Bax Inhibitor-1与Herp的相互作用

应用酵母双杂交技术筛选Herp的相互作用蛋白。构建编码Herp的基因HERPUD1真核表达载体HERPUD1plexA,应用MATCHMAKERLexA酵母双杂交系统筛选人胎脑cDNA文库,获得的阳性克隆的插入子为Herp的候选相互作用蛋白质,将Herp与筛选到的相互作用蛋白再一对一回复进行酵母双杂交实验,去除假阳性。对阳性克隆插入子的DNA序列测序,在GenBank中作匹配及生物信息学分析。结果得到其中1个阳性克隆的插入子序列与TEGT基因序列一致,编码蛋白为Baxinhibitor1。得出结论:Herp与Baxinhibitor1相互作用,Baxinhibitor1具有调节凋亡特性,提示Herp可能参与凋亡调节。

Battenin相互作用蛋白的筛选与初步鉴定

目的寻找Battenin相互作用蛋白的筛选方法,并对筛选出的Battenin相互作用蛋白进行初步鉴定。方法将编码Battenin相互作用蛋白肽段的cDNA序列与plexA质粒的DNA结合结构域基因重组作为诱饵,应用MATCHMAKERLexA酵母双杂交系统从人胎脑cDNA文库中筛选与Battenin相互作用蛋白再发生相互作用的蛋白质的cDNA,并进行生物信息学分析。结果从胎脑cDNA文库中筛选得到7个阳性克隆,其中一个基因与人TEGT基因有99%的同源性,TEGT编码蛋白为Bax抑制子1。结论Battenin相互作用蛋白与Bax抑制子1或类似物相互作用,Bax抑制子1具有反式调控因子特性,二者都可能参与基因表达调控。

外源性Rb基因导入对U937细胞周期和p21基因表达的影响

目的利用Rb基因重组腺病毒载体(AdCMV-Rb),将外源性Rb基因导入U937细胞,研究其对细胞周期、细胞凋亡及原癌基因p21表达的影响。方法AdCMV-Rb导入U937细胞后,用流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡率及Rb蛋白和p21蛋白的表达;RT-PCR检测原癌基因p21的表达。结果Ad-CMV-Rb可以高效导入U937细胞,Rb基因导入使U937细胞主要阻滞在G1期,细胞凋亡率在Rb基因导入24 h后无明显改变,48 h后凋亡率增高;Rb蛋白和p21蛋白表达增强;RT-PCR结果显示Rb基因的导入可以上调p21基因的表达。结论外源性Rb基因的导入可以上调原癌基因p21的表达,使得U937细胞周期阻滞在G1期。

FXR2酵母双杂交饵载体的构建及酵母菌转化

目的构建FXR2酵母双杂交系统的“饵”质粒,并转化酵母菌,为筛选FXR2P互作蛋白作基础。方法提取pMD18-T-FXR2,酶切后将FXR2基因连接到MATCHMAKERLexATwo-HybridSystem中的plexA质粒上,得到“诱饵”(Bait)-plexA-FXR2,导入大肠杆菌扩增,筛选阳性克隆并提取重组Bait质粒,再转入酵母菌EGY48(p8op-lacZ)。结果通过遗传学方法筛选得到构建成功的plexA-FXR2;通过营养缺陷筛选,证明Bait重组质粒转入酵母菌中。结论成功构建Bait质粒并使酵母菌转化。

实验性大鼠肝癌早期病变形成过程中氧自由基的产生与清除

本文在对大鼠用二乙基亚硝胺和N—2—乙酰氨基笏诱发肝癌的过程中,系统观察了肝组织黄嘌呤氧化酶,超氧化物歧化酶、过氧化脂质和维生素E的动态变化情况。结果表明,在病变形成的早期,各项指标均呈规律性改变,提示自由基的产生增多与清除机能受损在肝癌的形成中具有重要作用。并依此对临床肝癌的抗氧化防治提出了理论性探讨。

智力低下相关蛋白(FXR1P)与CMAS相互作用的生物学效应研究(英文)

脆性X综合征(FXS)是一种遗传性智力低下疾病,其发病率仅次于21三体综合征.脆性X智力低下蛋白(FMRP)是FXS的关键性致病因子,该蛋白由脆性X智力低下基因1(FMR1)编码所得.FMR1在神经肌肉和睾丸组织中广泛表达.脆性X相关蛋白1(FXR1P)则是由FMR1的同源基因脆性X相关基因1(FXR1)编码所得,并且与蛋白质和RNAs之间存在着相互作用.许多疾病都涉及到FXR1表达的改变.为了了解FXR1P与CMAS(胞嘧啶单核苷酸-N-乙酰神经氨酸合成酶)相互作用所产生的的生物学效应,我们构建了FXR1的过表达载体,并观察其在PC12细胞(大鼠鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞)和VSMC(血管平滑肌细胞)中的表达以及继而对于细胞形态和CMAS活性相关的许多细胞指标的效应.我们证实,FXR1基因的过表达可以提高PC12细胞中CMAS的活性,并对于该类细胞的生长提供一定程度的保护作用.PC12细胞是一种较为常见的用于研究神经系统疾病的细胞系.结论:我们推测FXR1P是一个组织特异调节因子,可以改变PC12细胞而非VSMC细胞中神经节苷酯(GM1)的浓度.

