miR-181b过表达对胶质瘤U87细胞中MT1-MMP和TIMP3蛋白表达和细胞侵袭能力的影响

目的:探讨微小RNA-181b(miR-181b)过表达对人胶质瘤细胞中膜型基质金属蛋白酶1(MT1-MMP)和金属蛋白酶组织抑制剂3(TIMP3)表达的调控作用及对细胞侵袭能力的影响。方法:将培养于DMEM培养基的人胶质瘤U87细胞分为阴性对照组(不做任何处理)、空载组(转染Lipofetamine 2000)、乱序组(转染乱序has-miR-181b寡核苷酸)和miR-181b组(转染has-miR-181b寡核苷酸)。qRT-PCR法检测各组细胞中miR-181b基因表达水平,Western blotting法检测各组细胞中MT1-MMP和TIMP3蛋白的相对表达水平,基质胶侵袭试验检测各组细胞的侵袭能力,测定各组细胞的趋化运动抑制率、迁移率和细胞黏附率;生物信息学数据库预测miR-181b的侯选靶基因。结果:miR-181b组U87细胞中miR-181b基因表达水平明显高于其他各组(P<0.01),呈过表达。miR-181b组U87细胞中MT1-MMP蛋白表达水平低于其他各组(P<0.01),miR-181b与MT1-MMP蛋白表达水平呈负相关关系(r=-0.787,P<0.05);miR-181b组U87细胞中TIMP3蛋白表达水平高于其他各组(P<0.01),miR-181b与TIMP3蛋白表达水平呈正相关关系(r=0.801,P<0.05)。基质胶侵袭试验中miR-181b组穿膜细胞数明显低于其他各组(P<0.05)。与其他3组比较,miR-181b组U87细胞的趋化运动抑制率升高、迁移率和细胞黏附率降低(P<0.05)。生物信息学数据库预测,在MT1-MMP的3′非翻译区(3′UTR)有1个与miR-181b的结合位点,在TIMP3的3′UTR有2个与miR-181b的结合位点。结论:miR-181b过表达可下调MT1-MMP和上调TIMP3蛋白的表达,从而抑制胶质瘤细胞的侵袭能力;miR-181b作为关键性调节miR,可能成为胶质瘤治疗的重要靶标。

单鼻孔经蝶窦入路显微手术治疗垂体腺瘤

目的总结单鼻孔经蝶窦入路垂体瘤显微切除术的经验。方法179例垂体腺瘤均经CT或MRI确诊,并在显微镜下经鼻蝶窦入路切除。结果全切150例,次全切除21例,近全切除8例,无死亡。术后病人症状均改善。结论经单鼻孔蝶窦入路切除垂体腺瘤是一种安全有效的微侵袭手术方法。

人胶质瘤MMP-2及TIMP-2 mRNA表达和酶活性的改变及其意义

目的:探讨人胶质瘤基质金属蛋白酶2 (明胶酶A,MMP- 2 )及金属蛋白酶组织抑制物2 (TIMP- 2 )m RNA表达和活性的意义。方法:按WHO分类标准将2 6例人胶质瘤标本分为4组,用RT- PCR检测MMP- 2和TIMP- 2 m RNA表达,用酶谱法检测其活性。结果:在明胶酶谱分析MMP- 2显示两条带,分别是定位于6 2 0 0 0活性形式和72 0 0 0酶原形式。在各级别胶质瘤之间MMP- 2的酶原形式(72 0 0 0 )无差别。随胶质瘤恶性程度的增加,MMP- 2 m RNA的表达水平和酶活性均明显增加,而TIMP- 2 m RNA的表达水平和酶活性均随胶质瘤恶性程度的增加而明显降低。结论:在不同恶性级别人胶质瘤,MMP- 2和TIMP- 2的基因转录及酶活性均发生改变,这些改变在促进胶质瘤的侵袭生长中起重要作用。

未见原发病灶的肝癌脑转移1例报告

1病例资料 患者男性,72岁,因＂左上肢进行性肌无力15 d,突发抽搐2次＂于2015年4月9日入本院。入院查体上肢肌力Ⅲ级,余肢体肌力正常。实验室检查：ALT 11.5 U/L,AST 25.0 U/L,Alb 38.7 g/L,TBil 9.3μmol/L,凝血常规正常。HBsAg阴性,抗-HBs阳性,抗-HBc阴性,HBeAg阴性,抗-HBe阴性.

