4种植物源性成分多重real-time PCR检测方法的建立及其在食用淀粉中的应用

建立一种可同时快速检测红薯、木薯、马铃薯、玉米源性成分的多重实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)方法。分别以红薯g3pdh基因、木薯g3pdh基因、马铃薯UGPase基因、玉米zSSIIb基因为靶基因设计特异性引物和TaqMan探针,以18S rRNA基因为内参基因,建立多重real-time PCR方法,开展方法学验证,并对不同掺入比例模拟样品和实际淀粉样品进行检测。结果显示,该方法具有高通量、特异性强、灵敏度高等优点。与15种非目标源性均无交叉反应;对目标DNA的检测灵敏度可达到3×10^(-3) ng/μL,且具有良好的线性关系和扩增效率;对淀粉样品的检出限可达0.1%,对50份实际样品进行检测,结果与参比方法一致,说明建立的多重real-time PCR法可用于食用淀粉种类掺假鉴别检测。

肉制品中马源性成分重组酶介导链置换等温扩增实时检测方法的建立及应用

目的:建立一种快速鉴定肉及肉制品中马源性成分的重组酶介导链置换等温扩增实时检测方法。方法:以马源性ATpase 6基因为靶基因设计多组特异性引物和Exo探针,通过引物筛选及反应参数优化,建立一种采用重组酶介导链置换等温扩增技术检测马源性成分的方法,并对该方法进行特异性、灵敏度和稳定性验证,同时通过对不同掺入比例混合样品、不同加工工艺模拟样品和市售样品进行检测,分析方法的检出限、适用性和准确性。结果:该方法反应迅速、特异性强、灵敏度高。可在39℃恒温条件下16min内完成反应;对23种非目标源性具有良好特异性;目标DNA的检测灵敏度可达到1.8copies/μL水平;对生肉的检出限为0.01%(质量分数,下同),对熟肉制品的检出限为0.1%;对90份市售样品进行检测,结果与标准方法一致。结论:建立的重组酶介导链置换等温扩增方法可用于肉及肉制品中马源性成分的掺假鉴别检测。

4种动物源性成分多重real-time PCR检测方法的建立及其在驴肉制品检测中的应用

建立一种同时快速检测驴、马、猪及鸭源性成分的四重实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)方法。分别以4种源性成分的Nad5、ATpase6、ATP8、cytb基因为靶基因设计特异性引物和TaqMan探针,以18S rRNA基因为内参基因,建立多重real-time PCR方法,并对该方法进行方法学验证,同时对不同掺入比例模拟样品、不同加工工艺模拟样品和实际驴肉样品进行检测。结果显示,该方法具有高通量、特异性强、灵敏度高等优点。当Ct值≤35.0时,方法对16种非目标源性具有良好特异性;灵敏度可检测到质量浓度为2×10^(-4)ng/μL的模板DNA;对生肉的检出限为肉含量的0.001%,对熟肉制品的检出限为肉含量的0.01%;对100份实际样品进行检测,结果与标准方法一致,说明建立的多重real-time PCR法可用于肉及肉制品中常见掺假源性成分的检测。

屠宰过程中滩羊胴(屠)体表面微生物污染水平的变化

为了促进盐池滩羊产业的进一步发展,降低宰后滩羊胴体表面的微生物污染水平,延长生鲜滩羊肉产品的货架期,对当地某滩羊屠宰加工企业日常生产过程中6个环节(剥皮扯皮、取白脏红脏、修整称重、去尾燎毛、冲洗和冷却)共300个滩羊胴(屠)体的5个部位(后腿、背部、胸部、前腿和颈部)表面的菌落总数(aerobic plate count,APC)进行采样和检测,以胴(屠)体平均APC作为指示指标进行统计和分析,探究滩羊胴(屠)体表面微生物污染水平在屠宰加工过程中的变化规律。结果显示,剥皮扯皮后,屠体平均APC为(2.27±0.43)lg(CFU/cm^(2));取白脏红脏、修整称重和冷却后,胴(屠)体平均APC均显著上升(P<0.05),分别达到(2.52±0.45)、(3.01±0.44)、(2.28±0.41) lg(CFU/cm^(2));去尾燎毛和冲洗后,胴体平均APC均显著下降(P<0.05),分别达到(2.28±0.37)、(2.28±0.41)lg(CFU/cm^(2))。

