表观健康的猪肉携带猪链球菌的调查

猪链球菌病（SS）是由猪链球菌引起的人兽共患传染性疾病,给养猪业及公共卫生安全构成了严重的威胁。人和猪感染发病的临床症状相似。以往对猪肉进行食品安全检测的项目多集中在致泻大肠杆菌、沙门菌、单增李斯特菌等食源性病原菌,检测过程中,偶尔也能分离到链球菌,但多数是没有致病性的。在经济高度发达的时代,食品安全越来越成为人们关注的焦点,本次通过对广州大型农贸市场销售的屠宰猪肉的随机抽样,初步了解表观健康的猪肉携带猪链球菌的情况和耐药性情况,为防范食源性猪链球菌病感染人及耐药性的传播提供理论依据。

猪链球菌相关毒力因子研究进展

猪链球菌(Streptococcus suis)病是近年来严重危害我国养猪业发展的细菌性传染病。由于没有国际统一的用于猪链球菌感染的动物模型,即便是同一菌株,其毒力在不同文献中也会存在较大差异。本文对猪链球菌相关致病因子及其研究进展进行综述,进而对猪链球菌相关毒力因子有新的认识。

对虾产品疫病双重荧光RPA方法的建立和初步应用

为实现对虾产品中两种病原体的简便、快速、高效检测,针对对虾传染性皮下及造血器官坏死病毒(infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus,IHHNV)和虾肝肠胞虫(EHP)进行双重荧光RPA(recombinase polymerase amplification,重组酶聚合酶扩增)检测方法的研究。根据IHHNV和EHP的保守序列设计引物、探针,建立双重荧光RPA方法,同时对方法的特异性、敏感性和重复性进行验证。结果表明,所建立的方法只对IHHNV和EHP有明显的扩增;用IHHNV和EHP阳性质粒进行倍比稀释检测,结果表明双重荧光RPA方法对IHHNV和EHP质粒检测灵敏度可以达到1×10^(2)copies/μL;用10个重复质粒样本进行检测,结果证明方法重复性较好。使用该方法对进口的冷冻对虾样本检测,检测出1例EHP阳性和1例IHHNV阳性,同时样本用荧光PCR方法进行比对检测,两种方法检测结果一致。本研究中所建立的方法对于两种疫病的区分检测具有重要的临床意义,可应用于养殖场、对虾产品生产企业和口岸实验室疫病的快速筛查。

不同生长时期凡纳滨对虾急性肝胰腺坏死病的检出与病原鉴定

随着集约化生产、养殖环境恶化,急性肝胰腺坏死病(AHPND)成为了当前制约对虾养殖效益的主要疾病之一。本试验以凡纳滨对虾不同生长时期的亲虾、虾苗、成虾作为研究对象,将对虾的肝胰腺进行初步富集后,采用荧光PCR和普通PCR的方法,检测样品中pirA VP和pirB VP毒素基因;对虾苗AHPND的病原进行分离鉴定、药敏试验和动物致病性试验。结果显示,在116份样品中检测到亲虾AHPND阳性3份,虾苗AHPND阳性7份,成虾AHPND阳性9份;从虾苗AHPND样品中分离纯化获得1株弧菌,经生化鉴定为副溶血性弧菌;16S rRNA系统发育树分析显示,该分离株与副溶血性弧菌聚为一类。药敏试验结果显示,该分离株对头孢西叮、头孢呋辛、复方新诺明等11种抗菌药敏感,对头孢噻吩耐药,对阿米卡星中介。动物致病性试验结果显示,健康凡纳滨对虾浸染1.8×10^(8) CFU/mL浓度的副溶血性弧菌菌液后,24 h内全部死亡,对虾的肝胰腺小管上皮细胞出现萎缩、变性、坏死等特征。本试验进一步掌握目前粤西地区不同生长时期凡纳滨对虾中AHPND的流行病学数据和病原特征,为该地区乃至全国的对虾养殖业AHPND的预防和控制提供参考依据。

进口南美白对虾亲虾急性肝胰腺坏死病的检测分析

急性肝胰腺坏死病(AHPND)是一种新发疫病,对对虾养殖业损失巨大。其病原是携带毒素质粒基因的副溶血弧菌,但具体致病机制仍不清楚。本研究利用国外报道的毒素质粒基因特异性引物,对一批进境南美白对虾亲虾进行了AHPND检测。因其PCR的扩增结果与国外所报道的基因片段一致,初步认定为AHPND阳性。本文对此次检测的结果和过程进行了分析,为我国AHPND的检测提供了分析数据。

