和紫外340nm定量测定G6PD活性的分析表明,pThioHis(A)-AChang-G6PDWT和pThioHis(A)-AChang-G6PDG487A在DF213中成功表达,分子量约为59kDa。IPTG诱导0、3、6、9、和12h后,G6PD活性逐渐增高,G6PD基因WT表达的酶活性约是G487A的20-25倍。表达载体的构建以及G6PDcDNA在DF213中成功表达,为重组酶G6PDG487A的进一步研究奠定了基础。

氧化石墨烯及其复合材料去除水体抗生素的研究进展

由于具有优异的抗菌性,抗生素被广泛应用于医学领域和养殖行业。然而,近年来对抗生素大规模的使用和排放,在自然界造成了大量的累积,引发了一系列水环境污染问题,严重威胁生态系统安全和人类健康。因此,研发可去除水中过量抗生素的材料已成为当前环境领域的重要研究方向之一。氧化石墨烯(graphene oxide,GO)以其高比表面积、良好亲水性、耐酸碱性、制备简便、成本低廉等优势,成为了一种新兴的抗生素去除材料。该文首先概述了现有的GO及其复合材料分类制备方法,包括空间改造、共价键修饰和金属氧化物改性等。其次,综述了近年来GO及其复合材料在抗生素去除领域的应用、影响因素及作用机制。结果表明,基于吸附原理的GO复合材料吸附去除抗生素效果主要受溶液p H、共存离子、吸附剂投加量、抗生素类别及浓度等多种因素的影响,吸附机制主要包括静电相互作用、π-π相互作用、阳离子-π键作用和氢键作用等,通过引入元素、金属和有机化合物等手段可有效提高GO材料的吸附容量;基于光催化降解原理的抗生素去除过程中,光照条件是最重要影响因素,而其中关键活性物质包括光生空穴、羟基自由基和超氧自由基等,掺杂金属纳米粒子与半导体纳米材料等能够优化其光催化性能。最后,通过对GO及其复合材料制备过程、去除机理和应用场景的综合分析,指出其普适性不高、实际应用不足和环境毒性不明等现存问题,并提出未来应加强材料研发、产业应用和毒性效应评估等方面的研究展望。

实时定量PCR测定人皮肤黑色素瘤细胞G6PD的表达

目的建立一种灵敏特异、重复性和稳定性好的检测G6PD表达的方法,以探究G6PD与肿瘤的相关性及其机理.方法用Real-time PCR技术测定了野生型、siRNA干扰型和无关序列对照型人皮肤黑色素瘤A375细胞的G6PD基因表达.绘制出β-actin和G6PD的标准曲线,标定了方法的稳定性和重复性,并以内参照β-actin较对G6PD的量.结果β-actin和G6PD标准曲线的回归系数分别为1.086和0.940;稳定性及重复性验证的Ctβ-actin值变异系数分别为2.46%和1.47%,而CtG6PD值变异系数分别为1.76%和1.87%.以野生型A375细胞作对照,无关序列不干扰A375细胞内源性G6PD基因表达(P>0.05),针对G6PD基因表达的siRNA的干扰效率为49%(P<0.01).结论实时荧光定量PCR在检测细胞G6PD基因表达时具有高灵敏度、高重复性和高稳定性的特点,可进一步用于G6PD与肿瘤的相关性研究.

