鸡堫菌菌丝体液体培养的研究

适合鸡菌菌丝体液体培养的培养基成分是：淀粉１０ｇ，蔗糖２ｇ，蛋白胨２ｇ，ＫＨ＿２ＰＯ＿４０．３ｇ，ＭｇＳＯ＿４·７Ｈ＿２Ｏ０．１５ｇ；最佳Ｃ／Ｎ为３０～４０：１；最适培养温度２６℃；ｐＨ６．４；振荡频率１４０～１４５ｒ／ｍｉｎ，继代培养周期８天．液体培养的鸡菌菌丝体氨基酸总量可达２７３ｍｇ／ｇ干重，其中４２．４１％为人体必需的氨基酸（未含色氨酸）．

贡蕉胚性细胞悬浮系的建立和植株再生

鲜食蕉品种的高度不育性和多倍性制约了用传统育种方法培育生产实践中所需的新品种 ,建立稳定的胚性细胞悬浮系是香蕉生物技术育种的前提。以目前国内尚未建立该体系的鲜食蕉品种贡蕉 (AA)未成熟雄花序的第 1～ 15位花梳为外植体 ,对胚性细胞悬浮系的建立和植株再生体系进行了优化。结果表明 ,5～ 6个月的培养后可获得分生小球体和浅黄色、松散易碎的胚性愈伤组织。 9μmol L 2 ,4 D对外植体愈伤组织的诱导效果最好 ,诱导率为 4 0 96 % ,胚性愈伤组织诱导率可达7 4 5 % ,其中 5 79%的胚性愈伤组织来源于第 6～ 12号位置的花梳。胚性愈伤组织悬浮培养后 ,通过 3个月的筛选和继代培养 ,可得到均质的胚性细胞悬浮系。该培养体系合适继代周期为 15d ,继代时合适的起始接种量为每 30mL培养基加 2mLPCVECS。培养 6个月的胚性细胞在体细胞胚诱导培养基中培养 15d后可见到白色半透明体细胞胚的发生 ,体细胞胚诱导率为 2 80× 10 3个 mLPCV。成熟体细胞胚的萌发率为 17 2 8% ,其中发育成正常的再生植株的百分率为 14 16 %。

影响根癌农杆菌介导的香蕉基因转化早期的主要因素

用含质粒载体pCAMBIA2 30 1的根癌农杆菌 (Agrobacteriuminoculation)转化“6 4 1”香蕉 (MusaAAACavendishsubgroupcv.6 4 - 1)的薄片外植体 ,通过测定GUS基因瞬时表达率 ,对转化早期的主要影响因素进行了研究。结果表明 :农杆菌EHA10 5较适合于介导转化。将薄片置于固体高渗培养基上培养 4h后 ,通过真空减压法使农杆菌接种于其上 ,获得了较高的瞬时表达率 (41 6 7% ) ,是对照 (8 33% )的 5倍 ,农杆菌悬液稀释 5倍用于转化较好 ,共培养 3d为宜。薄片外植体越靠近根部 ,瞬时表达率越高。而外植体预培养会降低瞬时表达率。

富含多糖和次生物质的芒果子叶总RNA的提取

为了提取芒果子叶总RNA ,去除次生物质和多糖等杂质的严重干扰 ,采用了正交试验快速优化提取方法。实验证明 70 %的丙酮能有效地去除大部分杂质 ,提取过程一天内可完成 ,RNA含量可达 67 7μg g·FW ,A2 60 A2 80 比值为 1 95 ,RNA的纯度及质量适合后续反应。

果用香蕉薄片外植体植株再生的研究

利用薄片培养方法 ,通过直接和间接器官发生途径分别获得了‘广东 631’香蕉的再生植株。该途径受多种因素影响。通过正交试验和单因子试验确定了最佳培养条件 :( 1)直接器官发生培养基为Ma (MSmodified) +BAP 10 μmol/L +KT 50 μmol/L +IAA 1μmol/L ;( 2 )愈伤组织诱导培养基为Mb (B5modified) +Dicamba 10 μmol/L +IAA 1μmol/L +2 ,4 D 0 .7μmol/L +NAA 0 .5μmol/L +BAP 4 .4 μmol/L +活性炭 1g/L ;( 3)愈伤组织继代培养基为Mb +Dicam ba 5μmol/L +IAA 1μmol/L +2 ,4 D 0 .4 μmol/L +BAP 2 2 μmol/L +KNO350 0mg/L +维生素B140mg/L +活性炭 0 .5g/L ;( 4 )分化培养基为 1/ 2Ma +BAP 1μmol/L +IAA 0 .5μmol/L +活性炭 1g/L ;( 5)成苗培养基为Ma +BAP 1μmol/L +KT 4 .6μmol/L +NAA 1μmol/L。