指向核心素养的高中地理学历案的设计与实践——以人教版“河流地貌的发育”为例

指向核心素养的课堂学习,需要在具体的任务情境中,通过整合学习资源解决问题,从而实现知识的结构化。在这一过程中真正需要学习方案的是作为学习主体的学生,但传统教案难以起到学习方案的作用。学历案的出现则解决了这一问题,它是教师在班级教学的背景下。

胶东沿海地区渔村村落与民居的保护及更新

胶东沿海地区渔村在村落空间、道路结构、院落布局、单体形式等构成要素具有鲜明的地域文化特征。通过分析传统渔村村落与民居的发展现状,提出了要依据传统渔村村落与民居的形成条件和发展历史,采取有针对性的保护及更新措施:选择性保留、创造性改造和适时性更新。

高铁枢纽应急疏散流线和空间设计方法研究

通过分析人群在应急状态下的心理行为特征,探求影响人群疏散效率的因素,提出利用计算机建模和仿真模拟技术量化评价人流疏散空间设计的研究方法。基于计算机建模和仿真模拟技术,建立数学模型,可以综合考虑空间设计、人群行为心理和疏散标志等因素对疏散效率的影响。开发相应的人流疏散软件,可以直观地观察人群的疏散过程和分布状况,并提出优化应急疏散流线和空间设计的方法策略。

胶东民居与闽粤民居艺术美学比较研究

胶东地区和闽粤地区作为海上丝绸之路南北两线起点,自古以来海上贸易往来十分频繁,货物运输和人口流动促进了两地区之间的建筑文化融合。胶东地区和闽粤地区同属于海洋文化,有着相同的精神信仰和审美情趣。本文通过两地民居在美学理想、审美法则、美学形式与美学意识等方面的比较研究,从地域文化圈角度分析两地民居艺术美学的交融性特征。

胶东沿海地区渔村村落人居环境的景观特色

胶东沿海地区渔村村落选址依山傍海,独特的山、海、岛并融的地形地貌造就了村落自成一格的自然景观。渔村村民以海为生,对大海充满了崇敬和敬畏之情。这种情感体现在村落人居环境上,形成了以"妈祖文化"为代表的文化景观。此外,渔村村落采用具有地域特色的海带草作为民居的建筑材料,形成人居环境独特的乡土景观。以荣成地区的靖子村、俚岛镇为典型案例,分析了胶东沿海渔村村落人居环境的自然、文化和乡土景观特色。

秩序的生成与变异:迈耶建筑作品中网格体系解析

理查德迈耶是现代建筑晚期,美国"纽约五人组"的代表人物。在诸多经典的迈耶作品中,方形网格都成为设计的重要母题,方形网格也因此被称作"迈耶词汇"。本文从形态构成角度,将迈耶对方形网格体系运用归纳为重复、穿插、旋转和层叠四种设计手法。结合典型建筑案例,分析了设计手法对于建筑空间秩序生成和变异所起到的作用。

玄学思想影响下的当代日本建筑

日本建筑思想与中国传统文化之间有着千丝万缕的联系。魏晋南北朝时期是中日文化交流的源头。本文阐述了中国传统文化中玄学思想体系,剖析了日本现代建筑思想根源。在比较和寻觅中,探求日本现代建筑思想与中国传统文化中玄学思想的联系。

圆柱形装药在土壤-混凝土复合介质靶中的爆炸开坑规律

为了探究炸药在土壤-混凝土复合防护工事的表层土壤的爆炸开坑情况及最佳爆破深度,在土壤-混凝土复合介质与单土壤介质两种条件下,对JH-2圆柱形装药在不同埋药深度中的爆炸进行了数值模拟。研究了药柱爆炸后爆坑的形成和发展规律。在8种不同埋药深度及有、无混凝土层的情况下,对比分析了爆坑的形状及尺寸。通过理论计算,得到80 g JH-2药柱在土中抛掷爆破时爆坑的最大半径及相应的埋药深度。对比研究了相同药量、不同埋药深度时土壤与土壤-混凝土两种工况下的爆坑形状与尺寸大小。结果表明:混凝土层反射的冲击波可以对土壤层表面进行二次破坏,使得爆坑的崩落区明显变大。通过试验验证发现,在埋药深度为350 mm时,80 g JH-2圆柱形装药可以在土壤-混凝土复合介质靶中形成一个大且稳定的爆坑,爆坑的形状、尺寸与仿真和理论计算结果吻合。