虾肝肠胞虫Taqman荧光PCR方法的建立与应用

为给虾肝肠胞虫(EHP)的监测和控制工作提供特异、灵敏的快速检测方法,针对EHP 18S相关保守序列设计1对特异性引物,优化并建立EHP的Taqman荧光PCR检测方法,同时验证该方法的重复性和敏感性。结果显示:体系扩增的最佳退火温度为60℃,构建好的质粒标准品标准曲线斜率为-3.195,R2为0.991;扩增产物阈值循环数(Ct)与标准模板起始量(X)的关系曲线为-3.195×Log(X)+36.923,扩增效率为105.59。使用所构建方法检测湛江市EHP流行情况,同时对样品进行白斑综合症病毒(WSSV)、传染性皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)、桃拉综合征病毒(TSV)、早期死亡综合症(AHPND)病毒检测。结果显示:样品的WSSV、IHHNV、TSV检测均为阴性;AHPND检出阳性率为10%,EHP为30%,其中1份样品的EHP和AHPND检测同为阳性。本研究建立的EHP荧光PCR方法具有特异、灵敏等优点。该方法及其临床应用数据可为EHP的防控提供技术参考。

盐干海参的2种核酸提取方法比对及其分子鉴定

目的建立盐干海参的核酸提取及其分子鉴定方法。方法选取5种盐干海参,采用直接处理、洗涤处理和浸泡处理3种处理方式,比较磁珠法和离心柱法两种核酸抽提方式的提取质量,并采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)法对提取的核酸进行分析确认。结果同一种抽提方式不同海参处理组间核酸质量没有显著差异,而两种抽提方式间核酸质量差异显著,其中磁珠法提取的核酸得率高、纯度高,而离心柱法提取的核酸得率及纯度均偏低。经PCR扩增验证,磁珠法提取的核酸效果较佳。将扩增产物进行测序及系统进化分析发现5种海参实际种类与标注名称仿刺参存在较大差异。结论盐干海参处理方式对核酸提取结果影响不大,磁珠法提取核酸效果较好,单纯依靠细胞色素c氧化酶亚基I(cytochrome c oxidase subunit I,COI)和16S rRNA基因通用引物并不能对所有的海参种类进行鉴定。

环境DNA应用研究进展

近年来,环境DNA(eDNA)应用发展迅速,已涉及食品微生物、生物监测、群落生态学、古环境研究、保护生物学和入侵生态学等多个领域。基于eDNA的研究手段具有非侵入性、易于取样和能够探测隐秘物种等优点,因此eDNA是生态系统广泛直接取样的一种有吸引力的替代品。本文综述了eDNA的定义和发展历史,介绍了DNA条形码选择和设计、样品收集、DNA抽提、DNA扩增测序、DNA条形码数据分析等eDNA研究步骤,描述了eDNA在外来物种入侵、物种检测、生物量估算、水中生态系统监测等领域的应用,总结出eDNA研究中存在的问题,并展望该方法的应用前景。本文为全面了解eDNA的应用提供了参考。

基于环境DNA的进口凡纳滨对虾携带水传播虾肝肠胞虫风险评估

【目的】基于环境DNA(eDNA)分析进口凡纳滨对虾携带水传播和运输虾肝肠胞虫(EHP)的风险性,为环境水中疫病监测和风险评估提供参考依据。【方法】取60批进口亲虾携带水用0.45μm硝酸纤维素膜过滤并提取eDNA,挑取10个携带水样滤膜eDNA用于凡纳滨对虾物种特异性鉴定,采用实时荧光定量PCR对所有携带水样滤膜进行EHP检测;同时以EHP阳性进口亲虾携带水开展人工感染试验,感染10 d后分别取养殖水样及虾体进行EHP检测;对进口亲虾携带水EHP阳性滤膜进行宏基因组测序分析,采用Krona对物种注释结果进行可视化展示,并将宏基因组测序分析结果与NCBI已公布的EHP氨基酸序列进行BLAST比对分析。【结果】进口亲虾携带水检测结果显示,成功从10个携带水滤膜eDNA扩增出凡纳滨对虾347 bp的特异目的片段,与原始序列片段的相似性达100%;在60批进口亲虾携带水样品中有2批携带水呈EHP阳性。EHP阳性进口亲虾携带水能成功感染虾苗组,且在虾苗肝胰腺组织分离获得成熟的EHP孢子,但亲虾组的虾体EHP检测呈阴性。宏基因组测序得到EHP的物种相对丰度值占真核动物物种的0.7%;与NCBI已公布的EHP氨基酸序列进行BLAST比对,结果获得213个同源EHP氨基酸序列;从进口亲虾携带水样品中分离鉴定获得的EHP与已报道物种黄道蟹肠孢虫(Enterospora canceri)和毕氏肠胞虫(Enterocytozoon bieneusi)的亲缘关系较近,对应的氨基酸序列相似性为别为83%和81%。【结论】进口凡纳滨对虾亲虾携带水具有传播EHP的可能性,即仅针对亲虾虾体进行EHP检测具有不完全性。eDNA检测可用来补充传统的虾体疫病监测方法,作为水环境疫病检测和风险评估的重要手段。

