青蒿素抗心律失常作用及机制

目的 观察青蒿素抗心律失常作用，并探讨其作用机制。方法 采用冠脉结扎，氯化钙，氯仿所致心律失常模型进行青蒿素的抗心律失常作用研究。应用膜片钳技术研究药物对内向整流钾电流的作用。结果 青蒿素能明显对抗结扎冠脉引起的心律失常，对氯化钙、氯仿引起的心律失常，可使其发生时间明显延长，室颤明显减少。膜片钳实验表１９９８０２２０ 收稿，１９９９０４１４ 修回作者简介：李宝馨，女，３５ 岁，副教授，博士，主要从事心血管药物研究；杨宝峰，男，４１ 岁，博士后，博士生导师，哈尔滨医科大学副校长，主要从事抗心律失常药物研究明，该药可剂量依赖性的明显抑制内向整流钾电流。结论 该药是一有效的抗心律失常药。

黄连素单用及合用谷维素在家兔及健康志愿者体内的药代动力学研究

目的 :研究黄连素单用及与谷维素伍用在家兔和健康志愿者体内的药代动力学。方法 :反相高效液相色谱法 ,紫外检测。用 3P87程序软件处理数据 ,用t检验法进行显著性检验。结果 :在此色谱条件下 ,黄连素在 2 0～ 64 0 μg·L-1之间呈良好的线性关系 ,其最低检测极限为 2 0 μg·L-1,平均回收率为 (99 85± 3 2 0 ) %。黄连素单用制剂组 ,在家兔体内 :其最高血药浓度cmax为 92 7μg·L-1,tpeak为 0 63h ,AUC0 -∞ 为 4 91 7μg·L-1·h-1;在人体内 :其最高血药浓度cmax为 3 94 7μg·L-1,tpeak为2 3 7h ,AUC0 -∞ 为 3 0 2 8 3 μg·L-1·h-1。黄连素与谷维素合用制剂组 ,在家兔体内 :其最高血药浓度cmax为 2 10 8μg·L-1,tpeak为 0 65h ,AUC0 -∞ 为 110 5 4 g·L-1·h-1;在人体内 :其最高血药浓度cmax为 5 3 4 2 μg·L-1,tpeak为 2 4 5h ,AUC0 -∞ 为4 13 6 9g·L-1·h-1。两组体内的血药浓度 时间曲线无论在家兔及人体均符合一室开放模型。结论 :无论在家兔及人体 ,黄连素与谷维素合用比黄连素单用吸收好 ,说明谷维素可促进黄连素吸收 ,两组之间的AUC0 -∞ 值具有显著差别 (P <0 0 5 ) ,而其它的体内动力学行为基本一致。

奎尼丁/奎宁与苦参碱/氧化苦参碱对HERG钾通道的作用及构效关系研究

目的：应用电生理及分子生物学技术研究同分异构体奎尼丁／奎宁及苦参碱／氧化苦参碱对表达在非洲蛙卵及HEK293细胞HERG通道的作用及作用位点。结果：在非洲蛙卵细胞，奎尼丁和奎宁均产生剂量依赖性阻断HERG通道的作用，奎尼丁IC50为3±0．03μM，奎宁IC50为44±0．6μM，奎尼丁效价强度是奎宁的14倍。在HEK293细胞，奎尼丁IC50为0．8±0．1μM，奎宁IC50为11±3μM，奎尼丁效价强度是奎宁的15倍。奎尼丁和奎宁对突变的F656C通道作用的IC50分别为771±81μM和391±40μM，表明二药对突变的F656C通道亲和力大大降低。苦参碱10、100μM对HERG通道具有一定的抑制作用，与对照组比没有显著差异；苦参碱1μM对HERG通道电流有促进作用，由给药前的53．1±9．3pA／pF增加至81．1±28．7pA／pF（P〈0．05）。氧化苦参碱对HERG通道具有剂量依赖性抑制作用，10μM可抑制HERG电流22％（P〈0．05）。结论：奎尼丁和奎宁对HERG通道均有抑制作用，奎尼丁与HERG通道亲和力大大强于奎宁，解释了奎尼丁引起长-QT综合症而奎宁没有此作用的原因。奎尼丁和奎宁在HERG通道的作用位点是F656氨基酸，二药与苯丙氨酸的相互作用决定其立体异构体对HERG通道作用的差异。苦参碱、氧化苦参碱对HERG通道作用存在较大差异，氧化苦参碱分子增加一个氧原子，增强了对HERG通道亲和力。

