实验室条件下长角血蜱甘肃株孤雌生殖种群的生物学特性

在实验室条件下，对我国北方长角血蜱甘肃株孤雌生殖种群的生活史进行了首次观察。研究发现，行孤雌生殖的长角血蜱为三宿主蜱；在兔体完成1个世代共需106～154d，饥饿期的幼蜱、若蜱与两性生殖的饥饿幼蜱、若蜱体重的差异不显著（P〉0．05），而饱血体重与两性生殖的长角血蜱种群饱血体重差异极显著（P〈0．01）；雌蜱饱血体重可达吸血前的108．46±19．72倍，与两性生殖的种群饱血体重差异亦极显著（P〈0．01）。雌蜱产卵量与饱食体重之间呈极显著正相关r=0．8970（P〈0．01）；生殖效率指数REI=6．76，生殖适合度指数RFI=6．29；蜱发育时间在不同季节无明显变化。

不同饲喂方式和温度对长角血蜱甘肃株生物学特性的影响

在不同饲喂方式和温度条件下,观察我国北方长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)甘肃株的生活史及对其生物学特性的影响。将试验蜱分组后置于不同饲喂方式和温度下,待其发育到下一阶段,叮咬实验动物,连续调查其发育阶段的生物学特性。研究发现,完成一个世代需101 d～148 d。成年饥饿雌蜱吸血期具有两个显著特征:缓慢吸血和快速吸血;经兔体叮咬的成年雌蜱其饱血体重小于羊体。不同饲喂条件下长角血蜱饱血体重、产卵量差异极显著(P<0.01);在一定温度范围内,幼蜱、若蜱的蜕变时间随温度的升高而缩短;当饱血雌蜱处于发育阶段时,产卵前期、产卵期及卵的孵化期均随着温度的升高而缩短;16℃～30℃条件下长角血蜱产卵量没有变化,利于蜱的存活;4℃以下和45℃以上饱血蜱及其后代不能存活;16℃以下蜱的发育周期延长。结果表明,长角血蜱为三宿主蜱;雄蜱可以帮助雌蜱吸血;在羊体上的吸血能力优于在兔体上的吸血能力;温度对长角血蜱的发育繁殖有影响。

一致性检验比较两种弓形虫抗体检测试剂盒

比较两个弓形虫抗体检测试剂盒检测结果的一致性,为流行病学调查和临床诊断筛选可合理使用的商品化试剂盒。对510份猪血清分别进行弓形虫抗体IHA和ELISA检测,应用Kappa检验比较两种试剂盒检测结果的一致性并进行分析,用x^2检验分析差异性。两种试剂盒联合检出79份阳性,阳性符合率为67.52%,阴性符合率为95.17%,总符合率为88.82%。x^2检验差异显著(x^2=228.23,p=0.00);u检验值为15.89,两种产品的一致性为中度一致(Kappa值=0.66)。所以弓形虫病IHA检测试剂盒可作为现场收益流行病学调查,而弓形虫Ig G抗体ELISA检测试剂盒适合辅助临床检测和诊断。x^2检验比较两种试剂盒具有局限性。u检验排除偶然性造成的一致程度,与Kappa检验结合可比较一致性。弓形虫抗体检测要根据实况选择不同的试剂盒。

一株野鸟源H3N2亚型禽流感病毒HA基因序列分析

为了解野鸟在宁夏感染或携带禽流感情况,采集野鸟新鲜粪便,进行RT-PCR检测和HA序列分析。结果检测到一株野鸟源H3N2禽流感病毒阳性样本,HA基因与蒙古报道的一株禽流感病毒同源性为98.6%,氨基酸同源性为99.5%,属于欧亚分支。提示该毒株的基因有可能来自外源性病毒。野鸟疫病监测可为家禽健康养殖提供预警预报作用。