脑膜瘤的诊断与治疗

脑膜瘤是中枢神经系统最常见的原发性肿瘤。在美国,脑膜瘤约占所有原发性中枢神经系统肿瘤的36.6%,在非恶性原发性中枢神经系统肿瘤中占53.2%[1]。大多数脑膜瘤的级别较低,其中,WHOⅡ~Ⅲ级脑膜瘤具有侵袭性生长模式,通常认为是恶性肿瘤。病人的临床表现取决于肿瘤位置和大小。典型临床症状是颅内压升高、局灶性神经系统(包括脑神经)缺陷和局灶性肿块效应引起的全身性和部分性癫癎发作,其中最常见的是头痛、癫癎发作、视觉症状、肢体无力和精神状态改变。

链脲佐菌素所致高血糖对大鼠缺血性脑损伤的影响

目的 研究链脲佐菌素所致糖尿病性高血糖 (HG)对大鼠缺血性脑损伤的影响。方法 链脲佐菌素引起糖尿病 4周的大鼠造成 10 min前脑缺血 ,观察缺血后脑组织的病理改变和癫痫发作情况。结果 在海马 CA1区和下脚区 ,HG组与正常血糖 (NG)组动物脑神经元损伤程度相似。然而 ,HG组动物有严重的顶叶皮质神经元坏死和“额外脑结构损伤”。 HG组中 42 .1%的动物脑缺血后出现癫痫发作 ,血浆葡萄糖浓度低于 12 mm ol/ L者未见癫痫发作。结论 糖尿病高血糖明显加重缺血后脑损伤并常引起脑缺血后癫痫发作。

靶向清除肿瘤干细胞功能性检测试验及其评价的研究进展

肿瘤干细胞(CSCs)在肿瘤的生长、转移、复发和治疗抵抗中起决定性作用,靶向清除CSCs已成为肿瘤治疗的重要策略。靶向清除CSCs的效果必须通过CSCs功能性检测来验证和评估。本文总结了近年清除CSCs功能性检测中肿瘤球形成试验、小鼠异种移植试验和有限稀释试验等技术,对这些技术的意义和应用中可能出现的问题进行探讨,为提高靶向清除CSCs措施的质量提供参考。

人脑膜瘤bFGF的表达与血管生成和细胞增殖能力的关系

目的 :探讨人脑膜瘤碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)的表达与肿瘤血管生成和细胞增殖能力的关系。方法 :应用免疫组织化学方法检测了 3 8例脑膜瘤组织 b FGF表达 ,分析其与肿瘤微血管形成及细胞增殖能力的关系。结果 :b FGF阳性表达率和表达强度在良性、非典型和间变型脑膜瘤间均无明显差异 (P>0 .0 5 )。良性与非典型脑膜瘤微血管密度 (MVD)值差异不显著 ,而间变型脑膜瘤 MVD值明显高于前二者 (P<0 .0 1 )。 b FGF表达阳性与表达阴性肿瘤的 MVD值差异无显著意义。三类脑膜瘤 b FGF表达分值与 MVD值及与 PCNA LI均不相关 (P>0 .0 5 )。结论 :未发现脑膜瘤 b FGF表达与血管生成存在明显的关系 ,在脑膜瘤血管生成和细胞增殖能力中 b