苦参碱、氧化苦参碱和白藜芦醇对HERG钾通道表达的影响

由于HERG钾通道在心律失常的发生与治疗中具有双重作用,因此成为近年来研究的热点。本文主要通过免疫荧光化学染色法、激光共聚焦显微镜及Western blotting法分别定性、定量地检测不同浓度的苦参碱、氧化苦参碱和白藜芦醇对稳定转染在HEK-293细胞中HERG钾通道表达的影响。研究发现,苦参碱(1μmol·L-1)和氧化苦参碱(1μmol·L-1)均能够促进定位于HERG-HEK细胞膜上的HERG钾通道的表达(n=5,P<0·05),苦参碱(100μmol·L-1)能够抑制定位于HERG-HEK细胞膜上的HERG钾通道表达(n=5,P<0·05),氧化苦参碱(100μmol·L-1)对HERG钾通道表达没有影响,白藜芦醇不影响HERG-HEK细胞中HERG钾通道表达。结果表明,低浓度的苦参碱促进HERG钾通道表达,高浓度的苦参碱抑制HERG钾通道表达,低浓度的氧化苦参碱促进HERG钾通道表达,白藜芦醇不影响HERG钾通道表达。这为苦参碱、氧化苦参碱和白藜芦醇抗心律失常作用机制及安全性提供了理论依据。

白藜芦醇对豚鼠心室肌细胞L型钙通道的影响

目的研究白藜芦醇(resveratrol,RES)对豚鼠心室肌细胞L型钙通道的影响。方法酶解法分离单个豚鼠心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术记录白藜芦醇对豚鼠单个心室细胞L型钙通道电流(ICa-L)的影响。结果不同浓度的RES明显抑制ICa-L,1、10、100μmol.L-1L的RES使其峰电流密度从(12.96±1.48)pA/pF减少到(11.36±1.59)、(9.96±1.51)和(7.77±0.68)pA/pF(n=6,P<0.01),冲洗后可恢复至(11.85±0.83)pA/pF。RES可使ICa-L的I-U关系曲线上移,其形状和峰值电压保持不变;RES还可使通道的激活曲线右移,但失活曲线和失活恢复时间无改变。结论白藜芦醇通过延长L型钙通道激活过程而明显抑制ICa-L,减少细胞外的钙离子内流,延长有效不应期,从而发挥抗心律失常作用。

白藜芦醇对大鼠离体胸主动脉环的舒张作用

目的:观察白藜芦醇(resveratrol,RVL)对大鼠离体胸主动脉血管的舒张作用并探讨其机制。方法:采用离体血管环灌流方法,观察RVL在含Ca2+或无Ca2+Krebs液孵育条件下对去甲肾上腺素(NA)引起的血管平滑肌收缩的影响;同法观察RVL对30,80mmol·L-1的KCl引起的血管平滑肌收缩的影响;RVL对NA引起的依赖于细胞内钙和细胞外钙收缩反应的影响,以及加入N-G-硝基-L-精氨酸(L-NNA)和优降糖后RVL舒张大鼠离体主动脉环效应的变化。结果:RVL呈浓度依赖性舒张NA引起的血管收缩;无Ca2+组RVL抑制NA所致血管平滑肌收缩效应大于含Ca2+组;RVL能够拮抗NA诱发的依内钙的收缩反应,而对外钙收缩无抑制。RVL对80,30mmol·L-1的KCl引起的血管平滑肌收缩均有抑制作用,且前者量效曲线明显上移。L-NNA使RVL舒血管效应降低(26.0±4.6)%;优降糖组的血管舒张受抑程度与对照组无显著差别(P>0.05)。结论:RVL可呈内皮依赖性舒张血管平滑肌,其作用机制可能与该药促进NO合成释放,开放钙激活的钾通道以及抑制血管平滑肌细胞外钙内流和内钙释放有关。

冠心胶囊对大鼠心肌缺血的保护作用

目的 观察冠心胶囊对大鼠心肌梗死的影响及其作用机制。方法 用大鼠冠脉结扎法制备心肌梗死模型 ,应用膜片钳技术研究药物对L 型钙通道的作用。结果 冠心胶囊能剂量依赖性地对抗大鼠冠脉结扎引起的心肌梗死 ,并明显抑制心肌缺血引起的S T段抬高。冠心胶囊 1,10 ,30mg·ml-1可显著抑制钙通道 ,减少钙离子内流 ,30mg·ml-1可抑制钙离子 5 2 % (P <0 .0 1)。结论 冠心胶囊能剂量依赖性地缩小大鼠心肌梗死面积 ,对心梗具有保护作用。这一作用可能和其调节植物神经的功能 ,抑制钙通道 ,稳定心肌细胞膜有关。

人口服黄连素的药代动力学研究

人口服黄连素的药代动力学研究包丽华李宝馨杨宝峰王慧珍郝晓敏吴少宏李文汉（哈尔滨医科大学药理教研室，哈尔滨１５００８６）中国图书分类号Ｒ９７２；Ｒ９６９．１近年来，许多实验表明黄连素具有抗心律失常和治疗心功能不全的作用〔１，２〕。但传统上认为，黄连素口...

