Cajal间质细胞的分离、培养方法探讨

目的 探讨体外培养Cajal间质细胞 (interstitialcellsofCajal,ICC)的方法。 方法 以小鼠小肠为ICC的组织来源 ,应用酶解法并结合密度离心法分离、培养ICC ,对ICC培养中的污染、Ca2 + 、Mg2 + 离子以及胶原酶等影响因素进行了探讨 ,应用ICC特异的c kit抗体进行免疫荧光染色后在激光共聚焦显微镜对其进行了鉴定。结果 成功建立起一套的分离、培养的方法。免疫荧光鉴定结果提示 ,本方法建立的ICC分离培养方法是稳定可靠的。结论 ICC分离培养比较困难 ,需要注意防止污染、减少无Ca2 + 、Mg2 + 离子液体以及胶原酶消化时间等问题 ,本方法有望为致力于ICC细胞研究的科研工作者提供方法借鉴 ,并有望促进ICC研究的深入进行。

体外培养小鼠小肠Cajal间质细胞及其形态学变化

目的:分析Cajal间质细胞(interstitialcellsofCajal,ICC)体外培养的要点,研究ICC在体外培养过程中的形态学变化;方法:体外分离、培养小鼠小肠ICC,采用ICC特异的c-kit抗体进行免疫荧光鉴定,应用光学显微镜和激光共聚焦显微镜观察其在体外生长30d的形态学改变过程。结果:体外分离、培养的ICC,贴壁后24h呈三角形或梭形,有少量突起;体外培养72h的ICC即出现明显的长突起,并且可与周围ICC相互形成突触连接,7d以上的ICC可以形成广泛的连接。体外培养的ICC可以在体外长时间培养,并且未发现明显的形态学变化。结论:体外培养3d后ICC形成类似于体内的网络连接,即可用于下一步实验,并可以稳定培养至少30d以上。ICC在体外的成功培养有望为深入研究ICC提供新的手段和借鉴。

大黄素对体外培养Cajal间质细胞钙离子振荡功能的影响

目的:探讨大黄素对体外培养Cajal间质细胞钙离子振荡的影响,从而进一步揭示大黄素等促进胃肠动力的分子机制方法:体外培养小鼠ICC,体外添加大黄素,应用钙离子指示剂标记细胞内钙离子含量,在激光共聚焦显微镜下动态观察其钙离子振荡功能的变化。结果:免疫荧光鉴定结果证实体外培养细胞为ICC,体外培养ICC具有钙离子振荡功能,大黄素能显著增强其钙离子振荡的频率和振幅。结论:大黄素能显著增强体外培养ICC钙离子振荡功能,可能是其促进胃肠动力的重要机制。

AP-1在内毒素刺激大鼠肺泡巨噬细胞中的动态变化及其在TNF-α表达中的调控作用

为观察内毒素刺激对大鼠肺泡巨噬细胞(AM)中核转录因子AP 1活性的影响 ,探讨AP 1在LPS刺激大鼠肺泡巨噬细胞表达TNF α中的基因调控作用 ,应用凝胶迁移阻滞技术(EMSA)检测LPS(Ecoli0 2 6∶B6)刺激大鼠AM核蛋白中AP 1的DNA结合活性的动态变化 ;在LPS刺激前 12h ,应用转基因技术将AP 1的硫代寡核苷酸圈套 (S ODNdecoy)转入大鼠AM ,应用ELISA法观察AP 1硫代寡核苷酸圈套对LPS刺激大鼠AM表达TNF α的影响。结果发现 ,应用 10 0ng/mlLPS刺激大鼠AM 0 5h,AP 1即迅速出现活化并达到峰值 ,在 1h活性略有下降 ,3h活性又逐渐回升 ,5h、8h又迅速回落 ,AP 1的活化状态至少可以持续 8h ,且与LPS刺激呈明显的量效关系 ;AP 1的S ODN圈套能明显抑制但不能完全阻断LPS诱导的TNF α表达。说明LPS刺激可使大鼠AM内AP 1活化 ,其在LPS介导的炎症反应中可能发挥重要作用 ;AP 1在LPS诱导的大鼠AM表达TNF α中可能起重要的调控作用 ,但TNF

