鸡Caspase3基因的克隆表达、酶活性及生物信息学分析

【目的】构建鸡半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(chCaspase 3)基因表达载体,鉴定表达蛋白酶活性,并进行生物信息学分析,为后续研究chCaspase 3功能奠定基础。【方法】以鸡法氏囊组织cDNA为模板,通过PCR扩增chCaspase 3基因,构建chCaspase 3基因的原核和真核表达载体。将原核表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达重组蛋白后利用Western blotting分析chCaspase 3原核表达产物。将真核表达载体以不同剂量(0、0.5、1.0、1.5、2.0μg)转染DF-1细胞进行表达,利用Western blotting和间接免疫荧光技术(IFA)分析chCaspase 3真核表达产物。用Caspase 3活性检测试剂盒分别检测原核和真核表达蛋白的酶活性;利用生物信息学软件分析chCaspase 3的相似性,并预测chCaspase 3蛋白的结构域和三级结构。【结果】chCaspase 3基因CDS区长852 bp,编码283个氨基酸。本研究成功构建了原核pET28a(+)-chCaspase 3和真核p3×Flag-CMV7.1-chCaspase 3重组质粒,原核表达产物分子质量为36 ku,与预期相符;真核表达产物表达量随转染的真核表达载体量的增加而增加。原核和真核表达产物均具有Caspase 3酶活性。生物信息学分析发现,chCaspase 3与其他物种相似性较低,且亲缘关系较远,chCaspase 3蛋白含有Caspase家族的保守五肽QACRG和经典的CASc结构域,其三维结构与人Caspase 3(hCaspase 3)十分吻合。【结论】试验成功克隆并表达了chCaspase 3基因,重组蛋白具有Caspase 3酶活性,生物信息学预测chCaspase 3蛋白与hCaspase 3蛋白有相似的三维结构,为揭示chCaspase 3蛋白的功能及探索其抗病毒天然免疫机制奠定了基础。

广西三黄鸡肠道中抗鸡白痢乳酸菌的分离鉴定

为开发鸡源益生菌资源,筛选能抑制鸡白痢沙门氏菌(SP)的乳酸菌,试验以散养三黄鸡为研究对象,以融钙圈法从鸡肠道中分离出乳酸菌,以双层琼脂平板扩散法筛选出对SP具有明显抑制效果的菌株,并结合形态学观察、生理生化试验和16S rRNA基因序列进行初步鉴定。在分析目的菌株的抑菌谱、耐酸耐胆盐特性以及对抗生素的敏感性后,以乳酸菌发酵液连续灌胃1日龄雏鸡14 d,研究其对雏鸡的安全性。结果显示:从鸡肠道中筛选出2株具有益生潜力的乳酸菌A1和K41,其无细胞上清液对SP的抑菌圈直径约为17 mm,其中A1为植物乳杆菌,K41为唾液乳杆菌;A1和K41的无细胞上清液对鼠伤寒沙门氏菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、藤黄微球菌和金黄色葡萄球菌均有明显的抑菌效果;A1和K41在pH 3.0条件下的存活率分别为97.24%和89.03%,在0.3%胆盐浓度下的存活率分别为89.81%和87.20%;A1和K41对β-内酰胺类抗生素阿莫西林、氨苄西林和头孢曲松等敏感,对卡那霉素、磺胺异噁唑和环丙沙星等耐药;口服A1和K41的雏鸡生长良好,生产性能与对照组相比无显著差异(P>0.05)。综上,植物乳杆菌A1和唾液乳杆菌K41对SP和多种病原菌有明显的抑制效果,且耐酸耐胆盐能力良好,对雏鸡安全无害。

黄连木油制备生物柴油的中试研究

在100L反应釜中进行制备黄连木生物柴油的中试试验,研究了反应温度、甲醇用量、催化剂用量、搅拌速率和反应时间对转化率的影响。试验结果表明最佳反应条件:反应温度60℃,甲醇用量为油重的20%,催化剂KOH用量为油重的1.2%,搅拌速率为150r/min,反应时间为60min,此时转化率达最高值93.6%。所得生物柴油基本达到GB/T20828-2007《柴油机燃料调合用生物柴油(BD100)》所规定的技术要求,净热值达到0#柴油的89.7%。油耗对比试验表明,燃用纯生物柴油后直喷柴油机油耗率增加12.2%。