苦参碱与E-4031,多非利特和RP58866对家兔心肌I_(k1)的作用比较(英文)

目的 比较苦参碱与E 4 0 31,多非利特和RP5 886 6对家兔单个心室肌细胞的内向整流钾电流(Ik1)的效价和效能的不同 ,揭示苦参碱抗心律失常作用弱于西药的原因。方法 应用全细胞膜片钳技术记录苦参碱与E 4 0 31,多非利特和RP5 886 6对家兔Ik1的影响。结果 苦参碱 1和 10 μmol·L- 1对家兔Ik1无明显影响。在实验电压为 - 12 0mV和保持电压为 - 70mV ,苦参碱 5 0和 10 0 μmol·L- 1对Ik1分别抑制达 6 % (n =8,P <0 .0 5 )和 8% (n =8,P <0 .0 5 ) ;在实验电压为 - 5 0mV ,抑制Ik1达 4 % (n =8,P <0 .0 5 )和 8% (n =8,P <0 .0 5 )。在实验电压为 - 12 0mV ,E 4 0 311和 10 μmol·L- 1使Ik1分别降低10 % (n =6 ,P <0 .0 5 )和 4 5 % (n =6 ,P <0 .0 5 )。在 - 5 0mV ,Ik1分别降低 5 % (n =6 ,P <0 .0 5 )和35 % (n =6 ,P <0 .0 5 )。在实验电压为 - 12 0mV ,多非利特 1和 10 μmol·L- 1使Ik1降低 19% (n =8,P <0 .0 5 )及 2 5 % (n =8,P <0 .0 5 )。在 - 5 0mV ,Ik1分别降低 11%和 19% (n =8,P <0 .0 5 )。在实验电压为 - 12 0mV ,RP5 886 6 1和 10 μmol·L- 1使Ik1分别降低 2 1% (n =8,P <0 .0 5 )和 5 0 % (n =8,P <0 .0 5 )。在 - 5 0mV ,Ik1分别降低 6 % (n =8,P <0 .0 5 )和11% (n =8,P <0 .0

槐果碱对HERG钾通道电生理功能的影响

HERG(human ether-a-go-go-related gene)钾通道在心律失常的发生及治疗中具有重要作用,因此已成为近些年来的研究热点。本研究应用全细胞膜片钳技术记录在HEK(human embryonic kidney)293细胞上稳定表达的HERG钾通道的电流和动力学曲线(激活、失活、复活和去活化)来研究不同浓度槐果碱对HERG电流及动力学曲线的影响,以了解槐果碱抗心律失常的作用机制。结果表明,槐果碱浓度依赖性地抑制HERG时间依赖性电流(Istep)及其尾电流(Itail)。在0 mV时,10、30、100及300μmol.L-1槐果碱对Istep的抑制率分别为(10.7±2.8)%、(11.3±5.5)%、(47.0±2.3)%及(53.7±2.5)%,对Itail的抑制率分别为(1.1±3.0)%、(17.1±3.3)%、(32.7±1.9)%(P<0.05,n=12)及(56.0±2.4)%(P<0.05,n=13)。100μmol.L-1槐果碱作用后失活时间常数减小,失活速率变快;复活时间常数在大部分指令电压下明显减小(P<0.01,n=12),复活速度加快;瞬时失活时间常数减小(P<0.05,n=12);稳态激活、去活化无明显改变。由此可看出,槐果碱通过影响通道的失活过程抑制HERG钾电流,使得心肌细胞复极时间延长,改善快速性心律失常。

