结核分枝杆菌耐热抗原(MTB-HAg)对γδ T细胞影响的研究进展

结核分枝杆菌耐热抗原(MTB-HAg)是从结核分枝杆菌(MTB)减毒菌株H37Ra经121℃,20 min,高温高压处理后从菌体释放到上清液中一种多肽类抗原。γδ T细胞是一类广泛分布于非淋巴组织的非常规T细胞,可分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)等细胞因子,在抗MTB感染的免疫应答中发挥重要作用。MTB-HAg可在体外有效刺激γδ T细胞增殖活化,使其更加高效地参与抗结核感染的过程,故MTB-HAg可作为设计新型结核疫苗或药物的潜在靶点。但由于MTB-HAg组成复杂,具体是何种成分刺激γδ T细胞发挥抗MTB感染功能还不清楚。

结核分枝杆菌GroEL1蛋白表达、纯化及结构和功能的生物信息学分析

目的:应用基因工程技术和生物信息学方法对结核分枝杆菌GroEL1进行原核表达与纯化及其结构和功能预测,分析该抗原在新型结核疫苗的应用价值。方法:采用PCR技术体外扩增GroEL1基因,并克隆至pET28a质粒中,测序筛选构建成功的pET28a-GroEL1载体,将其载体转化至大肠杆菌BL21(DE3)表达菌株中,IPTG诱导表达重组GroEL1蛋白,利用镍亲和层析柱纯化。从UniProt数据库中获取H37Ra株GroEL1核苷酸和氨基酸序列;分别运用Protparam、TMHMM-2.0、Protscale、NetChop-3.1、Psortb、SignalP-4.1工具预测GroEL1蛋白的理化性质、跨膜螺旋、亲/疏水性、磷酸化位点、亚细胞定位,信号肽;NetNGlyc-1.0和YinOYang-1.2预测其糖基化位点;SOPMA和Swissmodel预测蛋白的二级结构和三级结构;Clustalw对同源序列进行比对。String预测相互作用蛋白,IEBD和ABCpred预测蛋白的B细胞抗原表位。结果:成功构建重组pET28a-GroEL1载体,GroEL1蛋白在大肠杆菌中部分以可溶形式表达。镍亲和层析柱纯化重组GroEL1蛋白,其纯度达90%以上。Western blot鉴定证实重组GroEL1蛋白具有良好的免疫反应性。结核分枝杆菌H37Ra株GroEL1基因全长1620 bp,编码539个氨基酸,分子量55.88 kD,等电点为4.98,预测显示该蛋白亲水性较强、性质稳定,无跨膜区,有37个可能的磷酸化修饰位点和8个O-糖基化位点,属于非分泌蛋白,定位在细胞质,二级结构显示α-螺旋占53.43%,延伸链占11.87%,β-转角占7.61%,无规则卷曲占27.09%,有多个B细胞抗原表位及多个与GroEL1蛋白相互作用蛋白。结论:成功表达并纯化重组GroEL1蛋白,运用生物信息学成功预测GroEL1蛋白的结构和功能,为结核病的预防、诊断和治疗奠定基础。

信息驱动的大电网运行态势知识图谱框架及构建模式研究

基于大电网海量、高维的各类实时测量及仿真模拟信息,依托大数据、人工智能、知识图谱等先进信息技术,深度挖掘和表征电网运行态势知识并直观形象展示,是建设大电网在线智能主动安全防御体系的核心。首先,在智能全景系统思想体系下,采用“物理系统+信息系统+知识图谱”融合机制,综合考虑电网不同运行场景的稳定状态评估指标和优化控制策略信息,给出电网运行态势知识图谱的基本概念及内涵,并详细介绍其核心要素及构建目标。然后,依托智能电网调度时空大数据支撑平台,设计电网运行态势知识图谱软件功能架构,包含多源信息融合、时空大数据平台、态势图谱引擎、知识关联推理、图谱业务应用和友好人机交互等6个层次模块。在此基础上,给出自顶向下的电网运行态势知识图谱构建模式,并系统性介绍逻辑架构、技术架构、知识建模、知识抽取、知识融合、知识加工、知识更新、图结构存储、可视化引擎等构建技术。最后,研发大电网运行态势知识图谱智能构建及可视化系统,并在某省级电网开展测试应用,为实现信息驱动的大电网智能全景主动安全防御提供技术支撑。

