MYD88过表达对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制

目的探讨MYD88基因过表达对人弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法采用质粒转染法将过表达MYD88 L265P基因的pEGFP-C2-MYD88转染DLBCL细胞;实验分为空白对照组、阴性对照组和MYD88 L265P过表达组。倒置荧光显微镜下观察MYD88 L265P过表达后荧光表达;运用RT-PCR、Western blot法检测MYD88 L265P过表达前后DLBCL细胞的MYD88 L265P、IRAK4、NF-κB和BCL2的mRNA及蛋白表达水平;应用CCK-8法检测DLBCL细胞增殖;采用Hoechst染色法检测DLBCL细胞凋亡情况。结果MYD88 L265P过表达后,与空白对照组(0.6704±0.0175)和阴性对照组(0.7153±0.0196)相比,MYD88 L265P过表达组(1.1572±0.0102)的增殖率显著增高,均有统计学意义(P均<0.05)。MYD88 L265P过表达后,与空白对照组(0.69±0.04)和阴性对照组(0.81±0.07)相比,MYD88 L265P过表达组(0.48±0.05)的凋亡率明显降低,均有统计学意义(P均<0.05)。MYD88 L265P过表达后,与空白对照组(mRNA:1.0158±0.0115、0.9873±0.0102、1.0076±0.0153;蛋白:0.1834±0.0589、0.0968±0.0157、0.1475±0.0418)和阴性对照组(mRNA:0.9132±0.0098、1.0032±0.0156、0.9327±0.0112;蛋白:0.1879±0.0423、0.0889±0.0513、0.1348±0.0501)相比,MYD88 L265P过表达组IRAK4、NF-κB和抗凋亡蛋白BCL2的mRNA(3.2432±0.0136、2.9766±0.0213、1.5859±0.0198)及蛋白表达(0.4527±0.0524、0.2189±0.0475、0.3014±0.0598)明显增高,均有统计意义(P均<0.05)。结论MYD88 L265P过表达后,DLBCL细胞的凋亡率下降,细胞增殖率上升,其机制可能与MYD88 L265P基因突变激活和放大了NF-κB通路,促进抗凋亡蛋白BCL2的过表达有关。

雷公藤甲素调控SIRT2/p53信号通路诱导肺癌A549细胞凋亡

目的 体外培养肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)细胞A549,采用不同浓度雷公藤甲素(triptolide,TP)干预,研究其通过SIRT2通路诱导肺癌细胞凋亡的作用机制,为临床治疗肺腺癌患者提供新的策略和思路。方法 采用qRT-PCR检测不同浓度(0 nmol/L、60 nmol/L、80 nmol/L)TP对A549细胞中SIRT2相关基因表达水平;不同浓度TP对A549细胞中SIRT2相关蛋白的影响,采用Western Blot法检测。结果 基因表达水平检测结果显示,TP(60 nmol/L、80 nmol/L)与对照组TP(0 nmol/L)相比,SIRT2、MDM2、P300表达下调。同时,p53基因表达上调。Western Blot蛋白水平检测结果,TP(60 nmol/L、80 nmol/L)与对照组TP(0 nmol/L)相比,SIRT2、P300、MDM2蛋白在A549细胞中表达下降,p53蛋白表达上调,p53信号通路的Bcl-2蛋白表达抑制,增加Bax蛋白表达。结论 TP能够通过调控SIRT2/p53通路相关蛋白表达抑制肺腺癌细胞增殖并诱导其凋亡。

蒙药森登-4对胶原性大鼠关节炎的实验研究

目的:本研究建立大鼠胶原诱导性关节炎(Colla-induced arthritis,CIA)模型,探讨蒙药森登-4对关节炎大鼠的抗炎作用及治病机制。方法:建立牛II型胶原诱导的大鼠CIA模型,计算大鼠足爪肿胀度及关节评分,HE染色进行病理检查,影像学X线检查踝关节病变,MTT法检测大鼠脾淋巴细胞增殖情况。结果:蒙药森登-4有效部位能有效减轻CIA大鼠的炎症状况,缓解并抑制病情的发展。结论:该研究为蒙药森登-4在蒙医临床治疗类风湿关节炎提供一定的理论基础。

C-met基因产物在胃黏膜良、恶性病变中的意义

目的通过检测C-met基因产物在胃黏膜良、恶性病变中的表达,探讨其对提高胃癌早期诊断的意义。方法采用免疫组织化学S-P法检测正常胃黏膜、肠上皮化生、癌旁不典型增生、胃癌中的表达。结果C-met基因产物在肠上皮化生、癌旁不典型增生、胃癌间表达差异无统计学意义(P>0.05),但是表达三者均显著高于正常胃黏膜(P<0.01)。结论C-met基因表达与胃黏膜增殖恶化有关,是胃癌发生的早期现象。

