Nurr1通过抑制小胶质细胞NF-κB发挥抗炎作用

目的探索在细菌脂多糖(LPS)诱导的小鼠小胶质细胞(BV2细胞株)炎症反应中,核受体相关蛋白1(Nurr1)是否通过抑制NF-κB的表达及核转位发挥抗炎作用。方法培养小鼠BV2小胶质细胞株,将细胞分为Ctrl组、LPS组、C-DIM12(Nurrl特异性激动剂)组、siRNA干扰组、LPS+C-DIM12组。利用CCK-8检测LPS和C-DIM12的最适作用浓度,用Western blot观察NF-κB和Nurr1的表达变化,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养液中炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α的水平,用免疫荧光观察siRNA干扰或C-DIM12激活Nurr1表达活性后,NF-κB及p-IκB在BV2细胞中的表达水平。结果LPS刺激BV2细胞后,NF-κB表达提高,炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α释放量增加(P<0.05)。C-DIM12激活Nurr1后,免疫荧光染色技术和Western blot实验结果都显示NF-κB的表达显著下降,而小干扰RNA(siNurr1)沉默Nurr1表达后,NF-κB表达增加。在LPS激活的小胶质细胞中,NF-κB二聚体分子的结合分子p-IκB的磷酸化蛋白水平相对于对照组显著升高,而C-DIM12激活Nurr1后,p-IκB水平显著下降。结论Nurr1可以通过抑制小胶质细胞NF-κB表达水平并阻止NF-κB核位移发挥抗炎作用。Nurr1可能是一个新的潜在的治疗中枢神经系统炎症相关疾病的靶点。

Nurr1对细菌脂多糖诱导的小胶质细胞凋亡、自噬和铁死亡的抑制作用

目的研究核受体相关蛋白1(Nurr1)对细菌脂多糖(LPS)诱导的BV2小胶质细胞活性即细胞凋亡、自噬及铁死亡的作用,从而探究Nurr1通过调节小胶质细胞活性发挥神经保护作用的机制。方法培养小鼠BV2小胶质细胞株,将细胞分为Ctrl组、LPS组、C-DIM12组(Nurr1特异性激动剂)、LPS+C-DIM12组。利用Western blot观察Toll样受体4(TLR4)和Caspase-3的表达变化,流式细胞术检测细胞凋亡情况。检测利用Nurr1的特异性激动剂C-DIM12激活Nurr1的表达活性后,自噬蛋白LC3Ⅱ和铁死亡标志物谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的表达变化及脂质过氧化物产物丙二醛(MAD)的水平。结果LPS刺激BV2细胞后,TLR4和Caspase-3的表达升高(P均<0.05)。C-DIM12激活Nurr1后,TLR4和Caspase-3的表达下降。流式细胞实验结果也显示,Nurr1的激活抑制了细胞凋亡。C-DIM12激活Nurr1后,自噬蛋白LC3Ⅱ的表达相对于LPS组下降,铁死亡蛋白GPX4升高,而MDA显著下降(P均<0.05)。结论Nurr1可通过抑制LPS诱导的小胶质细胞的凋亡、自噬和铁死亡发挥神经保护作用。Nurr1可能是治疗中枢神经系统疾病的潜在靶点。

蛋白激酶C相互作用蛋白1基因敲除诱导神经元氧化应激

目的 研究蛋白激酶C相互作用蛋白1(PICK1)敲除对神经元氧化应激反应的影响,从而明确PICK1在神经元氧化应激反应中的作用。方法 剪取小鼠尾巴1 cm,匀浆后提取DNA和蛋白质,利用PCR和Western blot鉴定野生型小鼠和PICK1敲除鼠的基因型。利用ELISA检测试剂盒,检测野生型和PICK1敲除小鼠脑组织中活性氧簇(ROS)和谷胱甘肽(GSH)的水平。硝基酪氨酸(Nitrotyrosine)是氧化损伤标志因子,利用Western blot及免疫荧光染色方法,检测小鼠脑内Nitrotyrosine与神经元的标记物MAP2。结果 成功鉴定出野生型鼠、PICK1基因杂合子小鼠和纯合子小鼠。PICK1敲除小鼠脑内的氧化应激因子ROS (P<0.05)和Nitrotyrosine水平显著升高(P<0.05),而抗氧化应激因子GSH明显下降(P<0.05)。Nitrotyrosine与MAP2免疫荧光共染结果显示,PICK1敲除的小鼠中神经元细胞存在氧化损伤。结论 PICK1基因敲除导致了小鼠神经元的氧化应激反应,提示PICK1可能是抑制神经元氧化应激的一个靶点。