不同品种的英系猪繁殖性能的测定比较

为了解英系大白猪、长白猪、杜洛克猪纯种繁育繁殖性能上的特点和差异,通过统计分析广州某种猪场2016—2018年的育种数据,发现三个品种间的长白猪的产仔窝数和窝产仔数最高;大白猪的产活仔数最高,杜洛克猪和大白猪的产活仔率持平;但是三个品种的产仔窝数、总产仔数、产活仔数的差异不显著(P>0.05),三个品种的配种受胎率差异不大;同时发现近三年的三个品系母猪的繁殖性能总体呈上升的趋势。文章旨在分析英系3个品种猪纯种繁殖性能方面的差异,为猪场生产和繁殖育种提供科学数据。

用优化的切向流超滤法提高环境水中对虾白斑综合症病毒的浓度及检测效率

水是病毒传播的最重要途径之一,但是从水中检测病毒是一项挑战。由于水中的病毒滴度低,而且水的样品成分复杂,检测前通常需要进行水样品处理,浓缩水中的病毒以达到可检测的数量。本试验分析切向流超滤技术的关键参数(包括切向流的不同孔径、不同面积的超滤柱)以提高从水环境样品中浓缩对虾白斑综合症病毒的效率,并用荧光PCR和数字PCR来定量检测病毒浓缩效果。结果显示,浓缩白斑综合症病毒的过滤最佳过滤柱为0.2μm微过滤膜、UFP-100-C-4MA超滤柱(孔径100 kDa,面积为420 cm^(2))。在进行水样品倍比稀释后所构建的切向流超滤方法对白斑综合症病毒的平均浓缩回收率为73.92%,浓缩效果较好;且病毒回收重复性较高。因此,本试验所优化的切向流超滤方法可以有效地浓缩环境水中的虾病毒,提高水生病毒病原体的检测与流行病学调查的效率。

我国出口澳大利亚生虾产品技术贸易措施分析及对策研究

水产品是我国主要的出口产品,在国民经济尤其是农业经济中占有重要位置。澳大利亚被公认为是全球动植物检验检疫措施最严格的国家之一,近几年对进口生虾采取越来越严格的进口贸易措施。本文回顾了澳大利亚近几年针对进口生虾贸易措施发展进程,分析了澳大利亚风险分析体系、疫情防控机制、国内技术性贸易措施应对等方面存在的问题,从而对公共信息服务、加强技术支撑能力建设等方面提出一系列建议和思考,为我国出口水产品应对技术性贸易措施提供一定参考。

禽养殖场禽流感发生率影响因子研究进展

近年来,禽流感受到全球高度关注,禽类为流感病毒的基因贮存库,禽养殖场发生禽流感将产生极大的社会负面影响。综述养殖过程中养殖场禽流感发生率的影响因子,包括养殖前期的选址、水源情况、养殖分区,初孵雏或种蛋的选择,养殖过程中的养殖品种、养殖密度、卫生消毒、人员管理、免疫接种等。就我国目前而言,导致风险的主要原因是农户认知水平低和政府相关政策的不完善,国家宏观调控措施的施行可有效降低禽流感发病率。

传染性皮下及造血器官坏死病毒诱导南美白对虾抗白斑综合征病毒感染的初步研究

为进一步研究对虾抗病毒免疫方法,使用实验室动物病毒感染死亡率分析,研究传染性皮下及造血器官坏死病毒(IHHNV)和白斑综合征病毒(WSSV)在感染南美白对虾后的相互作用机制。结果显示,预感染IHHNV后的对虾在进行WSSV攻毒后,对虾的存活率得到了提高。荧光PCR检测病毒量的结果显示,预感染IHHNV再用WSSV攻毒,存活虾体内的IHHNV含量比死亡虾高。研究结果初步证明,IHHNV和WSSV在对虾体内存在相互作用机制,且IHHNV具有抑制WSSV复制的作用。

环境DNA方法对进口亲虾携带水中宿主物种的鉴定

为深入了解进口亲虾携带水中物种情况,本试验设计凡纳滨对虾物种特异性引物,采用环境DNA(eDNA)方法对境外进口亲虾携带水进行凡纳滨对虾物种鉴定,分析不同过滤膜、不同样本体积对于获取eDNA浓度的影响;对比不同来源水样、不同过滤膜和样品取样时间等因素对水样中凡纳滨对虾物种鉴定的影响;用宏基因组测序方法对水过滤膜eDNA进行测序分析。结果显示,本试验所设计的凡纳滨对虾物种特异性引物特异性好、灵敏度高,可以有效地从虾体和水中进行凡纳滨对虾物种鉴定;硝酸纤维素膜、玻璃纤维膜均有不同的过滤优势,水样品体积增加,得到的eDNA浓度也随之增加;虾体生存时间、样品取样时间对于宿主物种鉴定均会产生重要影响;宏基因组测序所得的对虾属序列中,凡纳滨对虾的物种序列占40%,物种丰度占比最高。结果表明,eDNA检测方法具有较好的灵敏性和特异性,可以作为监测水生动物携带水外来物种入侵的一个有效手段。

