嗜热真菌 Thermomyces lanuginosus热稳定a—淀粉酶的纯化及特性

嗜热真菌Thermomyces lanuginosus在液体培养基中于50℃静止培养14d,培养液经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Toyopearl离子交换层析、Butyl-Toyopearl疏水层析、SephacrylS-300分子筛层析和FPLC MonoQ离子交换层析,得到了凝胶电泳均一的淀粉酶。纯酶与淀粉反应不同时间后,用碘色反应法和DNS法测定淀粉和还原糖量,结果显示淀粉量在开始时迅速下降,但还原糖的量却增加很慢;产物经TLC层析分析为麦芽糖和少量葡萄糖。由此说明它为α-淀粉酶。用SDS-PAGE和Sephacryl S-300分子筛层析测定分子量为56000,不具亚基。酶反应最适温度和pH分别为65℃和4.5～5.0。在pH4.6条件下,酶在50℃是稳定的;60℃保温1h,仍保留94％的原酶活性;酶在70℃的半衰期为10min。钙离子对酶有激活作用。酶对糖原和糊精有一定的水解能力。

串珠镰刀菌细胞壁多糖激活寄生菌纤细齿梗孢的孢子萌发(英文)

利用碱抽提法从串珠镰刀菌 ( Fusarium moniliforme)菌丝细胞壁得到多糖粗提物。该多糖提取物可以激活寄生于串珠镰刀菌上的活体寄生真菌纤细齿梗孢 ( Olpitrichum tenellum)的孢子萌发 ,多糖浓度为 0 .2 mg/m L时 ,萌发率达 80 .5 %。纤细齿梗孢的孢子仅在存在该多糖提取物的条件下才能萌发 ,在马铃薯 -葡萄糖或葡萄糖 -酵母液体培养基上不能萌发 ,一些糖、氨基酸、无机盐、维生素不能促使其萌发 ,光也不影响萌发。纤细齿梗孢孢子萌发最适 p H是 7.0 ,最适温度 2 5℃。结果表明 ,串珠镰刀菌菌丝细胞壁多糖可能在激活纤细齿梗孢孢子萌发中起重要作用。

陕西省链格孢属的种

链格孢属(Alternaria)是一类分布极广、适应性很强的真菌。除少数腐生外,大多数为植物病原寄生菌,能引起多种植物病害,造成农业生产的重大损失。作者于1987—1990年分别在陕西不同地区采集链格孢属真菌标本600余份。经鉴定,发现陕西省链格孢属的种32个,其中中国新记录种6个,陕西省新纪录种17个。

串珠镰刀菌孢子表面的一种凝集素

用 0 .2 %SDS磷酸缓冲液从串珠镰刀菌 (Fusariummoniliforme)孢子表面抽提蛋白质。孢子表面蛋白经DEAE Sepharose阴离子交换柱层析和SephacrylS 10 0分子筛柱层析 ,分离和纯化了一种凝集素。该凝集素的分子量为 70kDa ,糖含量为 19.8% ,对兔血红细胞有很强的凝集活性 ,凝集活性被半乳糖特异性地抑制。

系统聚类分析在镰刀菌鉴定中的应用

根据Nelson,Toussoun&Marasas(1983)的分类系统,选取在PDA和CLA培养基上的50个编码性状,利用系统聚类分析的平均连锁法,初步建立了30种镰刀菌属(Fusarium)真菌为基础的计算机鉴定系统。用这个系统对玉米穗粒腐病上的三个未知菌株(Fusarium sp.1,F.sp.2,F.sp.3)进行鉴定的结果表明,F.sp.1为F.graminearum,F.sp.2为F.moniliforme,F.sp.3为F.proliferatum或F.subglutinans。从而证明此鉴定系统具备比较、鉴定性能。

菌寄生菌物与寄主菌物相互作用的研究进展

８０年代以来，菌寄生菌物与寄生菌物的相互作用研究取得较大进展，主要表现在以下几个方面：（１）菌寄生菌物到达寄主菌物之前通常存在趋向性；（２）菌寄生菌物与寄主菌物的相互识别是通过“凝集素一糖”实现的；（３）菌哥生菌物与寄主菌物识别和接触之后，菌丝间的相互作用是多种多样的，不同类型的菌寄生菌物有不同的表现形式；（４）菌寄生茵物产生的细胞壁降解酶在菌寄生过程中起重要作用。