系统性红斑狼疮患者外周血CD19^(+)CD25^(+)Breg比例和细胞表面PD-1和PD-L1的表达及其与临床指标的相关性

目的 研究程序性死亡蛋白1(PD-1)与其配体PD-L1在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CD19^(+)CD25^(+)调节性B细胞(Breg)的表达及临床意义。方法收集50例SLE患者和41例健康人(HC)外周血标本,采用流式细胞仪检测外周血中CD19^(+)CD25^(+)Breg的比例,以及CD19^(+)CD25^(+)Breg的PD-1、PD-L1表达,同时采集患者的临床表现和实验室指标等临床信息。使用免疫磁珠分选CD4^(+)T细胞与CD19^(+)B细胞,体外细胞共培养,检测Breg的分化。结果SLE患者活动组外周血中CD19^(+)CD25^(+)Breg比例低于HC,CD25^(+)B细胞PD-1、PD-L1的表达高于HC;SLE患者有胸腔积液、关节炎、C反应蛋白(CRP)上升的患者Breg频率高于对应阴性组;SLE患者有IgM下降、抗核糖核蛋白(RNP)抗体阳性的患者Breg频率低于对应阴性组;SLE患者有感染、发热、关节炎、IgA上升的患者CD19^(+)CD25^(+)PD-1^(+)细胞频率高于对应阴性组;SLE患者有感染、发热、IgA上升的患者CD19^(+)CD25^(+)PD-L1^(+)细胞频率高于对应阴性组;活化的CD4^(+)T细胞有利于CD19^(+)B细胞表面CD25的表达。结论SLE患者外周血中CD19^(+)CD25^(+)Breg降低,但细胞表面PD-1与PD-L1的表达增加,并且与相关临床表现及实验室参数存在一定的关系。活化的CD4^(+)T细胞促进Breg的分化。

结核分枝杆菌GroEL2蛋白表达、纯化及生物信息学分析

目的克隆、表达和纯化结核分枝杆菌H37Ra株GroEL2蛋白,并进行生物信息学分析。方法以结核分枝杆菌H37Ra株基因组DNA为模板,PCR扩增GroEL2基因,克隆至pET-28a载体中,构建重组pET-28a-GroEL2载体,将其转化至BL21(DE3)菌株中,在异丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达后,利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)电泳分析表达产物,镍-亚氨基二乙酸(Ni-IDA)亲和层析柱纯化重组GroEL2蛋白,Western blot鉴定GroEL2的表达效果。利用生物信息学方法对GroEL2蛋白的理化性质、蛋白结构、抗原表位等进行预测。结果成功构建重组pET-28a-GroEL2表达载体,在大肠杆菌中以可溶形式表达GroEL2蛋白。Ni-IDA亲和层析柱纯化重组GroEL2蛋白,纯度达90%以上。生物信息学分析显示其能与多种蛋白相互作用,且存在多个潜在的T细胞、B细胞抗原表位。结论重组GroEL2蛋白具有良好的免疫反应性,可能是结核病新型疫苗和诊断方法开发的新靶点。

铁死亡与自身免疫性疾病的研究进展

自身免疫性疾病是一组病因不明的复杂疾病,均存在自身组织抗原特异性T细胞或B细胞的异常激活和相应组织器官的炎症反应,且与不能有效清除自身衰老损伤细胞有关。铁死亡是一种新型的非凋亡性细胞死亡形式,主要生化特征包括铁过载、氧化应激、脂质过氧化和抗氧化通路受损。近年认为铁死亡与自身免疫性疾病(如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎)的发生发展相关,这可能为自身免疫性疾病的发病机制研究和新药研发提供新方向。