运动发酵单胞菌发酵产乙醇的中试研究

从6株Zymomonas.mobilis基因工程菌中筛选出一株乙醇高产菌Z4,在500ml摇瓶小试的基础上利用5L全自动发酵罐进行了中试放大。结果表明Z4菌株的最适初糖浓度为18%;pH6.0,35℃,发酵48h乙醇最高含量达67.9g·L-1,得率达77.0%。补料分批培养实验结果表明,补料时机以发酵起始后24h为佳,发酵48h后乙醇含量达最高值93.1g·L-1,得率为77.6%。

麻疯树籽制备生物柴油的中试研究

以100 L反应釜进行了制备麻疯树生物柴油的中试实验,并研究了反应温度、醇油比、催化剂用量、搅拌速率对转化率的影响。实验结果表明,最佳反应条件为:反应温度60℃,醇油质量比为1∶4.5,催化剂KOH用量为油重1.2%,搅拌速率150 r/min,反应60 min时转化率达到最高值98.3%。所得产品基本达到GB/T20828—2007《柴油机燃料调合用生物柴油(BD100)》所规定的技术要求,净热值达到0#柴油的90.1%。

运动发酵单胞菌发酵产乙醇的中试研究

从6株Zymomonas.mobilis基因工程菌中筛选出一株乙醇高产菌Z4,在500ml摇瓶小试的基础上利用5L全自动发酵罐进行了中试放大。结果表明Z4菌株的最适初糖浓度为18%;pH6.0,35℃,发酵48h乙醇最高含量达67.9g.L-1,得率达77.0%。补料分批培养实验结果表明,补料时机以发酵起始后24h为佳,发酵48h后乙醇含量达最高值93.1g.L-1,得率为77.6%。

麻疯树籽制备生物柴油的中试研究

以100升反应釜进行了制备麻疯树生物柴油的中试试验,并研究了反应温度、醇油比、催化剂用量、搅拌速率对转化率的影响。实验结果表明最佳反应条件为:反应温度60℃,醇油质量比为1:4.5,催化剂KOH用量为油重1.2%,搅拌速率150rpm,反应60min时转化率达到最高值98.3%。所得产品基本达到GB/T20828-2007《柴油机燃料调合用生物柴油(BD100)》所规定的技术要求,净热值达到0号柴油的90.1%。

壳聚糖酶高产菌株的筛选、产酶条件的优化及壳聚糖酶的分离纯化

从采集的土样中分离到3株产壳聚糖酶的菌株,经摇瓶复筛,菌株JH01产酶能力最强。对其发酵产酶条件的研究结果表明其产酶最适培养基组分为:壳聚糖2.0%,NaCl0.05%,MgSO40.05%,KH2PO40.075%,FeSO40.001%,牛肉膏0.3%,pH5.5。最适产酶培养条件为:40℃、180r/min培养48h。在最适产酶培养条件下,48h时菌株JH01发酵液中壳聚糖酶活力可达到26.03U/mL,产酶能力为国内已报道的最高值。经DEAECellulose52柱层析,壳聚糖酶被纯化了11.70倍。经SDS-PAGE鉴定,纯化后酶已达到电泳纯的程度,分子量为30kD。

生物柴油的低温流动性研究

生物柴油是可再生清洁燃料,能够减缓人类对石化柴油的依赖,然而生物柴油凝固点和粘度相对较高,低温流动性较差,冬季低温环境下结晶体易堵塞发动机管道和过滤器,缸内燃油雾化不良,使发动机性能恶化甚至无法正常工作。研究了以乙醇、乙酸乙烯酯和零号柴油为掺混剂对生物柴油低温流动性的影响,结果表明,三种添加剂对生物柴油均具有降凝和降低粘度的效果,而乙醇和柴油对生物柴油低温流动性的改良作用最为明显。

商品化龙眼气调冷藏保鲜研究

按照生产标准化原则,着重研究商品化龙眼的气调冷藏保鲜工艺。研究结果表明,采取的气调冷藏保鲜技术适用于规模商品化龙眼保鲜,保鲜工艺简单实用,操作易于标准化,气调冷藏能有效地保持龙眼特有味道和主要营养成分,对龙眼保鲜有着明显的效果,龙眼气调冷藏保鲜期达49天以上。