水产养殖环境中抗生素抗性基因(ARGs)研究进展

抗生素对水产养殖业中水生生物疾病防治、生产线增产等发挥着重要作用,但长期滥用抗生素很可能会诱导水生生物体内产生携带抗生素抗性基因(Antibiotic resistant genes,ARGs)的耐药菌(Antibiotic resistant bacteria,ARB)。ARGs在水产养殖环境中的持久性残留、迁移和传播,会埋下基因污染隐患,导致生态失衡并危害人类安全,如何遏制抗生素抗性的传播已引起全球重点关注。就水产养殖环境中ARGs的研究进展,系统总结了ARGs的污染现状及其在水产养殖环境中的来源、迁移传播和影响因素,并简述了ARGs与抗生素、微生物群落和环境因素之间的关联特性,以及抗生素、ARGs和ARB对生态环境与人类健康的影响。基于此,概述了ARGs的控制策略与去除技术,并提出了今后的研究方向,以期为水产养殖环境中ARGs污染机理的解析和抗生素抗性传播风险的控制提供科学参考。

数字乡村建设影响共同富裕的实证检验

文章分别测度了2011—2020年中国30个省份的数字乡村建设水平和共同富裕综合指数,并采用固定效应模型、中介效应模型检验了数字乡村建设对共同富裕的影响及作用机制。结果显示:数字乡村建设显著促进了共同富裕;中西部地区享受到的数字乡村建设红利比东部地区更为显著,且数字乡村建设的共富效应对粮食主产区、产销平衡区的影响大于粮食主销区;数字乡村建设能够通过提升农业现代化水平、增加农村居民收入、提高农村居民数字素养促进共同富裕目标的实现。

新时代背景下共同富裕发展水平测度及时空分异

文章从人民、共享、发展、可持续四个维度构建共同富裕评价指标体系,基于熵权-TOPSIS法从省域层面测度了2011—2020年我国共同富裕发展水平,并对其时空演变、区域差异特征和障碍度进行分析。结果表明:2011—2020年我国共同富裕发展水平呈上升趋势,但总体发展水平较低且区域间存在显著差异,呈现“东部—东北—中部—西部”依次递减的阶梯状发展格局。不同省份之间共同富裕发展具有显著空间正相关性和空间集聚特征,但区域分布逐渐固化;空间关系显著地区以“低-低”集聚模式为主。经济发展效率低、分配制度不健全、物质财富差距大是新时代背景下阻碍中国共同富裕发展的主要因素。

生物炭及其复合材料去除水体石油烃研究进展

水体的石油污染对生态环境造成的长期影响和破坏,是一直以来全球重点关注的环境问题之一。生物炭及其复合材料作为可有效吸附石油烃的富炭多孔材料,已成为目前水体修复领域的重要研究对象。文章对近年来生物炭及其复合材料在水体环境中石油烃吸附的相关研究进行了整理,总结了生物炭的类型、理化性质及其常见的制备过程,介绍了表面改性、磁性改性以及纳米改性等生物炭复合材料制备方式。在此基础上,简述了生物炭及其复合材料吸附石油烃时的原材料性质、污染初始浓度、外加物质以及盐度等内外因素的影响,讨论分析了去除石油烃过程中疏水相互作用、孔隙填充、π-π相互作用、毛细管效应以及表面吸附等作用机理。针对当前研究中所存在的生物炭及其复合材料的生态风险不明确、多数研究停留在实验室阶段、吸附过程机理研究不够深入等问题,提出了强化吸附材料风险评估、优化其制作工艺、提升其循环再生性能和深化吸附机理研究等方向,以期为生物炭及其复合材料吸附水体石油烃的大规模应用提供科学参考。

产业集聚与碳排放:促进还是抑制?——基于中国省级层面的经验证据

文章基于中国2004—2018年30个省份的面板数据,实证分析产业集聚对碳排放的作用效果。研究表明:全国层面,一产集聚和二产集聚均促进碳排放,而三产集聚对抑制碳排放有显著效果。一二产业、二三产业和一三产业的共同集聚均能在一定程度上改善碳排放;地区层面,东中西地区产业集聚对碳排放的作用方向大体与全国一致,但区域间作用效果存在差异。为此,建议政府构建一产、二产集聚与碳排放动态监测的联合预警机制,发挥三产集聚对碳排放的积极作用,因地制宜制定东中西地区产业集聚的发展策略。

