补骨脂炮制品水提和醇沉物化学成分及肝毒性研究

目的研究补骨脂不同炮制品水提及醇沉物中5种化学成分的含量变化情况,并初步评价其肝毒性。方法制备补骨脂生品和雷公法、流水漂洗法、盐炙法炮制品的水提样品,以及雷公法、盐炙法炮制品的醇沉样品,采用高效液相色谱法测定其中补骨脂苷、异补骨脂苷、补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚的含量并进行比较;以不同质量浓度补骨脂生品、流水漂洗法、雷公法、盐炙法水提样品和雷公法、盐炙法醇沉样品作用72 h,计算各样品对野生型斑马鱼的半数致死浓度(LC50)和最大非致死浓度(MNLC);以对乙酰氨基酚为阳性对照,以上述样品(MNLC)作用72 h,观察野生型斑马鱼的基本形态和转基因斑马鱼的肝脏表型。采用Pearson相关性分析评价成分含量与肝毒性的相关性。结果与生品水提物比较,不同炮制品水提样品中补骨脂苷、异补骨脂苷的含量均显著降低(P<0.05),而雷公法、盐炙法醇沉样品中补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚的含量均显著升高(P<0.05)。生品、流水漂洗法、雷公法、盐炙法水提样品和雷公法、盐炙法醇沉样品的LC50分别为2.45、5.00、5.38、1.55、2.36、0.64 g/L(以生药量计),MNLC分别为2.21、4.53、5.02、1.37、2.13、0.53 g/L(以生药量计);与空白对照组比较,各样品处理组斑马鱼幼鱼均表现出不同程度的畸形,肝脏相对荧光强度均显著减弱(P<0.05或P<0.01)。补骨脂酚、异补骨脂素、补骨脂素等脂溶性成分与肝脏相对荧光强度的相关性较高(R2>0.7)。结论补骨脂炮制品经水提后以补骨脂苷、异补骨脂苷为主,经醇沉后补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚的含量增加;醇沉样品的肝毒性更强,且肝毒性与补骨脂脂溶性成分的含量呈正相关。

基于分步醇沉法研究酒制黄精多糖理化性质及免疫活性

目的对酒制黄精水溶性多糖(Polysaccharides from wine-processed Polygonatum sibiricum.,PSPW)进行分步醇沉,对各醇沉组分理化性质及免疫活性进行研究。方法采用分步醇沉法对PSPW进行分离、纯化;采用气相色谱(GC)、高效凝胶渗透色谱(HPGPC)及傅里叶变换红外光谱(FT-IR)等方法对各醇沉组分的理化性质进行研究;采用MTT法、中性红吞噬实验及Griess法评价各醇沉组分对RAW 264.7细胞免疫活性的影响。结果随分步醇沉中所用乙醇浓度增加,依次获得0~30%、30%~50%、50%~70%及70%~80%多糖组分,分别命名为PSPW-1、PSPW-2、PSPW-3及PSPW-4;理化性质结果表明4个醇沉组分(分子量分别为2.26×10^(4)、2.24×10^(4)、1.15×10^(4)及6.58×10^(3)u)均为糖蛋白复合物;各醇沉组分单糖组成种类和比例存在显著差异,均含高比例的半乳糖;免疫活性研究表明各组分均可促进RAW264.7细胞活力、吞噬中性红能力、分泌NO能力及分泌酸性磷酸酶活力,其中组分PSPW-3免疫活性最强。结论分步醇沉法所得PSPW各醇沉组分理化性质和免疫活性存在较大差异,推测PSPW-3为酒制黄精多糖发挥免疫调节作用的最佳活性组分,本研究为酒制黄精多糖最佳免疫调节活性组分的构效关系及黄精多糖功能性食品开发提供依据。