商品化龙眼气调冷藏保鲜研究

按照生产标准化原则,着重研究商品化龙眼的气调冷藏保鲜工艺。研究结果表明,采取的气调冷藏保鲜技术适用于规模商品化龙眼保鲜,保鲜工艺简单实用,操作易于标准化,能有效地保持龙眼特有味道和主要营养成分,对龙眼保鲜有着明显的效果,龙眼气调冷藏保鲜期达49天以上。

基因自然重排鸡传染性法氏囊病病毒的分子特征

为了对某鸡群疑似传染性法氏囊病(IBD)的病例进行分子诊断、病毒分离和分子特征分析,本试验通过核酸检测调查该鸡群法氏囊组织和病毒分离物中传染性法氏囊病病毒(IBDV)的感染情况,将分离得到的毒株命名为GL1906,继而对该病毒基因组双节段的VP2高变区(vVP2)序列和VP1-b序列进行分析。结果显示,GL1906 vVP2基因的特征性氨基酸位点在222A、256I、284A、294I和299S上均符合超强毒株(vvIBDV)的特征,但279N符合致弱毒株的特征;VP1-b基因在242D、390L、393E与弱毒株一致,287A与vvIBDV一致,此外第777~782位核苷酸序列为GGTGCC,与弱毒株一致;GL1906 vVP2的核苷酸、氨基酸序列与vvIBDV的同源性最高,在系统进化树中与vvIBDV同为A3分支;GL1906 VP1-b的核苷酸、氨基酸序列与B节段属于独特来源的NN1172同源性最高,在系统进化树中同属于B3独特分支。结果表明,本试验分离株GL1906的基因组双节段vVP2和VP1-b具有不同的来源,是基因型为A3B3的基因自然重排毒株。

Z.mobilis基因工程菌发酵酒精技术条件的研究

文章通过温度梯度驯化得到了一株适用于工业中高温生产酒精的工程菌——Z.mobilis基因工程菌。对该工程菌株进行温度、发酵起始pH、接种量、发酵周期以及添加营养盐的优化试验最终得到该工程菌株的最佳发酵工艺,即发酵温35℃,发酵起始pH 6.0,接种量为10.0%,发酵周期48h,添加营养盐10 mg/L是最佳发酵工艺。最佳发酵工艺下,酒精得率为94.0%,酒分9.5%(v/v)。

产胞外多糖的海洋动物共附生细菌的分离及生物学活性分析

【目的】对广西北部湾近海海域内部分鱼类、虾类和蟹类的体内和体表产胞外多糖(EPS)细菌进行分离及生物学活性分析,为该海域近海海洋动物共附生微生物资源的开发利用提供参考依据。【方法】以广西北部湾近海海域内采集到的部分鱼类、虾类和蟹类体内和体表共附生海洋细菌为研究对象,用黏液比色法进行初筛后,再用醇沉法和Sevage法提取、纯化细菌所产EPS,用苯酚硫酸法测定多糖含量,筛选出产EPS的海洋共附生细菌,通过16S rDNA序列对细菌种属进行鉴定和多样性分析,并通过1,1⁃二苯基⁃2⁃三硝基苯肼(DPPH)自由基的清除率及对鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的抗病毒能力初步评估代表菌株的EPS生物学活性。【结果】共分离到37株产EPS的共附生海洋细菌,基于代表菌株的16S rDNA序列分析,菌株分别属于3纲4目6科6属10种,其中优势菌是芽孢杆菌属,占代表菌株42.86%,其次是普罗威登斯菌属(25.00%)和弧菌属(21.43%);EPS含量测定结果显示不同菌株之间产糖量具有明显差异;DPPH清除率测定结果显示,代表菌株所产的EPS均具有一定抗氧化活性,且不同属菌株之间、同属不同种菌株之间DPPH清除率差异明显;优势芽孢杆菌的代表菌株所产EPS具有抑制IBDV在鸡胚上复制的能力。【结论】广西北部湾近海海域内的海洋动物共附生微生物中产EPS细菌存在种属多样性,所产EPS具有抗氧化活性和抗病毒活性。研究结果能为广西北部湾近海海洋动物共附生细菌资源利用提供科学依据。

