CD_(34)^+儿童急性淋巴细胞白血病人类端粒酶逆转录酶基因表达的研究

目的探讨人类端粒酶逆转录酶(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)基因表达与CD34+儿童急性淋巴细胞白血病的关系和临床意义。方法采集42例ALL患儿骨髓标本,分别进行细胞形态学及细胞化学染色,确定其FAB类型,运用一组相关的单克隆抗体,采用流式细胞术及直接免疫荧光标记技术进行免疫分型,采用吉姆萨G显带技术进行核型分析;同时,采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测其外周血hTERT表达水平。结果儿童急性淋巴细胞白血病CD34+表达阳性率52.38%(22/42),CD34+髓系抗原表达阳性率高CD34-;CD34+的ALLhTERT-mRNA表达水平高于CD34-的ALL,而正常对照组无或低表达。结论CD34+儿童急性淋巴细胞白血病hTERT-mRNA表达上调;hTERT基因表达参与了儿童急性淋巴细胞白血病的发生发展。

四川地区重型β-地中海贫血患儿及双亲基因突变的研究

目的 探讨四川地区重型 β-地中海贫血患儿及其双亲突变基因类型的特点。方法 对 2 7例 β-地中海贫血患儿及双亲采用盐水渗透性试验测定红细胞渗透脆性、碱变性法测定抗碱血红蛋白 (Hb F)、醋酸纤维薄膜电泳比色法测定血红蛋白 A2 (Hb A2 )和氰化高铁血红蛋白法测定 Hb等 β-地中海贫血血液学检查。用常规方法抽提外周血白细胞 DNA,多重等位基因特异聚合酶链反应 (MASPCR)分析其基因类型。结果 2 7例重型 β-地中海贫血患儿及其双亲共 81例标本中检测出最常见的 3种基因突变是 CDl7(A→ T)、CD4 1- 4 2 (- TTCT)、IVS- - 6 5 4(C→ T) ,占总数的 94 .5 4 %。结论 采用 MASPCR法进行基因诊断 ,具有操作简单、快速准确 ,一次可检测多种突变基因型 ,提高了基因诊断率。

急性白血病患儿hTERT基因的表达

目的 探讨人类端粒酶逆转录酶 ( h TERT)基因表达与儿童急性白血病 ( AL)的关系和临床意义。方法 采用逆转录 -聚合酶链反应 ( RT- PCR)方法检测 K5 62白血病细胞株、40例急性白血病患儿和 10例正常对照的 h TERT基因表达。结果 K5 62白血病细胞株、3 0例急性淋巴细胞白血病 ( AL L)患者中 2 3例、10例急性髓系细胞白血病 ( AML)患者中 7例有 h TERT基因表达。h TERT基因表达见于 AL 所有亚型 ,其相对表达水平与 AL 的完全缓解 ( CR)率有相关性 ,相对表达水平≥ 1.0的患儿 CR率低及生存期短。结论 h TERT基因表达与儿童急性白血病发生有关 ,h TERT基因高表达的患者 CR率低、无病生存期短 ,h

急性非淋巴细胞白血病患儿人类端粒酶逆转录酶基因的表达

目的探讨人类端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达与儿童急性非淋巴细胞白血病(ANLL)关系和临床意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测HL-60白血病细胞株、14例ANLL患儿和11例正常对照的hTERT基因表达。结果HL-60白血病细胞株、14例ANLL患儿中11例及健康儿童2例有hTFRT基因表达;hTERT基因表达见于ANLL所有亚型;其表达水平明显高于正常对照,但较K562细胞株低。结论儿童ANLLhTERT-mRNA表达水平上调;hTERT基因表达与儿童ANLL发生发展有关。

hTERT基因表达上调与儿童急性淋巴细胞白血病髓系抗原表达的关系

目的探讨人类端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达上调与儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)髓系抗原表达的关系。方法采集42例ALL患儿的骨髓标本,分别进行细胞形态学及细胞化学染色,确定其FAB类型,运用一组相关的单克隆抗体,采用流式细胞仪及直接免疫荧光标记技术进行免疫分型,采用吉姆萨G显带技术进行核型分析;同时,采用半定量RT-PCR方法检测其外周血hTERT的表达水平。结果儿童ALL髓系抗原表达阳性率26.19%,髓系抗原表达的ALLhTERT-mRNA表达水平高于无髓系抗原表达的ALL,而正常对照组无或低表达hTERT-mRNA。结论伴髓系抗原表达的儿童急性淋巴细胞白血病hTERT-mRNA表达上调。

