冷冻储存对黑木耳菌包特性和子实体品质的影响

为了探究冷冻储存对黑木耳菌包特性和子实体品质的影响,为黑木耳菌包冬季储存条件提供技术参考,以完成后熟的黑木耳菌包为试验材料,在-20℃条件下分别冷冻储存15 d和30 d,以20℃储存30 d为对照,观察测定黑木耳菌包特征、单袋产量、子实体形态特征和质构特性。结果表明,冷冻储存可抑制黑木耳菌包菌丝体生长,显著降低耳片硬度、弹性和咀嚼度,增加第1潮耳片产量。冷冻储存对耳片泡发率、黏聚性和回复性影响不显著。冷冻储存时间越长,第2潮耳片产量和单袋产量越低,耳片越薄,耳片弹性越低。

不同核桃壳配比的栽培基质对香菇生长及产量的影响

利用云南省核桃产业副产物核桃壳,以10%、20%、30%、40%配比替代主料木屑探索香菇栽培的优良配比,提升核桃产业价值,实现食用菌产业可持续发展。通过养菌期间菌丝生长情况、出菇期子实体农艺性状调查和成分检测,与常规栽培料进行对照,核桃壳替代主料栽培香菇对菌丝生长的影响不明显,甚至核桃壳占比30%的EG菌丝生长速度较CK快;不同核桃壳添加比例对于香菇子实体农艺性状和产量有一定影响,但差异不明显;4个EG香菇营养成分接近或高于CK,如粗多糖、总氨基酸和粗纤维高于CK;7种人体必需氨基酸中,赖氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸和苏氨酸含量4个EG均高于CK,EG D蛋氨酸含量高于CK,EG B、EG C和EG D苯丙氨酸含量高于CK;4个EG天冬氨酸、谷氨酸和丙氨酸含量都高于CK。核桃壳作为主料替代木屑栽培香菇,对香菇生长及农艺性状无不良影响,且风味和品质有所提升。核桃壳作为香菇栽培替代料切实可行,具有进一步试验研究和推广应用价值。

白肉灵芝‘云灵3号’选育

在云南省内收集野生子实体,经过鉴定和组织分离获得白肉灵芝(Ganoderma leucocontextum)菌株,以菌株L4439作为对照,通过初筛、复筛、区别性鉴定、中试和多年多点示范栽培选育菌株。结果表明:选育的菌株L4968菌丝生长速度较快,子实体呈红褐色、漆样高光泽,同心环纹和放射状纵脊明显,菌盖长度为(15.08±0.12)cm,菌盖宽度为(12.23±0.09)cm,菌肉厚度为(0.81±0.02)cm,菌柄长度为(7.25±0.10)cm,菌柄直径为(2.75±0.07)cm,每袋子实体鲜重为(84.98±1.41)g,生物学效率为(15.45±0.26)%,栽培周期为(85.00±0.82)d,出菇整齐,栽培性状稳定,栽培产量较高,该菌株适宜在云南及周边地区进行设施化和林下仿生栽培。2023年,菌株L4968通过云南省种子管理站云南省非主要农作物品种鉴定,品种名称为‘云灵3号’。

野生泰国木耳的生物学特性及驯化栽培

结合形态特征和分子系统发育分析,将采自云南省红河哈尼族彝族自治州屏边苗族自治县腐木上的野生木耳鉴定为泰国木耳(Auricularia thailandica)。经组织分离获得纯培养菌株,并首次对中国采集的泰国木耳开展固体培养、液体培养和驯化栽培试验。试验结果表明,固体培养时的最适配方为可溶性淀粉20.0 g·L^(-1)、豆饼粉2.0g·L^(-1)、氯化钙3.0 g·L^(-1)、琼脂粉18.0 g·L^(-1),pH为7,培养温度为32℃。液体培养时的最适配方为可溶性淀粉20.0 g·L^(-1)、蛋白胨2.0 g·L^(-1)、磷酸氢二钾3.0 g·L^(-1),pH为6,培养温度为26℃。栽培试验结果显示其原基分化较快,耳片一致性较好,子实体肥厚、耳形规整,产孢面与野生子实体相同,有明显皱褶,有非常大的应用价值,可作为新种质资源开发和利用。

