蓖麻RcNHX3基因的克隆与生物信息学分析

液泡膜型Na^+/H^+逆向转运蛋白基因(NHX)是植物抵御盐害的关键基因.本研究利用RACE方法克隆了蓖麻Rc NHX3基因的3'端和5'端片段.最后设计全长引物获得蓖麻RcNHX3全长序列,并对其进行生物信息学分析.结果表明,蓖麻液泡膜型钠氢逆向转运蛋白基因的c DNA完整的开放阅读框序列为1611bp,推测其可编码536个氨基酸;含有Na+/H+交换泵(^(50)NES^(52))是液泡膜型Na^+/H^+逆向转运蛋白重要的特征之一;存在12个跨膜结构域,属于跨膜蛋白;预测NHX3蛋白的二级结构和三级结构.

蓖麻液泡膜质子泵RcVP1基因克隆与表达分析

为挖掘耐盐基因,培育耐盐蓖麻新种质,本研究设计特异性引物克隆蓖麻液泡膜H+-PPase基因,将其命名为Rc VP1,该基因开放阅读框为2 304 bp,编码767个氨基酸,其编码蛋白质的分子量和等电点分别为8.04×104和4.94。Rc VP1含有保守的H+-PPase结构域,包括CS1、CS2、CS3高度保守区,有13个跨膜结构域。多重序列比对结果表明Rc VP1氨基酸序列与毛白杨的相似性最高,达95.00%,与Ⅰ型H+-PPase拟南芥AVP1的相似性高达88.53%,与Ⅱ型H+-PPase拟南芥AVP2的相似性只有36.41%,属于Ⅰ型液泡膜H+-PPase跨膜蛋白质。半定量PCR分析结果表明,该基因在蓖麻叶片、茎中受盐胁迫诱导上调表达,在种子中抑制表达。

上海农业适度规模经营的实践与思考

随着农村改革的深入和商品生产的发展,在家庭联产承包制取得成效的基础上,土地适度规模经营问题已成为大城市郊区和沿海经济发达地区农村的重要课题。上海郊区在这方面已进行了初步实践,并提出了一些需要思考研究的问题。

上海郊区农村股份合作制试点情况的调查

1992年下半年,我们对上海郊区农村股份合作制的试点情况进行了调查,听取了川沙、金山、嘉定等县关于股份合作制试点情况的介绍,并去考察了一些股份合作制企业。总的来看,郊区农村股份合作制试点进展比较顺利,发展是健康的。

四川省农村合作基金会考察报告

四川省农村合作基金会起步于1983年，经过定点试行，全面推广，稳定发展，到1994年底，全省已有市、县级农村合作基金联合会118家，占全省219个建制县（市）的54％；有乡、镇级农村使用基金会4966家，占全省乡镇总数的80％以上；入会可融通资金达192.97亿元。

上海产权市场实务浅议

党的十六大关于"发展产权、土地、劳动力和技术等市场,创造各类市场主体平等使用要素的环境"以及十六届三中全会关于建立健全现代产权制度的精辟论述,不仅为上海建立现代市场体系,促进新一轮经济发展,明确了目标和方向,而且为上海产权市场的功能定位和产权交易运作提出了更高要求.联系上海产权市场10年来的实践过程,在理论与实践结合上,着重进行实务性研究.