禽流感诊断技术研究进展

禽流感是严重危害畜牧业和人类健康的一种传染性疾病,多年来在世界上许多国家和地区都发生过此病,危害巨大。世界各国对其进行了大量研究。文章就目前国内外对禽流感病毒血清学和分子生物学诊断技术的研究进展做一综述。

驽巴贝虫病间接ELISA检测方法的建立

目的克隆表达驽巴贝虫诊断抗原基因BC48,建立间接ELISA诊断方法。方法从感染驽巴贝虫的毛驴血液中提取虫体基因组DNA,利用PCR技术扩增BC48基因,将其克隆入表达载体pET-28a,转化大肠埃希菌感受态细胞,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,用镍柱亲和层析法纯化蛋白。以该蛋白作为诊断抗原建立间接ELISA诊断方法 ,对反应条件进行优化,并对该方法的特异性和敏感性进行评价。结果扩增获得1272bp的BC48基因片段。重组表达质粒pET-28a-BC48诱导后获得大小约为Mr46000的可溶性融合蛋白,纯化后蛋白浓度为12.98mg/ml。间接ELISA方法条件优化的结果显示,最佳抗原包被浓度为65μg/ml,最适血清稀释度为1∶80,该融合蛋白可特异性地与驽巴贝虫感染血清结合,而不与马泰勒虫感染血清及阴性血清反应。使用该方法与镜检法检测17份散养毛驴血清样品,阳性检出率分别为3/17和2/17。结论以BC48重组蛋白为抗原建立的间接ELISA方法可用于马属动物驽巴贝虫病的检测。

长角血蜱卵cDNA表达文库的构建

【目的】以长角血蜱卵为材料构建高质量的长角血蜱卵cDNA表达文库,为进一步筛选克隆目的基因奠定基础。【方法】在无RNA酶污染的环境下从长角血蜱卵中提取RNA,进而纯化mRNA,采取oligo(dT)引物合成双链cDNA,定向克隆到λSCREEN载体。用PhageMaker extract对其进行体外包装以形成完整的噬菌体,转染大肠杆菌ER1647,测定库容量。并用构建的cDNA文库克隆已知的长角血蜱促卵泡激素基因。【结果】所构建长角血蜱卵cDNA表达文库的基础库容量约为1.38×106PFU,重组率为100%,扩增后文库的滴度为2×109PFU·ml-1。获得了目的基因,其序列与GenBank中的长角血蜱促卵泡激素(DQ248886)的核苷酸序列的同源性为97.8%。【结论】成功构建了长角血蜱卵cDNA表达文库。

长角血蜱雌蜱唾液腺cDNA表达文库的构建

为了克隆和研究具有免疫原性的长角血蜱基因。应用建库试剂盒成功构建了长角血蜱雌蜱唾液腺cDNA表达文库．在无Rnase污染的环境下摘取半饱血长角血蜱雌蜱唾液腺。并从中提取RNA，进而纯化mRNA。利用oligo（dT）引物反转录合成双链cDNA，并在其两端加EcoRⅠ／HindⅢ定向接头并酶切，过柱分级分离后。将cDNA分子定向连接到具有EcoRⅠ／HindⅢ粘性末端的λSCREEN载体中．经体外包装转染E．coliERl647宿主菌，进行文库容量测定和扩增．以扩增文库的DNA为模板。利用载体通用引物检测cDNA文库中插入片断的大小和质量．经检测。所构建长角血蜱cDNA文库的基础库容量约为4．2×10^6pfu／mL，插入片段主要集中在300～2000bp之间．说明文库质量高、代表性强。