多胺对大鼠缺氧-复氧心肌细胞内钙的影响

目的:观察外源性低浓度多胺对大鼠缺氧-复氧心肌细胞钙超载的影响。方法:酶解分离大鼠心室 肌细胞,用正常氧合Tyrode液灌流8 min,换为缺氧液灌流32 min,再转换为正常氧合Tyrode液灌流8 min,复制心肌 缺氧-复氧模型。分别在缺氧前给予精胺,缺氧-复氧后给予精胺、精脒、腐胺。应用激光扫描共聚焦显微镜 (LSCM)连续观察细胞内钙荧光强度的动态变化。结果:精胺(1 mol/L)对正常静息状态下大鼠心室肌[Ca2+]i无影 响。缺氧前给予精胺,可取消复氧引起的心肌[Ca2+]i增高;缺氧-复氧后给予精胺、精脒、腐胺对缺氧-复氧引起 [Ca2+]i升高也有不同程度的降低作用,其中以精胺的作用最强。复氧后给予精胺降低缺氧-复氧[Ca2+]i升高的 作用小于缺氧前给予。结论:缺氧前给予精胺可拮抗缺氧-复氧心肌细胞钙超载发生;复氧后给予精胺可使缺氧- 复氧心肌细胞钙超载减轻,但其作用力度不如缺氧前给药。多胺拮抗缺氧-复氧心肌细胞钙超载的作用以精胺> 精脒>腐胺的顺序递减。

三氧化二砷对豚鼠心室肌细胞内游离钙离子浓度的影响

目的 研究三氧化二砷(As2O3)对豚鼠心室肌细胞内游离钙离子浓度的影响。方法Fluo-3／AM荧光探针标记豚鼠心室肌细胞游离钙离子,激光共聚焦显微镜实时测定不同浓度As2O3干预5 min后心室肌细胞的胞浆钙的变化。不同剂量的As2O3对正常台氏液中的豚鼠心肌细胞体外浓度递减性干预13 h后心肌细胞DNA片断化的情况。结果 不同浓度As2O3对心室肌细胞的胞浆钙影响不同。在正常台氏液中,低浓度As2O3引起一过性钙增高,高浓度的As2O3引起持续钙增高,并被钙通道阻滞剂维拉帕米不完全阻断。在无钙台氏液中,低浓度As2O3对胞浆钙无影响,高浓度的As2O3引起持续钙增高。10μmol.L-1的As2O3体外浓度递减性干预13 h后,豚鼠心肌细胞发生DNA的片断化。低于10 μmol·L-1的As2O3体外浓度递减性干预13 h后,心肌细胞无明显的DNA片断化。结论 As2O3影响细胞外钙内流和细胞内钙库释放,导致心肌细胞内的游离钙升高,其机制可能有电压依赖性钙通道参与。低浓度引起胞内一过性钙升高;高浓度导致胞内持续性钙升高。后者可能是As2O3诱导细胞凋亡的机制之一。

三氧化二砷对胃癌细胞SGC7901多药耐药的逆转作用及其机制

研究三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对胃癌细胞多药耐药的逆转作用及其机制。逐渐递增长春新碱(VCR)的浓度诱导胃癌细胞株SGC7901产生多药耐药性(SGC7901/VCR)。MTT法测定药物对肿瘤细胞的杀伤作用;Western blotting检测肿瘤细胞内P-糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽S-转移酶(GST-s)表达。结果表明,胃癌SGC7901/VCR细胞对长春新碱(VCR)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)及表阿霉素的耐药倍数分别为16.56倍、2.69倍及13.05倍。经As2O3预处理24 h后,长春新碱、5-氟尿嘧啶及表阿霉素对SGC7901/VCR的耐药倍数显著下降(P<0.05)。SGC7901/VCR在静息时细胞内P-gp、GST-s蛋白表达显著高于SGC7901。而As2O3可使SGC7901/VCR细胞内P-gp、GST-s蛋白表达显著下降,但是对SGC7901无明显作用。从而证实As2O3部分逆转SGC7901/VCR的耐药性,其机制可能与P-gp、GST-s蛋白表达降低有关。

microRNA在犬心房纤颤模型中的变化

目的应用miRNA芯片技术研究小分子RNA(miRNA)对犬心房纤颤(AF)的调节作用,发现了AF的新机制,为新药研究提供了新的靶点。方法将杂种犬随机分为两组,假手术组(n=4);利用高频起搏器对右心耳进行刺激起搏诱发持续性AF组(n=5),取左心房组织常规抽提总RNA,采用含有468种miRNA的芯片检测系统进行miRNA表达谱差异分析。结果和假手术组相比,AF模型组的miRNA表达谱中差异表达的miRNA共有10个,其中有4个miRNA上调,6个miRNA下调。结论miRNA参与了持续性AF的调节作用,提示miRNA是抗心律失常药物作用的新靶点。

