酒糟的生物技术处理——固态发酵法生产菌体蛋白和纤维素酶的研究

以选择获得的高产蛋白菌株和里氏木霉为菌种 ,酒糟为主要原料 ,通过添加适当辅料为培养基 ,经固态发酵方法 ,发酵后基质中蛋白质含量达 41.8% (干基 )、纤维素酶活性达 12 483u/g。

海栖热袍菌内切葡聚糖酶Cel12B与木聚糖酶XynA CBD结构域融合基因的构建、表达及融合酶性质分析

海栖热袍菌内切葡聚糖酶Cel12B是极耐热胞外酶，氨基酸序列分析表明不含有纤维素结合结构域（CBD），对结晶纤维素无活性，但同样菌种来源的木聚糖酶XynA有催化结构域和纤维素结合结构城。用同样极耐热酶CBD区域和Cel12B融合构建重组质粒pET-20b—Cel12B—CBD，经诱导表达后，对结晶纤维素有活性，酶学特性研究表明：最适反应温度为100℃、最适pH为5．8、在pH4．5—7．0时酶活力稳定，90℃保温2h仍有87％的酶活。

微生态制剂HGB在蛋鸡养殖中的应用

[目的]探讨微生态制剂HGB在蛋鸡养殖中的应用效果。[方法]选取400只健康的80日龄商品代罗曼褐蛋鸡，随机分为试验组与对照组，饲养条件相同，均饲喂基础日粮，试验组添加微生态制剂HGB。[结果]使用微生态制剂HGB有助于增加蛋鸡体重、提高蛋鸡对饲料的利用率，并能改善蛋鸡的生产性能，也可改善试验蛋鸡的饲养环境。与对照组相比较，在试验期间的第135～165天，试验组的料蛋比低0.20，产蛋率高8％，产蛋总数增加496枚。经方差分析表明2组结果差异极显著（P〈0.01）。[结论]使用微生态制剂HGB可增加蛋鸡体重，提高蛋鸡对饲料的利用率，改善蛋鸡的生产性能，提高蛋鸡产蛋量，还可改善蛋鸡的饲养环境。

微生物青贮添加剂菌种的优化

研究了乳酸菌与酵母菌的菌种特性 ,确定乳酸菌的最佳培养时间为 12h ,酵母菌为 1～ 2d ;乳酸菌的最适培养温度为 30℃ ,酵母菌为 2 8℃。试验还以秸秆为原料 ,进行了菌种复配、发酵 ,测定了产品的粗蛋白和粗纤维变化。确定了菌种的最佳工艺参数 :乳酸菌最佳添加量为 4 % ,乳酸菌∶酵母菌最佳配比为 1∶3。

酵母富硒生产废水绿色循环利用工艺研究

通过生物吸附处理酵母富硒生产废水中的主要毒害污染物硒,使酵母富硒生产废水中残留的无机硒浓度从150 mg/L降至12 mg/L。通过摇瓶实验,将处理后的酵母富硒生产废水,部分替代酵母发酵培养基配制水进行重新利用。结果显示,经处理废水替代酵母发酵培养基配制用水的比例可达60%~80%。处理后的酵母富硒生产废水回用于酵母发酵工艺具有可行性。

以秸秆为原料制备低聚木糖工艺研究

研究了稻草粉经氯化钠预处理后加氢氧化钠高温蒸煮提取木聚糖,然后再加酶水解生产低聚木糖的工艺路线。稻草粉在质量分数为2.5%的NaCl溶液中浸泡12 h后,滤去浸泡液,然后采用固液比1∶10、120℃、120 min的蒸煮条件进行蒸煮。结果表明,木聚糖的提取得率达29.05%(按稻草粉中木聚糖计),用底物质量分数为3%的木聚糖,加入木聚糖酶液,水解温度80℃,反应时间5 h,最后测得还原糖总质量浓度可达3.54 g/L。

极耐热内切葡聚糖酶Cel12B的高效表达

海栖热袍菌 Thermotoga maritima 是嗜极端高温的厌氧细菌,其产生的极耐热葡聚糖酶具有很好的热稳定性和潜在的可观工业用途。但嗜高温菌基因在大肠杆菌中表达水平较低,T．m 内切葡聚糖酶 Cel12B 基因带有信号肽,应用在线预测分析,通过 PCR 方法分别克隆 Cel12B 完整基因和不带信号肽基因至 pET-20b 载体, 构建重组质粒 pET-20b-Cel12B 和 pET-20b-Cel12B-WS,转化至大肠杆菌 JM109DE3诱导表达后,分析酶活,结果表明去除信号肽重组菌单位酶活是未去除信号肽重组菌11倍多。