长角血蜱甘肃株肌钙蛋白基因P27/30的克隆和序列分析

参照GenBank中长角血蜱致病性Okayama株肌钙蛋白P27/30基因的核苷酸序列,设计合成一对引物,从本实验室保藏的干净长角血蜱卵中快速提取总RNA,通过RT-PCR扩增出607 bp的肌钙蛋白基因,将其克隆于PGEM-T-Easy载体,对其进行序列分析,并推导出氨基酸序列,将这一序列与国内外已发表的长角血蜱肌钙蛋白基因进行比较分析。结果表明本实验室保藏的长角血蜱甘肃株与上述已发表的Okayama株核苷酸序列同源性为92.1%,氨基酸同源性为86%。长角血蜱甘肃株与Okayama株、四川孤雌生殖株的发育有一定差异。经RT-PCR分析表明,该基因在长角血蜱的卵、幼蜱、若蜱和饥饿成蜱这几个阶段均有表达。

长角血蜱雌蜱唾液腺cDNA表达文库的免疫筛选与初步分析

蜱的免疫预防是目前国内外研究的热点,以抗血清为探针筛选cDNA表达文库是获取功能抗原基因的有效的方法之一,为了获得抗长角血蜱免疫原基因,用兔抗长角血蜱血清和兔抗长角血蜱唾液腺蛋白血清对长角血蜱雌蜱唾液腺cDNA表达文库进行了免疫筛选,经过两轮筛选共获得34个阳性克隆,所得阳性噬菌体转染宿主菌BM25.8使之亚克隆为重组质粒,用此质粒转化宿主菌JM109并进行序列测定和生物信息学分析.结果表明:在长角血蜱雌蜱唾液腺cDNA表达文库中获得26个长角血蜱免疫相关cDNA序列,其编码蛋白与长角血蜱HL35、黏附素hlim3假定蛋白、热休克蛋白、NADH脱氢酶、钙网蛋白以及杂色花蜱和肩突硬蜱的二硫异构酶等具有同源性.所获阳性克隆为长角血蜱保护性抗原基因的筛选奠定了基础.

家兔抗长角血蜱免疫模型的建立及对长角血蜱成蜱生长发育的影响

每隔2周用长角血蜱成蜱定量感染家兔,成功构建了具有不同抵抗力的家兔免疫模型。ELISA检测结果表明,家兔血清中的抗体效价从初次叮咬后第3周开始呈阳性,随着叮咬次数的增加抗体水平逐渐上升,第11周时达到高峰。具有一定抵抗力的家兔对长角血蜱成蜱的吸血和生长发育影响显著,其抗体水平与长角血蜱成蜱在兔体的吸血周期、死亡率成正相关,与雌蜱的饱血脱落率、饱血体重成负相关。结果进一步证明,蜱的唾液腺是其主要的免疫器官之一。家兔抗体水平的持续期足以使长角血蜱完成一个世代,可以满足试验需求,是抗蜱免疫研究理想的阳性对照模型。同时,血清中特异性抗体的效价也可以作为判断动物对长角血蜱抵抗力强弱的重要指标之一。

矩形波导窄边缝隙分析方法述评

对矩形波导窄边缝隙的各种分析方法进行了综述，并指出了它们存在的问题。从中可以看到这一问题的理论分析方法的进步和尚需解决的问题。

牦牛源短小芽胞杆菌TS1的分离鉴定及其生物学特性研究

[目的]本试验旨在研究一株牦牛源短小芽孢杆菌(命名:TS1)的分离鉴定、抗逆性、对常用抗菌药物的耐药性以及对常见致病菌的抑菌活性,初步探索其作为益生菌添加剂在畜牧养殖中应用的可行性。[方法]对健康牦牛新鲜粪便进行100℃水浴处理10 min以筛选具有抗逆性的芽胞杆菌,进行形态学、生理生化特征及16S rRNA序列分析鉴定,通过测量生长曲线、耐酸、耐胆盐试验、药敏试验及抑菌试验等方法对其生物学特性进行研究,通过全基因测序分析其可能产生抗菌物质的类型。[结果]TS1为短小芽胞杆菌且具有耐酸、耐胆盐生长特性;TS1对于12种常见的抗菌药物敏感,且对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、猪链球菌具有抑菌作用。测序分析显示该菌株可编码与Amylocyclicin同源性达48.90%的一种新型抗菌肽,进而发挥其抗菌活性。[结论]短小芽胞杆菌TS1有一定的抗逆性和潜在的益生能力及广谱抗菌效果,并且在畜禽肠道微生物系统中对抗生素耐药性传递的风险较低,适合作为益生菌添加剂类抗生素替代产品。

