基质金属蛋白酶及其组织抑制物在db/db小鼠糖尿病肾病中的表达和活性

[目的]探讨基质金属蛋白酶(MMP-s)和基质金属蛋白酶抑制物(TIMPs)在db/db小鼠糖尿病肾病发病机制中的作用。[方法]6例db/db小鼠肾组织标本,用蛋白质印迹法检测MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2蛋白的表达,用白明胶酶谱法检测MMP-2和MMP-9活性。[结果]与db/m小鼠相比,db/db小鼠肾脏MMP-2、MMP-9蛋白质的表达分别下降了55.4％和30.1％(P<0.05);而TIMP-1和TIMP-2蛋白质表达分别上升了272.5％和48.8％(P<0.01)。db/db小鼠肾脏MMP-9的活性较db/m小鼠明显下降(85.9％,P<0.001);MMP-2的活性在db/db小鼠和db/m小鼠肾脏中均检测不到。[结论]db/db小鼠肾脏中MMP-s-蛋白表达和活性下降,而TIMPs蛋白表达上升,使细胞外基质降解减少,积聚增多,是db/db小鼠糖尿病肾病主要发病机制之一。

转化生长因子β1对系膜细胞纤溶酶原激活物抑制物1表达的影响

目的观察转化生长因子(TGF)β1对肾小球系膜细胞(GMC)纤溶酶原激活物抑制物(PAI)-1表达的影响,并探讨反应性氧基(ROS)在TGF-β1诱导的PAI-1表达中的作用。方法体外培养大鼠GMC,分别用TGF-β1(2ng/ml)和葡萄糖氧化酶(GO)(10mU/ml)刺激,并用BSO和抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)进行干预处理。采用Western印迹检测PAI-1蛋白表达;RT-PCR和Northern杂交检测PAI-1mRNA表达;合成的荧光素纤溶酶底物测定纤溶酶活性。结果外源性TGF-β1和GO可显著上调大鼠系膜细胞PAI-1蛋白和mRNA的表达并降低纤溶酶活性。BSO可显著增强TGF-β1和GO诱导的系膜细胞PAI-1mRNA的表达;而NAC可显著地逆转由TGF-β1和GO诱导的PAI-1mRNA表达的上调作用。结论TGF-β1可显著上调系膜细胞PAI-1的表达并抑制纤溶酶活性。ROS在TGF-β1诱导的系膜细胞PAI-1表达上调的信号传递途径中可能起了信号传递分子的作用。

血管内皮生长因子调节小鼠系膜细胞基质金属蛋白酶及其组织抑制物的表达

目的 研究血管内皮生长因子(VEGF)对体外培养的小鼠系膜细胞表达基质金属蛋白酶(MMPs)和金属蛋白酶组织抑制物(TIMPs)的调节作用。方法 对体外培养的小鼠系膜细胞应用人重组VEGF孵育12 h,应用蛋白质印迹法检测细胞培养液MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP2的蛋白质水平;应用白明胶酶谱法检测MMP2、MMP9的活性;应用RT-PCR检测系膜细胞TIMP1、TIMP2 mRNA表达。结果 VEGF(10 ng/ml)可提高小鼠系膜细胞MMP2和MMP9蛋白质释放(和对照组相比分别提高43％和34％,P<0.05),MMP2和MMP9活性分别提高17％和26％(P<0.05)。同时,VEGF可呈剂量依赖地下调小鼠系膜细胞TIMP1和TIMP2蛋白质和mRNA的表达,VEGF(25 ng/ml)可减少小鼠系膜细胞TIMP1和TIMP2蛋白质释放分别为43％和67％(P<0.05);并抑制TIMP1和TIMP2mRNA的表达(分别下降41％和59％,P<0.01)。结论 VEGF使系膜细胞MMPs蛋白质表达增加、活性增强,同时下调TIMPs mRNA和蛋白质的表达,可能在增生性肾小球肾炎的发病机制中起一定的作用。