虚拟仿真技术在神经生物学教学方法的设计与评估

神经生物学作为研究神经系统结构和功能的学科,对于学生理解大脑和神经系统的运作机制至关重要。本文探讨了虚拟仿真技术在神经生物学教学方法的设计与评估,以提高学生的学习体验和知识掌握程度。首先,介绍虚拟仿真技术在教育领域的应用潜力。其次,探讨虚拟仿真技术在神经生物学教学方法的设计,包括虚拟实验和模拟演示以及虚拟现实案例和情境设计。然后,讨论虚拟仿真技术在神经生物学教学方法的评估框架,包括学生问卷调查、知识测试、实验技能评估和学习成绩分析。最后,探讨虚拟仿真技术在神经生物学教学方法面临的挑战和未来发展方向。

基于人耳听觉模型的语音质量客观评价方法

将人耳听觉模型应用于语音质量客观评价 ,用听觉模型对语音作处理得到近似的短时语音频谱 ,在此基础上得到谱距离作为语音质量的评判标准 .实验结果表明这种方法与主观评价结果的相关度达到 0 .

姜黄素衍生物对激活的小胶质细胞诱导型一氧化氮合酶表达的抑制作用

目的对比研究姜黄素(curcumin)及其衍生物对脂多糖(lipopolysacchar,LPS)激活的小胶质细胞一氧化氮(NO)的产生及诱导型一氧化氮合酶((inducible nitric oxide synthase,iNOS)表达的影响。方法用LPS(1μg.mL-1)刺激原代培养的大鼠小胶质细胞,同时用不同浓度姜黄素及其衍生物F进行干预,应用免疫组化方法观察细胞活性;Western-blot方法检测iNOS蛋白的表达;用Cayman's Nitrate/Nitrite Colorimetric AssayKit检测细胞上清液中NO的含量。结果LPS作用4h后,iNOS蛋白表达明显增强,NO释放量明显增加;使用姜黄素干预18h后,浓度在5μg.mL-1以上时可以显著抑制LPS激活的小胶质细胞iNOS蛋白的表达和NO的产生,但是姜黄素衍生物只有在浓度达到25μg.mL-1时才对iNOS蛋白的表达和NO的产生有明显的抑制效果。结论姜黄素和它的衍生物都能够抑制LPS激活的小胶质细胞iNOS蛋白的表达以及NO的产生,但其衍生物的作用相对较弱。

《生物技术专业英语》课程教学内容与方式的探讨

针对宁夏医科大学基础医学院生物技术专业学生英语水平较差,基础相对薄弱、英语学习兴趣不高的现状,本文探讨了如何通过改进《生物技术专业英语》授课内容及授课方式,来激发学生学习专业英语的兴趣,提高专业英语阅读、写作和听力能力。

抑制糖原合酶激酶-3β对少突胶质前体细胞分化的阻碍作用

目的探讨抑制糖原合酶激酶3β(glycogensynthasekinase 3β,GSK3β)活性对少突胶质前体细胞(OPCs)分化为成熟的少突胶质细胞(OLs)的阻碍作用及机制。方法原代分离培养OPCs,利用1.5m M氯化锂(Li Cl)抑制GSK3β96h,采用免疫荧光染色技术检测抑制GSK3β后,OLs的标记物抗碱性髓鞘蛋白抗体(MBP)和抗2,3-环核苷酸3’-磷酸水解酶(CNP)表达量的变化,并通过检测caspase 3的表达量来确定GSK3β对OPCs分化的阻碍作用是否与程序性死亡相关。结果 GSK3β被Li Cl抑制后,CNP和MBP的蛋白表达量明显减低,同时细胞形态也未出现类似于对照组的网状结构;在加入Li Cl处理96h后,caspase 3表达没有升高。结论抑制GSK3β活性可特异性阻断OPCs的正常分化过程,而非OPCs的程序性死亡所致。