正常人结肠上皮细胞体外培养和鉴定

目的:探讨正常人肠上皮细胞(intestinal epithelial cells, IEC)的分离、体外培养方法,为研究IEC以及与IEC相关疾病建立合适的细胞模型. 方法:正常结肠黏膜取自外科手术的大肠恶性肿瘤患者距肿瘤10 cm的结肠组织,联合运用Ⅰ型胶原酶和嗜热菌蛋白酶消化分离IEC,接种于含多种促IEC生长的营养成分的DMEM培养液内,根据IEC和成纤维细胞贴壁时间的差异并运用胶原酶来纯化IEC,通过观察IEC生长状态、形态特征、超微结构及检测上皮细胞膜抗原对IEC进行鉴定. 结果:联合运用Ⅰ型胶原酶和嗜热菌蛋白酶消化1 h可分离出健全绒毛隐窝单位,2 wk左右细胞可铺满整个玻片.免疫细胞化学检测该细胞为阳性细胞,纯度高. 结论:联合运用Ⅰ型胶原酶和嗜热菌蛋白酶,可分离培养出高纯度未凋亡的ICE.

内毒素肝损伤过程中枯否细胞NF-κB和AP-1活性变化及其生物学意义

为探讨内毒素肝损伤过程中 ,枯否细胞 (Kupffercells,KCs)内主要转录因子Nuclearfactor kappaB(NF κB)、Activatorprotein 1 (AP 1 )活性的动态变化规律 ,采用健康昆明种小鼠 ,随机分组如下 :Lipopolysaccharide(LPS)尾静脉注射 3h的量效关系 :正常对照组和低 ( 1mg kg)、中 ( 5mg kg)、高 ( 1 0mg kg) 3个内毒素剂量组 ;注射 5mg kgLPS的时效关系 :正常对照、0 .5、1、3、5、8h组 .Electrophoreticmobilityshiftassay(EMSA)法检测KCs中NF κB、AP 1活性 .结果发现 ,内毒素肝损伤过程中 ,KCs中NF κB、AP 1在不同时效和量效均不同程度活化 .提示 ,二者的活化与炎症反应的调控机制紧密相关 。

不同术式对慢传输型便秘患者的疗效、营养和健康状况的影响

目的观察全结肠切除回直肠吻合术（ileorectal anastomosis,IRA）和次全结肠切除盲直肠吻合术（caeco-rectal anastomosis,CRA）治疗慢传输型便秘患者的效果,以及对患者营养状况和健康状况的影响。方法收集5家医院提供的行全结肠切除回直肠吻合术的40例患者,以及行次全结肠切除盲直肠吻合术的32例患者临床资料,对手术资料和术后随访资料进行统计分析,观察患者术前和术后的血红蛋白、总蛋白和白蛋白含量;采用术后全身情况调查表、MNA营养状况调查表、健康调查评分量表（SF-36）、社会生活情况调查表,分析两种手术治疗效果,以及对患者营养状况和健康状况的影响。结果 IRA组和CRA组术后3个月患者对手术满意度为87.5%,术后6个月都在90.0%以上。两组大便次数增多的例数随术后时间延长而减少,与各自术后3个月的例数相比,IRA组术后1年的例数显著减少（P〈0.01）,CRA组术后6个月的例数也显著减少（P〈0.05）。IRA组和CRA组术后1年应用止泻剂例数显著少于各自术后3个月的例数（P〈0.05,P〈0.01）。IRA组术后的血红蛋白和白蛋白含量较CRA组显著增高（P〈0.05）。两组MNA营养状况调查指标数值之间无统计学差异（P〉0.05）,两组各指标得分均接近最高分。两组健康调查评分量表数值之间无统计学差异（P〉0.05）。两组的健康状况、情绪问题和对周围生活的感受的得分只有最高分的68.8%~82.4%。结论 IRA和CRA手术能缓解患者便秘症状,术后营养状况良好,健康状况和社会生活受到一定程度的影响。IRA和CRA手术都适用于治疗慢传输型便秘,可根据患者的个体情况选择手术方式。

结直肠癌患者血清及粪便中热休克蛋白60检测的临床意义

目的探讨热休克蛋白(heat shock protein60,HSP60)在结直肠癌患者血清和粪便中的表达及其对结直肠癌的诊断价值。方法采用间接ELISA法,检测40例结直肠癌患者及相应正常对照的血清及粪便中HSP60表达。结果HSP60在结直肠癌患者血清及粪便中较正常对照明显增高(P<0.05),且粪便浓度高于血清(P<0.05);结直肠癌患者粪便中HSP60含量与不同肿瘤浸润期及远处转移期有关(P<0.05),并在肿块型直肠癌中明显增高(P<0.05)。结论HSP60在结直肠癌患者的血清、粪便中异常高表达。