城市交通枢纽节能设计研究

针对目前交通枢纽能耗大的现状,笔者课题组对京沪、京广沿线已建成的中小型城市交通枢纽进行实地调研。本文从空间集约化设计、建筑形体设计。围护结构遮阳设计、屋顶采光设计、室内吊顶空间以及新材料利用等方面分析城市交通枢纽能耗大的原因,并提出了节能措施,并基于BIM技术,采用GBS建筑能耗模拟软件,对设计方案进行分析、对比和优化。

高通量微生物显色法快速检测动物源性食品中抗生素残留

建立一种采用高通量微生物显色法对动物源性食品中抗生素残留进行筛检,再结合高效液相色谱-串联质谱(high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS)法对阳性样品进行复测的分析检验方法。本方法利用嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus sterothermophilus)作为指示菌,制备96微孔板,可同时对不同类别多种抗生素进行联合检测。结果表明:该微生物显色法操作简便、快捷,成本低,结果准确且易判断,选取pH 7.4磷酸盐缓冲液进行提取,以反应液150μL、菌液50μL(初始OD_(600 nm)为0.4左右)、样品提取液100μL作为检测体系,检测效果最佳,对动物源性食品中氨基糖苷类检出限为60μg/kg,β-内酰胺类检出限为20~40μg/kg,大环内酯类检出限为60~80μg/kg,四环素类检出限为40~60μg/kg,符合国内外对抗生素残留限量的要求。对60份动物源性样品进行检测,其结果与HPLC-MS/MS复测结果一致,说明该微生物法稳定性良好,可用于动物源性食品中抗生素残留的初筛检测。

3种致病菌多重real-time PCR检测方法的建立及其在散装即食肉制品中的应用

建立一种同时快速检测沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌的三重实时聚合酶链式反应(realtime polymerase chain reaction,real-time PCR)方法。以沙门氏菌invA基因、金黄色葡萄球菌Sa442基因和蜡样芽孢杆菌Cereolysin AB基因为靶基因设计引物和TaqMan探针,建立多重real-time PCR方法,对该方法进行方法学验证,并对实际的散装即食肉制品样品进行检测。结果表明,该方法特异性强、灵敏度高、重复性好。对15株非目标菌进行检测,结果均为阴性;3种致病菌的定量线性浓度范围为10^(2)~10^(8) CFU/mL,且定量检测批内和批间的变异系数均小于2%;沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌在未增菌的即食肉制品样品中检出限分别为3.8×10^(2)、4.9×10^(2) CFU/mL和5.7×10^(2) CFU/mL,经增菌5 h后,检出限提高到3.8、4.9 CFU/mL和5.7 CFU/mL。对100份实际样品进行检测,结果与标准方法一致,说明建立的多重real-time PCR法可以用于散装即食肉制品中3种致病菌的检测。

基于数据挖掘建立北京地区牛、羊肉串掺假风险预测模型

通过对2019年北京地区销售的牛、羊肉串掺假情况进行调查,建立基于数据挖掘的食品安全风险预测模型。本实验从10种不同销售渠道的100家销售单位采集牛、羊肉串样品200份,采用实时聚合酶链式反应法对样品进行猪、牛、羊、鸡、鸭5种源性成分检测,分析掺假情况,并基于检测指标及样品信息,运用反向传播(back propagation,BP)神经网络算法构建牛、羊肉串掺假的风险预测模型。结果表明:由质控样品获得的源性成分报出限为Ct值28.0,在此基础上本次调查的200份样品,总不合格率为17.5%(35/200),其中牛肉串样品不合格率为14%(14/100),羊肉串样品不合格率为21%(21/100),用猪肉和鸭肉进行肉类掺假是目前主要的掺假手段;利用上述调查数据,经数据准备、模型生成、数据训练和验证及参数优化,构建的3层BP神经网络预测模型对于不合格样本的预测准确率达95.7%,可满足风险预测的目的。该模型具有良好的参考和应用价值,可为食品安全风险预防和控制提供依据。