人脑膜瘤血管生成和细胞增殖能力的关系

目的 :探讨人脑膜瘤血管生成与细胞增殖能力的关系。方法 :应用免疫组织化学方法检测38例人脑膜瘤 (良性 14例 ,非典型和间变型各 12例 )第 因子相关抗原和增殖细胞核抗原的表达特点 ,分析肿瘤微血管密度 ( MVD)值与增殖细胞核抗原标记指数 ( PCNA LI)之间的关系。结果 :良性与非典型脑膜瘤 MVD值之间差异无显著性 ,间变型脑膜瘤 MVD显著高于良性和非典型脑膜瘤的 MVD值 ( P<0 .0 1) ,间变型脑膜瘤 PCNA LI明显高于良性和非典型者。良性脑膜瘤 MVD和 PCNA LI不相关 ,而非典型和间变型脑膜瘤 MVD值与 PCNA L I之间呈正相关。结论 :非典型和间变型脑膜瘤血管生成与细胞增殖能力有一定关系。

人胶质瘤细胞的侵袭能力和胶原溶解作用的体外研究

目的:观察人胶质瘤细胞的体外侵袭能力及对胶原的溶解作用。方法:在体外用Boyden小室侵袭实验评价人恶性胶质瘤细胞株U87MG穿过Matrigel基膜胶的迁移能力;用琼脂-明胶凝胶观察U87MG细胞条件培养基对基质胶原溶解的影响。结果:U87MG胶质瘤细胞穿过Matrigel膜的细胞数明显多于加入EDTA或加入抗MMP-2抗体的U87MG胶质瘤细胞的穿膜细胞数(P<0.01),而后两者穿膜细胞数之间的差异无显著性(P>0.05),EDTA或抗MMP-2抗体对U87MG细胞的穿膜细胞数有明显的抑制作用,抑制率分别为79.2%和77.1%。U87MG细胞条件培养液能在凝胶孔周围引起明显增大的透明环,用EDTA或抗MMP-2抗体抑制MMP-2酶活性可明显减少透明环的形成。结论:U87MG胶质瘤细胞的侵袭能力和胶原降解作用取决于MMP-2,提示MMP-2在胶质瘤侵袭生长中起重要作用。

基质金属蛋白酶2及其抑制物在人胶质瘤中的表达

目的 :探讨基质金属蛋白酶 2 (MMP- 2 )及其组织抑制物 2 (TIMP- 2 )在人胶质瘤的表达特点。方法 :按 WHO病理分级标准将 35例人胶质瘤标本分为 4组 : 级 7例 , 级 12例 , 级 10例 , 级 6例。另取 4例正常脑组织作为对照。用免疫组化方法检测 MMP- 2和 TIMP- 2的表达 ,分析二者表达强度及阳性染色率与病理分级的关系。结果 :MMP- 2和 TIMP- 2阳性染色主要位于胶质瘤细胞浆和细胞外基质。在 ～ 级胶质瘤 ,MMP- 2的阳性细胞染色率 (% )分别为 10 .4 2± 3.95、 2 9.92± 7.6 9、 4 5 .4 0± 9.0 1和 5 7.17± 11.39,表达强度 (分值 )分别为 2 .14± 0 .38、 3.17± 0 .71、 4 .0 0± 0 .70和 5 .83± 0 .4 1,均随胶质瘤恶性程度的增加而增加 ;而 TIMP- 2的细胞阳性染色率 (% )分别为 5 1.81± 12 .2 8、 36 .4 2± 9.6 8、 2 2 .10± 7.71和 4 .33± 1.6 3,表达强度 (分值 )分别为5 .5 7± 0 .5 3、 3.92± 0 .2 9、 2 .70± 0 .5 0和 2 .17± 0 .4 1,均随恶性程度的增加而明显降低。随着胶质瘤恶性程度的增加 ,MMP- 2 / TIMP- 2比值明显升高。胶质瘤 MMP- 2和 TIMP- 2的表达水平之间呈明显负相关 (r=- 0 .6 9,P<0 .0 5 )。结论 :MMP- 2和 TIMP- 2在人胶质瘤的侵袭生长中共同起重要作用。

