单羧酸转运蛋白1增强乳腺癌细胞对3-溴丙酮酸的敏感性

目的探究单羧酸转运蛋白1(MCT1)在增强乳腺癌细胞对3-溴丙酮酸(3-Br PA)敏感性中的作用,为乳腺癌治疗提供新思路。方法 MTT法检测3-Br PA对乳腺癌细胞的增殖抑制作用,溴化丙啶单染法流式细胞术检测细胞凋亡,ELISA试剂盒检测细胞内己糖激酶Ⅱ、乳酸脱氢酶、乳酸、三磷酸腺苷水平,Western blot检测MCT1蛋白的表达,瞬时转染c DNA上调MCT1的表达后,检测3-Br PA对MDA-MB-231细胞的增殖和三磷酸腺苷水平的影响。结果 3-Br PA对MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响不明显,200μmol/L作用24 h后增殖抑制率和凋亡率仅为8.72%和7.8%;但200μmol/L 3-Br PA作用MCF-7细胞24 h后其增殖抑制率和凋亡率为84.6%和82.3%。MDA-MB-231细胞的MCT1过表达后,200μmol/L 3-Br PA对细胞的增殖抑制率为72.44%,明显高于对照组(P<0.05);25、50、100、200μmol/L 3-Br PA作用细胞6 h后,细胞内三磷酸腺苷水平和对照组相比分别为96.98%、88.44%、43.3%、27.56%。结论 MCT1能增强乳腺癌细胞对3-Br PA的敏感性,其机制可能是将3-Br PA转运到细胞内,从而抑制细胞糖酵解来发挥抗肿瘤作用。

肿瘤细胞能量代谢特点及其研究进展

肿瘤细胞能量代谢依赖于糖酵解和氧化磷酸化,肿瘤细胞由于其生长迅速,常常出现葡萄糖等营养物质摄取增多、糖酵解增加等现象。近年来,针对肿瘤细胞能量代谢的研究受到了广泛的关注。该文总结了肿瘤细胞能量代谢过程中所需要的营养物质、调控网络以及治疗靶点,为后续研究和临床治疗提供重要参考。

单羧酸转运蛋白1抑制剂AZD3965对胃癌BCG-823细胞增殖和凋亡的影响

目的:探究单羧酸转运蛋白1(MCT1)抑制剂AZD3965通过抑制肿瘤细胞MCT1对胃癌细胞BCG-823增殖及凋亡的影响及其相关的分子机制。方法:MTT法检测不同浓度AZD3965(0、20、40、80μmol/L)对胃癌细胞的增殖抑制作用。通过倒置显微镜观察胃癌细胞BCG-823在不同浓度AZD3965(0、20、40、80μmol/L)处理后细胞形态的改变。集落克隆形成实验观察AZD3965对胃癌细胞BCG-823集落形成能力的影响。PI单染流式细胞术检测AZD3965对胃癌细胞BCG-823细胞凋亡的影响。Western blotting检测AZD3965作用下MCT1和凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达。结果:经AZD3965作用后BCG-823细胞的生长受到抑制,且随着药物浓度和作用时间的增加,AZD3965对人胃癌细胞BCG-823的增殖抑制作用逐渐增强(P <0. 01)。通过倒置显微镜观察不同浓度AZD3965(20、40、80μmol/L)处理胃癌细胞后,相较空白对照组(0μmol/L AZD3965)胃癌细胞数目明显减少,细胞发生皱缩破裂,细胞形态发生改变。集落克隆形成实验表明AZD3965对胃癌细胞BCG-823有增殖抑制作用。PI单染流式细胞术结果显示,20、40、80μmol/L AZD3965处理BCG-823细胞24 h后,细胞的凋亡率分别为(13. 33±4. 13)%、(22. 53±2. 97)%和(36. 63±5. 23)%,与空白对照组(0μmol/L AZD3965)相比明显升高(P <0. 01)。Western blotting结果显示,AZD3965可以下调BCG-823细胞中MCT1、Bcl-2的表达和上调Bax的表达。结论:AZD3965可通过抑制MCT1活性,并且激活Bax和抑制Bcl-2,从而抑制胃癌细胞增殖和诱导细胞凋亡。