根癌农杆菌介导苜蓿体胚转化及转基因植株再生

用含质粒载体pCAMBIA2301(带有受CaMV35S启动子调控的GUS基因和nptⅡ基因)的根癌农杆菌Agrobacteriumtumefaciens转化晋南苜蓿MedicagosativaL cv Jinnan的体胚组织,发现负压处理有利于提高转化频率(可达35%),3批共158个体胚切块的转化实验共获得具有卡那霉素抗性的再生植株15株,经组织化学染色和分子检测,证实GUS基因已整合到转化植株基因组中,在芽、叶片、叶柄和根等组织中均有表达,并在土壤栽培过程中保持稳定的表达。

芒果生长素反应因子类蛋白的cDNA克隆和表达

通过SSH法获得了一个与不定根形成相关的差异表达的cDNA片段 ,其推导的氨基酸序列与拟南芥的生长素反应因子 (ARF)类蛋白具有较大的同源性 ,因此将它命名为MiARF。用所设计的基因特异引物进行 3′RACE扩增获得包含完整读码框架 (ORF)的MiARF1(GenBank登录号为AY2 5 5 70 5 )和MiARF2 (GenBank登录号为AY30 0 80 8)。MiARF1全长为 32 72bp ,其中 ,ORF含 2 5 2 3bp ,5′非翻译区 (5′UTR)含 2 85bp ,3′非翻译区 (3′UTR)含 4 6 4bp。由该序列所推导的氨基酸序列与拟南芥ARF2 (BAB10 16 2 )的ID值为 6 4 % ,E值为 0 ,在DNA结合区域 (DBD)、III和IV区域的同源性更高 ,ID值均大于 80 %。MiARF2cDNA全长为 14 74bp ,其中ORF含 981bp ,5′非翻译区含 2 85bp ,3′非翻译区含 2 0 8bp ,由该序列所推导的氨基酸序列与拟南芥ARF2 (BAB10 16 2 )的ID值为 84 % ,E值为e- 1 51 。MiARF2仅具有DBD保守区并与MiARF1的基本相同 ,但缺乏III和IV区域。VirturalNorthern杂交表明 :MiARF2在生根的组织中表达水平高 ,而在非生根的组织中未见表达 ;MiARF1在生根及非生根的组织中均有表达。

大蕉(Musaparadisiaca ABB Linn.)花序愈伤组织的诱导及其体细胞胚发生

大蕉未成熟雄花接种到胚性愈伤组织诱导培养基中,4￣5个月后可诱导出胚性愈伤组织,并可在继代培养基上增殖。胚性愈伤组织转移到体细胞胚诱导培养基中可诱导出体细胞胚。体细胞胚在成熟培养基上培养2个月后转移到含有0.2mg·L-16-BA的分化培养基上可以萌发,进而形成再生植株。组织学切片证明所诱导的愈伤组织是胚性组织,其所产生的体胚具有典型的单子叶植物体细胞胚的组织结构。

与芒果子叶切段不定根形成相关基因的cDNA片段的克隆

在研究芒果子叶横切所形成的远轴面和近轴面的不定根形成时发现,只在近轴面形成不定根。该研究利用抑制性扣除杂交(suppressive subtractivehybridization,SSH)方法,以子叶切段远轴切面作为参照样品,近轴切面作为检测样品,构建正向差异cDNA文库,分离与芒果子叶切段不定根形成相关基因的cDNA片段。经Virtual Northern杂交分析,获得6个阳性克隆。序列分析和同源性比较结果表明这些cDNA片段均为首次报告,它们分别与转运蛋白、转录调控因子及酶基因的DNA序列同源。

氮源对巴西香蕉薄片愈伤组织诱导的影响

为了改善由薄片外植体所诱导的愈伤组织的胚性能力,研究了氮源对巴西香蕉(MusaAAACavendishsubgroupcv.Brazil)薄片愈伤组织诱导的影响。取香蕉组培苗的假茎和球茎切成1mm左右的薄片为外植体,能较快诱导出愈伤组织。结果表明,当改良的B5培养基中x([NH+3])为1∶26时,诱导出愈伤组织的形4] [NO-态最好,且愈伤组织诱导率高达93 2%;愈伤组织中形成拟分生细胞团的能力最好。添加高浓度的椰子汁也能改善愈伤组织形成的质量,培养基中φ(椰子汁)=3 2%时,含拟分生细胞团数目最多,这些愈伤组织具有较强的器官发生能力。

Thidiazuron对苜蓿愈伤组织的乙烯生成及其体细胞胚胎发生的影响

苜蓿叶柄在Ｂ５Ｈ培养基上诱导并继代所形成的是无色、松软的胚性愈伤组织，内含许多有分生能力的细胞团。当Ｂ５Ｈ中的ＫＴ用ＴＤＺ替换时，愈伤组织变绿变硬，出现管状分子和芽原基的分化，其体胚发生能力丧失，而且其乙烯生成和ＰＡＬ活性升高。乙烯形成酶的抑制剂ＣｏＣｌ２可以抑制ＴＤＺ的上述作用，部分地恢复愈伤组织的体胚发生能力。ＴＤＺ对愈伤组织的这些作用可能与其促进乙烯生成有关。