两个蓖麻品种萌发期的耐盐性与相关基因响应的差异比较

为比较盐胁迫下两个蓖麻品种通蓖5号和哲蓖3号萌发期耐盐性与盐响应相关基因表达的差异,本试验设置0、50 mmol/L、100 mmol/L、150 mmol/L四个浓度NaCl处理,测定种子吸水变化、萌发各项指标和三个盐响应相关基因的表达量,分析其差异。结果表明:(1)两个品种蓖麻种子正常吸水分为三个阶段,在0～15 h快速增加,15～30 h内缓慢增加,30 h后快速增加。盐处理的通蓖5号在第三阶段吸水骤减,高浓度(100 mmol/L,150 mmol/L) NaCl处理下吸水基本停滞;哲蓖3号在低浓度(50 mmol/L NaCl)处理中仍表现出吸水三阶段特性,随着盐浓度升高才对第三阶段的吸水产生较大的影响。(2)盐胁迫下两个品种种子的发芽率、发芽势、发芽指数等指标均随盐浓度增加呈现逐渐下降的趋势。相同盐浓度处理下哲蓖3号各项指标显著优于通蓖5号,表明哲蓖3号萌发期耐盐性强于通蓖5号。(3)两个蓖麻品种种子中的三个盐响应基因RcSOS3、RcVP1、RcNHX1对盐处理有不同的响应,相同盐浓度处理下在耐盐性强的品种中表达量高。这一结果为蓖麻育种及蓖麻种子萌发期耐盐机制的深入研究提供了参考。

蓖麻RcNHX2基因克隆与生物信息学分析

液泡膜型钠氢逆向转运蛋白(Tonoplast Na^+/H^+antiporters,NHX)在植物耐盐方面具有重要意义。本研究利用RACE方法克隆了蓖麻Rc NHX2基因的3'端和5'端片段。最后设计全长引物获得蓖麻Rc NHX2全长序列,并对其进行生物信息学分析。结果表明,蓖麻液泡膜型钠氢逆向转运蛋白基因的c DNA完整的开放阅读框序列为1 626 bp,推测其可编码541个氨基酸;含有典型的液泡膜型钠氢逆向转运蛋白典型的Na^+/H^+交换泵(^(50)NES^(52))和氨氯吡嗪咪的结合位点(^(84)LFFIYLLPPI^(93));存在12个跨膜结构域,属于跨膜蛋白;预测其定位于细胞质膜和液泡膜及内质网膜。

蓖麻耐盐基因HKT的克隆及表达载体构建

为挖掘蓖麻耐盐相关基因,以盐生植物蓖麻(Ricinus communis L.)叶片为材料。设计特异性引物,克隆高亲和性钾离子转运蛋白(high-affinity K+transporter,HKT)耐盐基因,并对其序列进行生物信息学分析。结果表明,该基因全长1 596 bp,编码531个氨基酸,推测分子量为59.74 kD,等电点(pI)为9.32。多重序列比对和系统发育树分析表明该蛋白与木薯和橡胶树的同源性最高,分别为69.13%和67.03%,且与HKT1蛋白家族成员同源性较高,为S-G-G-G类型蛋白,推测该蛋白为HKT1类蛋白。二级结构预测蓖麻HKT蛋白有9个跨膜结构域,主要定位于内质网上,是典型的跨膜蛋白。根据蓖麻HKT基因序列设计带有Bam HⅠ和PstⅠ酶切位点的引物扩增出全长基因,用限制性内切酶Bam HⅠ和PstⅠ进行双酶切后与表达载体pCHF-3300连接。本研究成功构建了蓖麻HKT基因的表达载体,为进一步研究该基因的转化及功能验证提供参考。

蓖麻Na^+/H^+逆向转运蛋白基因NhaD克隆与表达载体构建

为发掘耐盐相关基因,以蓖麻叶片为材料,设计特异性引物,克隆蓖麻Na^+/H^+逆向转运蛋白基因(NhaD),并对该序列进行生物信息学分析。结果表明,NhaD全长1 743 bp,可编码580个氨基酸。将其命名为Rc NhaD。其编码蛋白的分子量为61.821 kD,等电点(pI)值6.74。利用DNAMAN软件对该序列与其它植物氨基酸序列进行同源性比对,结果显示与木薯等植物的同源性在85%以上,该蛋白含有ArsB蛋白的功能域,属于ArsB/NhaD转运蛋白家族成员。对其二级结构分析显示该蛋白为疏水性蛋白,该蛋白具有11个跨膜区域,是典型的跨膜蛋白。根据Rc NhaD全长设计带有KpnⅠ与XbaⅠ酶切位点的引物扩增出序列全长,用KpnⅠ与XbaⅠ进行双酶切后与表达载体pCG-1301连接,成功构建了Rc NhaD的表达载体。本研究为进一步研究该基因功能提供指导。