双繁星Wiener指标的极值

一个连通的无圈分子图(树)称为双繁星,如果删去其所有悬挂点后,得到的分子图是双星树。主要考虑双繁星的Wiener指标的极值问题,完全刻画了具有固定顶点数的双繁星的最小Wiener指标。

数字经济、产业集中度与贸易规模——基于中国上市公司数据的实证分析

本文基于2012—2020年中国进出口上市公司数据,运用系统GMM方法,实证分析了数字经济对中国进出口贸易规模的影响及产业集中度的调节作用。结果表明:数字经济对中国贸易规模扩大具有显著的促进作用;产业集中度在数字经济赋能贸易规模扩大的过程中发挥了重要的正向调节作用,但数字经济的直接赋能效果与产业集中度的调节效应在不同产业之间存在差异。最后,针对数字经济促进贸易发展过程中出现的问题提出相应的政策建议。

外资进入如何影响制造业市场势力?

准确衡量外资的市场效应是制定对外开放政策的基础,通过使用Roeger模型对中国制造业产业层面的市场势力测算发现:制造业在两位数与四位数产业层面均存在显著的市场势力;外资水平溢出效应、外资前向溢出效应、外资垂直关联效应、市场集中度、资本密集度在不同产业层面对制造业的市场势力溢价有不同的影响。

推进城市化对生态环境的影响研究

环境条件的变化影响着区域城市化的盛衰,为了避免我国走上“拉美陷阱”过度城市化所导致生态环境恶劣的老路,此次研究采用了全新视角,把城市化、生态环境作为一个复合的系统,从整体视角探究城市化推进对生态恢复的驱动作用,从政府和企业两方面入手,解决好生态环境与城市化协调发展的问题,对以往过于激进的城市化推进方式进行反思和调整。

乡村振兴背景下农村数字普惠金融发展研究

农村数字普惠金融是指依托大数据、云计算、人工智能等现代化科学技术来为农户、涉农小微企业和新型农业经营主体等农村群体提供共享、便捷、安全的金融服务。本文在概括农村数字普惠金融发展的意义基础上,根据乡村振兴背景下农村数字普惠金融发展优势,通过对农村数字普惠金融发展现状的分析,针对农村数字普惠金融发展的现实困境:农村居民数字普惠金融意识薄弱;网贷平台风险防控难;征信体系不完善;提出了化解农村数字普惠金融发展困境的对策:提升农村居民数字普惠金融意识;加强农村互联网金融平台的风险防范;完善农村金融征信体系。农村地区数字普惠金融的发展扩大了农村地区数字普惠金融的覆盖面,缓解了农业农村农民的融资难题,实现了运用大数据征信体系精准授信,比起传统普惠金融更具优势。农村数字普惠金融发展问题是农村金融支持乡村振兴的重要课题。

口服普萘洛尔联合复方倍他米松局部注射治疗婴幼儿血管瘤的疗效评价

目的:分析普萘洛尔联合倍他米松局部注射治疗婴幼儿血管瘤的临床疗效。方法:收集2018年5月至2020年6月就诊于青岛大学附属医院美容整形外科符合纳入标准的婴幼儿血管瘤患者61例,分组为单纯口服普萘洛尔组共19例,单纯局部注射复方倍他米松组共20例,口服普萘洛尔联合局部注射复方倍他米松治疗组共22例,术后随访观察6个月并评估临床疗效。结果:联合组的治愈率明显高于单纯注射复方倍他米松组和单纯口服普萘洛尔组,差异有统计学意义(P 0.05)。联合组治疗时间明显短于单用复方倍他米松组和单用普萘洛尔组,差异有统计学意义(P 0.05)。所有口服普萘洛尔的患儿中有10例出现心率减慢,临床观察后恢复正常,未给予特殊处理。所有注射复方倍他米松的患儿中有6例出现术区肿胀,给予加压包扎后逐渐消退;有2例患儿在注射后出现烦躁。比较三组不良反应的发生率,差异无统计学意义(P 】0.05)。结论:口服普萘洛尔联合局部注射复方倍他米松治疗婴幼儿血管瘤疗效更佳。