K562、HL-60细胞端粒酶催化亚单位的表达

目的 探讨RT PCR法分析肿瘤细胞人端粒酶逆转录酶 (hTERT) mRNA表达水平的临床应用价值。方法 以 β actin为内对照 ,采用RT PCR法测定K5 6 2、HL 6 0细胞及正常人外周血的hTERT mRNA表达水平。结果 K5 6 2、HL 6 0细胞hTERT表现出高的表达水平 ,相反 ,正常人外周血无或低表达。结论 RT PCR分析hTERT mRNA表达的方法具有特异性、敏感性高 ,易定量 ,操作简单 ,快速等特点 。

基因治疗遗传性疾病临床试验的研究进展

基因治疗的目的是纠正引起病理改变的突变基因,这一概念十分引人注目,对未来遗传性疾病的治疗将产生重大影响。本文就临床基因治疗X连锁严重联合免疫缺陷病、腺苷脱氨酶缺乏严重联合免疫缺陷病、血友病A、B、慢性肉芽肿病的临床试验的研究进展进行综述。

谈学术沙龙在医学继续教育中的作用

医学继续教育是我国造就高素质、高技能的医疗卫生人才的主要渠道。以讲授为主要形式的传统医学继续教育面临着"新疾病谱的发生"、新理论、新技术等挑战,阻碍了医学继续教育的发展和医疗卫生人才的培养,必须对其进行创新。学术沙龙的主要特征是"平等"、"对话"、"理解"与"宽容"。其作为医学继续教育的一种组织形式,不仅可以加强学术交流和学术争鸣,促进科技创新,还能开拓视野,从整体上提高医疗卫生人才的素质。本文根据我们的实践,就上述问题探讨了学术沙龙在医学继续教育中的作用。

重型珠蛋白生成障碍性贫血患儿基因突变及免疫紊乱的特点

目的探讨重型珠蛋白生成障碍性贫血(β地中海贫血)患儿的基因突变类型及免疫紊乱的特点。方法多重等位基因特异聚合酶链反应(MASPCR)分析其基因类型。采用ELISA方法检测血浆IL6、IFNγ水平;采用免疫比浊法检测血浆IgG、IgA、IgM水平。结果重型β地中海贫血25例患儿中最常见的3种基因突变是CD17(A→T)、CD4142(-TTCT)、IVSⅡ654(C→T),占总数的94%。血浆IL6、IFNγ水平均明显高于正常对照(P均<0.05),IgG也明显高于正常对照组(P=0),而IgA、IgM则无明显变化(P>0.05)。结论MASPCR法进行基因诊断,具有操作简单、快速准确,一次可检测多种突变基因型,提高了基因诊断率。重型β地中海贫血患儿免疫系统中存在多种成分的免疫缺陷。

急性溶血性贫血患儿人类骨髓端粒酶催化亚单位的表达

目的探讨急性溶血性贫血患儿人类骨髓端粒酶催化亚单位（hTERT）的表达及其与外周静脉血Hb水平的关系。方法急性溶血性贫血患儿15例。男13例,女2例;年龄5.5-11.0岁。其中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PD）缺乏症患儿10例;药物诱导性溶血性贫血患儿5例。选择同期本院血液/肿瘤科病房确诊为上呼吸道感染所致的粒细胞减少症、骨髓检查正常患儿10例为对照组;4株K562细胞为阳性对照。采集G-6-PD缺乏症、药物诱导性溶血性贫血和粒细胞减少症患儿外周静脉血,全自动血液分析仪XE2100检测各组患儿外周静脉血Hb水平,采用Zinkham法检测G-6-PD缺乏症和对照组患儿血G-6-PD活性,分析二组患儿血G-6-PD活性的差别。采集急性溶血性贫血组和对照组患儿胸骨骨髓,采用半定量反转录-聚合酶链反应检测其骨髓和阳性对照K562细胞株的hTERT的相对表达水平,比较急性溶血性贫血组与对照组患儿、阳性对照K562细胞株hTERT相对表达水平的差异。常规检测急性溶血性贫血患儿外周血Hb水平。采用Pearson直线相关分析急性溶血性贫血患儿骨髓hTERT表达水平与外周血Hb水平的关系。结果与对照组比较,G-6-PD缺乏症患儿血G-6-PD活性明显下降（t=8.373P=0）。急性溶血性贫血患儿骨髓hTERT相对表达水平显著高于对照组患儿（t=6.052P=0）,但明显低于K562细胞株（t=9.893P=0）。急性溶血性贫血患儿骨髓hTERT表达水平与其外周血Hb水平呈负相关（r=-0.888P=0）。结论急性溶血性贫血患儿急性溶血时,低水平Hb可在一定范围内上调骨髓hTERT表达水平。