稻瘟菌诱导的水稻过氧羟基脂肪酸分解酶的分离

水稻叶片接种稻瘟病菌后，在非亲和性组合稻叶（１３１小种接种稻叶）中，过氧羟基脂肪酸分解酶（ＬｉｐｉｄＨｙｄｒｏｐｅｒｏｘｉｄｅ－ＤｅｃｏｍｐｏｓｉｎｇＥｎｚｙｍｅ，简称ＬＨＤＥ）活性在接种３６ｈ后显著增加，６０ｈ增加到最大；在亲和性组合稻叶（００７小种接种稻叶）和健康稻叶中，ＬＨＤＥ活性在接种３６、４８和６０ｈ后无显著增加。接种后４８ｈ的稻叶中的ＬＨＤＥ活性分别是亲和性组合稻叶和健康稻叶中ＬＨＤＥ活性的４．３和６．０倍。通过ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ阴离子交换层析，接种后４８ｈ的稻叶中的ＬＨＤＥ分为ＬＨＤＥ１和ＬＨＤＥ２两个组分。ＬＨＤＥ１组分在健康稻叶、亲和性组合稻叶和非亲和性组合稻叶中变化不大，总活性分别为０．０８Ｕ、０．０９Ｕ和０．１０Ｕ；但ＬＨＤＥ２组分在非亲和性组合稻叶中显著增加，而在亲和性组合稻叶和健康稻叶中变化不大，总活性分别为８．７２Ｕ、１．３０Ｕ和１．９０Ｕ。由此说明ＬＨＤＥ２是侵染诱导性ＬＨＤＥ，可能参与水稻对稻瘟病的抗性反应。

菌寄生真菌分子生物学研究进展

菌寄生真菌(mycoparasites)是一类具重要理论和应用价值的真菌.它们不仅对植物病害有防治潜力,而且对阐明生物间的寄生现象及信号传递有重要意义.近几年,菌寄生真菌的研究有较大进展.重点有两个,一个属理论研究领域,研究方向集中在菌寄生真菌与寄主真菌相互识别的分子机制;在此基础上,作者提出了利用寄主真菌凝集素防治植物病害的设想.由于寄主真菌凝集素可以诱导菌寄生真菌细胞壁降解酶的产生,如果利用生物技术大量生产出这种凝集素,它诱导寄生真菌产生细胞壁降解酶,这些酶消解和杀死寄主真菌和植物病原真菌,从而达到防治植物病害的目的.

烟草叶围细菌的分离及其对Alternaria alternata的拮抗作用

分离到烟草叶围细菌136株,通过对峙培养实验筛选出对烟草赤星病菌A.alternata有较强拮抗活性的9个菌株。离体叶片生防测定实验表明,9株细菌均能不同程度地减轻烟草赤星病的发生。其中菌株Tpb88具有较强和稳定的拮抗作用,无菌滤液实验表明,叶围细菌Tpb88在一定浓度范围内能有效抑制A.alternata菌丝生长、孢子萌发和芽管伸长,且浓度越高,抑制能力越强,结果表明Tpb88对烟草赤星病菌的拮抗机制可能为抗菌物质的产生。

抗茶树冰核细菌内生菌的筛选及鉴定

从茶树内生菌中进行了冰核细菌拮抗菌的筛选,得到菌株Y1,通过对菌株Y1进行形态学观察、生理生化指标测定及16 S r DNA序列测定和序列同源性分析,将菌株Y1鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。本研究获得了茶树内生拮抗菌株,明确了菌株Y1的种属,有利于冰核细菌生物防治的开展。