鲢鱼背肌肌原纤维蛋白自溶与内源组织蛋白酶B,L,H的关系

鲢鱼鱼糜制品在加工过程中容易发生热诱导 (5 0～ 70℃ )的鱼糜凝胶软化 (modori) ,导致鱼糜制品品质下降。为探明原因 ,本研究比较了在加工过程中漂洗前后鲢鱼鱼肉糜中组织蛋白酶B ,L ,H活性的变化 ,结果表明漂洗后仍残留了组织蛋白酶B ,L ,H活性 ,其中组织蛋白酶L活性的残留率最高 ,为 2 5 6 1%± 0 82 %。用SDS PAGE分析了有无E 6 4存在下 ,鲢鱼背肌肌原纤维蛋白自溶过程中 (pH 6 5 ,5 0℃ ) ,肌球蛋白重链相对含量的差异 ,结果显示肌球蛋白重链相对含量的下降趋势与残留的组织蛋白酶活性变化趋势吻合 ;而且E 6 4部分抑制了肌球蛋白重链的自溶。上述结果表明溶酶体半胱氨酸组织蛋白酶在鲢鱼鱼糜凝胶软化中起一定作用 ,而且组织蛋白酶L可能是重要的蛋白水解酶。

鲢鱼CPIs的三种电泳鉴定方法的比较研究

本文对Geltain-substrate-SDS-PAGE反相酶谱法(方法 A)、Native-PAGE反相酶谱法(方法 B)和与papain反应后进行SDS-PAGE法(方法 C)三种电泳方法的鉴定效果、灵敏度进行了对比,确定了鲢鱼卵粗提样中小分子CPIs的最适电泳鉴定方法。结果表明,对于在电泳上活性不稳定的鲢鱼卵小分子CPIs而言,方法 A灵敏度较低,且可能出现假阳性现象;方法 B虽能准确鉴定小分子CPIs的存在,但不能判断分子量。方法 C,即小分子CPIs与papain在37℃下反应5h以上,然后进行SDS-PAGE,抑制剂条带清晰可见,鉴定效果好,且能提供分子量分布信息。此外,尽管荧光底物法和Azocasein法都无法检测到鲢鱼肝胰浓缩粗提液中半胱氨酸蛋白酶抑制活性,但是利用C法,则有效地鉴定了其中CPIs的存在和分子量分布情况。综上所述,方法 C或协同方法 B的电泳鉴定方法,适用于鲢鱼下脚料粗提样品中CPIs的鉴定,效果理想,灵敏度高,操作简便。

鲢鱼和草鱼下脚料中CPIs抑制活性比较及其分子量分布的鉴定

本研究首先确定偶氮酪蛋白（Azocasein）法和荧光合成肽法测定CPIs抑制活性的适宜反应体系,并证实Azocasein法更适合在鲢、草鱼下脚料（卵、皮）粗提过程中监测CPIs的抑制活性,而在层析过程中需采用高灵敏度的荧光合成肽法。Azocasein法测定表明,草鱼卵（349600units、332units/mg）和皮（25600units、87units/mg）中总活和比活均分别显著高于鲢鱼卵（10620units、3.98units/mg）和皮（3726units、14.14units/mg）;同时,草鱼卵中CPIs抑制总活、比活均高于皮;鲢鱼卵中CPIs抑制总活高于皮,但抑制比活则低于皮;此外,根据Sephacryl S-200分子筛层析中活性峰位置,初步判断两种鱼卵和皮组织中均存在高（50~128ku）、低（7~19ku）分子量形式的CPIs,但明胶底物-SDS-PAGE反相酶谱中仅可见高分子CPIs形成的条带,而小于20ku的低分子CPIs均无法得到鉴定。