船舶压载水的生物入侵分析

船舶压载水的转运和排放是水生生物入侵的重要途径。为保障我国海洋生态和水产养殖安全,文章基于我国航运大国地位,介绍船舶压载水排放带来的生物入侵及其相关国际标准和法律规定,并对我国船舶压载水监管提出建议。研究结果表明:由船舶压载水引起的生物入侵主要包括浮游生物和微生物;目前国际对于船舶压载水排放主要执行D-2标准,很多国家均以法律手段对船舶压载水进行监管;我国在加快船舶压载水立法的同时,应加强基础数据研究、制定统一的规范标准和扩展关注领域。

湛江地区凡纳滨对虾肝肠胞虫检出实例分析

对虾肝肠胞虫对我国对虾养殖业具有极大影响,为了解肝肠胞虫感染与养殖水体环境的关系,研究选取了湛江地区凡纳滨对虾养殖场两口高位池和两口低位池,在放苗初期对池塘水体理化因子进行了一周的监测,并采集了不同养殖场的小虾进行肝肠胞虫巢式PCR检测。结果表明,采集的样品均为阳性,水质理化数据在不同养殖模式下具有显著差异,后续还需进行大量的试验调查才能进一步了解肝肠胞虫的流行病学情况。该病与其他疫病综合感染率较高,国内已有多例该病的报道,将该病列入我国动物疫病病种名录并制定相关的检测标准具有重要意义。

鸟类促性腺激素抑制激素(GnIH)的研究进展

一直以来,促性腺激素释放激素(Gonadotropin releasing hormone,GnRH)被认为是下丘脑唯一的调节垂体促性腺激素的神经肽,直到2000年,Tsutsui等人发现鹌鹑下丘脑室旁核的神经元可分泌一种神经肽,能抑制鹌鹑垂体前叶细胞促性腺激素的释放,故将其命名为促性腺激素抑制激素(Gonadotropin inhibiting hormone,GnIH),之后又陆续在鸡、八哥、麻雀。

肝肠胞虫和致AHPND的副溶血弧菌双重荧光PCR方法的建立及在环境DNA样品中的应用

为了快速检测致对虾急性肝胰腺坏死病的副溶血弧菌(VP_(AHPND))和肝肠胞虫(EHP)这2种病原,根据NCBI中副溶血弧菌pirAB^(VP)毒素基因和肝肠胞虫SWP1基因的保守序列设计并合成特异性引物和Taq Man探针,通过优化反应条件,评估方法的特异性、灵敏度、重复性,并且把该方法应用于环境DNA(eDNA)样品检测。结果显示所建立的双重荧光PCR方法特异性强,仅能扩增出V_(PAHPND)和EHP的阳性核酸,与对虾常见病原白斑综合征病毒、传染性皮下和造血器官坏死病毒、十足目虹彩病毒1等均无交叉反应;VP_(AHPND)和EHP的最低检测限分别为14和1.4 copies/μL;组内和组间重复的变异系数均≤1.9%。从56批e DNA样品检测结果发现,VPAHPND阳性7批(12.5%),EHP阳性4批(7.14%),其中VPAHPND-EHP双重感染2批(3.57%)。这表明基于e DNA识别技术,该VPAHPND和EHP双重荧光PCR可以大大提升临床实验室的对虾疫病诊断速度,为海关等监管部门提供可靠高效的快速检测方法。

姜黄粉对岭南黄鸡生产性能、免疫器官指数和抗氧化能力的影响

选择1日龄快大型岭南黄肉鸡180只,随机分成4个组,其中A组为空白对照,饲喂基础日粮;B组在基础日粮中添加1.00 g/kg的姜黄粉;C组在基础日粮中添加2.00 g/kg的姜黄粉;D组在基础日粮中添加5.00 g/kg的姜黄粉,分别于21、35和49日龄就姜黄粉对快大型岭南黄鸡的生产性能、免疫器官指数和抗氧化能力的影响进行了研究.结果表明,添加5.00 g/kg的姜黄粉能够显著提高快大型岭南黄鸡的全期增重和降低料肉比,降低死亡率,显著提高试验鸡的免疫器官指数和血清中的超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-PX)的活力,降低血清中丙二醛(Malonedialdehyde,MDA)含量.从而证明姜黄粉可以改善黄鸡的生产性能,提高免疫器官指数和抗氧化能力.