结核分枝杆菌GroES蛋白表达、纯化及其生物信息学分析

目的 将结核分枝杆菌H37Ra株GroES蛋白进行原核表达与纯化,并对其进行生物信息学分析。方法 通过PCR扩增GroES基因并克隆至pET28a中,测序鉴定后将pET28a-GroES转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导GroES蛋白表达,SDS-PAGE分析表达产物,镍亲和层析柱纯化重组GroES蛋白,Western blot鉴定GroES的免疫反应性。应用ORF Finder、ProtParam、TMHMM Server 2.0、NetPhos 3.1 Server、NetNGlyc1.0 Server、SignalP 4.1 Server、BLAST、Softberry、PSORT、Vaxijen、SOPMA、SWISS-MODE、ABC-pred、IEDB、SYFPEITHI、STRING工具对GroES的结构和功能进行生物信息学预测。结果 成功构建重组pET28a-GroES重组体,用ITPG诱导后GroES在大肠杆菌以可溶性形式表达,纯化后GroES纯度达90%,Western blot证实GroES具有免疫反应性。生物信息学显示GroES蛋白由100个氨基酸组成,分子式为C478H776N124O147S1,等电点为4.62,为亲水性蛋白,有9个磷酸化位点,无跨膜区及信号肽序列,其编码基因MRA-3458全长303bp,含1个开放阅读框;GroES二级结构中,α-螺旋占5%,β-折叠占37%,β-转角占8%,无规则卷曲占50%;预测GroES具有多种与之相互作用的蛋白质和潜在的T、B细胞表位。结论 成功表达和纯化具有免疫反应性的重组GroES蛋白,并预测了GroES结构与功能,提示GroES可作为制备结核疫苗或药物的候选蛋白,为更深入理解结核分枝杆菌的感染免疫机制奠定基础。

“直线与椭圆的位置关系”教学实践与反思

解析几何是培育学生数学核心素养的重要载体,在课堂教学中要充分挖掘其教育价值.在“直线与椭圆的位置关系”一课的教学中进行尝试,借助GeoGebra软件作出图形,根据几何直观提出研究问题,通过代数运算解决提出的有关问题,进而发展学生的直观想象、代数运算和逻辑推理素养.

信息驱动的大电网全景安全防御概念及理论框架

以电网为核心的能源互联网发展趋势及信息技术高度发展,对大电网安全稳定运行和智能防控提出了更高的要求,需要发展和建立与之相适应的在线安全防御支撑体系。首先,评述了现有电网安全防控发展现状及新形势需求,进而提出了建立信息驱动的大电网全景安全防御的设想,详细阐述了其概念、建设目标、多维控制内涵及多层次互动协调控制原则。其次,以信息流控制能量流为核心,设计了自动闭环控制与服务层次架构,明确了各环节的主要功能。在此基础上,系统性部署了信息驱动的全景安全防御理论框架,并阐明了各层面的基础理论和关键技术。最后,给出了该体系实施的时空大数据构建模式,以期利用先进大数据技术实现运行环境下的大电网多维度、立体化安全防御及精确掌控。

中国森林公园的发展方向

森林公园是充分发挥森林功能特别是森林生态系统服务功能的主要载体。当前,以森林公园为主体的森林旅游研究已成为中国森林生态学科研究中的一大亮点。较早地根据美国金融风暴以及中央土地流转政策等新形势,从总结分析中国森林公园的主要发展历程、产业经济态势和生态环境概况入手,对未来中国森林公园的发展方向进行了判断。指出土地流转制度改革将推动森林公园的经营多样化,金融危机将推动森林公园更加注重近距离市场培育,城市化进程将加大人们对森林康体旅游产品的需求。同时,游憩冲击管理将成为森林公园维持生态平衡的一种重要的行为调节方式,环境资源特别是森林保健旅游资源、森林公园的生态补偿机制、森林旅游产业结构调整与投资融资政策等将成为森林旅游研究的主要热点和重点。为有效化解金融危机对森林公园的负面影响,用足用好国家土地新政策,必须及早规范集体林权流转体系,积极扶持民营森林旅游的开发建设,开展生态教育夯实森林旅游的内涵,谨防林权流转之后旅游地通货膨胀,采用科学合理的生态技术加强森林旅游资源保护与可持续利用。