三氧化二砷对心肌细胞蛋白激酶C及胞内游离钙的影响

目的 探讨三氧化二砷 (As2 O3)治疗白血病时的心脏不良反应机制。方法 Fluo 3/AM荧光探针标记豚鼠心室肌细胞 ,激光共聚焦显微镜实时测定不同浓度As2 O3干预后的心室肌胞浆 [Ca2 +]i,磷基转移法测定心室肌胞膜和胞浆内蛋白激酶C(PKC)的活性。结果 0 .5 μmol·L- 1As2 O3对台氏液中豚鼠心室肌细胞 [Ca2 +]i 无明显影响。 2 μmol·L- 1As2 O3持续作用 6min时 ,细胞 [Ca2 +]i 开始升高 ,持续约 9min后恢复到给药前水平。 10 μmol·L- 1As2 O3作用不到 3min时 ,心室肌细胞 [Ca2 +]i 持续升高至扫描结束共 2 7min ,一直没有恢复。As2 O3引起的 [Ca2 +]i 升高可被钙通道阻滞剂维拉帕米和硝苯地平不完全阻断。 2～ 10 μmol·L- 1AS2 O3作用3h可使细胞膜及胞浆相的PKC活性升高 ,10 μmol·L- 1组 ,细胞膜相的PKC升高更明显。结论 一定浓度的As2 O3可使心肌细胞内游离钙升高、PKC活化 ,细胞膜可能是As2 O3最初作用靶点。

白藜芦醇对HERG钾通道电生理功能的影响

目的探讨白藜芦醇对稳定转染HERG基因的HEK293细胞上HERG钾通道的影响,进一步了解其抗心律失常的作用机制。方法传代得到单个HERG-HEK细胞,应用全细胞膜片钳技术记录HERG-HEK细胞上的HERG钾电流和动力学曲线(激活、失活、复活和去活化)。结果白藜芦醇(1、10、100μmol·L-1)浓度依赖性的抑制HERG步阶电流(IHERG)及其尾电流(IHERGtail),0mV电压下1μmol·L-1白藜芦醇抑制IHERG25.3%±9.4%,IHERGtail23.6%±11%;10μmol·L-1白藜芦醇抑制IHERG28%±8.4%,IHERGtail28.8%±9.1%;100μmol.L-1白藜芦醇抑制IHERG43.7%±1.5%,IHERGtail47.9%±11%(P<0.05,n=12)。100μmol·L-1白藜芦醇作用后失活时间常数减小,失活速率变快;去活化时间常数明显减小(P<0.05,n=12)。激活、瞬时失活和复活动力学没有明显变化。结论白藜芦醇通过影响通道的开放状态和失活状态抑制HERG钾电流,从而使得心肌细胞复极时间延长,改善快速性心律失常。

三氧化二砷对人肺腺癌Anip973细胞内[Ca^(2+)]i的影响

目的 研究三氧化二砷 (As2 O3)对人肺腺癌Anip973细胞内游离 [Ca2 + ]i的影响。方法 培养人肺腺癌Anip973细胞 ,用激光扫描共聚焦显微镜 (LSCM)观察As2 O3对人肺腺癌Anip973细胞内游离 [Ca2 + ]i的影响 ;用生长曲线法测药物对肿瘤细胞增殖的影响。结果 ①LSCM显示As2 O3作用后的人肺腺癌细胞Anip973细胞内 [Ca2 + ]i显著升高 (P <0 .0 0 1 )。②As2 O3对人肺腺癌细胞株Anip973细胞内 [Ca2 + ]i升高作用具有剂量依赖性。③As2 O3能明显抑制人肺腺癌Anip973细胞的增殖。结论 As2 O3可能是通过升高人肺腺癌细胞内 [Ca2 + ]i来启动细胞凋亡机制 ,诱导肺癌细胞凋亡 。

白藜芦醇对冠脉结扎诱发大鼠急性心肌缺血的保护作用的研究

目的研究白藜芦醇(resveratrol)对大鼠急性心肌缺血的保护作用,并进一步阐明其机制。方法建立急性心肌缺血模型,持续观察标准Ⅱ导联心电图30min,6h后进行心肌TTC染色测量心肌梗死面积,测定血清肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)活力,确定心肌损伤程度。心肌细胞凋亡的检测采用原位末端标记法(TUNEL),免疫组化法检测凋亡相关基因Fas、Bax及Bcl-2的蛋白表达。结果白藜芦醇能够剂量依赖性地降低大鼠心肌冠脉结扎后ST段抬高,降低CK、LDH活力,缩小心肌梗死面积,降低心肌细胞凋亡指数,抑制Fas、Bax的表达,增强Bcl-2的表达。结论白藜芦醇对冠脉结扎诱发的大鼠急性心肌缺血有保护作用,其机制可能与上调Bcl-2蛋白表达,下调Fas、Bax蛋白表达,抑制心肌细胞凋亡有关。