热休克蛋白60在激活的少突胶质前体细胞的表达

目的研究热休克蛋白60(HSP60)在重组人干扰素-γ(IFN-γ)和重组人热休克蛋白60(rhHSP60)激活的少突胶质前体细胞中的表达情况。方法分离SD大鼠的少突胶质细胞前体细胞(OPC),经IFN-γ和rhHSP60激活后,应用western blot方法检测细胞中的HSP60蛋白的表达;采用ELISA方法检测细胞培养液中炎症因子TNF-α及IL-6的释放量。结果经IFN-γ和rhHSP60分别激活后,OPC胞体内的HSP60蛋白表达均显著升高,胞外TNF-α及IL-6的释放量也明显增加。结论在激活状态下,OPC中的HSP60蛋白表达显著增高,刺激细胞产生大量炎症因子,从而参与细胞的应激反应。

热休克蛋白60在激活的小胶质细胞中的表达及基因调控

目的研究细菌脂多糖(LPS)激活的小胶质细胞中热休克蛋白60(HSP60)的表达情况及其基因调控。方法分离SD大鼠的小胶质细胞,经LPS激活后,应用Western-Blot方法检测细胞中HSP60蛋白的表达,real-time PCR法检测细胞中HSP60 mRNA的量,并进一步检测热休克因子1(HSF-1)表达的变化。结果在激活的小胶质细胞中,HSP60的蛋白及mRNA水平均显著升高,其转录因子HSF-1的水平也相应增高。结论在激活的小胶质细胞中,HSF-1蛋白表达显著提高,HSP60 mRNA及蛋白合成增强,参与细胞的应激反应。

枸杞叶及枸杞多糖对去势雌性大鼠骨密度的影响

目的利用X射线小动物活体成像方法动态观察枸杞叶和枸杞多糖对去势雌性大鼠不同时间、不同部位骨密度的影响。方法 48只6月龄SD雌性未孕大鼠随机分为:假手术(Sham组)、去卵巢组(OVX组)和给药组,给药组再分为去卵巢+枸杞叶高剂量组(1000mg·kg-1)、低剂量组(500mg·kg-1)和枸杞多糖高剂量(100mg·kg-1)、低剂量组(50mg·kg-1)。采用去卵巢法造模,于造模4、8周后进行椎骨、股骨、胫骨骨密度测定;造模8周后,进行枸杞叶及枸杞多糖自由饮水给药干预,于给药6周和12周后进行椎骨、股骨、胫骨骨密度测定。结果大鼠去卵巢造模4周和8周后,OVX组和各给药组大鼠椎骨、股骨、胫骨骨密度均低于Sham组(P均<0.05),造模8周组大鼠椎骨、股骨、胫骨骨密度均低于4周组(P均<0.05)。给枸杞叶和枸杞多糖高、低剂量6周和12周后,OVX组、各给药组大鼠椎骨、股骨、胫骨骨密度均低于Sham组(P均<0.05);给药6周各给药组大鼠椎骨、股骨、胫骨骨密度与OVX组差异无统计学意义(P>0.05,给药12周给药组大鼠椎骨、股骨、胫骨骨密度高于OVX组(P<0.05)。结论大鼠去卵巢6周和12周后,其椎骨、股骨、胫骨均出现了骨质丢失,而服用枸杞叶及枸杞多糖后,可延缓去卵巢后的骨质丢失,且长时服用效果优于短时服用。