不同T细胞亚群在抗结核杆菌感染中的作用

目的：观察 Ｃ Ｄ４ ＋ αβ Ｔ 细胞和γδ Ｔ 细胞对结核杆菌（ Ｍｔｂ） 不同抗原的增殖反应，以及活动性肺结核患者外周血中这两类 Ｔ 细胞亚群的数量和功能的变化。方法：用 Ｍｔｂ 分泌性蛋白抗原和耐热性低分子多肽抗原刺激健康人和肺结核患者的外周血 Ｔ 细胞，用荧光标记特异性单抗在流式细胞仪上检测新鲜分离和培养１０ ｄ 后的细胞表型，以计数扩增的 Ｔ 细胞亚群数量。结果：活动性肺结核患者外周血中 Ｃ Ｄ４ ＋ αβ Ｔ 细胞的数量比正常对照明显减低，而γδ Ｔ 细胞的数量无明显变化； Ｍｔｂ 分泌性抗原仅能刺激 Ｃ Ｄ４ ＋ αβ Ｔ 细胞增殖，而耐热性多肽抗原能刺激两类 Ｔ 细胞亚群增殖；活动性肺结核患者外周 Ｃ Ｄ４ ＋ αβ Ｔ 细胞对 Ｍｔｂ 分泌性抗原以及γδ Ｔ 细胞对 Ｍｔｂ 耐热性多肽抗原的增殖反应均明显降低。结论： Ｃ Ｄ４ ＋ αβ Ｔ 细胞和γδ Ｔ 细胞均参与机体抗 Ｍｔｂ 感染的保护性免疫机制。

神经垂体多肽激素在人胎儿胸腺组织的表达

目的：探讨神经垂体激素在人胎儿胸腺组织的表达。方法：用放射免疫测定药盒测定人胎儿胸腺组织匀浆提取物中精氨酸升压素（ＡＶＰ）和催产素（ＯＴ）的含量，同时用免疫组化方法检测胎儿胸腺组织冷冻切片和石蜡切片中的ＡＶＰ和ＯＴ的表达。结果：人胎儿胸腺组织提取液中ＡＶＰ（１２例）和ＯＴ（１３例）的含量（ｐｇ／１００ｍｇ湿重组织）（ｘ±ｓ）分别为４７．６４±４５．１４和８３．３５±５５．８９。比较胎龄＜２０周组和≥２０周组的胸腺组织提取液中这两种多肽激素的含量，差异均无显著性（Ｐ＞０．０５）。免疫组化检测发现，胸腺组织中ＡＶＰ和ＯＴ阳性反应细胞的分布部位与角蛋白阳性反应细胞相一致，表明胸腺上皮细胞可表达这两种神经垂体多肽激素。结论：人胎儿胸腺在胎龄１６～２０周时即可表达神经垂体多肽激素ＡＶＰ和ＯＴ，胸腺上皮细胞是产生这两种神经多肽激素的主要细胞。

基于多目标优化的加速意图识别PHEV能量管理策略研究

为了使插电式混合动力汽车(plug-in hybrid electric vehicle,PHEV)能够获得更好的燃油经济性,本文提出了一种基于多目标优化的加速意图识别能量管理策略,在基于规则型能量管理策略的基础上采用模糊控制器构建起加速意图识别模块,通过引入修正系数对整车需求转矩进行实时修正,实现更符合驾驶员意图的转矩输出,同时利用多目标粒子群算法对整车的传动比进行优化以提升整车燃油经济性,利用CRUISE软件搭建整车模型与MATLAB/Simulink进行联合仿真验证策略的有效性。仿真结果表明:在世界轻型车辆测试循环(world light vehicle test cycle,WLTC)工况下,当起始动力电池荷电状态(state of charge,SOC)为70%时,对比基于多目标优化的加速意图识别策略与单一的加速意图识别策略,前者的燃油经济性提升了0.48%;当起始SOC为35%时,前者的燃油经济性提升了2.22%,由此得出基于多目标优化的加速意图识别策略对于提升整车燃油经济性具有较好的效果。