儿童血清钙检测结果分析

为研究儿童生长发育与钙的关系 ,采用Varian 2 50型原子吸收分光光度计测定了 72 7例儿童血清中Ca含量 ,对其结果进行了统计学分析。结果表明 ,血清Ca为 2 2 4± 0 16mmol/L ,低于正常值 2 2 5～ 3mmol/L ,低钙发生率为 4 1 13%。本研究结果为临床提供参考 ,指出在整个儿童期均应注意补充钙。

端粒酶在急性白血病中的研究进展

端粒酶实质上是一种逆转录酶，能以自身ＲＮＡ为模板，合成（ＴＴＡＧＧＧ）ｎ重复序列，维持肿瘤细胞端粒的长度，使其成为永生细胞，具有无限增殖能力，在肿瘤形成和发展中起重要作用。本文重点讨论端粒酶与急性白血病临床特征的关系，研究发现端粒酶活性水平与急性白血病的高危因素和预后密切相关，检测端粒酶活性水平有利于监测病情的变化，指导制定合理的化疗方案。

729例儿童血清微量元素测定结果分析

目的研究儿童血清微量元素。方法采用美国 Ｖａｒｉａｎ ２５０型原子吸收分光光度计测定 ７２９例不同年龄组微量元素钙（Ｃａ）、铁（Ｆｅ）、锌（Ｚｎ）、铜（Ｃｕ）、镁（Ｍｇ），对其结果进行统计学分析。结果不同年龄组各种血清微量元素结果不相同，其中各年龄组血清钙均偏低，低钙发生率为４１．１３％，其次是铁、铜、锌、镁；而高铁（２４．４４％）和高铜（１０．１５％）的发生率较低铁（１５．２６％）和低铜（７．５４％）发生率高。结论在儿童保健中应科学的合理的补充微量元素。

儿童急性淋巴细胞白血病抗原错译表达的临床意义

目的 研究儿童急性淋巴细胞白血病 (ALL)抗原错译表达的临床意义。方法 对 5 4例ALL患儿的骨髓标本分别进行细胞形态学及细胞化学染色 ,确定其FAB类型 ,运用一组相关的单克隆抗体 ,采用流式细胞仪及直接免疫荧光标记技术进行免疫分型 ,采用吉姆萨G显带技术进行核型分析。结果 儿童ALL5 4例髓系抗原阳性表达率为 2 9.63 % ,其中CD13为 2 5 .93 % ,CD33为 2 0 .3 7% ,CD14 为 11.11%。T ALL和B ALL髓系抗原阳性表达差异无统计学意义 ( 3 0 .77%vs 2 9.2 7% P =0 .918)。CD34 表达阳性ALL髓系抗原阳性表达率明显高于CD34 表达阴性ALL髓系抗原阳性表达率 ( 40 .63 %vs 13 .64 % P =0 .0 3 9) ;ALL髓系抗原阳性表达与髓系抗原阴性表达的完全缓解 (CR)率差异无统计学意义 ( 81.2 5 %vs94.74% P =0 .148) ;但生存率曲线比较分析 ,ALL髓系抗原阳性表达的生存时间短 (P =0 .0 3 1)。结论 儿童ALL的抗原错译表达率为2 9.63 % ;CD34 阳性的ALL抗原错译表达率明显高于CD34 表达阴性的ALL抗原错译表达率 ;ALL髓系抗原阳性表达的生存时间短 ;