枸杞多糖含药血清对Aβ激活星形胶质细胞分泌炎症因子和α7nAChR表达的影响

目的研究枸杞多糖(LBP)含药血清对Aβ1-40激活的海马星形胶质细胞(astrocyte,AC)分泌炎性因子TNF-α、IL-6和α7nAChR表达的影响。方法 4月龄SD大鼠分别灌胃给予LBP和等量蒸馏水,常规制备含药血清;原代培养SD大鼠海马AC,经纯化鉴定后随机分为对照组、Aβ1-40组、药物组。各药物组为在加入Aβ1-40前12h预先分别加入:尼古丁、甲基牛扁亭(MLA)、LBP血清和空白血清,各组加Aβ1-40后继续培养24、48和72h。MTS法检测细胞的增殖活性;ELISA检测TNF-α和IL-6的浓度;免疫荧光染色和Western Blot检测α7nAChR的表达。结果 1原代培养的AC纯度达到95%以上,达到实验要求;2与对照组相比,Aβ1-40激活后的AC增殖活性和TNF-α、IL-6的浓度均升高(P均<0.05),α7nAChR的表达明显增多(P<0.05);3与Aβ1-40组比较:给予尼古丁和MLA后,AC增殖活性和TNF-α、IL-6的浓度以及α7nAChR的表达均降低(P均<0.05),给予LBP血清后,TNF-α、IL-6的浓度和α7nAChR的表达明显减少(P均<0.05),但AC增殖活性仍显著升高(P<0.05);LBP血清组与尼古丁组在Aβ1-40激活24和72h时α7nAChR的表达接近,与MLA组在Aβ1-40激活24h时接近。结论 LBP含药血清能降低Aβ1-40诱导的海马AC升高的TNF-α、IL-6水平和α7nAChR的高表达。

用叶片形态鉴别葡萄品种的探讨

采用Galet 的葡萄表现型分类方法,对巨峰、红富士及白香蕉葡萄进行分类证明,三品种的判别拟合率可达80%。按照此方法建立的品种分类数据库可为葡萄品种自动检索提供科学依据。

热休克蛋白60基因定点诱变导致其在细胞内定位的改变

目的研究将热休克蛋白60(HSP60)蛋白序列中第70位的丝氨酸(serine)突变为丙氨酸(alanine)后,HSP60在细胞内定位的改变。方法将PrC/CMV-HSP60P1重组质粒中HSP60P1编码第70位丝氨酸的碱基定点诱变为编码丙氨酸的碱基序列,转染至小胶质细胞BV-2细胞株中表达。细胞经10h缺氧处理后,裂解细胞,应用差速离心方法分离细胞膜、细胞质和线粒体,应用Western-blot方法检测各细胞器中HSP60的含量。结果在转染未诱变PrC/CMV-HSP60P1质粒的细胞中,正常情况下,HSP60大部分分布在线粒体,少部分在胞浆,细胞膜中未见表达;缺氧刺激后,HSP60在细胞膜、胞浆和线粒体中均有表达;然而70位丝氨酸突变为丙氨酸后,只观察到HSP60在胞浆和线粒体中的表达,而在细胞膜上未见表达。结论作为磷酸化位点的Serine70对HSP60在细胞内的定位具有关键作用。

PBL模式在生物技术导论课程教学的应用初探

生物技术导论是医学生物技术专业必修的基础学科,涵盖领域广、理论繁杂、技术新颖,是对生物技术的归纳与总结。为提高生物技术导论的教学效果和水平,该文作者在传统教学的基础上,引入了PBL教学模式。实践证明,PBL教学模式提高了学生的学习积极性和主动性,激发了学生对理论结合实践探索的兴趣,受到学生与老师的一致好评。

医学院校《生物技术概论》教学初探

生物技术概论作为生物技术专业的必修课程,难度较高,综合性较强。基于此特点,本文作者根据实际教学体会,从如何选择教学内容、如何进行教学方法改革等方面提出一些拙见,以期提高教学水平,并为其他医学院校生物技术课程的开展提供一定的借鉴。

大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)后脑毛细血管的改变与迟发缺血性神经功能障碍(DIND)的关系

