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蜜蜂TPI基因克隆与生物信息学预测 被引量:4
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作者 王琦 李玮妮 王荣 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期108-113,共6页
利用电子克隆方法获得蜜蜂(Apis mellifera)磷酸甘油醛异构酶(triosephosphate isomerase,TPI)基因,并采用生物信息学方法对该基因编码蛋白从等电点、疏水性/亲水性、二级结构等进行了预测,以及试验验证,结果表明蜜蜂TPI基因全长为1 768... 利用电子克隆方法获得蜜蜂(Apis mellifera)磷酸甘油醛异构酶(triosephosphate isomerase,TPI)基因,并采用生物信息学方法对该基因编码蛋白从等电点、疏水性/亲水性、二级结构等进行了预测,以及试验验证,结果表明蜜蜂TPI基因全长为1 768 bp,具有完整的开放阅读框架(ORF),并得到了试验证实。 展开更多
关键词 蜜蜂 电子克隆 磷酸甘油醛异构酶 生物信息学
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慢病毒介导雌激素受体β在乳腺癌细胞中的高表达抑制上皮细胞间质转化相关基因的表达 被引量:1
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作者 李玮妮 陈立涵 +5 位作者 程龙 付洁 林亚红 刘婕 张浩 叶棋浓 《生物技术通讯》 CAS 2013年第5期624-627,共4页
目的:建立稳定高表达雌激素受体β(ERβ)蛋白表达的乳腺癌ZR75-1细胞株,检测其对上皮细胞间质转化(EMT)相关基因的影响。方法:将编码人ERβ的cDNA序列插入慢病毒表达载体pCDH-EF1-MCS-T2A-Puro,将其与慢病毒包装辅助质粒共转染293T细胞... 目的:建立稳定高表达雌激素受体β(ERβ)蛋白表达的乳腺癌ZR75-1细胞株,检测其对上皮细胞间质转化(EMT)相关基因的影响。方法:将编码人ERβ的cDNA序列插入慢病毒表达载体pCDH-EF1-MCS-T2A-Puro,将其与慢病毒包装辅助质粒共转染293T细胞后收集病毒上清,感染乳腺癌ZR75-1细胞,经嘌呤霉素筛选后获得稳定高表达含Myc标签的人ERβ的混合细胞集落,以及作为对照组整合有对照慢病毒载体pCDH-EF1-MCS-T2A-Puro的混合细胞集落,提取细胞蛋白,用Myc抗体检测Myc-ERβ融合蛋白的表达,同时检测EMT相关基因Snail、E-Cadherin、N-Cadherin的表达水平和GSK-3β的磷酸化水平。结果:建立了稳定高表达Myc-ERβ融合蛋白的乳腺癌细胞株,和对照组相比,Myc-ERβ高表达抑制EMT相关蛋白N-cadherin和Snail的表达,增强E-cadherin分子的表达,抑制GSK-3β磷酸化水平。结论:建立了Myc-ERβ高表达的乳腺癌细胞株,发现ERβ高表达抑制EMT相关分子的表达,为深入研究分子在乳腺癌中调控的机制奠定了基础。 展开更多
关键词 上皮细胞间质转化 雌激素受体 乳腺癌
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组蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及其自激活作用检测
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作者 李玮妮 李法曾 +5 位作者 张浩 陈立涵 程龙 徐小洁 刘婕 叶棋浓 《生物技术通讯》 CAS 2013年第2期165-168,共4页
目的:构建组蛋白H2A、H2B、H3、H4的酵母双杂交诱饵载体,检测其在酵母细胞中的表达和自激活活性,为应用酵母双杂交系统筛选与组蛋白相互作用的蛋白奠定基础。方法:扩增H2A、H2B、H3、H4蛋白基因编码区cDNA序列,克隆至酵母表达载体pGBK-T... 目的:构建组蛋白H2A、H2B、H3、H4的酵母双杂交诱饵载体,检测其在酵母细胞中的表达和自激活活性,为应用酵母双杂交系统筛选与组蛋白相互作用的蛋白奠定基础。方法:扩增H2A、H2B、H3、H4蛋白基因编码区cDNA序列,克隆至酵母表达载体pGBK-T7中,再将其转化至酵母细胞AH109中,提取酵母总蛋白,检测各种组蛋白的表达,并检测表达的组蛋白在酵母细胞中对报告基因有无自激活作用。结果:将H2A、H2B、H3、H4基因的cDNA克隆至酵母表达载体pGBK-T7中,其中组蛋白H4得到正确表达,且对报告基因LacZ、HIS3、Ade无激活作用。结论:可以利用酵母双杂交系统筛选与H4相互作用的蛋白质。 展开更多
关键词 组蛋白 酵母双杂交 表观遗传
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cDNA Cloning and Bioinformatic Prediction of TPI Gene from Apis mellifera
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作者 王琦 李玮妮 王荣 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2012年第5期1097-1100,1126,共5页