超长劈核钩在微创超声乳化手术中的应用

目的:观察钩长2.5mm劈核钩在2.2mm微切口下,应用改良预劈核方式进行白内障扭动模式超声乳化手术的临床效果,并探讨其临床特点。方法:回顾分析在我院行扭动模式下超声乳化白内障摘除联合人工晶状体植入手术的白内障患者247例320眼,根据术中碎核方式,分为改良预劈核组和常规乳化拦截劈核组。其中改良预劈核组省略水分离步骤,使用加长劈核钩从6∶00位前囊膜下贴囊袋内壁探入囊袋与晶状体间隙,绕过晶状体赤道,待劈核钩前端至晶状体后极时向上用力与进入前房的超声乳化头在不使用超声的状态下挤切劈裂晶状体核为两半,转核、并反复多次劈核。对照组用常规拦截劈核法。术前记录包括最佳矫正视力、角膜内皮计数,术中记录平均超声能量(AP)、实际超声乳化时间(U/Stime)、平均累积能量符合参数(AECP)、前房BSS灌注量和手术并发症,观察术后1wk角膜水肿的情况和角膜内皮细胞计数。结果:将两组同级核硬度的亚组进行比较,改良预劈核组的平均超声能量、实际超声乳化时间、累积超声能量时间和前房BSS灌注量、1wk角膜内皮丢失率均低于拦截劈核组(P<0.05)。结论:使用改良预劈核扭动模式白内障超声乳化的方法可提高手术超声能量利用效率、减少手术中前房灌流量,并进一步降低白内障超声乳化手术对患者角膜内皮的损伤。

hUC-MSCs基因表达及其对金黄色葡萄球菌抗菌活性

目的检测转染抗菌肽LL-37人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)的基因表达及其对金黄色葡萄球菌的抗菌活性。方法分离、培养hUC-MSCs;构建LL-37慢病毒载体转染至hUC-MSCs,倒置显微镜观察细胞形态,计算其转染效率;应用Western blot方法检测LL-37表达,酶标比浊法检测细胞培养上清液抗菌活性。结果成功培养hUC-MSCs;获取包装滴度为1×10^12TU/L的LL-37慢病毒载体,转染至hUC-MSCs后72 h可观察到细胞呈现绿色荧光,转染效率为85.40%。Western blot检测显示,转染组hUC-MSCs过表达LL-37,细胞培养上清液对金黄色葡萄球菌有明显抑制作用,抑菌率为98.74%。结论hUC-MSCs可成功表达具有较强抗菌活性的抗菌肽LL-37。

后疫情时代高职教育国际化发展现状与路径研究

在后疫情时代,高职教育国际化发展具有重要意义。本文旨在研究后疫情时代高职教育国际化发展的现状与路径,并提出对应策略。通过文献综述和实践分析,教师发现高职教育国际化发展已成为高职教育发展的趋势,但现有发展存在低水平和步调不同等问题。该研究表明,高职教育国际化发展的价值包括提高教育质量,积累国际化资源,拓展学生视野和拓宽就业渠道。此外,我们还提出了高职教育国际化发展的策略,包括构建国际化课程体系,积极开展国际合作,注重师资队伍建设和加强学生留学指导等方面,以推动高职教育国际化发展。我们的研究成果可以为高职院校提供指导和借鉴。

微课在高职教学改革中的价值分析

随着智能手机的日渐普及,互联网的触角伸到了生活的各个角落。这为微课的大面积推广使用奠定了基础,也引起了教育界对微课教学模式的改革。高职院校的教师应正确地使用微课教学模式和教学资源,能丰富知识内容,加强学生的思维锻炼,达到教学改革的效果,学生的职业技能水平也能得到良好的培养。因此文章就微课在高职教学中的改革展开论述。