乙烯和多胺的生物合成与植物体细胞胚胎发生

综述了乙烯、多胺生物合成与植物体细胞胚胎发生的关系，以及乙烯和多胺生物合成的互相调节对植物体细胞胚胎发生的影响。

MGBG对苜蓿愈伤组织生长、体细胞胚胎诱导及其乙烯生物合成的影响

在苜蓿（ＭｅｄｉｃａｇｏｓａｔｉｖａＬ．）愈伤组织继代之初加入不同浓度的甲基乙二醛双（脒腙）（ＭＧＢＧ）（０．５，１，２ｍｍｏｌ／Ｌ），可不同程度地抑制愈伤组织及其后体胚诱导悬浮培养物的生长和体胚形成；若在体胚诱导阶段加入，则上述的抑制作用更为强烈。ＭＧＢＧ不但促进愈伤组织乙烯释放量、内源ＡＣＣ（１氨基环丙烷１羧酸）水平和ＡＣＣ合成酶活性，也促进体胚诱导悬浮培养物的ＡＣＣ水平及ＡＣＣ合成酶的活性，但降低体胚诱导悬浮培养物的ＭＡＣＣ（丙二酰ＡＣＣ）水平。ＭＧＢＧ对体胚诱导和培养物的生长的抑制作用与其上述的对ＡＣＣ和乙烯生成促进作用及降低ＡＣＣ转化成ＭＡＣＣ的效应有关。

芸苔属几种蔬菜种子的劣变及其荧光泄漏物质——Ⅰ.种子劣变程度与荧光泄漏物质

比较了芸苔属蔬菜芥蓝类、白菜类、菜心类和芥菜种子吸胀时荧光物质的泄漏与种子劣变.结果表明:不是所有丧失萌发力的种子均能泄漏荧光物质.泄漏荧光物质种子占不能萌发种子总数的百分比大小按下列顺序:芥蓝类>白菜类>菜心类>芥菜类变化,这种顺序与其劣变系数变化顺序相平行.劣变系数反映了该种子抗劣变能力,因此可利用荧光物质泄漏的种子占不萌发种子的百分比测定该种子的抗劣变能力或种子劣变程度.荧光物质主要分布在胚中.死种子吸水后荧光物质可泄漏于所在组织的外部,而活种子则否.

与芒果子叶切段不定根形成有关的活性物质初探

在芒果子叶维管渗出物中检测到多种物质 ,其中生物碱和甾体两种物质为维管渗出物所特有。芒果子叶的甲醇提取液可提高黄瓜子叶不定根形成的百分率、生根数和根鲜重 。

‘过山香’香蕉多芽体的诱导及其体细胞胚的发生

以我国重要香蕉种质‘过山香’(AAB)为材料,研究了香蕉多芽体诱导、多芽体茎尖薄切片即分生组织性的表层结构物(scalp)愈伤组织诱导和体细胞胚发生的合适条件。结果表明,该品种单个不定芽茎尖在P4培养基(含BAP100μmol·L-1和IAA1μmol·L-1)中继代5个周期后可诱导获得类似花椰菜结构的多芽体。从30μmol·m-2·s-1光强,光/暗周期(16h/8h)培养的多芽体所获得的scalp在添加24D5μmol·L-1和Zeatin1μmol·L-1的愈伤组织诱导培养基中黑暗培养,45d后愈伤组织诱导率可达97.6%。诱导20d后黄色分生小球体类结节状愈伤组织开始发生,90～120d后在分生小球体局部可获得白色或浅黄色松散的胚性愈伤组织(诱导率为17.5%)。从胚性愈伤组织诱导的体细胞胚在成熟培养基上培养60d后体胚萌发率和植株转化率分别为14.5%和11.1%

浅谈外语教学的交际教学法

任何人教语言,自觉不自觉地,必然按照自己对语言的看法去教。也就是说,即使是最简单的语言教学法,也都体现着某种语言哲学。交际教学法,自然也有其所依据的语言哲学。这种语言哲学,姑称之为交际语言哲学。交际语言哲学,可以归纳为一句话:语言是交际工具。这句话听来没什么新鲜,其中道理却远不是人人都明白。首先必须说明的,是交际在这里不只是指社交往来。

GENERAL INTRODUCTION TO CECL

CECL教程的目标是让学生获得交际能力。交际能力有三个组成面:语言能力(对语言形式即语言、语法、词汇的知识),实用能力(语言在实际交际中运用的能力),以及认知与感受的能力。交际能力,必须通过交际去获得。外语教学的课堂活动,能否认为是交际活动,取决于其在何种程度上体现了以下四个条件:(i)交际必须是为了传达意义内容,而不是为了练习语言,(ii)交际不能脱离上下文及环境。(iii)交际必然存在自由及不可预料性。(iv)交际的环境和语言都必须真实。教学法有如下几个要点:(1)学习的过程与学习结果相比,过程更重要。(2)学生的共性与个别性相比,强调个别性。(3)教师与学生相比,学生为主。教师的作用,只是计划、提供条件、监督和察觉学习过程、并作课堂交际的一方。(4)流利与准确,不应片面强调准确而扼杀流利,而应先抓流利,以流利带动准确,最后才可能流利与准确两者兼得。只有两者兼得,才能达到有效的交际。