[Objective] The aim was to clone triosephosphate isomerase (TPI) gene from Apis mellifera, and predict the properties of TPI protein with bioinformatic meth- ods. [Method] The TPI gene was firstly cloned by in silic... [Objective] The aim was to clone triosephosphate isomerase (TPI) gene from Apis mellifera, and predict the properties of TPI protein with bioinformatic meth- ods. [Method] The TPI gene was firstly cloned by in silico cloning based on the ex- pressed sequence tags (ESTs) from Unigene of NCBI. Some characters of the TPI protein including hydrophobicity or hydrophilicity, isoelectric point (pl) and secondary structure were analyzed and predicted by the tools of bioinformatics. [Result] The TPI gene from A. mellifera was 1 768 bp in full length and it contained a complete ORF which encoded 247 amino acids; the pl of TPI protein was 8.515; the TPI protein was a member of ~13-fold family. [Conclusion] The in silico cloning based on the expressed sequence tags is a efficient method in practice, and this study will provide more references for further study on A. mellifera at molecular level. 展开更多
关键词 Apis mellifera In silico cloning Triosephosphate isomerase (TPI) BIOINFORMATICS
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一种快速构建基因多个点突变体方法的建立 被引量:1
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作者 陈立涵 李玮妮 +2 位作者 张浩 程龙 叶棋浓 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2013年第7期678-685,共8页
蛋白质内部多个位点的翻译后修饰在基因的功能调节过程中发挥重要作用,基因的点突变体在其结构和功能研究中发挥非常关键的作用,因此,高效、快速构建基因的多个点突变体在基因的功能研究中意义重大.本研究在建立了对目的基因进行高效准... 蛋白质内部多个位点的翻译后修饰在基因的功能调节过程中发挥重要作用,基因的点突变体在其结构和功能研究中发挥非常关键的作用,因此,高效、快速构建基因的多个点突变体在基因的功能研究中意义重大.本研究在建立了对目的基因进行高效准确的单点突变方法的基础上,以SRrp53点突变体的构建为例,设计了新型的以反向PCR为基础的多个点突变的实验流程,获得的多位点突变体质粒经测序后均与预期相符,将测序正确的多位点突变体质粒转染293T细胞后,均表达了分子质量正确的蛋白质.以上结果表明,该实验设计方案能够高效、方便地用于基因多个点突变体的构建,为进一步研究它们的分子功能打下了基础. 展开更多
关键词 反向PCR SRrp53 多位点突变
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宜城市城镇居民体育活动现状的调查研究
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作者 刘若愚 桂雨晨 +1 位作者 李玮妮 刘歆 《当代体育科技》 2013年第13期125-126,共2页
本课题着重研究了在多元文化背景下宜城市城镇居民体育活动的现状。从调查体育意识与体育行为现状入手,对该市城镇居民体育意识、体育行为的特点和规律进行分析,探讨了影响该市城镇居民体育意识与行为的因素,提出了解决的办法和建议,旨... 本课题着重研究了在多元文化背景下宜城市城镇居民体育活动的现状。从调查体育意识与体育行为现状入手,对该市城镇居民体育意识、体育行为的特点和规律进行分析,探讨了影响该市城镇居民体育意识与行为的因素,提出了解决的办法和建议,旨在为全民健身计划开展群众体育工作提供参考,以达到提高居民体质健康水平和全民健身的目的。 展开更多
关键词 城镇居民 体育活动 宜城市 调查研究
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慢病毒介导的敲低UBC9表达抑制ERβ类泛素化修饰水平 被引量:3
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作者 李玮妮 陈立涵 +6 位作者 程龙 徐小洁 付洁 关鑫 刘婕 张浩 叶棋浓 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期187-190,共4页
目的建立稳定敲低UBC9蛋白表达的293T细胞株,检测其对雌激素受体β(ERβ)类泛素化修饰水平的调节作用。方法构建4条针对人UBC9基因的慢病毒短发夹RNA(shRNA)的干扰载体,将其与慢病毒包装辅助质粒共转染293T细胞后,收集病毒上清,感染293... 目的建立稳定敲低UBC9蛋白表达的293T细胞株,检测其对雌激素受体β(ERβ)类泛素化修饰水平的调节作用。方法构建4条针对人UBC9基因的慢病毒短发夹RNA(shRNA)的干扰载体,将其与慢病毒包装辅助质粒共转染293T细胞后,收集病毒上清,感染293T细胞,经嘌呤霉素(puromycin)筛选后获得稳定表达慢病毒介导UBC9 shRNA的混合细胞集落,分别用实时(real-time)PCR和Western印迹方法检测UBC9的表达情况,瞬时转染方法检测UBC9表达水平对ERβ类泛素化修饰水平的影响。结果建立了稳定敲低UBC9的293T细胞株,UBC9降低能够抑制ERβ类泛素化修饰水平。结论 UBC9在ERβ类泛素化修饰反应中发挥重要作用。 展开更多
关键词 慢病毒属 UBC9 ERΒ 类泛素化修饰 RNA干扰
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