目的利用激光扫描共聚焦显微镜（1aserscanningconfocalmicroscope，LSCM）研究大鼠蛛网膜下腔出血（subarachnoidhemorrhage，sAH）后大脑毛细血管内径周长及周细胞形态变化，及其与迟发缺血性神经功能障碍（delayedischemicneurologicaldeficit，DIND）的关系。方法SD大鼠180只，随机分为SAH组（A组，n：84）、生理盐水组（B组，n=84）和正常对照组（C组，n=12）。A组采用枕大池二次注血法建立SAH模型，B组同法注射等量生理盐水。A、B组分别在二次注血（或生理盐水）后1、3、5、7、9、11、13天取大脑，每组每时相取12个大脑。6个大脑用异硫氰酸荧光素（fluoresceinisothiocyanate，FITC）标记的番茄凝集素进行大脑血管灌注染色后获取，其余6个进行周细胞结蛋白（Desmin）免疫荧光染色和HE染色。用LSCM测量毛细血管内径周长，并观察周细胞形态变化。HE染色用来观察脑组织病理形态。C组用以上同样方法观察。结果A组二次注血后3～11天脑组织出现局部缺血梗死的病理形态：组织结构紊乱、间质水肿、神经元变性坏死。B、C组大鼠大脑毛细血管内径正常，A组二次注血后第1天毛细血管内径无明显变化，第3天开始出现毛细血管管腔狭窄，第5天毛细血管内径周长变小达到高峰，高峰期持续至第7天，后逐渐缓解，第13天基本恢复正常。A组与B、C组相比，周细胞出现胞体聚缩的形态改变（P〈0．05）。结论SAH后大脑毛细血管管腔狭窄、周细胞形态异常可能与DIND的发生密切相关。

荒漠沙蜥松果体褪黑激素含量的季节性变化(英文)

应用高效液相色谱法 (HPLC)—UV检测了不同季节荒漠沙蜥 (Phrynocephalusprzewalskii)松果体内褪黑激素的含量。结果显示 ,其高峰值发生在春季 ,为 10 17± 2 0 9pg/pineal。低峰值出现在冬季 (实验室内冬眠 ,2～ 4℃ ) ,为 35 5± 6 8 5 pg/ pineal,秋季的含量 (735± 133 7pg/pineal)高于夏季的含量(5 97± 94 9pg/pineal)。表明荒漠沙蜥松果体褪黑激素含量呈现明显的年周期节律并与光周期和生殖周期的年节律基本相符。

聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1对热休克蛋白60的抑制作用

目的观察聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)对早产儿脑室周围白质软化(PVL)小鼠模型及体外培养的少突胶质前体细胞中的热休克蛋白60(HSP60)表达的调控作用。方法建立未成熟小鼠野生型(Wild-type)和PARP-1基因缺失型小鼠脑白质损伤模型,术后取脑,冰冻切片,采用免疫荧光标记法对切片内HSP60进行染色,并在荧光显微镜下观察HSP60的表达。体外培养的少突胶质前体细胞经PARP-1的抑制剂3,4-dihydro-5-[4-(1-piperidinyl)butoxyl]-1(2H)-isoquinoline(DPQ)或激活剂Etopside预处理,再经IFN-r激活后,应用Western-blot方法检测细胞内HSP60的表达情况。结果在PARP-1基因缺失型小鼠脑白质损伤模型脑中,HSP60的表达量明显高于Wild-type组(P<0.05)。PARP-1抑制剂DPQ能够明显增强HSP60的表达,而PARP-1激活剂Etopside可显著抑制HSP60的表达。结论 PARP-1对HSP60的基因表达具有负调控作用。

纳洛酮对少突胶质细胞的保护作用

目的研究纳洛酮(naloxone)对脂多糖(lipopolysacchar,LPS)激活的小胶质细胞诱导少突胶质细胞损伤的影响。方法共培养大鼠小胶质细胞和少突胶质细胞,用LPS(1μg.mL-1)刺激小胶质细胞,随后用0.1μM纳洛酮进行干预,应用免疫组化方法观察计数少突胶质细胞。结果仅用0.1μM纳洛酮处理细胞,细胞活性基本保持不变,而当小胶质细胞被LPS激活后,与之共培养的大量的少突胶质细胞死亡(P<0.01);小胶质细胞被LPS激活,给予0.1μM纳洛酮处理后,少突胶质细胞的活细胞数显著升高(P<0.05)。结论纳洛酮能够抑制LPS激活的小胶质细胞引起的少突胶质细胞的损伤。