极耐热内切葡聚糖酶Cel12B的基因克隆、表达和酶学性质的研究

极耐热酶在工业生产中有可观的潜在用途，为此从极端嗜热厌氧细菌海柄热袍菌中通过PCR方法克隆出Cel12B基因，构建重组表达质粒pET-20b-Cel12B，转化至大肠杆菌JM109（DE3）诱导表达后，获得极耐热重组内切葡聚糖酶．经过热处理和组氨酸亲和层析柱纯化，获得电泳纯单一条带，酶学性质测定表明：最适作用pH为6．0，最适作用温度90℃，在pH5．3～6.5之间酶活力稳定，90℃半衰期70min。

应用型生物工程专业基因工程教学思考与实践

基因工程是生物工程专业核心课程,为了培养应用型人才,就如何提高教学质量、教学效果和实验教学,进行了一些实践与探索。

克伦特罗酶免检测试剂盒的评价

以自制克伦特罗酶免检测试剂盒与德国r—Biopharm公司生产的试剂盒对比，从稳定性、重复性、特异性、灵敏度、精度、检测范围、IC5和检测时间多个角度对本产品进行了质量评估，结果显示，各项参数均接近于德国r—biopharm公司的试剂盒。批间C．V．％〈15％，批内C．V．％〈10％，检测灵敏度可达到0．096ng／mL。ED50稳定在1．22ng／mL左右。检测精度在80～110％之间；检测范围为0．24—9，45ng／mL；检测时间小于2h。

降解结晶纤维素极耐热葡聚糖酶重组菌的构建

极耐热纤维素酶在纤维素生物转化中具有潜在的开发前景,但极耐热酶缺乏对天然纤维素的分解能力。采用基因工程方法,将极耐热内切葡聚糖酶Cel12B基因和同样极端嗜热菌来源的纤维素结合域(CBD)区域融合,构建重组质粒pET-20b-Cel12B-CBD,转化至大肠杆菌JM109(DE3)诱导表达后,融合基因表达产物对结晶纤维素具有一定的分解能力。

已酸菌的菌种选育

本文就浓香型大曲酒主体香味成份已酸乙酯来源的重要功能微生物已酸菌的分离和选育作了研究，通过在特定环境条件取样，经分离得一产已酸的微生物，经诱变育种，已酸的能力较出发菌株有较大提高，达２００mg／100ml。

电信运营商综合互联网Cache平台部署探讨

Cache技术在互联网上的积极应用,能有效丰富本地的热点内容,提升用户的体验,节省网络带宽,带来可观效益。本文分析了各种重定向方式的特点及应用场景,着重对Web Cache和P2P Cache的一体化部署方式进行探讨。

桑黄多糖分离纯化及其结构初步鉴定

本文用离子交换和凝胶层析对桑黄多糖进行了纯化,并对多糖的结构、组成及理化常数进行了分析。结果表明,经弱碱性阴离子和弱酸性阳离子交换树脂一次串联脱蛋白,蛋白脱除率达94.96%,多糖回收率为77.77%。再经凝胶层析,得到大分子量多糖组分HHM(2.84×106Da)和小分子量多糖组分HLM(5.33×104Da),HLM和HHM的旋光度分别为[α]D25=+64.8°和[α]D25=+58.4°,由IR分析,初步推测该HHM和HLM多糖为β型吡喃多糖,由TLC法测得的HHM的单糖组成为葡萄糖,HLM单糖组成分别为葡萄糖和半乳糖。

F/10木聚糖酶研究进展

木聚糖酶广泛应用在食品加工、纸浆漂白、饲料添加剂、工业乙醇的生产,生物转化等领域。相对于G/11木聚糖酶,F/10家族在稳定性、耐酸性和耐碱性方面更有优越性,本文综述了该家族木聚糖酶的相关基因,酶分子空间结构及催化机理等基本特性,特别对热稳定性属性及基因工程改造其稳定方面进行了详细说明,为进一步进行酶分子改造和应用提供借鉴。