疏水缔合聚合物AHAPAM的制备与性能评价

为获得耐温性能良好的疏水缔合聚合物,以丙烯酰胺(AM)、对苯乙烯磺酸钠(SSS)、N,N-二甲基十八烷基烯丙基氯化铵(DMAAC-18)为原料制备了一种两性疏水缔合聚合物AHAPAM。通过测定AHAPAM溶液的黏度优化了AHAPAM的制备条件,研究了AHAPAM的耐温抗盐性能。结果表明,在DMAAC-18和SSS摩尔分数分别为1.5%和0.6%、单体质量分数25%、引发剂((NH4)2S2O8与Na HSO3摩尔比1.2∶1)加量0.2%、反应温度45℃、p H值为9、反应时间6 h的最佳合成条件下制得的AHAPAM的临界缔合浓度值为0.19%。AHAPAM浓度高于临界缔合浓度时,聚合物疏水链间以分子间缔合为主并形成空间网状结构。AHAPAM的抗温性能良好,0.50%AHAPAM溶液在120℃、170 s^(-1)下剪切1.4 h的黏度约为90 m Pa·s。AHAPAM的抗盐性能较好,在氯化钠和氯化钙加量为18%和15%时,AHAPAM溶液的黏度约为330 m Pa·s。

基于潜在肝毒性成分分析的补骨脂炮制减毒机制

目的:以补骨脂中补骨脂苷、补骨脂素、异补骨脂苷、异补骨脂素、补骨脂酚5个潜在肝毒性成分为评价指标,对雷公炮制法等4种补骨脂炮制样品及其动态过程中成分变化情况进行分析比较。方法:色谱柱为Kromasil 100-5 C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)柱;流动相为甲醇-0.1%甲酸溶液,梯度洗脱;流速为1.0 mL/min;检测波长为246 nm;柱温为30℃;进样量为10μL。测定补骨脂不同炮制品及雷公炮制法各环节样品中5个成分的含量。结果:不同炮制品中5个潜在肝毒性成分含量差异较大,以雷公炮制法对补骨脂苷、异补骨脂苷、补骨脂酚的含量影响最为明显,并发现提高雷公炮制法中酒的浓度,可进一步加速补骨脂酚的分解;水处理主要促进苷类成分降解。结论:该研究表明雷公炮炙法是降低补骨脂的潜在肝毒性成分含量的有效方法,可为补骨脂药材炮制减毒方法研究提供依据。

黄精凝集素PCL-2诱导人前列腺癌LNCap细胞凋亡及机制研究

研究黄精凝集素PCL-2对人前列腺癌LNCap细胞生物活性和可能的抗肿瘤机制。从黄精药材中提取分离得到黄精凝集素PCL-2,体外培养LNCap细胞,采用WST-1和集落形成实验评价PCL-2对LNCap细胞的增殖作用;2,7-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针法检测LNCap细胞内ROS含量;qRT-PCR和Western blot法检测PCL-2对LNCap细胞中相关基因和蛋白表达的影响。研究结果显示PCL-2能显著抑制LNCap细胞的增殖,促进细胞中ROS生成;PCL-2通过上调LNCap细胞中Bax、Caspase-3及Caspase-9基因mRNA和蛋白表达并下调Bcl-2基因mRNA和蛋白表达水平诱导LNCap细胞凋亡。本研究结果表明PCL-2诱导LNCap细胞凋亡活性作用显著,可作为抑制前列腺癌的潜在药物。

乙二醇回收工艺中影响除盐剂除盐效率的试验研究

乙二醇作为天然气水合物抑制剂在国内外气田尤其是深海气田中得到广泛应用。针对目前常用的闪蒸法脱盐工艺存在能耗较高的缺点,提出了一种使用除盐剂对回收乙二醇进行除盐的方法。利用氯化钠在溶剂中的溶解度与溶剂极性相关的原理,筛选出了一种低成本、高除盐能力、可循环利用的除盐剂DA-A。探究了体系温度、pH值、水含量、除盐剂加量及加入方式对除盐能力的影响,并对除盐剂DA-A的回收情况进行了实验研究。