人脂肪源间充质干细胞治疗ABO血型不合造血干细胞移植后的顽固性单纯红细胞再生障碍性贫血2例(英文)

回顾性分析2004-04/2006-02河南省血液病研究所收治的2例接受异基因造血干细胞移植后并发单纯红细胞再生障碍性贫血的患者,病例1为一处于第2次完全缓解期的25岁女性急性淋巴细胞白血病患者;病例2为一处于第2次完全缓解状态的16岁女性急性髓细胞白血病患者。均经中心静脉输入脂肪源间充质干细胞进行治疗,剂量为1.0×106/kg。结果2例接受脂肪源间充质干细胞治疗的患者病情很快得以缓解,且均无明显不良反应出现。提示应用脂肪源间充质干细胞治疗ABO血型不合造血干细胞移植后出现的顽固性单纯红细胞再生障碍性贫血有一定的疗效。

人肝癌特异性EB病毒载体-p^(EBAF)介导hGM-CSF基因的转移及表达

目的 :探索人粒细胞 -巨噬细胞集落刺激因子 (hGM -CSF)基因在肝癌细胞中特异性表达的新途径。方法 :构建 pEBAF/hGM -CSF基因克隆 ,用脂质体转染法将它分别导入分泌甲胎蛋白 (AFP)的肝癌细胞株HepG2和不分泌APF的细胞株SMMC772 1,构建两转基因的细胞克隆HepG2 /hGM -CSF、SMMC772 1/hGM-CSF ,用MTT比色法测定细胞上清中hGM -CSF活性。结果 :HepG2 /hGM -CSF细胞上清hGM -CSF活性平均为 46 .5ng/ml/10 6/2 4h ,SMMC772 1细胞上清中无明显hGM -CSF活性。结论

成人脂肪源Flk1^+CD31^-CD34^-细胞体外定向诱导分化为胰岛样细胞观察

目的:体外定向诱导成人脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞向胰岛样细胞分化。方法:首先将成人脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞培养在含适当浓度的B27、bFGF及EGF等因子的培养基(诱导液1)中诱导6d,接着更换诱导培养基,用含适当浓度的β细胞调节素、尼克酰胺等高糖无血清培养基(诱导液2)诱导细胞向胰岛样细胞分化,诱导前后用RT-PCR法检测细胞nestin、神经元素3(ngn3)、胰岛素启动因子1(IPF-1)、胰岛素、胰高血糖素基因的表达;免疫组织化学法检测nestin、胰岛素、胰高血糖素、生长抑素抗原的表达;放射免疫分析法检测细胞胰岛素分泌情况。结果:成人脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞经诱导液1诱导6d后可分化成nestin+的祖细胞;继续用诱导液2诱导6d后变圆的细胞逐渐增多,并聚集成团,免疫荧光结果证实经2阶段诱导后的细胞表达胰岛素、胰高血糖素、生长抑素等内分泌激素,放射免疫分析结果表明诱导的胰岛样细胞团可以分泌胰岛素。结论:成人脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞具有胰腺干、祖细胞的固有特征,极有可能作为种子细胞用以糖尿病的细胞治疗。

Ⅰ-Ⅲ期中度侵袭性非何杰金淋巴瘤序贯化疗观察

目的：探讨初治的Ⅰ～Ⅲ期中度侵袭性非何杰金淋巴瘤有效的化疗方案。方法：选择Ⅰ～Ⅲ期中度侵袭性非何杰金淋巴瘤患者182例，随机等分为A、B2组。A组采用CHOP方案化疗8个周期，实际完成73例；B组前4个周期采用CHOP方案，后4个周期采用DICE方案化疗，实际完成69例。2组患者化疗结束后均根据具体情况给予放疗。比较2组完全缓解（CR）率及1a、2a、3a、4a总生存率。结果：A组化疗结束后CR率为57．5％，1a总生存率86．3％，2a总生存率61．0％，3a总生存率48．8％，4a总生存率31．0％。B组化疗结束后CR率为66．7％，1a总生存率87．0％，2a总生存率69．8％，3a总生存率64．3％，4a总生存率56．3％。2组比较，CR率及1a、2a、3a总生存率差异均无统计学意义（P均〉0．05），4a总生存率差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：Ⅰ-Ⅲ期巾度侵袭性非何杰金淋巴瘤患者采用CHOP方案4个周期、DICE方案4个周期序贯化疗赦单用CHOP方案8个周期化疗的4a总生存率有明短提高。