云南商品牛肝菌中易混淆毒牛肝系统学研究

基于ITS序列的分子系统学与形态分类学方法,对云南商品牛肝菌进行分子系统学研究。研究结果显示,易混淆毒牛肝菌不是一个自然类群,它们镶嵌在牛肝菌目的各分支中;牛肝菌属不是单系群;绿盖裘氏牛肝菌Chiua virens(W.F.Chiu)Y.C.Li&Z.L.Yang、圆花孢牛肝菌Heimioporus retisporus(Pat.&C.F.Baker)E.Horak、黄粉末牛肝菌Pulver-oboletus ravenelii(Berk.&M.A.Curtis)Murrill、紫盖牛肝菌Tylopilus eximius(Peck)Singer和小孢粉孢牛肝菌Tylopilusmicrosporus S.Z.Fu,Q.B.Wang&Y.J.Yao是云南商品牛肝菌中易混淆的5种毒牛肝菌。

剑川县野生菌资源及可持续发展潜力研究

剑川县有丰富的野生菌资源。调查发现该县常见的野生菌有166种,79属,65.7%是菌根菌,其中美味牛肝菌(Boletu edulis)、铜色牛肝菌(B.aereus)、茶色牛肝菌(B.brunneissimus)、灰褐牛肝菌(B.griseus)、松苞菇(Catathe-lasma ventricosum)、松茸(Tricholoma matsutake)、变绿红菇(Russula virescens)、松乳菇(Lactarius deliciosus)、红汁乳菇(L.hatsudake)、鸡油菌(Cantharellus cibarius)、黄鸡油菌(C.aurora)、羊肚菌(Morchella sp.)是主要的贸易真菌。同时在调查中注意到剑川野生菌资源存在过度利用、不科学采集及违规贸易等问题,针对出现的问题提出了改进的方法及可持续发展建议。

鲢鱼(Hypophthalmichthys molitrix)背肌中组织蛋白酶B2的纯化与酶学性质鉴定

对鲢鱼背部白肌中的组织蛋白酶B2，进行了分离纯化及酶学性质的鉴定。目的酶经粗提后，再通过酸处理、硫酸铵分级沉淀、超滤、DEAE-Sephacel、Sephacryl S-100、SP-Sepharose F．F．、Blue-sepharose6 F．F．、Con A-Sepharose等步骤纯化，纯化倍数达到396．5倍。经SDS-PAGE分析，该酶呈现了分子量约为25和20KDa的2条带。组织蛋白酶B2的最适反应温度和pH分别为30-35℃和pH5．5。巯基还原剂DTT、L-Cys、pMe均显著地激活了该酶的活性。50μmol／L的E-64能够完全抑制其活性。Cl^-浓度为100μmol／L以内时，对组织蛋白酶B2起到激活作用，200μmol／L时则表现为抑制作用。25mmol／L的P2O7^4-，即可有效抑制该酶的活性。该纯化酶能够水解Z-Arg—Arg-MCA、Z—Phe-Arg—MCA，但是不能够水解L-Arg-MCA。组织蛋白酶B2水解Z—Arg-Arg—MCA、Z—Phe-Arg—MCA的K。值分别为7．15及226μmol／L，表明Z—Arg—Arg—MCA是该酶的最适底物。

层杯菌属一新记录种(英文)

报道了来自中国的层杯属一新纪录种——黄层杯菌，该菌一般分布在滇中地区，生长在高湿度的阔叶林或混交林下腐木上，丛生。其特征如下：菌盖宽2-8mm，浅杯状到圆盘状。上表面黄色，下表面白色；菌柄长3～10mm，从端部向基部逐渐变细，白色；子囊5．5～6．5μm×154．4～173.3μm，球棍形，含8个孢子，单行排列；于囊孢子3．5～5．0μm×14．5～19．3μm，有隔，不含油滴；侧丝0．8～1．5μm×160～178．2μm，丝状。新记录种附有英文描述和结构图。标本保存于云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所高等真菌研究室。