胃肠道间质瘤病理及免疫组织化学特征分析

目的:探讨胃肠道间质瘤(GIST)的病理形态和免疫组织化学的特征。方法:应用免疫组织化学SP法对48例GIST进行标记,观察CD117、CD34、SMA、S-100的表达。结果:在48例GIST中,CD117阳性率为89.6%(43例),CD34的阳性率为83.3%(40例),SMA的阳性率为31.3%(15例),S-100的阳性率为14.6%(7例)。结论:CD117和CD34是诊断GIST最有价值的辅助诊断指标,而且联合使用才能提高GIST的诊断率。

胃肠道间叶源性肿瘤病理及免疫组化研究

目的:研究胃肠道间叶源性肿瘤的病理形态特点及免疫组化表型,讨论肿瘤的来源,进而提高对该类肿瘤的认识。方法:对60例胃肠道间叶源性肿瘤进行回顾性分析,应用免疫组化SP法检测CD117,CD34,Vimetin,S-100,SMA,Bcl-2的表达。结果:60例胃肠道间叶源性肿瘤中胃肠道间质瘤占85%,平滑肌肿瘤占8.33%,神经鞘瘤占1.67。其中51例胃肠道间质瘤中CD117的表达率为90.19%,CD34的表达率80.39%,Vimetin的表达率86.27%,Bcl-2的表达率为74.5%(38例),S-100的表达率11.76%。结论:胃肠道间叶源性肿瘤以胃肠道间质瘤最多见。对胃肠道间叶源性肿瘤的诊断不能完全靠光镜,必须结合免疫组化,才能做正确诊断。对胃肠道间叶源性肿瘤的诊断最好联合使用一组免疫组化抗体,其中CD117和CD34是诊断胃肠道间质瘤最敏感而有效的免疫组化标记。

灰口铸铁力学性能影响因素的正交试验和方差分析

以国内外近年来在灰口铸铁中Ｓｉ／Ｃ比的影响的研究成果为依据，通过综合考虑Ｍｎ／Ｓ比、碳当量和Ｓｉ／Ｃ比对灰口铸铁力学性能的影响，采用正交试验方法设计实验方案，并对实验结果进行计算机方差分析和线性回归处理，提出了机械性能与成分之间的数学模式，预测了高强度灰口铸铁的最佳成分，并探讨了进一步开发灰口铸铁性能潜力的可能．

抗胃癌鼠单抗Fab段在大肠杆菌中的表达

目的:探索强启动子T7在可溶性抗体Fab表达中的作用。方法:利用DNA重组的方法将Fd段及K链基因转移到质粒pT7中,置于T7噬菌体启动子的下游,通过蛋白质印迹法证明pT7-3G9是否有可溶性Fab的表达。结果:pT7-3G9有可溶性Fab的表达;pT7-3G9表达的可溶性Fab比p3G9-L高。结论:强启动子系统可作为可溶性抗体Fab的表达载体,T7启动子在可溶性抗体Fab表达中作用比Lac启动子强。

Lac启动子在可溶性抗体Fab表达中的作用

目的 :探讨Lac启动子在可溶性抗体Fab表达中的作用。方法 :利用DNA重组的方法对P3 -3G9噬菌体抗体表达载体[1 ] 进行改建 ,通过免疫印迹试验鉴定新的载体P3G9-L是否有可溶性Fab的表达。结果 :1.P3G9-L为单Lac启动子同时驱动Fd段及K链的双顺反子的可溶性Fab段表达载体。 2 .P3G9-L中的Lac启动子的作用是缓和的 ,可溶性Fab表达量较低。结论 :1 Lac启动于可以用于可溶性抗体Fab的表达体系。 2

关于如何对低硫灰口铸铁进行孕育处理的探讨

研究了低硫情况下电炉熔炼如何改进孕育效果的方法．研究表明，对含硫较低铸铁的孕育方法的改进，不一定非要通过补硫或改善孕育剂的方法来实现；通过增加原有孕育剂的数量、改进孕育方法同样能改善孕育效果．

抗体Fab在大肠杆菌中表达的研究

用Ｔ７噬菌体启动子增加抗体Ｆａｂ的产量。ｐ３－３Ｇ９是由抗胃癌鼠单抗３Ｇ９构建的噬菌体抗体表达载体，其Ｆｄ和Ｋ链各由一个Ｌａｃ启动子控制表达，通过ＤＮＡ重组将其改造为单启动子双基因的可溶性Ｆａｂ段表达载体ｐ３Ｇ９－Ｌ，再将Ｆｄ和Ｋ基因转移到质粒ｐＴ７中，置子Ｔ７噬菌体启动子的下游，形成新的Ｆａｂ表达载体ｐＴ７－３Ｇ９。通过免疫印迹实验证明了ｐ３Ｇ９－Ｌ与ｐＴ７－３Ｇ９均有可溶比抗体Ｆａｂ的表达，将两者的表达量进行了比较，后者略高于前者。初步尝试了利用强启动子系统表达可溶性抗体Ｆａｂ，证明ｐＴＴ噬菌体表达载体系统可用于Ｆ３ｂ的分泌型表达，但是表达量的增加并不理想，还有待于进一步探索。