嗜热毛壳菌纤维素酶(CBHⅡ)cDNA的克隆及在毕赤酵母中的表达

嗜热毛壳菌Chaetomium thermophilumCT2是一种土壤腐生菌,可产生具有重要工业生产价值的纤维素酶类。RACEPCR获得嗜热毛壳菌纤维二糖水解酶Ⅱ(CBHⅡ)的编码基因(cbh2)。DNA序列分析表明cbh2的开放阅读框由1428个碱基组成,编码476个氨基酸。推断的氨基酸序列包含一个典型真菌纤维素酶的糖结合域(CBD)、催化域(CD)以及二者之间富含脯氨酸和羟基氨基酸的连接桥。根据氨基酸序列推算该酶分子量为53kD,属于糖苷水解酶第六家族,具有该家族催化保守区的典型特征。PCR扩增cbh2的成熟蛋白编码基因,利用基因重组的方法构建可在毕赤酵母分泌表达系统中表达纤维二糖水解酶蛋白的重组表达载体,并转化毕赤酵母得到重组子。在毕赤酵母醇氧化酶AOX1基因启动子的作用下,重组蛋白得到高效表达,小规模发酵量达1.2mgmL。经硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fastflow阴离子层析等步骤纯化了该重组表达蛋白。SDSPAGE得到重组蛋白分子量为67kD,与从嗜热毛壳菌中纯化的该酶分子量一致。该重组纤维二糖水解酶作用的最适合温度50℃,最适pH4.0,在70℃的半衰期为30min,具有较好的热稳定性。

烟草叶围细菌Tpb55菌株的鉴定及其抑菌活性

Tpb55是从烟草叶面生境中分离获得的一株拮抗细菌,本研究从形态、生理生化、16S-23S rDNA转录间隔区PCR(ITS-PCR)分析,初步明确了该菌株的分类地位。光学显微镜下观察到Tpb55菌体为杆状,革兰氏染色均匀,鞭毛周生,产芽孢,各项生理生化测试指标与枯草芽孢杆菌菌株表现一致;16S-23S rDNA ITS-PCR分析结果表明,Tpb55与枯草芽孢杆菌同源性达到99.75%。Tpb55代谢产物对7种病原真菌和3种病原细菌均有不同程度的抑菌作用,表明该菌株代谢产物具有较高的抑菌活性和较广的抑菌谱。进一步研究发现,该菌株代谢产物对有机溶剂、蛋白酶、热和pH值都有很高的稳定性,是具较好开发潜能的生防菌株。

粉红聚端孢菌胞外几丁质酶纯化、特性及抗菌活性

粉红聚端孢菌 (Trichothecium roseum)在 SMCS中恒温摇床 (2 0 0 r/ min,2 8℃ )上培养 12 d,诱导产生了大量的胞外几丁质酶。培养滤液经 (NH4) 2 SO4分级沉淀、DEAE- Sepharose FF阴离子交换柱层析和 CM- Sepharose FF阳离子交换柱层析获得了 SDS- PAGE纯的胞外几丁质酶 ,分子量约为39k Da。几丁质酶最适作用温度为 4 0℃ ,最适 p H范围为 4 .0～ 7.0。抗菌活性显示 ,纯酶对供试病原菌都有不同程度的抑菌作用 ,其中对棉花黄萎菌的抑制作用最强。

山东烟草病毒病发生特点及防治对策

对山东烟区烟草病毒病发生特点进行了分析,预测了未来几年烟草病毒病的发生趋势,并提出了烟草病毒病的防治方法。病毒病的防治应从改良品种、改善农业生态环境等方面着手,以改进农事操作方式方法、优化耕作制度为主,辅以少量低毒、低残留的农药进行系统综合防治,真正做到预防为主,综合防治。

Harpin_(Xoo)诱导烟草过敏性细胞死亡的细胞及分子特征

HarpinXoo是水稻白叶枯病菌分泌的蛋白质,用harpinXoo注射烟草后20h,可表现过敏性细胞死亡(hypersensitive cell death,HCD)。对harpinXoo诱导的烟草叶片用DNA特异染料(DAPI)染色后经荧光显微镜观察发现,烟草细胞在harpinXoo诱导后不同时间表现明显的染色质浓缩;对诱导后的烟草DNA经2%琼脂糖凝胶电泳发现,诱导后12h烟草DNA开始出现弥散的条带,24h后弥散的小片段大量增加;定量RT-PCR检测发现,harpinXoo诱导的烟草HCD早期即有标志基因hin1和hsr203J的诱导表达。这些结果表明,harpinXoo诱导的烟草细胞死亡,是植物的一种主动反应,具有细胞编程死亡的重要特征。