脓毒症相关性脑病大鼠海马区神经细胞自噬

目的:探讨脓毒症相关性脑病(sepsis-associated encephalopathy,SAE)大鼠海马区神经细胞自噬现象及微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达。方法:盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP)建立脓毒症大鼠模型。60只30日龄健康雄性Wistar大鼠被随机分为假手术组(10只)和CLP组(50只)。CLP后12 h监测大鼠脑电图(electroencephalogram,EEG)及体感诱发电位(somatosensory evoked potential,SEP),并进行神经生物学评分。根据大鼠是否发生SAE将CLP组大鼠再分为SAE(+)组和SAE(–)组。HE染色观察大鼠海马区病理学改变;电子显微镜观察大鼠海马区神经细胞自噬的超微结构;Western印迹检测LC3-I和LC3-II蛋白的表达。结果:50只大鼠在CLP后12 h内死亡5只,存活45只大鼠中有16只出现神经行为学、EEG及SEP改变,诊断为SAE,其发病率为35.56%(16/45)。与假手术组和SAE(–)组比较,SAE(+)组大鼠在CLP后12 h时α波的频率明显减少,δ波增加,P1振幅下降,P1波和N1波潜伏期延长(P<0.05)。CLP后12 h时SAE(+)组大鼠海马区细胞明显水肿,锥体细胞明显减少,甚至溶解,细胞排列紊乱,而假手术组和SAE(–)组大鼠海马区细胞形态正常、层次清楚。透射电子显微镜观察表明:SAE(+)组大鼠海马区细胞结构紊乱,可见自噬泡、颗粒状基质和方形或长方形晶体,自噬泡内含有溶酶体等细胞器,假手术组和SAE(–)组大鼠海马区组织细胞无自噬泡形成。SAE(+)组大鼠在CLP后12 h,海马区神经细胞LC3-II/LC3-I值明显高于假手术组和SAE(–)组(P<0.05)。结论:SAE大鼠海马区神经细胞存在细胞自噬现象,LC3-II/LC3-I值明显升高。

雷帕霉素逆转急性淋巴细胞白血病CEM-C1细胞对糖皮质激素耐药的研究

目的探讨雷帕霉素是否可以逆转地塞米松(DEX)耐药的急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞株CEM-C1细胞的GC耐药性。方法以儿童T-ALL GC耐药株CEM-C1和GC敏感株CEM-C7为研究对象,MTT法检测不同浓度(1 000 ng/ml、100 ng/ml、10 ng/ml、1 ng/ml和0.1 ng/ml)雷帕霉素及其联合1μmol/L地塞米松(DEX)作用后对细胞增殖的影响;细胞离心甩片瑞氏染色法观察细胞形态学变化;Annexin V/PI染色法检测对细胞凋亡的影响;PI染色法检测细胞周期改变。结果①不同浓度雷帕霉素作用于CEM-C1和CEM-C7细胞,对细胞生长的抑制作用均呈时间和浓度依赖性,联合应用1μmol/L DEX后,这一生长抑制作用显著增强,24 h IC50约为100 ng/ml。②以终浓度100 ng/ml雷帕霉素作用于CEM-C1和CEM-C7细胞18、24及48 h,细胞形态学与对照相比均无明显变化;Annexin V-PI双染流式细胞术检测均未见明显凋亡;细胞周期测定发现两种细胞均阻滞于G1期,S期细胞比例均明显降低。③以终浓度100 ng/ml雷帕霉素联合1μmol/L DEX作用于CEM-C1细胞后,瑞氏染色发现CEM-C1细胞于24 h出现细胞核改变,48 h出现明显凋亡;Annexin V/PI双染细胞凋亡检测显示细胞凋亡率较单用雷帕霉素及DEX时显著增加,18 h时早期凋亡细胞开始增多,24 h时最为明显;细胞周期测定显示S期细胞比率较单用雷帕霉素时显著降低,而G1期细胞显著增多。结论雷帕霉素能够逆转CEM-C1细胞对GC的耐药性,其机制有待进一步深入研究。