四环素抗性表型筛选外源基因高效表达克隆

目的 :应用四环素抗性表型从外源基因的cDNA文库中筛选高效表达克隆。方法 :将四环素抗性基因(TetR)克隆到载体pBV2 2 0 中构建筛选载体pBV2 2 3 ;根据氨基酸密码子的简并性 ,在保持原有氨基酸序列不变的情况下 ,人工合成外源基因的cDNA 5′端简并引物库 ,以hGM CSF基因为例进行筛选。把hGM CSFcDNA简并文库克隆到pBV2 2 3 中的TetR 上游位置 ,构建pBV2 2 3 /hGM CSF克隆文库 ,导入大肠杆菌DH5α中 ,构建转基因的细菌文库 ,在不同质量浓度 (2 0mg/L ,40mg/L ,5 0mg/L ,6 0mg/L)的四环素培养基中培养。结果 :从高浓度四环素培养基中获得高效表达的pBV2 2 3 /hGM CSF克隆 ,测序结果显示该克隆的hGM CSFcDNA 5′端序列与天然序列比较有 7个碱基发生突变 ,且符合实验设计的要求。通过基因重组 ,构建成最终的高效表达克隆pBV2 2 0 /hGM CSF ,其表达hGM CSF的量占细菌总量的 18% ,较原表达水平提高 80 %。结论 :可通过四环素抗性筛选系统筛选外源基因的高效表达克隆。

非清髓异基因外周造血干细胞移植治疗白血病疗效观察

目的探讨非清髓性异基因外周血造血干细胞移植(NAPBSCT)治疗年龄较大的白血病患者安全性和疗效。方法采用NAPBSCT治疗6例45～65岁白血病患者,其中急性淋巴细胞白血病1例,淋巴瘤细胞白血病2例,急性粒细胞白血病1例,慢性粒白血病2例。以FAC为预处理方案,氟拉达宾(Flud)50mg/d(-6d～-2d)(以造血干细胞输注当日为0d,输注前为"-",输注后为"+"),抗淋巴细胞免疫球蛋白(ALG)15mg/(kg.d)(-6～-2d),环磷酰胺(CTX)30mg/(kg.d)(-4～-3d)。于+30d进行第1次供者淋巴细胞输注,每4周1次,共6次。输注的供体淋巴细胞数由5×104/kg逐渐增加至1.5×108/kg。结果1例患者于移植后56天死于急性移植物抗宿主病(aGVHD),1例患者于移植后81天死于肺部真菌感染,其余4例患者目前均存活,最长的1例已存活达35个月。6例患者在移植早期均形成混合性嵌合体和血液学部分缓解,供体淋巴细胞输注后有3例患者形成供体型完全嵌合体,并达到血液学完全缓解。结论非清髓性外周血造血干细胞移植治疗年龄较大的白血病患者较为安全且疗效较好。

泰索帝联合异环磷酰胺、顺铂治疗晚期非小细胞肺癌

目的 :研究泰索帝联合异环磷酰胺、顺铂治疗晚期非小细胞肺癌 (NSCLC)的临床疗效和不良反应。方法 :第 1天用泰索帝 6 0mg/m2 ,静脉滴注 3h ,应用泰索帝治疗前给予抗过敏治疗 ,第 2～ 4天给予异环磷酰胺 1.2 /m2 ,顺铂 30mg/m2 ,2 1天～ 2 8天为一周期 ,共用 3周期。结果 :完全缓解 (CR) 8.3% ( 1/12 ) ,部分缓解 (PR) 5 8.3% ( 6 /12 ) ,Ⅲ°～Ⅳ°骨髓抑制 2 5 % ( 3/12 )。结论 :泰索帝联合异环磷酰胺、顺铂治疗晚期非小细胞肺癌的有效率高 ,重度骨髓抑制的发生率也较高。