非小细胞肺癌活检标本中CK7、TTF-1、NapsinA、CK5/6及p63的表达及其意义

目的检测CK7、TTF-1、Napsin A、CK5/6及p63在非小细胞肺癌(NSCLC)活检标本中的表达及其意义。方法采用免疫组化SP法检测100例NSCLC活检标本中CK7、TTF-1、Napsin A、CK5/6及p63的表达,并结合NSCLC的临床病理特征进行分析。结果 CK7、TTF-1和Napsin A在68例肺腺癌中的阳性率分别为98.5%(67/68)、92.6%(63/68)和97.1%(66/68),表达水平明显高于CK5/6(7.3%,5/68)和p63(8.8%,6/68)(P<0.05);而CK5/6和p63在32例肺鳞状细胞癌中的阳性率分别为96.9%(31/32)和93.8%(30/32),表达水平明显高于CK7、TTF-1和Napsin A的阳性率28.1%(9/32)、9.4%(3/32)和3.1%(1/32)(P<0.05),两者差异均具有统计学意义。结论 CK7、TTF-1、Napsin A、CK5/6及p63在对肺活检标本腺癌和鳞状细胞癌的鉴别中具有重要意义,可作为非小细胞肺癌鉴别诊断的特异性免疫组化套餐。

人冠状动脉粥样硬化斑块内白细胞介素6和18及肿瘤坏死因子α表达与斑块稳定性有关

目的探讨人冠状动脉粥样斑块中白细胞介素6和18及肿瘤坏死因子α表达水平与斑块稳定性的关系,以及白细胞介素6和18及肿瘤坏死因子α之间的相关性。方法选取104例冠状动脉组织蜡块标本,在光学显微镜下观察,并结合SmartScape图像分析系统对冠状动脉粥样斑块面积、脂核面积和纤维帽厚度进行测量分析,将其分为正常血管组、稳定斑块组和不稳定斑块组。采用免疫组织化学技术检测冠状动脉粥样硬化斑块中白细胞介素6和18及肿瘤坏死因子α的表达水平。结果稳定斑块组与不稳定斑块组斑块面积差异无显著性(P>0.05),而斑块脂核面积和纤维帽厚度在两组间差异有显著性(P<0.01)。正常血管中白细胞介素6和18无表达,肿瘤坏死因子α无表达或极少量表达;在不稳定斑块组白细胞介素6和18及肿瘤坏死因子α表达水平明显高于稳定斑块组(P<0.01),尤其是在纤维帽的肩部和脂质核心。白细胞介素6和18及肿瘤坏死因子α表达具有相关性,且各因子间呈正相关关系。结论白细胞介素6和18及肿瘤坏死因子α表达水平可反映冠状动脉粥样硬化斑块的稳定性,并且它们之间的表达具有相关性。检测这些因子可帮助临床医生预测冠心病危险事件的发生。

胃癌乙酰肝素酶和NF-κB表达及与临床病理特征和血管形成的关系

目的探讨胃癌乙酰肝素酶(heparanase,HPA)和激活的NF-κB表达及与胃癌临床病理特征和血管形成的关系。方法免疫组织化学(IHC)分别检测了138例胃癌、138例配对癌旁胃粘膜(距癌2cm)和138例配对远离胃癌的手术切缘正常胃粘膜组织(距癌5cm以上)HPA蛋白的表达;138例胃癌组织NF-κB、血管内皮生长因子(VEGF)和CD34蛋白的表达,CD34抗体进行血管内皮染色,用于计数胃癌组织微血管密度(MVD);人胃癌细胞系SGC-7901和MGC803中HPA蛋白的表达。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测了40例胃癌、40例癌旁胃粘膜(距癌2cm)和40例远离胃癌的手术切缘正常胃粘膜组织(距癌5cm以上)以及人胃癌细胞系SGC-7901和MGC803 HPA mRNA的表达结果胃癌HPA蛋白和mRNA阳性表达率(71.0%,72.5%)明显高于癌旁胃粘膜(32.6%,35.0%)和正常胃粘膜(10.0%,8.8%)(P均<0.01),癌旁胃粘膜明显高于正常胃粘膜(P<0.01)。HPA蛋白和mRNA在人胃癌细胞系SGC-7901均为阳性,而在人胃癌细胞系MGC803均为阴性。胃癌HPA和激活的NF-κB蛋白阳性表达率,侵袭至浆膜外、有脉管内瘤栓、有淋巴结转移、有远端转移和临床分期Ⅲ-Ⅳ期者明显高于侵袭至浆膜、无脉管内瘤栓、无淋巴结转移、无远端转移和临床分期I-Ⅱ者(P均<0.05)。胃癌HPA蛋白表达和激活的NF-κB蛋白表达成正相关(rs=0.223,P=0.009)HPA蛋白表达和激活的NF-κB蛋白表达阳性胃癌的MVD明显高于HPA蛋白表达和激活的NF-κB蛋白表达阴性胃癌的MVD(P均<0.01)。胃癌HPA蛋白表达和激活的NF-κB蛋白表达均与VEGF蛋白表达成正相关(rs=0.275,P=0.001;rs=0.527,P=0.000)。结论HPA和激活的NF-κB蛋白表达在胃癌的发展及血管形成中起重要作用;胃癌HPA蛋白表达与激活的NF-κB蛋白表达有关。