硫酸软骨素生产工艺的改进

目的改进硫酸软骨素生产工艺,提高硫酸软骨素产率和含量。方法用废胰渣清洗软骨,用正交试验法设计控制酶水解的温度、时间和pH值,在吸附去杂蛋白质后加盐等。结果工艺改进后,硫酸软骨素的产率在5 .3%左右,含量在78%以上,与原工艺相比,产率和含量都有所提高。结论此改进工艺方便易行,可应用于生产。

利用酵母双杂交系统筛选与FXR1P相互作用的蛋白

目的筛选FXR1P相互作用蛋白,探讨FXR1P生物学功能。方法应用酵母双杂交技术,构建诱饵表达载体pGBKT7/FXR1,转化酵母菌AH109,与转化了人胎脑cDNA文库的酵母菌Y187交配筛选阳性克隆并测序。结果重组表达载体pGBKT7/FXR1构建成功;从人胎脑cDNA文库中筛选出5个与FXR1P结合的蛋白基因,分别与5种已知的编码蛋白基因序列同源:胞苷一磷酸-N-乙酰神经氨酸合成酶(CMAS)、铁蛋白重链多肽1(FTH1)、高尔基体自身抗原golgina亚类4(GOLGA4)、17-β羟类固醇脱氢酶1(HSD17B1)、绒毛膜生长催乳激素1(CSH1)。结论为进一步研究FXR1P的功能及脆性X综合征发病机制提供新的线索。

抗人血栓调节蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

为了制备特异性抗人血栓调节蛋白(human thrombomodulin,hTM)的单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),利用脂质体Lipofectamine 2000将包含hTM全长cDNA序列的重组表达质粒pThr402转染CHO细胞,经G418筛选及相关鉴定后获得高效稳定表达hTM的CHO-TM5细胞株。将CHO-TM5细胞直接免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术,通过细胞ELISA (cellular enzyme-linked immunoabsorbent assay,CELISA)筛选出阳性克隆后,将杂交瘤细胞株腹腔注射Balb/c小鼠诱生腹水。用CELISA、流式细胞术、免疫组织化学染色法及免疫印迹法对所获McAb的特异性进行鉴定。我们获得了1株可稳定分泌抗hTM的McAb的杂交瘤细胞株NH-1,其亚型为IgGl,McAb腹水效价为1×10^(-6),腹水抗体含量为20 mg/ml。NH-1对相应抗原具有较高的组织特异性,在体内与正常组织的交叉反应少,对人脐静脉内皮细胞、CHO-TM5有特异性结合反应,说明NH-1可特异性识别天然的hTM分子,为进一步应用此McAb进行hTM生物学功能及临床意义研究提供了基础。

不同民族人群FMR1基因CGG重复序列检测与分析

目的检测和分析脆性X综合征致病基因FMR1 CGG重复序列在汉族和壮族人群中的多态性分布。方法采用PCR扩增技术和聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对1060例汉族人（男280人，女780人）和283例壮族人（男85人，女198人）FMR1基因CGG重复序列进行分析，并用Southern印迹技术对结果进行了验证。结果汉族人群中共检测到33种等位基因，其中CGG重复序列范围为6～43，壮族人群共检测到27种等位基因，CGG重复序列范围为6～57，两类人群中最常见的等位基因分别为28和29。结论应用PCR扩增技术进行了FMR1基因的大面积筛查，中国汉族和壮族人群中FMR1基因CGG重复序列变异分布略有差异。

脆性X相关蛋白Ⅰ的研究进展

脆性X相关基因I(FXR1)发现于1995年,位于3号染色体3q28。其产物脆性X相关蛋白1(FXR1P)与脆性X智障蛋白1 (FMR1P)、脆性X相关蛋白2(FXR2P)形成一个RNA结合蛋白家族。目前认为这三种蛋白能输送mRNA分子并调控其翻译过程。FXR1的翻译产物(FXR1P)分子中存在两个KH结构域和一个RGG结构域,这两种结构域与FXR1P分子的RNA结合作用有关。FXR1P的表达具有较高的组织特意性,在横纹肌中表达最高。合适的动物模型对于一种蛋白的功能研究具有十分重要的意义,目前,FXR1敲除的各种动物模型如小鼠、斑马鱼、非洲爪蟾的近亲Xenopus tropicalis已经在不同的实验室建立。本文主要介绍了FXR1P的结构特点、功能及其实验动物模型。