阿片受体信号调节相关蛋白RGS4及β-arrestin2在泻剂结肠大鼠结肠中的表达变化

目的探讨泻剂结肠大鼠结肠中阿片受体信号调节相关蛋白RGS-4和β-arrestin2的表达变化及意义。方法 7~8周龄Wistar大鼠16只,体质量（200±20）g,雌雄各半,按随机数字表法分为对照组（n=8）及泻剂结肠组（n=8）,饲养环境温度18~28℃,相对湿度40%~80%。对照组饲以普通软饲料,泻剂结肠组饲以混有酚酞的饲料,建立泻剂结肠大鼠模型。通过RT-PCR及Western blot方法对RGS-4和β-arrestin2在结肠中的表达进行相对定量分析。结果两种阿片受体信号调节蛋白在泻剂结肠组及对照组大鼠结肠内均有不同程度的表达。RT-PCR结果显示泻剂结肠组RGS-4和β-arrestin2 mRNA相对表达水平均明显高于对照组[（3.418 3±0.247 4）vs（0.987 6±0.034 1）,（2.974 4±0.214 2）vs（0.921 1±0.040 1）,P〈0.01]。Western blot检测结果显示RGS-4和β-arrestin2的表达在泻剂结肠组较对照组明显升高[（0.403 4±0.049 9）vs（0.115 3±0.010 2）,（0.913 9±0.061 1）vs（0.467 6±0.043 7）,P〈0.01]。结论RGS-4和β-arrestin2在泻剂结肠大鼠结肠中表达均明显增强,提示其可能增强泻剂结肠大鼠结肠MOR信号传导调节功能。

腹腔镜直肠癌根治手术65例分析

[目的]探讨腹腔镜直肠癌全直肠系膜切除(TME)手术几个值得注意的问题。[方法]回顾性分析腹腔镜直肠癌TME手术65例。[结果]65例按TME原则采用腹腔镜完成直肠癌手术,Dixon手术58.5%(38/65),Miles手术30.8%(20/65),Parks手术10.8%(7/65)。手术时间130～300min,平均175min,术中平均出血量120ml。本组无吻合口瘘,无围手术期死亡病例。术后1～4d肠道功能恢复。[结论]腹腔镜直肠癌TME手术安全可行,术中应根据病情选择肠系膜下动脉切断位置、盆腔自主神经保留以及是否行保护性回肠造口。

全腹腔镜胃转流术治疗肥胖型和非肥胖型2型糖尿病的疗效分析

目的:研究胃转流术(GBP)治疗肥胖型和非肥胖型2型糖尿病的疗效及其疗效差异。方法:回顾分析我院2010年采用GBP治疗的肥胖型和非肥胖型2型糖尿病患者各34例的临床资料,包括术前与术后的空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2hPG)、糖化血红蛋白(HbAlc)、空腹胰岛素(Fins)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)的变化情况和疗效评定,并比较其疗效差异。结果:68例手术均成功,两组患者术前Fins和HOMA-IR的组间差异有统计学意义(P<0.05),肥胖型组均较高,其余各项指标的组间差异均无统计学意义(P>0.05),术后6个月,两组患者除Fins的变化差异无统计学意义(P>0.05),各指标均有不同程度的下降,与术前相比差异均有统计学意义(P<0.05),两组患者术后的组间差异与术前相同,两组手术有效率均大于94%,治愈率均大于85%。结论:GBP对肥胖型与非肥胖型T2DM均有显著疗效,其治疗机制与摄食减少导致低热量和体重减轻无关。

LPS对小鼠枯否细胞核因子-κB活性的促进效应

为探讨细菌胞壁主要内毒素脂多糖 (Lipopolysaccharide ,LPS)对与炎症反应紧密相关的核因子 -κB(NF -κB)活性的影响 ,从正常对照和不同剂量的LPS刺激后不同时相的小鼠中分离出其肝脏枯否细胞 (Kupffercell,KC)。用凝胶迁移率改变分析法 (Electrophoreticmobilityshiftassay ,EMSA)检测KC核提取物中NF -κB的活化与LPS的量效、时效关系。结果发现 :刺激 3h后 ,低剂量的 (1mg/kg)LPS ,即可检测到NF -κB活性 ;中剂量组 (5mg/kg)的NF -κB活性达峰值 ,高剂量组 (10mg/kg)则仍可维持NF -κB的活化状态。中剂量 (5mg/kg)刺激 0 .5h即可检测到NF -κB活性 ,3h时NF -κB活性达峰值 ,并可持续到至少 8h。表明抑制NF -κB的过度活化可能有助于炎症的治疗。