LASS2/TMSG-1基因过表达对人肺癌95D细胞体外侵袭迁移能力的影响及其机制

目的分析LASS2/TMSG-1基因过表达对人肺癌95D细胞体外侵袭迁移能力的影响,初步探讨LASS2/TMSG-1基因的作用机制。方法运用脂质体转染法将前期已构建好并冷冻保存的Pc DNA3-TMSG-1质粒通过脂质体转染法瞬时转染入95D细胞(高转移潜能,LASS2/TMSG-1低表达),使外源性LASS2/TMSG-1基因在细胞内过表达即LASS2/TMSG-1过表达组,同时设立转染空白质粒的空白对照组和未转染质粒的阴性对照组。应用体外侵袭及迁移实验检测人肺癌95D细胞侵袭及迁移能力的变化;应用qRT-PCR和Western blot法检测LASS2/TMSG-1 mRNA及蛋白的表达;应用Western blot法检测ATP6L、MMP-2及MMP-9在细胞中的表达水平;应用明胶酶谱法检测肿瘤细胞中MMP-2及MMP-9的活性;使用比色法检测细胞中V-ATPase的活性;使用BCECF H+敏感探针检测细胞外H+浓度的变化。结果 LASS2/TMSG-1过表达组细胞的LASS2/TMSG-1表达水平明显升高,而ATP6L表达水平下降,其V-ATPase活性及细胞外H+浓度降低,与空白对照组和阴性对照组相比差异均具有统计学意义(P<0.05);MMP-2、MMP-9的表达及活性均降低,与其他两组相比差异有统计学意义(P<0.05);并且LASS2/TMSG-1过表达组细胞的体外侵袭及迁移能力明显低于其他两组(P<0.05)。结论 LASS2/TMSG-1可能通过结合ATP6L亚基抑制V-ATPase活性,改变细胞外H+浓度,影响MMP-2、MMP-9的表达及活性,进而改变肿瘤细胞的体外侵袭迁移能力等生物学行为。

中铬铸铁变质剂选择及其对组织、冲击耐磨性能的影响

以键参数函数图为依据，选择部分变质剂在中铬铸铁上进行试验。结果发现，加入００１％到００２％的锌进行变质处理，中铬铸铁可以得到较好的碳化物分布形态和较好的抗冲击磨损性能。证明了用键参数函数选择变质剂的方法也适用于中铬铸铁的研究。

MC、34βE 12、CK19、galectin-3及CD56免疫组化套餐在甲状腺乳头状癌中的表达及其诊断价值

甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）是甲状腺癌中最常见类型，其诊断主要依赖于复杂的乳头状分枝及其核的特征（图1），病理学诊断难度不大。但在实际工作中，某些甲状腺良性病变如结节性甲状腺肿、滤泡性腺瘤中常出现良性乳头状增生，这些乳头状增生或假乳头，有时与PTC中的“真性乳头”结构相似而难以鉴别.

VEGF、IL-6在类风湿关节炎发病中的作用研究进展

类风湿关节炎（RA）是一类病因尚未明确的以关节滑膜炎为主要病变的慢性自身免疫性疾病,它可以导致骨和软骨的侵蚀破坏,最后造成关节畸形.随着分子生物学和免疫学技术的研究进展,发现滑膜细胞和淋巴细胞可以产生大量的细胞因子,其中IL-6可诱导滑膜细胞分泌血管内皮生长因子（VEGF）,VEGF可提高血管通透性,促使炎性细胞渗出.血管形成和炎症反应是两个相互依赖的过程,这些因子之间相互调节,形成一个复杂的网络,促进了RA的发生和发展[1].