Cl^-浓度对2A12铝合金电化学行为的影响

通过干湿周浸试验、扫描电镜观察和电化学阻抗谱(EIS)测试,研究了2A12铝合金在不同质量浓度NaCl溶液中干湿周浸48 h和480 h后带锈样的电化学行为与规律。试验结果表明,干湿周浸48h后,低浓度NaCl溶液中2A12铝合金的腐蚀过程主要受电荷转移电阻控制;随浓度增加,其电化学特征转变为受电荷转移电阻和Warburg阻抗扩散混合控制。干湿周浸480h后,0.5%和10%NaCl溶液中2A12铝合金的Nyquist曲线由高频容抗弧和中低频扩散阻抗组成,而2.5%至5%浓度的Nyquist曲线由高低频双容抗弧组成。提高Cl^-浓度可以促进点蚀的形成和发展,进而影响电化学行为。

大肠杆菌生产重组极耐热木聚糖酶的诱导条件及其酶学性质

构建重组菌(JM109/pTrc 99A xylIV)作为极耐热木聚糖酶的生产菌株,研究了IPTG诱导时间、IPTG浓度、重组菌生长的不同阶段加IPTG和温度对重组菌生产极耐热木聚糖酶的影响以及它的酶学性质.结果表明,IPTG诱导8h后极耐热木聚糖酶的表达量基本维持不变,0.5～5mmol/L浓度的IPTG诱导重组菌表达极耐热木聚糖酶的效果基本相同;当重组菌生长到OD600为1.2左右时加IPTG诱导最好,诱导温度对极耐热木聚糖酶表达水平的影响不大.重组耐热木聚糖酶的最适反应pH值为5.4～5.8,重组极耐热木聚糖酶的最适反应温度大于100℃,重组极耐热木聚糖酶在pH值4.2～7.5都比较稳定,重组极耐热木聚糖酶的温度稳定性好,在90℃下保温2h后残存酶活还有90%.

脂肪酶基因在枯草芽孢杆菌中的表达及表达产物性质的研究

从环境中筛选到了脂肪酶高产菌株金黄色葡萄球菌JH,依据NCBI上发表的原核微生物脂肪酶基因序列的多序列比对,发现它具有很强的序列保守性。利用PCR从金黄色葡萄球菌JH基因组中扩增得到了脂肪酶基因,利用基因重组技术将其整合到质粒pC194中,并导入到枯草芽孢杆菌中进行表达。应用选择抗药性筛选重组子,利用硫酸铵沉淀法和离子交换层析分离纯化重组脂肪酶,并用SDS-PAGE进行纯度鉴定,确定其相对分子量约为32kDa。通过对其酶学特性的研究发现,重组脂肪酶在反应温度为41℃,pH为8.0时具有最大活性,其Km和Vm各自为0.34mmol/L和308μmol/mg·min,Ca2+、K+、Mg2+能激活这种酶的活性,而Fe2+、Cu2+、Co2+则抑制它的活性。

易错PCR定向进化大幅度提高极耐热β-葡聚糖酶的活性

采用易错PCR方法对来自于极耐热海栖热袍菌的内切葡聚糖酶Cel1B进行定向进化。携带有Cel12B基因的重组质粒pET-20b-Cel12B在固定Mn2+浓度下,通过使用不同浓度的Mg2+优化易错PCR条件,产物构建成pET-20b-Mu-Cel12B重组子,并建立突变体文库,重组子经改进的刚果红平板法筛选,通过透明圈的大小获得了酶活性大幅度提高的突变体3个,突变基因经诱导后的酶活力分别是在同样条件下诱导获得的亲本酶的2.1倍、3.2倍和3.7倍。

紫外-微波复合诱变选育高产纤维素酶的Trichoderma asperelloides菌株

为了选育高纤维素酶活的Trichoderma asperelloides菌株,本试验以中国工业微生物菌种保藏管理中心的Trichoderma asperelloides41245为原始菌株,采用紫外和微波两种物理方法复合诱变,纤维素刚果红平板初筛和固态发酵产酶复筛。试验最终获得一株Trichoderma asperelloides突变株ZWWB1,在以麦秸和麸皮为基质的固态发酵培养基上培养96 h,滤纸酶活力达15.08 U/g,是原始菌株的1.81倍。经5次传代发酵培养滤纸酶活力变化不大。可见该突变菌株ZWWB1产纤维素酶能力较高且遗传稳定性较好,可考虑进一步开发应用于秸秆饲料发酵。