MCT1抑制剂AZD3965增强肝癌细胞对表柔比星敏感性的作用

目的探讨单羧酸转运蛋白1(MCT1)抑制剂AZD3965增强肝癌细胞对表柔比星敏感性的作用。方法 MTT法检测单独使用表柔比星(10,20,40μmol/L)以及20μmol/L AZD3965联合表柔比星(10,20,40μmol/L)处理Hep G2细胞24 h对细胞增殖的影响。使用4μmol/L AZD3965、0. 01μmol/L表柔比星以及4μmol/L AZD3965联合0. 01μmol/L表柔比星处理Hep G2细胞5 d,观察药物对细胞集落克隆形成的影响。用20μmol/L表柔比星处理细胞4 h或20μmol/L表柔比星预处理细胞2 h再与20μmol/L AZD3965联合处理细胞2 h,用活细胞工作站检测细胞内表柔比星的荧光强度;用流式细胞术检测细胞内表柔比星的荧光曲线。结果单独使用表柔比星(10,20,40μmol/L)处理Hep G2细胞24 h的存活率分别为(61. 93±3. 02)%,(59. 87±1. 14)%,(54. 15±6. 14)%。20μmol/L AZD3965作用于Hep G2细胞24 h的存活率为(73. 25±6. 21)%。AZD3965联合表柔比星(10,20,40μmol/L)处理Hep G2细胞24 h,细胞存活率分别为(43. 11±1. 65)%,(45. 27±1. 09)%,(42. 93±1. 86)%。与单独使用表柔比星相比,表柔比星和AZD3965合用后细胞存活率明显降低(P <0. 05)。AZD3965增强表柔比星对Hep G2细胞集落克隆形成的抑制作用。AZD3965增加表柔比星在Hep G2细胞内的分布。AZD3965增加表柔比星在Hep G2细胞内的积累。结论 AZD3965可增强肝癌Hep G2细胞对表柔比星的敏感性,其机制可能是AZD3965增加表柔比星在肝癌细胞内的分布和积累。

MTH1抑制剂TH588对人乳腺癌细胞增殖及相关蛋白表达的影响

目的观察MTH1抑制剂TH588对人乳腺癌MCF-7及MDA-MB-231细胞增殖的影响,探讨其作用机制。方法MTT法检测不同浓度的TH588(0,8,16,32,64,128μmol/L)对乳腺癌MCF-7及MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用,倒置显微镜观察TH588处理乳腺癌MCF-7及MDA-MB-231细胞后细胞形态学变化。集落克隆形成抑制实验观察不同浓度的TH588(0,3.2,6.4,12.8μmol/L)对乳腺癌MCF-7及MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用。PI单染流式细胞术检测不同浓度TH588(0,32,64,128μmol/L)对乳腺癌MCF-7及MDA-MB-231细胞死亡的影响,Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果在128μmol/L的TH588作用下,MCF-7细胞24,48,72 h的存活率分别为(67.32±4.34)%、(56.81±0.93)%和(30.86±1.46)%,MDA-MB-231细胞24,48,72 h的存活率分别为(63.35±0.49)%、(41.11±0.75)%和(29.15±0.85)%,与对照组(0μmol/L)比较,细胞的存活率明显降低(P<0.05)。在倒置显微镜下可观察到TH588作用于乳腺癌细胞后,细胞数目明显减少,细胞形态发生改变,细胞皱缩,有细胞碎片及颗粒物质形成,细胞边缘不清晰。集落克隆实验结果表明,TH588对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞有明显的增殖抑制作用。PI结果显示,128μmol/L TH588处理MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞48 h,细胞死亡率分别为52.8%和55.6%,与对照组相比细胞死亡率明显增高(P<0.05)。Western blot结果显示,TH588可下调Bcl-2蛋白的表达,并上调Bax蛋白的表达。结论 TH588对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞有明显的增殖抑制作用,其机制可能是TH588抑制了MTH1的修复作用,激活Bax和抑制Bcl-2,从而引起乳腺癌细胞的凋亡。

冬凌草甲素诱导三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及对细胞内活性氧水平的影响

冬凌草甲素是从中药冬凌草Rabdosia rubescens中分离得到的一种贝壳杉烯二萜类的天然有机化合物,具有抗炎、抗菌、抗肿瘤等多种生物活性。该实验观察冬凌草甲素对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。采用MTT法检测冬凌草甲素对MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用,PI单染、Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术分析冬凌草甲素对MDA-MB-231细胞凋亡的影响,活性氧(ROS)试剂盒检测细胞内ROS水平的变化,Western blot分析PARP,Bcl-2,caspase-3蛋白的表达情况。结果表明,冬凌草甲素对乳腺癌MDA-MB-231细胞具有明显的凋亡诱导作用,显著升高细胞内的ROS水平,下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,并促进caspase-3及其底物PARP的切割。提示,冬凌草甲素诱导MDA-MB-231细胞凋亡的作用可能与升高细胞内ROS水平、下调Bcl-2的表达以及激活caspase-3相关。