新生期去胸腺对神经内分泌系统的影响

新生期去胸腺(NTx)小鼠2月龄时脾脏淋巴细胞ConA反应性、MLR和IL-2产生能力均受抑制,而NK活性显著增加。NTx小鼠2月龄时血清T4和73水平均明显降低,去胸腺越早T4水平越低;还发现NTx大鼠的T4水平也明显降低。NTx雌性小鼠卵巢重量和血清E_2水平明显降低,但雄性NTx小鼠血清睾酮水平下降不明显。NTx小鼠的血清皮质酮水平明显降低。另发现NTx小鼠下丘脑甲硫脑啡肽(M-Enk)含量明显降低。本文研究结果表明NTx可降低甲状腺、性腺和肾上腺皮质的功能,并影响下丘脑(MEnk)的产生,证实了新生期胸腺对神经内分泌系统的功能发育起着重要作用。

基于激光熔覆的5CrNiMo模具修复研究

选用含稀土Y的合金粉末,采用同步法激光熔覆工艺方法对失效的5CrNiMo模具进行了修复,并进行了显微组织、硬度、耐磨性和抗高温氧化性的测试与分析。结果表明,同步法激光熔覆技术可以实现5CrNiMo模具的成功修复,含稀土Y的合金粉与5CrNiMo基体形成了良好的冶金结合;此外,模具的表面硬度、耐磨性和抗高温氧化性因此而分别提高了40.2%、85.7%和86.3%。

胸腺——神经内分泌网络的研究

60年代以前当人们对胸腺功能尚未真正了解时,就发现它与其它内分泌器官的活动互有影响。在胸腺的免疫功能和内分泌功能明确以后,又有许多学者观察胸腺与神经内分泌系统的相互关系,如发现新生期去胸腺小鼠的神经内分泌系统功能紊乱等。1977年Besedovsky 提出神经内分泌免疫网络学说后,受到广泛的重视,已有大量资料表明免疫系统与神经内分泌系统之间存在双向调节的关系。胸腺作为免疫系统中枢器官和内分泌器官的双重角色在神经内分泌免疫网络中有特殊重要地位。近年来。

国内外游艇经济研究进展

游艇活动是近年来在我国逐步兴起的一项休闲运动,但在其发展过程中缺乏理论指导。本文综述了国内外游艇经济研究动向和进展,以求对我国游艇经济的研究和发展起到借鉴和引导作用。

多型腔PET瓶坯模具热流道创新设计

对96型腔PET瓶坯模具热流道进行创新设计,突破传统三流道设计,采用五级流道设计,使用整体注塑成型方法,保证了在模具流道里面的塑料均匀地流到各个型腔中,产品冷却时间一致,一次能生产出多个产品,提高了模具的生产效率。且圆弧连接减小了材料冲击力,凝料流畅、缺陷少,解决了多型腔热流道模具设计的关键问题,并对注塑过程进行模拟分析,数据吻合,设计合理。

三亚市邮轮产业生态研究

三亚是我国较早发展邮轮产业的一个城市,发展到今天已经初具规模。考虑到产业的可持续发展,本文从产业生态系统的能值与生态位入手,分析了三亚市邮轮业的产业生态环境,提出了相关建议与对策。

汽车钣金模具CAD技术研究

汽车钣金逆向CAD模型建构在汽车业界的发展已久。近年来,国内开始使用逆向工程软件,以建构曲面及特征线的方式,进行钣逆向CAD模型的建构。该方法除可以通过控制曲面质量来改善加工精度,以减少后段工程的钳修部份,更由于CAD的曲面资,可以做为设计后端各工程参考依据,使得整个开发的过程予以计算机化,节省再开发的成本。本文讨论了钣金模具逆向流程,以及汽车钣金逆向CAD模型的建构技术。