高通量抗生素残留初筛试剂盒的研制及应用

以动物源性食品中常见的单一或配伍使用的抗生素为检测目标,开发基于微生物显色原理的高通量快速检测其残留的初筛试剂盒。选取嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus sterothermophilus CICC 10392)作为指示菌,优化其微胶囊包埋条件,并固定于96微孔板中,结合前期研究成果制成可同时对禽畜肉中常见的4类抗生素进行联合初筛的试剂盒,克服了因菌种活化耗时较长及液体菌种运输困难等问题。结果表明:以0.1 g/mL聚乙烯醇为载体、pH 6.0的硼酸-磷酸盐溶液为交联剂对初始吸光度(A600 nm)为0.8的指示菌进行包埋,其机械强度、细胞活性及检测效果最好;该试剂盒对四环素类检出限为40~60μg/kg,氨基糖苷类检出限为60~120μg/kg,大环内酯类检出限为60~100μg/kg,β-内酰胺类检出限为20~40μg/kg,四环素与氨基糖苷类配伍使用检出限为20~40μg/kg,β-内酰胺类与氨基糖苷类配伍使用检出限为10μg/kg,符合国内外对抗生素残留限量的要求;用色谱法对试剂盒检测的70份样品进行验证,无假阴性存在,说明该试剂盒结果可靠,可用于动物源性食品中抗生素残留的初筛检测。

动物源性食品中喹诺酮类药物残留的检测

建立一种采用微生物显色法对动物源性食品中抗生素残留进行初筛,之后再结合高效液相色谱-质谱(high performance liquid chromatography-mass spectrometry,HPLC-MS)法对阳性样品进行复测的分析检验方法。利用大肠杆菌(E.coli)作为指示菌,制备96微孔板,选取pH 7.4磷酸钠-乙腈缓冲液进行提取,以反应液150μL、菌液50μL(初始A_(600 nm)0.4左右)、样品提取液100μL作为检测体系,可同时检测15种喹诺酮类药物。结果表明:所建立的微生物显色法操作简便、快捷、成本低,结果准确且易判断,对动物源性食品中喹诺酮类药物检出限为40~200μg/kg,符合国内外对抗生素残留限量的要求。对50份动物源性样品进行检测,其结果与HPLC-MS复测结果一致,说明该微生物法稳定性良好,可用于动物源性食品中喹诺酮类药物残留的初筛检测。

基于网络数据的预先包装熟肉制品生产过程致病菌监控指标选择分析研究进展

主要研究预先包装熟肉制品生产过程中主要食源性致病菌污染风险来源和变化趋势。以GB 29921—2021《食品安全国家标准预包装食品中致病菌限量》中肉制品涉及的沙门氏菌、单核细胞增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌和致泻大肠埃希氏菌为研究对象,基于网络数据统计畜禽肉原料、生产过程环境和过程产品以及市售产品中这4种致病菌污染监测结果,通过对比在产销过程不同阶段的检出情况,分析污染风险的变化趋势,为企业在生产过程中合理选择和开展致病菌监控提供建议。结果表明:畜禽肉原料中4种致病菌污染较普遍,总检出率达到10.63%;生产过程中,单核细胞增生李斯特菌在生产环境中检出率为7.25%,沙门氏菌检出率为2.65%,金黄色葡萄球菌检出率为1.07%,通过熟制工艺和生产过程卫生控制措施,金黄色葡萄球菌和沙门氏菌检出率下降趋势明显大于单核细胞增生李斯特菌,结合单核细胞增生李斯特菌嗜冷、易形成生物膜且具有较高致病风险的生物学特性,建议企业重点关注该致病菌在生产过程中的污染风险,并将其列为致病菌监控指标。需要说明的是,因为致泻大肠埃希氏菌为新版GB 29921新增加的限量指标,所以污染监测数据少于其他3种致病菌,后续应针对该致病菌加强监测力度。

9种腌腊肉制品贮存过程中游离脂肪酸的变化、影响因素及其来源途径的研究

选取9种腌腊肉制品,通过比较肥瘦质量比例、贮藏温度、不同产地、灭酶与不灭酶产品游离脂肪酸的含量及酸性脂肪水解酶、中性脂肪酶、碱性脂肪酶的酶解后酶活力,饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸、多不饱和脂肪酸组成,分析腌腊肉制品贮存过程中游离脂肪酸的变化及其影响因素,进而考察游离脂肪酸的来源途径。结果表明:相同条件下,全瘦肠、肥瘦质量比3∶7腊肠、肥瘦质量比4∶6腊肠游离脂肪酸的含量依次降低;不同产地游离脂肪酸含量差异显著;贮存温度37℃时游离脂肪酸的含量明显高于25℃;灭酶腌腊制品比不灭酶产品的游离脂肪酸增幅较小,且差异逐渐增大。脂肪水解酶在腌腊肉制品游离脂肪酸产生过程中发挥了重要的作用,贮存前期,酶促反应的持续进行,游离脂肪酸不断产生,脂肪水解是主导作用,而贮存后期不饱和脂肪酸不稳定逐渐被氧化,脂肪氧化起到关键作用。