传染性法氏囊病病毒和禽致病性大肠杆菌的二重探针实时荧光定量PCR方法的建立与应用

为建立用于传染性法氏囊病病毒(IBDV)和禽致病性大肠杆菌混合感染快速鉴别检测的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,研究分别根据IBDV VP2基因和大肠杆菌UidA基因设计合成特异性引物和探针,通过普通PCR方法扩增目的基因片段并克隆至pGM-T载体,构建重组质粒pGM-T/VP2和pGM-T/UidA作为标准品,通过正交试验确定引物和探针的最佳浓度,分别建立基于VP2和UidA基因的标准扩增曲线,并进一步验证其特异性、灵敏性、重复性,建立的方法应用于人工感染样本和临床样本的检测,并与常规PCR方法进行比较。结果显示:VP2和UidA基因的最佳上、下游引物浓度均为0.30μmol/L,VP2和UidA基因的探针浓度分别为0.35μmol/L和0.25μmol/L;VP2和UidA基因扩增的线性范围均为10^(3)~10^(7)拷贝/μL,相关系数R2≥0.99,灵敏度均为100拷贝/μL;两者组间及组内变异系数均小于2%;人工感染样品与临床样品的检测结果与普通PCR方法一致。研究表明,建立的二重探针FQ-PCR方法为同时检测IBDV和禽致病性大肠杆菌提供了快速、敏感、特异且能满足临床样本需求的检测方法。

用于有机蒸汽分离的PAN-SR复合膜的研究

以聚丙烯腈（ＰＡＮ）为膜材料考察了铸膜液浓度、不同添加剂、不同硅橡胶对膜性能的影响制成了ＰＡＮ基膜和ＰＡＮ复合膜利用电镜考察了ＰＡＮ基膜的形态和结构将ＰＡＮ基膜与ＰＡＮ复合膜分别浸泡在７种溶剂中２００～１３２０ｈ，观察膜性能及膜失重变化测定复合膜对有机蒸汽的分离性能，实验结果表明。

探讨小儿肺热咳喘口服液在治疗小儿肺炎中的临床疗效

目的探讨小儿肺热咳喘口服液在治疗小儿肺炎中的临床疗效。方法选取2014年5月∽2015年4月收治的44例小儿肺炎患者,随机分为治疗组和对照组,对照组采用普通治疗方式,治疗组采用小儿肺热咳喘口服液治疗,比较两组患者的病情恢复情况。结果治疗组患者的第一秒用力呼气量和其占据用力肺活量百分比结果分别是（4.50±0.92）l/s和（93.19%±10.42%）,其肺功能指标与对照组相比存在差异（P〈0.05）,具有统计学意义。结论小儿肺炎患者采用小儿肺热咳喘口服液治疗后,肺功能得到有效恢复,缩短病情恢复时间。

关于机电一体化技术若干问题的探讨

21世纪,机电一体化技术将扮演机械工业的主角。机电一体化技术是渗透到所有机械产品之中的普遍技术,几乎没有行业的限制。为此,本文详细研究了机电一体化系统的基本结构、功能原理解接口特征匹配的实现方法、机电一体化技术的发展。因此本文具有深刻的理论意义和广泛的实际应用。

机械优化设计的数学建模及求解中的几个问题

本文从设计变量的选择、目标函数的建立、约束条件的确定、数学模型的尺度变换、数据表和线图资料的使用、优化结果的分析与处理等方面对机械优化设计的数学建模问题进行了分析,并对求解中可能出现的问题提出了作者自己的观点。

观察枯草杆菌二联活菌颗粒对小儿厌食治疗效果

目的观察枯草杆菌二联活菌颗粒对小儿厌食治疗效果。方法 38例小儿厌食患者,均采用枯草杆菌二联活菌颗粒治疗,对比患者治疗前后的血红蛋白、红细胞等多项指标结果。结果治疗后患者的血红蛋白、红细胞以及血浆前白蛋白三项指标结果分别是(119.49±12.20)g/L、(4.42±0.27)×1012/L以及(150.33±26.71)mg/L;治疗前后对比显著差异(P<0.05)。结论小儿厌食患者采用枯草杆菌二联活菌颗粒治疗后,可以改善患者的不良食欲症状,促进其饮食搭配营养合理。