白附子提取物对胶质瘤细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及其机制

目的:研究白附子提取物对人SHG-44脑胶质瘤细胞生长的影响,初步探讨白附子对胶质瘤细胞增殖和凋亡的作用机制。方法:培养脑胶质瘤SHG-44细胞,将其分为空白对照组和8、40、200及1 000μg.L-1白附子提取物组,MTT法检测白附子提取物对SHG-44细胞生长的影响,倒置显微镜观察细胞凋亡形态,流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡率,细胞免疫组织化学法检测Bcl-2与Bax蛋白表达。结果:MTT结果,与空白对照组比较,8和200μg.L-1白附子提取物组细胞在30min和3h时,细胞增殖均明显受抑制,细胞增殖活性降低(P<0.05);1 000μg.L-1白附子提取物组细胞在30min、1h和3h时,细胞增殖活性均明显降低(P<0.05);不同浓度白附子提取物对胶质瘤细胞增殖抑制作用呈剂量-时间依赖性。镜下观察,与空白对照组比较,各药物组细胞均出现数量不等的凋亡小体。流式细胞术分析,部分细胞阻滞于G2/M期,细胞凋亡率随着药物浓度的增加而升高。细胞免疫组织化学检测,与空白对照组比较,200μg.L-1白附子提取物组细胞Bcl-2蛋白表达降低(P<0.01),Bax蛋白表达增高(P<0.01)。结论:白附子提取物可抑制SHG-44细胞的增殖及诱导其发生凋亡,其作用机制与Bcl-2蛋白表达下降和Bax蛋白表达上升有关。

五味子乙素对脑胶质瘤SHG-44细胞VEGF表达水平的影响及其细胞生长抑制作用

目的:探讨五味子乙素(Sch B)作用于脑胶质瘤SHG-44细胞后对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响及细胞生长抑制作用,阐明其可能机制。方法:培养脑胶质瘤SHG-44细胞,将其分为对照组和Sch B50、100、200mg.L-1组,MTT法检测不同剂量Sch B作用SHG-44细胞后其生长情况;酶联免疫吸附实验和细胞免疫组织化学方法观察Sch B作用后SHG-44细胞VEGF蛋白表达情况。结果:与对照组比较,200mg.L-1 Sch B作用SHG-44细胞24h,细胞增殖活性轻度增加(P<0.05);Sch B(50、100和200mg.L-1)作用48或72h,细胞增殖活性明显降低(P<0.05或P<0.01);200mg.L-1 Sch B作用SHG-44细胞72h,培养上清中VEGF蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。与对照组比较,Sch B作用SHG-44细胞72h后,Sch B 50、100和200mg.L-1组VEGF蛋白阳性表达率均明显降低(P<0.01)。结论:Sch B能明显抑制SHG-44细胞VEGF蛋白表达及细胞生长,提示Sch B可能通过抑制脑胶质瘤血管生成而发挥抗肿瘤作用。

五味子甲素对脑胶质瘤C6细胞生长的抑制作用及其机制

目的:探讨五味子甲素对脑胶质瘤C6细胞生长的抑制作用,阐明其作用机制。方法:培养大鼠脑胶质瘤C6细胞,将其分为对照组及50、100和200mg·L-1五味子甲素组,采用MTT法检测C6细胞增殖率,流式细胞术分析细胞周期百分率,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养上清中CyclinD1、Bax、Bcl-2和Casepase-3蛋白表达水平。结果:与对照组比较,24和48h时50、100和200mg·L-1五味子甲素组细胞增殖率均明显降低(P<0.01),72h时100和200 mg·L-1五味子甲素组细胞增殖率明显降低(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,200mg·L-1五味子甲素组SubG1期细胞百分率升高(P<0.05),S期细胞百分率降低(P<0.05)。与对照组比较,100和200mg·L-1五味子甲素组细胞CyclinD1蛋白表达水平降低(P<0.01),不同浓度五味子甲素组Bax蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01),200mg·L-1五味子甲素组Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.01),不同浓度五味子甲素组Bax/Bcl-2比值明显升高(P<0.01),200mg·L-1五味子甲素组Caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.01)。结论:五味子甲素通过下调CyclinD1蛋白表达水平、上调促凋亡因子Bax和Bcl-2表达水平而抑制C6细胞的生长。