卷丹百合提取物对4℃有氧冷藏草鱼肉片中优势腐败菌的抑菌效果

首先采用传统的分离方法从4℃有氧冷藏草鱼去皮肉片货架期终点中分离出3株优势菌株,并对其进行鉴定。随后将这3株优势菌分别回接到4℃有氧冷藏草鱼肉片上,判断其致腐能力。最后,采用滤纸片法测定卷丹百合(Lilium lancifolium Thunb.)花叶、花蕾提取物对3株优势腐败菌的抑菌活性。结果表明,4℃有氧冷藏草鱼去皮肉片货架期终点优势腐败菌为腐败希瓦氏菌(Shewanella putrefaciens)、草莓假单胞菌(Pseudomonas fragi)和中间气单胞菌(Aeromonas media),其中腐败希瓦氏菌的致腐能力最强。抑菌实验表明,当加量为20μL时,卷丹百合花叶水提物对腐败希瓦氏菌的抑菌圈直径为32 mm,花蕾60%乙醇提取物对草莓假单胞菌和中间气单胞菌的抑菌圈直径分别达到10 mm和26 mm。因此,可以判断卷丹百合提取物对4℃有氧冷藏草鱼去皮肉片中货架期终点优势腐败菌具有抑菌效果。

鲢鱼卵中两种高分子半胱氨酸蛋白酶抑制因子的纯化与鉴定

以鲢鱼卵为材料,通过匀浆、酸处理和超滤制备半胱氨酸蛋白酶抑制因子(cystine proteinase inhibitors,CPIs)粗提液,进而经Sephacryl S-100分子筛层析、Blue Sepharose 6 Fast Flow染料亲和层析、SP-Sepharose Fast Flow阳离子交换层析、Con A Sepharose 4B亲和层析,获得两种纯化的高分子CPIs,即Con A不吸附部分a-1和吸附部分的糖蛋白a-2。二者分别被纯化了102.62倍和274.28倍,酶活回收率分别为2.02%和1.42%。通过TSK G2000 SWXL凝胶过滤高效液相色谱结合十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳及其反相酶谱法分析,表明a-2及再次经高效液相色谱法回收的a-1在电泳图上均呈单一带,a-2为单一峰,且a-1的分子质量为139 ku,a-2的分子质量为92 ku。二者均能抑制半胱氨酸蛋白酶(木瓜蛋白酶和鲢鱼组织蛋白酶L)但不抑制丝氨酸蛋白酶(胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶)。根据a-1和a-2的分子质量及抑制活性特征和糖蛋白特性,推测二者可能为鲢鱼卵Kininogens的不同形式。

云南省德钦县野生羊肚菌资源初探

通过对云南德钦县羊肚菌资源的调查研究,发现该地区内有羊肚菌8种,其中2种国内外未见报道,同时对其相应分布生态类型作了介绍。

干巴菌病虫害调查及防治研究

介绍了干巴菌侵染性病害1种,非侵染性病害2种,虫害3种,同时对其相应的防治方法作了描述。

野生食用菌资源保护与开发的有效措施—包山养菌

云南省大型野生食用菌资源丰富 ,品质好 ,但近年来由于生态环境的破坏和掠夺式的采摘 ,导致资源急剧减少 ,品质降低。采取包山养菌的形式能较好地解决资源破坏与开发问题。