人脐带和骨髓源间充质干细胞生物学特征的对比研究

为了对比人脐带组织源间充质干细胞(UC-MSC)与骨髓源间充质干细胞(BM-MSC)的生物学特性,从足月胎儿脐带组织和成人骨髓中分离出间充质干细胞(MSC)。用有限稀释法、流式细胞术、倒置显微镜检及RT-PCR等方法检测UC-MSC和BM-MSC的分离成功率、细胞产量、成纤维细胞集落形成单位(CFU-F)、增殖特性、免疫表型和多向诱导分化能力等并对比性研究二者的生物学特性。结果表明,UC-MSC和BM-MSC的分离成功率均达100%;虽然由脐带组织中分离的有核细胞数低于骨髓(1×106/cmvs5.5×107/ml)(p=0.0002),但在培养第14天由脐带和骨髓中得到的贴壁细胞数无差异(8.6×105/cmvs8.4×105/ml)(p>0.05);UC-MSC形态、大多数分子表型、细胞周期状态、脂肪和骨诱导分化能力与BM-MSC相似,但UC-MSC的CFU-F比例(1∶1609±0.18)高于BM-MSC的CFU-F比例(1∶35700±0.01)(p<0.05)。此外,UC-MSC具有比BM-MSC更强的增殖能力(p<0.05)。UC-MSCHLA-ABC和CD106分子表达低于BM-MSC(p<0.05)。结论:脐带组织源间充质干细胞产量和绝大多数生物学特征与BM-MSC的相似,且具有比BM-MSC更高的增殖能力、较低的HLA-ABC和HLA-DR表达,UC-MSC有望成为BM-MSC理想的替代来源。

一种基于三维激光点云建模的技术方案

随着数字化城市建设的推进,大规模建筑物需要完成三维模型的工作,传统根据全站仪采集数据制作模型的方法效率低下,特别是针对复杂建筑、煤化厂、炼化厂等厂区装置进行建模,显得更加困难。本文提出了利用三维激光仪扫描点云数据进行三维建模的方案,可以大大缩短外业数据采集的时间,减少外业工作量。

成人脂肪源多能干细胞的分离与鉴定

目的:分离人脂肪源干细胞,并检测其多能性。方法:用淋巴细胞分离液梯度分离得到低密度成人脂肪源单个核细胞后,用免疫磁珠除去CD45+及GlyA+细胞,通过极限稀释法获得单克隆细胞,体外扩增并鉴定其生物学特性。结果:分离纯化得到的单克隆源细胞体外传35代,超过92%的细胞仍处于细胞周期的G0/G1期;细胞倍增时间约为30h;细胞的主要表型一直保持为:Flk1+、CD34-、CD45-、CD31-、GlyA-、vWF-、HLAⅠ类抗原-及HLA-DR-;该单克隆源扩增细胞体外维持着自我更新及向成骨细胞、脂肪细胞、神经细胞和肝上皮样细胞分化的潜能。结论:该脂肪源单克隆细胞属于多能干细胞,极有可能作为一种理想的种子细胞,用于治疗一些遗传及退行性疾病。

亚叶酸钙/氟尿嘧啶、顺铂3种方案治疗晚期胃肠道腺癌

目的 :观察两种剂量的亚叶酸钙 (CF 2 0mg/m2 ,2 0 0mg/m2 )、两种给药方法的氟尿嘧啶 (5 FU ,持续灌注和每天静滴 2小时 )与顺铂 (DDP 2 0mg/m2 )组成 3种方案分别治疗晚期胃肠道腺癌的临床疗效及不良反应。方法 :将 1999年 1月～ 2 0 0 0年 11月住院治疗的晚期胃肠道腺癌 36例患者随机分为A、B两组 ,回顾性分析 1997年 4月～ 1998年 12月住院治疗的 2 9例同种患者作为对照组C组。A组 :CF 2 0 0mg/m2 ,静滴 2小时 ,每天 1次 ,连用 5天 ;5 FU 3g/m2 ,持续静脉灌注 5天 (加入Baxter泵内 ) ,DDP 2 0mg/m2 ,静滴 2小时 ,每天 1次 ,连用 5天。B组 :CF 2 0mg/m2 ,用法同A组 ;5 FU、DDP剂量与方法同A组。C组 :CF 2 0 0mg/m2 ,用法同A、B组 ;5 FU 6 0 0mg/ (m2 ·d) ,用法同CF ;DDP方法同A、B组。以上方案每 3周为 1周期 ,连续 3个周期后评价疗效及不良反应。结果 :A组 (n =2 0 )胃癌 8例、大肠癌 12例 ,有效率 (CR +PR)分别为 5 0 %(4 / 8)、41.7%(5 / 12 ) ;B组 (n =16 )胃癌7例、大肠癌 9例 ,有效率 (CR +PR)分别为 42 .9%(3/ 7)、44 .4%(4 / 9) ;C组 (n =2 9)胃癌 14例、大肠癌 15例 ,有效率 (CR +PR)分别为 35 .7%(5 / 14)、40 %(6 / 15 )。毒副反应 :A、B两组血液毒性、胃肠道反应及肾。