神经电生理监测在面神经微血管减压术中的应用

目的：探讨神经电生理监测在原发性面肌痉挛（HFS）微血管减压术（MVD）中的应用,阐明MVD在提高手术疗效及减少术后并发症发生中的作用。方法：选取2010年12月—2014年12月接受MVD治疗的HFS患者163例,其中2010年12月-2012年12月收治的73例HFS患者作为对照组,术中无电生理监测;2013年1月-2014年12月收治的90例HFS患者作为监测组,术中行脑干听觉诱发电位/侧方扩散效应/面神经运动诱发电位（BAEP/LSR/FN MEP）监测。对比分析2组减压手术患者术后有效率及听力下降、眩晕和面瘫等并发症发生情况。结果：监测组患者即刻显效率为52.55%（47例）,轻微面瘫1.11%（1例）,听力下降、眩晕5.56%（5例）;术后随访6～12个月,平均9.6个月,面瘫、听力下降及眩晕均明显改善,手术显效率为65.56%（59例）。对照组患者即刻显效率为30.14%（22例）,轻微面瘫13.69%（10例）,听力下降、眩晕23.29%（17例）;术后随访6～12个月,平均9.6个月,面瘫、听力下降及眩晕均明显改善,手术显效率为64.38%（47例）,2组患者即刻手术显效率比较差异有统计学意义（P〈0.05）,监测组明显优于对照组;远期疗效比较差异无统计学意义（P〉0.05）。2组患者面瘫、听力下降和眩晕等并发症发生率比较差异有统计学意义（P〈0.05）,监测组优于对照组。结论：LSR监测能够提高面神经MVD近期疗效,对于远期疗效意义不明显,但术中行BAEP、LSR及FN MEP监测对于责任血管的识别、减压效果和面、听神经的保护具有重要意义。

caspase-8在胶质母细胞瘤抵抗TRAIL诱导凋亡中的作用

目的:对人脑胶质母细胞瘤SC189细胞株中单克隆细胞株进行研究,探讨caspase-8在胶质母细胞瘤抵抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导凋亡分子机制中的作用。方法:获取SC189单克隆细胞株,应用酸性磷酸酶法检测SC189单克隆细胞株对TRAIL敏感性;Western blotting检测各单克隆细胞株表达FADD、DR5、DR4及caspase-8情况;经TRAIL作用后发生caspase-8、caspase-3、caspase-9、DFF-45凋亡级联裂解反应情况。结果:获得的5株SC189单克隆细胞株,经不同浓度TRAIL作用后细胞死亡率为-5.25%～45.80%,其中4株对TRAIL抵抗,1株对TRAIL相对敏感;Western blotting检测发现FADD、DR5、DR4表达相似,caspase-8表达不同,发生抵抗的细胞株caspase-8表达明显减少,经TRAIL作用后不发生凋亡级联裂解反应;相对敏感的细胞株caspase-8表达增多,经TRAIL作用后可出现明显的凋亡级联裂解反应。结论:SC189单克隆细胞株中caspase-8表达量直接与TRAIL反应敏感性有关联。

CD133免疫磁珠分选脑肿瘤干细胞及其生物学特性

目的:从人脑肿瘤组织中分离、培养、纯化和鉴定脑肿瘤干细胞(BTSCs),探讨CD133免疫磁珠分选方法获取BTSCs的可行性及BTSCs的生物学特性。方法:留取人脑胶质母细胞瘤新鲜标本,分离获得脑肿瘤细胞。应用CD133免疫磁珠分选方法纯化BTSCs;流式细胞仪检测分选阳性率;神经球计数法分析CD133+/-亚群细胞神经球形成情况;免疫荧光方法检测CD133+/-亚群细胞表面神经干细胞(NSCs)标记物CD133、神经巢蛋白(nestin)表达情况;检测CD133+/-亚群细胞经诱导分化后细胞表面分化标记物β-TubulinⅢ、GFAP表达情况。结果:CD133+亚群细胞具有干细胞特性,可形成明显的神经球,具有自我更新和明显的增殖能力,并且NSCs标记物CD133、nestin表达阳性,经诱导分化后分化标记物β-TubulinⅢ、GFAP表达阳性;CD133-亚群细胞无上述特性。结论:CD133免疫磁珠分选方法获得的CD133+亚群细胞即为BTSCs,该方法可以得到高纯度的BTSCs,可以用于BTSCs的实验研究。