建鲤组织蛋白酶L的原核表达、纯化鉴定及多克隆抗体的制备

对原核表达的重组建鲤组织蛋白酶L(Cathepsin L,CAT L)蛋白进行尿素洗涤和Ni-NTA亲和层析纯化,该目的蛋白经300 mmol/L咪唑洗脱为单一峰,SDS-PAGE结合TSK-GEL G2000SWxl凝胶过滤高效液相色谱分析表明重组CAT L获得了高度纯化,分子量约28 k D,纯度超过95%。Z-Phe-Arg-MCA底物测活法显示该重组CAT L表现为半胱氨酸蛋白酶活性,能与其内源抑制因子Cystatin以1︰1的摩尔比结合,具有生物学活性。以纯化的重组CAT L蛋白免疫Balb/C小鼠获得抗血清,经ELISA法检测获得的CAT L抗血清效价高于1︰512000;Western blotting鉴定结果表明该抗体具有良好的特异性,能够识别原核表达的重组CAT L蛋白。免疫组织化学分析结果表明,该抗体还能识别建鲤小肠、肝胰脏、脾、背肌和心肌组织表达的内源性CAT L蛋白。因此可利用该抗体从蛋白水平检测CAT L在鱼类不同组织中的表达和分布情况。

小麦Bowman-Birk型蛋白酶抑制因子的克隆表达及其抑制鱼糜凝胶软化的效果研究

为探究重组小麦(Triticum turgidum)Bowman-Birk蛋白酶抑制剂(BBI)抑制活性特征及其对鲢鱼肌原纤维蛋白自溶反应的抑制效果,采用TA克隆技术克隆小麦BBI成熟肽基因片段,并对原核表达的小麦BBI蛋白进行镍亲和层析纯化,利用SDS-PAGE、TSK-GEL G2000SWxl高效液相色谱检测诱导及纯化效果。在测定重组小麦BBI对胰蛋白酶的抑制活性的基础上,进一步通过SDS-PAGE分析了重组BBI对鲢鱼肌原纤维蛋白自溶反应的抑制作用。结果表明,经双酶切鉴定证实成功获得了BBI成熟肽基因片段,该基因与野生二粒小麦BBI相关基因(GenBank登录号EU346892.1)序列相似性为99.63%。目的蛋白在SDSPAGE及TSK-GEL G2000SWxl高效液相色谱分析中,分别表现为单一带和单一峰,产物得到有效纯化,分子量约10.5kD。该重组小麦BBI对胰蛋白酶有明显的抑制活性。添加量5μg·mg-1重组BBI可显著抑制鲢鱼肌原纤维蛋白(尤其是肌球蛋白重链)在pH 7.5,50℃下的自溶。

圆锥小麦地方品种面筋和面团流变学特性研究

为了拓宽小麦品质育种遗传资源，对27份圆锥小麦地方品种的面筋和面团流变学特性进行了分析。结果表明，供试品种间存在较大差异，其面筋指数平均为63．02％，变幅为23．58％～99．78％；湿面筋含量平均为41．19％，变幅为30．21％～49．66％；干面筋含量平均为13．07％，变幅为10．09％～15．77％；蛋白质含量平均为13．80％，变幅为10．11％～16．06％。其粉质仪参数表现为吸水率较高，形成时间、稳定时间和断裂时间较短，公差指数表现一般与形成时间和稳定时间均值分别为3．1min（变幅为1．2～7．5min）和3．9min（变幅为0．6～11．4min）。蛋白质与湿面筋和干面筋含量之间表现为极显著正相关，与形成时间呈显著正相关。面筋各参数相互之间，以及粉质仪各参数相互之间存在不同显著程度的相关，但两类参数之间相关不显著。分析表明圆锥小麦地方品种中可能具有普通小麦品质改良所需的优异基因资源，对于品质育种具有重要利用价值。

蛋白性半胱氨酸蛋白酶抑制因子(CPIs)及在鱼类中的研究进展

本文主要介绍了蛋白性半胱氨酸蛋白酶抑制因子(CPIs),并特别对第一类群(即Cystatins超家族)的结构特征、抑制机制及其多种活性、功能进行了概述;在此基础上,进一步对各种鱼类来源CPIs的纯化、鉴定现状及其在鱼类发育保护、免疫调节、肿瘤抑制及抑菌等方面的潜在活性、功能做以系统的综述,并展望了鱼类CPIs的可能应用前景。