自体外周血造血干细胞支持下大剂量化疗治疗恶性肿瘤

目的 :观察自体外周血造血干细胞 (autologousperipheralbloodstemcell,APBSC)支持下大剂量化疗(high dosechemotherapy ,HDC)治疗恶性肿瘤 (malignanttumor ,MT)的临床疗效及安全性。 方法 :从 1999年 10月起 ,对住院治疗的 16例高危及复发的非霍奇金淋巴瘤 (non Hodgkin’slymphoma ,NHL)、8例高危乳癌 (breastcan cer,BC)、1例多发性骨髓瘤 (multiplemyeloma ,MM)患者 ,常规治疗 4～ 6个周期后 ,行APBSC动员及采集 ,然后行HDC ,其中 1例MM行自体CD34+ 细胞移植。HDC方案 :NHL为CBV ,CTX 12 0mg/kg ,BCNU 6 0 0mg/m2 ,VP 1690 0mg/m2 ;BC为CTCb ,CTX 5 0 0 0mg/m2 ,TSPA 70 0mg/m2 ,CBP 90 0mg/m2 ;MM为HD Mel2 0 0mg/m2 。对未获CR的NHL及部分高危BC给予病灶局部放疗。结果 :16例NHL包括初治 10例、复治 6例 ,分别用CHOP、DICE方案化疗 ,获CR 9例 ,PR 7例 ,HDC后CR 9例仍为 ,PR 7例获CR 3例 ,CR率 4 2 .9% (3/ 7) ,4例仍为PR。8例高危BC术后患者 ,CAF方案化疗 4个周期后 ,获CR 7例 ,HDC后仍为CR ,1例采集APBSC后 ,出现多发骨转移 ,放弃大剂量治疗。 1例MM ,VAD方案化疗 4个周期后为PR ,HDC后为CR。造血功能重建 :移植后中性粒细胞 (ANC)≥ 1.0× 10 9L-1所需要的中位时间为 10 (+8～ +14 )d ;

培门冬酶治疗儿童急性淋巴细胞白血病临床观察

目的探讨培门冬酶在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)中应用的疗效及安全性。方法 62例初发ALL患儿,均按ALL-XH-99方案进行治疗。对照组34例采用VDLP方案(长春新碱+柔红霉素+左旋门冬酰胺酶+泼尼松)进行诱导缓解治疗和巩固强化治疗;试验组28例将前方案中左旋门冬酰胺酶改为培门冬酶,余不变。比较2组临床疗效和安全性。结果试验组的完全缓解率为93%,对照组为91%,无显著差异(P>0.05)。试验组2年无进展生存率为75%,总生存率为89%;对照组2年无进展生存率为71%,总生存率为85%,差异均无显著意义(P>0.05)。试验组肝功能损害发生率(17%)低于对照组(56%),差异有显著意义(P<0.05),且试验组未出现严重过敏反应发生。结论培门冬酶在治疗儿童ALL中具有与左旋门冬酰胺酶相当的疗效和较低的不良反应。

XIAP和XAF1在急性白血病中的表达及其意义

目的:研究急性白血病(AL)患者中凋亡抑制蛋白XIAP和XIAP相关因子1(XAF1)的表达及其临床意义。方法:以86例AL患者为研究对象,其中初诊未治患者56例,治疗后完全缓解期(CR)患者22例,缓解后复发患者8例,应用RT-PCR方法检测骨髓细胞中XIAP mRNA和XAF1mRNA表达。对照组为20名门诊非恶性血液病患者。结果:对照组、初治组、缓解组和复发组的XIAPmRNA平均表达水平之间比较,差异具有显著性(F=58.77,P<0.01);对照组的XIAPmRNA平均表达水平为0.29±0.13,明显低于AL初治患者(0.98±0.30)(P<0.01)和缓解组(0.45±0.17)(P<0.05);缓解组的平均表达水平明显低于初治组(P<0.01);复发组的XIAP mRNA平均表达水平最高(1.23±0.30),不仅明显高于对照组和缓解组(P<0.01),也高于初治组(P<0.05)。对照组的XAF1mRNA的阳性表达率为100%,明显高于初治组(51.79%)(P<0.01)和缓解组(77.27%)(P<0.05);初治组和复发组的阳性表达率(25%)明显低于缓解组(P<0.05),但初治组与复发组无显著性差异(P>0.05)。XIAP mRNA和XAF1mRNA表达在初治AML和ALL组比较均无显著性差异(P>0.05)。结论:XIAP异常高表达和XAF1异常低表达可能在急性白血病发病和病情进展中起重要作用,为AL的治疗提供了新思路。