一种新型的微带印刷振子阵列天线

本文介绍了一种新型微带印刷振子阵列天线，其特点是带宽可达１６％，副瓣电平低于－２５ｄＢ，中心频率可达－３０ｄＢ。它重量轻，透空性好，可折叠。

宁夏贺兰山岩羊小反刍兽疫疫情来源分析

2018—2023年,宁夏贺兰山国家级自然保护区连续发现多起野生岩羊(Pseudois nayaur)不明原因死亡,通过解剖采样、实时荧光RT‑PCR检测,证实为小反刍兽疫病毒(PPRV)核酸阳性。使用Vero细胞分离出了部分毒株,采用RT‑PCR技术对宁夏地区病死家养羊和野生动物病料组织扩增PPRV F基因的全长片段。使用DNASTAR Lasergene和MEGA X软件对岩羊PPRV F基因序列进行比对和分析,构建系统发育树分析其分子遗传特征。结果显示:宁夏地区不同年度家养羊和贺兰山岩羊感染的PPRV毒株F基因同源性均在99%以上,其中2023年毒株与2018年、2019年1月毒株同源性最高,为99.8%,与2014年、2016年宁夏家养羊PPR疫情毒株及China/XJYL/2013(KM091959.1)同源性为99.6%。遗传进化分析表明,宁夏野生岩羊及家养羊PPRV同源性较高,均属于基因Ⅳ系中亚分支。因此推测宁夏及周边省份流行的PPR疫情可能通过不同途径在贺兰山野生动物种群中扩散蔓延,需加强PPR等野生动物疫源疫病监测。

布鲁氏菌荧光微球免疫层析试纸条的研制

本研究以量子点荧光微球为标记物,制备免疫层析试纸条,用于快速检测牛血清布鲁氏菌抗体。采用布鲁氏菌脂多糖(LPS)和兔抗重组链球菌蛋白G多克隆抗体分别作为检测线和质控线喷涂硝酸纤维素膜,以荧光微球标记的重组链球菌蛋白G喷涂玻璃纤维素膜作为量子点结合垫,经组装、切割制备免疫层析试纸条。使用布鲁氏菌病阳性血清国家标准品测定所建立方法的灵敏度和稳定性,使用牛鼻气管炎阳性血清等常见牛病血清及牛布鲁氏菌病阴性血清国家标准品评价该方法的特异性;使用建立的方法与间接ELISA(iELISA)同步检测100份临床血清样品,比较两者的符合率。结果显示:量子点荧光微球免疫层析试纸条的最低检出限为0.3 IU/mL,常温保存18个月其检测灵敏度不变;与牛鼻气管炎、牛流行性腹泻、牛结节性皮肤病等临床疫病的血清抗体无交叉反应;与iELISA方法的阳性符合率为94.2%,阴性符合率为100%,总符合率为97.0%。结果表明,本研究建立的布鲁氏菌荧光微球免疫层析试纸条敏感、特异、稳定,操作时不需要借助仪器,适用于临床快速检测和初筛,可为我国布鲁氏菌病防控提供技术支持。

天线在雷达座车上检测

本文发表于《天线技术》第10集,为了讨论问题,经作者同意,现全文转载,详见本期第47页编者按。

低副瓣波导窄边裂缝平面阵天线的研制报告

介绍了研制的俄副瓣波导窄边裂缝平面阵天线的设计方法及达到的性能指标.通过实践证明了编制的CAD软件是有效实用的.可用于宽带低副瓣窄带极低副瓣天线的设计.