利用hTM表达细胞株制备抗人血栓调节蛋白单克隆抗体

为了研制抗人血栓调节蛋白(hTM)的单克隆抗体(mAb),给经CHO细胞免疫的BALB/c小鼠腹腔注射环磷酰胺诱导其对CHO和CHO-TM5细胞的共同抗原表位产生免疫耐受,再用高效表达hTM的CHO-TM5常规免疫小鼠.细胞融合后,ELISA筛选分泌抗hTM的特异性mAb阳性克隆,并将其腹腔注射BALB/c小鼠诱生腹水.腹水中的mAb经亲和层析纯化后,采用ELISA、流式细胞术、免疫组织化学染色法及Westernblotting对其进行特异性鉴定.结果显示,共获得了5株阳性克隆,其中2F7可稳定分泌IgG1亚型的mAb,腹水抗体效价为1×10-6,含量为19.56g/L.2F7在体内与正常组织的交叉反应极少,对HUVEC、CHO-TM5有特异性结合,并可识别细胞裂解液还原条件下分子质量为105ku左右的蛋白质多肽.2F7的解离常数Kd约为1.22×10-9mol/L.实验结果表明,通过采用新的技术路线,直接应用hTM表达细胞株免疫小鼠,成功制备了具有高度特异性与高亲和力的抗hTMmAb,为其他来源困难的蛋白质mAb制备提供了可借鉴的技术方案,同时2F7的研究鉴定为进一步应用抗hTMmAb进行hTM生物学功能及临床意义研究提供了新的物质基础.

酵母双杂交系统筛选CLN8P相互作用蛋白

目的应用酵母双杂交系统筛选CLN8P相互作用蛋白质,通过对相互作用蛋白质的筛选及研究,探讨CLN8的功能,为CLN8和NCLs疾病群的发病机制研究提供线索,并为疾病的蛋白质相互作用网络提供资料。方法应用酵母双杂交技术,以pLexA-CLN8为诱饵质粒筛选人胎脑cDNA文库,得到Leu+LacZ+阳性克隆,进一步进行验证,并对验证后的阳性克隆的外源性片段进行测序及同源性分析。结果从人胎脑cDNA文库中筛选得到60个Leu+LacZ+阳性克隆;将获得的具有外源性片段的文库质粒与诱饵质粒一对一重新转入酵母体内对相互作用进行验证,共获得阳性克隆22个;对验证后阳性克隆测序并进行同源性分析,共获得不同的候选基因序列5个。结论应用酵母双杂交系统,共筛选得到5个不同的基因,其编码蛋白与CLN8P有相互作用,可能与NCLs发病机制相关。

生物技术省级特色专业建设的探索与实践

结合南华大学的实际,生物技术专业经过积极的探索与实践,提出了培养具有"医药"特色的应用型生物技术创新人才的目标与思路,围绕培养方案、课程建设、教学改革、实践教学等环节阐述了生物技术省级特色专业建设的实践过程。

生物科学专业基因工程教学改革初探

《基因工程》是我校生物科学专业的主干课程之一。该课程是一门具有很强实践性的技术学科,本课程教学质量的好坏将直接关系到学生的专业素质、动手能力以及创新能力的培养。本教研室从教学内容、教学方法和手段、构建网络教学平台,实验教学和考核方式等五个方面入手,对《基因工程》传统的教学模式进行了一系列的改革,实践证明取得了一定的成效。

壮族人群脆性X综合征中不稳定遗传序列的研究

目的研究湖南省壮族人群FraX中不稳定DNA序列的多态性,建立一种快速筛查FraX中FMR-1动态突变的方法,为提高遗传咨询和诊断水平奠定基础。方法采用经典的PCR-Southernblot法对156例X染色体FRAXA位点(CGG)n重复序列拷贝数进行测定并与PCR-序列分析胶银染法进行比较。结果(CGG)n重复序列范围为6～57,高峰为29;发现一男性携带者,CGG重复数为57;PCR-序列分析银染法结果与PCR-Southernblot法结果完全一致,从PCR扩增到产物检测只需4,5h即可完成。结论壮族人群(CGG)n频率分布高峰为29,其次为27,30;PCR-序列分析胶银染法快速、直接、简便、实用,适合脆性X综合征的大规模群体筛查。

FMR-1基因中CGG重复序列扩增条件的优化

目的:优化PCR扩增条件,建立一种有效检测脆性X综合征的方法。方法:在常规PCR的基础上,采用耐高温酶替代法、碱基替代法,同时加入有机溶剂DMSO等,对表型正常的人群进行FMR1基因CGG重复序列检测。结果:改良PCR法可以提高G C富集区扩增效率,并取得了较好的效果。结论:建立了一种扩增FMR-1基因中CGG重复序列的可行方法。

HRCT诊断眼脉络膜骨瘤的价值

目的:探讨HRCT诊断眼脉络膜骨瘤的价值。材料和方法:回顾性分析9例13只眼脉络膜骨瘤的HRCT表现。结果:13只患眼HRCT分别表现为眼环后部钙化。斑点形(3只眼)、短线形(4只眼)、纺锤形(4只眼)、不规则形(2只眼)。结论:HRCT不仅可以显示眼脉络膜骨瘤的骨化以及无症状患者的微小骨化,还可以观察周围组织有无病变,是本病的首选影像学检查方法。

生物技术专业实践教学改革的探索

生物技术是生命科学领域中科学技术的核心,新技术、新方法和新设备层出不穷,结合培养科技型、创新型、应用型生物技术专业人才的目标,我系对生物技术专业的实践教学进行了改革与探索,并取得了较好的效果。