TGF-β1对胶质瘤U87细胞上皮-间质转化的诱导作用

目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)诱导胶质瘤U87细胞发生上皮-间质转化(EMT)的作用,为阐明胶质瘤侵袭性生长的机制提供依据。方法:以不同浓度TGF-β1体外处理胶质瘤U87细胞,分为2.5×10^(-6)、5.0×10^(-6)、10.0×10^(-6)和20.0×10^(-6)g·L^(-1) TGF-β1组,以0×10^(-6)g·L^(-1) TGF-β1组作为空白对照组。Western blotting法检测各组U87细胞中上皮标志物(上皮钙黏蛋白)和间质标志物(神经钙黏蛋白和波形蛋白)以及转录因子(Snail、Slug和Zeb1蛋白)的相对表达水平;倒置显微镜下观察U87细胞形态表现;划痕愈合实验检测U87细胞相对迁移距离。结果:随着TGF-β1浓度的升高,胶质瘤U87细胞中上皮钙黏蛋白相对表达水平逐渐降低,2.5×10^(-6)、5.0×10^(-6)、10.0×10^(-6)和20.0×10^(-6) g·L^(-1) TGF-β1组U87细胞中上皮钙黏蛋白相对表达水平低于空白对照组(P<0.05或P<0.01);神经钙黏蛋白和波形蛋白相对表达水平则随着TGF-β1浓度的升高逐渐升高,神经钙黏蛋白相对表达水平分别比空白对照组升高11.5%(P>0.05)、39.4%(P>0.05)、51.0%(P<0.05)和76.9%(P<0.05);10.0×10^(-6)和20.0×10^(-6)g·L^(-1) TGF-β1组U87细胞中波形蛋白相对表达水平均高于空白对照组(P<0.01)。5.0×10^(-6)、10.0×10^(-6)和20.0×10^(-6) g·L^(-1) TGF-β1组U87细胞中Snail、Slug和Zeb1蛋白的相对表达水平高于空白对照组(P<0.05或P<0.01)。与空白对照组比较,10.0×10^(-6) g·L^(-1) TGF-β1组U87细胞呈拉伸状和更为狭长,细胞迁移能力明显增强。结论:一定浓度范围内,TGF-β1能以浓度依赖方式诱导胶质瘤U87细胞发生EMT。

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对非小细胞肺癌细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导人非小细胞肺癌H596细胞发生凋亡,初步阐明非小细胞肺癌细胞经TRAIL诱导凋亡的作用和机制。方法:培养H596细胞,设对照组和不同浓度(0.01、0.03、0.10、0.30、1.00、3.00、10.00、30.00和100.00μg.L-1)TRAIL组,TRAIL作用H596细胞24h后,酸性磷酸酶法检测细胞凋亡的百分率;Western blotting法检测TRAIL相关蛋白caspase-8、Bcl-2及Fas相关死亡结构域(FADD)的表达情况。结果:TRAIL浓度为0.01～0.03μg.L-1时,对H596细胞的生长无明显抑制作用,细胞出现增殖趋势;从0.10μg.L-1开始,随着TRAIL浓度升高,细胞开始出现凋亡,至10.00μg.L-1时细胞凋亡水平显著增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。Western blotting检测,caspase-8、Bcl-2和FADD蛋白表达正常。结论:高浓度的TRAIL可以诱导H596细胞发生凋亡,可能与TRAIL相关蛋白表达正常有关联。