医学生普通外科实习阶段实践能力的培养与评价

临床实践能力是医师在医疗活动中的执行能力、交往能力、自我调控能力等综合能力。临床实习是培养医学生临床实践能力的重要阶段，是从学生成长为医生的重要环节。普通外科的临床实习是整个外科学临床实习的关键。当前临床外科学的现实教学和临床需求严重脱节，医学生临床实践能力低下仍然是临床教学中的重要问题。本文就医学生普通外科实习阶段实践能力的培养与评价报告如下。

泻剂结肠大鼠模型阿片受体表达变化

目的探讨3种阿片受体亚型（MOR、DOR、KOR）在泻剂结肠大鼠模型结肠内的表达变化及意义。方法使用7~8周龄Wistar大鼠20只,体质量（200±20）g,雌雄各半,按随机数字表法分为对照组（n=10）及泻剂结肠组（n=10）,单只分笼饲养（环境温度18~28℃,相对湿度40%~80%）。对照组饲以普通饲料,泻剂结肠组饲以含酚酞饲料。通过RT-qPCR及Western blot法对阿片受体在结肠中的表达进行相对定量分析。结果 3种阿片受体亚型在泻剂结肠组及对照组大鼠结肠内均有不同程度的表达。RT-qPCR检测显示泻剂结肠组MOR、DOR及KOR mRNA相对表达水平均明显高于对照组[（5.093±1.410）vs（1.092±0.222）,（2.612±0.612）vs（1.032±0.082）,（2.607±0.327）vs（0.995±0.109）,P〈0.01]。Western blot检测显示泻剂结肠组MOR、DOR及KOR的表达较对照组明显升高[（0.361±0.023）vs（0.152±0.021）,（0.246±0.059）vs（0.159±0.005）,（0.309±0.018）vs（0.201±0.015）,P〈0.01]。结论各阿片受体亚型在泻剂结肠大鼠结肠中表达均明显增强,提示其对泻剂结肠大鼠结肠运动及分泌功能可能存在明显的抑制作用。

启发式教学法在普通外科教学中的应用

启发式教学法是指一切教学活动都必须以调动学生的积极性、主动性、创造性为出发点。本文综述了国内教学中采用启发式教学法的方法,将问题启发、归纳比较、演示启发和临床病例启发教学法应用于普通外科教学中,目的是为了更好地向学生传授知识,提高学生的学习能力,提高学生素质。

问题引导式教学法在普通外科教学中的实践和体会

将问题引导式教学法在普通外科专业课教学中进行实践,结果表明,该教学法使学生能充分利用自身掌握的知识,积极主动地分析讨论,提高了学生学习热情,培养了其分析思维能力。

经鼻型肠梗阻导管在肠梗阻治疗中的作用（附58例报道）

目的 探讨经鼻型肠梗阻导管在肠梗阻治疗中的作用及临床疗效.方法 回顾我院2014年1月至2015年2月期间使用经鼻型肠梗阻导管治疗肠梗阻的病人58例,总结分析其临床治疗效果.结果 所有病人经过3～25 d的肠梗阻导管治疗,共42例病人梗阻症状完全缓解;8例病人因肿瘤梗阻行手术治疗;5例因保守治疗后效果不佳行手术治疗;3例因症状完全缓解后带管进食后又再次出现肠梗阻症状行手术治疗.结论 经鼻型肠梗阻导管对于小肠梗阻及右半结肠梗阻的病人可以起到较好的减压作用,值得推荐使用.

经骶尾人路手术在低位直肠疾病切除中的应用(附18例报告)

目的：总结经骶尾入路手术在低位直肠良性病变及直肠肿瘤局部切除中的应用体会。方法低位直肠疾病患者18例，均采用经骶尾入路手术治疗。直肠类癌4例，直肠间质瘤4例、直肠癌4例（Dukes 分期均为 A 期）、直肠腺瘤2例、直肠内脱垂合并盆底疝2例、直肠后囊肿1例、直肠阴道瘘1例。结果术后随访发现，所有患者均无瘤存活。2例直肠内脱垂合并盆底疝，术后疗效差，其中1例再次行全结肠切除术。结论骶尾入路手术简单易行，手术创伤小，病变切除完整，有利于保护性功能和肛门功能。

普通外科教学中应用比较式教学方法的体会

比较就是辨别两种或两种以上事物异同的思维过程,不仅可以将新旧知识、事物关系沟通组织起来,而且可以教给学生一种良好的学习方法。普通外科教学中采用同一疾病内部的纵向比较,多种疾病间的横向比较,以及比较正与反、简与繁的比较方法,可以提高学生把握事物的特征和概括取舍的能力,调动学生自主学习的热情。