疏绵状嗜热丝孢菌热稳定几丁质酶的纯化及其性质研究

采用硫酸铵沉淀、DEAE SepharoseFastFlow阴离子层析、Phenyl Sepharose疏水层析等步骤获得了凝胶电泳均一的疏绵状嗜热丝孢菌 (Thermomyceslanuginosus)几丁质酶。经SDS PAGE和凝胶过滤层析测得纯酶蛋白的分子量在 4 8～ 4 9 .8kD之间。该酶反应的最适温度和最适pH分别为 5 5℃和 4 5 ,在pH4 5条件下 ,该酶在 5 0℃以下稳定 ;6 5℃的半衰期为 2 5min ;70℃保温 2 0min后 ,仍保留 2 4 %的酶活性。其N 端氨基酸序列为AQGYLSVQYFVNWAI。金属离子对几丁质酶的活性影响较大 ,Ca2 + 、Na+ 、K+ 、Ba2 + 对酶有激活作用 ;Ag+ 、Fe2 + 、Cu2 + 、Hg2 + 对酶有显著的抑制作用 ;以胶体几丁质为底物的Km 和Vmax值分别为 9 .5 6mg mL和 2 2 . 12 μmol min。抗菌活性显示 ,该酶对供试病原菌有不同程度的抑制作用。

小麦叶片β-1,3-葡聚糖酶的诱导、纯化与抗菌活性

三个小麦品种331、抗倒680和鲁麦23经氯化汞、水杨酸或核黄素处理后，叶片中的β-1，3-葡聚糖酶活性均有不同程度的升高。氯化汞处理24h对品种331该酶活性的诱导作用最强。因此取用氯化汞处理24h的331小麦叶片研磨得到粗酶液。将粗酶液经硫酸铵分级沉淀、Phenyl-Sepharose Fast Flow疏水层析、DEAE-Sepharose Fast FloW阴离子交换层析和SephacrylS-100分子筛层析，得到了SDS-PAGE凝胶电泳谱带单一的β-1，3-葡聚糖酶样品。经SDS-PAGE(12％)和凝胶过滤层析，测得其分子量约为52.0～53.6kD。抗菌试验测定显示，纯化的β-1，3-葡聚糖酶对供试的4种病原真菌的生长、孢子萌发或芽管伸长都有一定程度的抑制作用。

嗜热毛壳菌CT2纤维二糖水解酶Ⅰ在毕赤酵母中的高效表达

嗜热毛壳菌ChaetomiumthermophilumCT2可产生具有重要工业生产价值的纤维素酶类。RT-PCR扩增cbh1成熟蛋白的编码基因,利用基因重组的方法构建可在毕赤酵母分泌表达系统中表达纤维二糖水解酶的重组表达载体,并转化毕赤酵母得到重组子。在毕赤酵母醇氧化酶AOX1基因启动子的作用下,重组蛋白得到高效表达,小规模发酵量达1.42mg/mL。表达蛋白分泌到培养基中,分子量约80kD;以脱脂棉为底物测得酶活为21U/mL。表达蛋白在60℃稳定,70℃保温60分钟仍保持90%的酶活力,具有较高的热稳定性。

根癌农杆菌介导的轮枝镰孢菌遗传转化及T-DNA插入突变体的筛选

建立并优化了农杆菌介导转化轮枝镰孢菌Fusarium verticillioides获得T-DNA插入突变体的体系,在镰孢菌孢子浓度106个/mL、农杆菌OD600=0.15-0.20、乙酰丁香酮浓度为200μmol/mL的条件下共培养36h转化率最高,可达60-120个/106个孢子。共获得转化子1000多个,连续转接5代能够稳定遗传。PCR验证潮霉素B抗性基因已整合进转化子基因组DNA中,部分转化子表现为生长和形态异常。该转化体系的建立为研究该菌的致病机制和功能基因分析奠定了基础。