表达产物可用IMAC快速纯化的原核表达载体的组建与应用

以原核高效表达载体ｐＢＶ２２０为骨架载体，采用互补寡核苷酸插入法在ｐＢＶ２２０多克隆位点的上游插入了起始密码子和６组氨酸编码序列，将此新质粒命名为ｐＢＶ２２２，以此载体表达的目的蛋白在Ｎ段带有Ｈｉｓ６尾以利于ＩＭＡＣ层析快速纯化目的蛋白，酶切及核苷酸序列分析验证了我们的设计。将ＩＬ２和ＧＭＣＳＦｃＤＮＡ克隆入ｐＢＶ２２２载体中，表达的目的蛋白与预期的分子量相同，表达产物以包涵体的形式存在，表达量比非融合蛋白有明显的提高，且这种融合蛋白保留ＧＭＣＳＦ的生物学活性。表达菌体直接用６ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍裂解或首先分离包涵体之后盐酸胍裂解，上清直接ＩＭＡＣ层析，以阶段性或线性ｐＨ梯度洗脱特异的目的蛋白。

NK/T细胞淋巴瘤患者中血浆EB病毒含量检测及其临床意义

目的探讨外周血中EB病毒检测在NK/T细胞淋巴瘤中的预后意义。方法统计本院治疗的结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤患者56例,应用荧光定量PCR技术检测外周血中游离EBV-DNA拷贝数,将血浆EBA/DNA含量检测>0 copies/ml为阳性,分别比较阳性组患者和阴性组患者在疾病分期、B症状以及疗效之间的差异。结果 45例阳性患者中有29例(64.4%)为晚期(Ⅲ/Ⅳ期)患者,11例阴性患者中3例(27.3%)为晚期(Ⅲ/Ⅳ期)患者,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);阳性组中伴有B症状者27例,明显高于阴性组患者的2例(P<0.01)。阳性组患者中达CR者17例(37.8%),低于阴性组患者中达CR者8例(72.3%),两组患者差异有统计学意义(P<0.01)。阳性组患者在3年无病生存率及总生存率方面均低于阴性组(3年无病生存率42.2%VS 72.7%,总生存率48.9%VS 81.8%,P<0.05)。结论 NK/T细胞淋巴瘤患者外周血中EB病毒检测具有一定的预后指导意义。

BEAC预处理自体造血干细胞移植治疗淋巴瘤的疗效观察

0引言 恶性淋巴瘤（ML）是淋巴系统常见的恶性肿瘤,对放化疗敏感,常规治疗可使60%的霍奇金病（Hodgkin’s disease,HD）和30%～50%的非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin’s disease,NHL）患者得到治愈或长期无病生存,但对恶性度高、耐药及难治的ML疗效差。有研究显示,初治侵袭性淋巴瘤,

异基因造血干细胞移植中嵌合体的STR-PCR定量检测

目的:研究异基因造血干细胞移植后供者单个核细胞、CD3+T细胞、CD15+粒细胞植入情况。方法:采集22例清髓性外周血干细胞移植患者移植前及移植后不同时间的骨髓标本,应用免疫磁珠进行CD3+T细胞、CD15+粒细胞分选,常规提取DNA,PCR扩增后,进行毛细管电泳,确定基因位点及峰面积,计算供者嵌合率。结果:22例患者均在中位时间+12d(+9d～+15d)造血恢复。骨髓单个核细胞在+7d时供者嵌合率为70%,+14d供者嵌合率均超过90%,+21d和+28d供者嵌合率均超过95%以上。CD15+粒细胞在+7d时嵌合率为40%,在+14d、+21d和+28d供者嵌合率>95%。CD3+T细胞在+7d、+14d、+21d和+28d供者嵌合率分别为65%、80%、84%和90.9%。移植后早期完全嵌合组急性GVHD发生率高于混合嵌合组。结论:在+28d3群细胞均可达到供者完全嵌合状态。定量检测对判断早期植入、预测复发,指导临床干预治疗具有重要意义。